胃癌中異常表達(dá)剪接因子的生物信息學(xué)分析及功能

張愛東，史 娟

中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院 北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院 基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100005

胃癌作為一種常見的消化系統(tǒng)惡性腫瘤之一，死亡率一直居高不下。據(jù)調(diào)查，胃癌發(fā)病率在中國(guó)所有癌癥中居第2位，在全世界的發(fā)病率居第5位，致死率在所有腫瘤中居第3位[1]。胃癌患者的年齡主要集中在40～70歲，其他年齡段患者人數(shù)較少，但近年來(lái)青年人的胃癌發(fā)病率呈上升趨勢(shì)[2]。早期胃癌患者行根治性切除術(shù)后的5年生存率可達(dá)90%，但是由于早期診斷中缺少有效的分子標(biāo)志物等原因，我國(guó)胃癌患者就診時(shí)約80%已到晚期，導(dǎo)致疾病進(jìn)一步發(fā)展、腫瘤轉(zhuǎn)移，甚至步入終末期[3]。

選擇性剪接的發(fā)生與細(xì)胞的生理病理、發(fā)育調(diào)控甚至疾病的發(fā)生有關(guān)[4]。有研究表明，在癌癥發(fā)生發(fā)展過(guò)程中，選擇性剪切的發(fā)生以及在這個(gè)過(guò)程中產(chǎn)生的異構(gòu)體蛋白的功能，對(duì)癌癥的診斷和治療都具有非常重要的意義[5]。選擇性剪接對(duì)癌基因以及抑癌基因的活性和異常表達(dá)均有調(diào)控作用，從而對(duì)癌癥的發(fā)生及惡化產(chǎn)生一定影響。研究還表明，選擇性剪接可以影響蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)域家族，這些蛋白質(zhì)家族在腫瘤中經(jīng)常發(fā)生突變并可能破壞癌癥相關(guān)途徑中的蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用，該發(fā)現(xiàn)為癌癥的治療提供了新思路[6]。富含絲氨酸蘇氨酸蛋白家族(SR)是選擇性剪接調(diào)節(jié)的重要因子之一，有多個(gè)拷貝的RNA識(shí)別基序(RNA recognition motif，RRM)。富含絲氨酸蘇氨酸蛋白家族中的剪接因子10(SR Splicing Factor，SRSF10)基因作為SR蛋白家族中重要的成員之一，具有經(jīng)典的SR蛋白結(jié)構(gòu)域，是一個(gè)重要的剪切因子。

癌癥基因組圖譜(The Cancer Genome Atlas，TCGA)數(shù)據(jù)庫(kù)是由美國(guó)國(guó)家癌癥研究院(National Cancer Institute，NCI)和美國(guó)國(guó)家人類基因組研究院(National Human Genome Research Institute，NHGRI)在2006年共同合作承擔(dān)開展的TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)計(jì)劃[7-9]，旨在編目和發(fā)現(xiàn)主要的致癌基因組改變，以創(chuàng)建癌癥基因組譜的全面“圖譜”。 到目前為止，TCGA研究人員通過(guò)大規(guī)?；蚪M測(cè)序和綜合多維分析，分析了30多種人類腫瘤，對(duì)癌癥類型的研究以及全面的泛癌分析已經(jīng)擴(kuò)展了腫瘤發(fā)生的當(dāng)前知識(shí)。該項(xiàng)目的一個(gè)主要目標(biāo)是提供公開的數(shù)據(jù)集，以幫助改進(jìn)診斷方法、治療標(biāo)準(zhǔn)，并最終預(yù)防癌癥[10]。本研究采用生物信息學(xué)方法分析了胃癌中有表達(dá)差異的剪接因子，研究了異常表達(dá)的選擇性剪接因子SRSF10對(duì)胃癌細(xì)胞表型的影響，以期為胃癌的早期診斷、預(yù)后判斷以及靶向治療提供新的研究方向。

材料和方法

實(shí)驗(yàn)細(xì)胞和材料SGC-7901胃癌細(xì)胞由本實(shí)驗(yàn)室保存，在含有雙抗及10%胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)基中培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為37 ℃、5% CO2。Lipofectamine 2000、TRIzol(美國(guó)賽默飛世爾科技有限公司)，RPMI-1640培養(yǎng)基、胎牛血清(中國(guó)HyClone Laboratories公司)，Anti-SRSF10抗體(美國(guó)Abcam公司)，Anti GAPDH抗體(中國(guó)Proteintech公司)，HRP標(biāo)記的山羊抗兔抗體、HRP標(biāo)記的山羊抗小鼠抗體(中杉金橋生物技術(shù)有限公司)，MTS、siRNA(銳博生物有限公司)。

胃癌及癌旁組織RNA-seq數(shù)據(jù)差異表達(dá)分析在TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)中下載胃癌及癌旁RNA-seq數(shù)據(jù)，使用Perl語(yǔ)言處理RNA-seq數(shù)據(jù)格式的腳本[11]，在Linux服務(wù)器上運(yùn)行Perl腳本提取并整合RNA-seq數(shù)據(jù)[12]，以獲得胃癌和癌旁組織的RNA-seq矩陣。同時(shí)在ENSEMBLE數(shù)據(jù)庫(kù)中下載Homo_sapiens.GRCh38.88.chr.gtf人類基因組注釋文件[13]，并使用人類基因組注釋文件將矩陣中的整體id轉(zhuǎn)換為基因id，最后獲得含基因id的RNA-seq矩陣。利用R語(yǔ)言以及R軟件包對(duì)胃癌中差異表達(dá)基因進(jìn)行分析[14]，繪制差異基因表達(dá)的火山圖。利用Perl腳本 gene.namelistto info.pl、構(gòu)建的選擇性剪接因子庫(kù)文件ASFs.txt以及得到的表達(dá)差異所有基因文本，依據(jù)|logFC|≥0.5，P<0.05條件篩選出胃癌中表達(dá)差異的選擇性剪接因子[15](FC表示倍數(shù)變化；logFC表示對(duì)FC取以2為底的對(duì)數(shù))。在線網(wǎng)站gepia(http：//gepia.cancer-pku.cn/index.html)輸入SRSF10按照教程進(jìn)行在線分析。

細(xì)胞轉(zhuǎn)染技術(shù)轉(zhuǎn)染前1d將細(xì)胞鋪到6孔板中，密度40%～60%，置于5%CO2、37 ℃培養(yǎng)箱中過(guò)夜培養(yǎng)。當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到80%左右時(shí)，更換無(wú)血清培養(yǎng)基，饑餓細(xì)胞2 h。轉(zhuǎn)染試劑的準(zhǔn)備：用高溫高壓過(guò)的2個(gè)1.5 ml EP管配制A液和B液。A液：100 μl無(wú)血清培養(yǎng)基加入6～8 μl轉(zhuǎn)染試劑Lipofectamine 2000，混勻。B液：100 μl無(wú)血清培養(yǎng)基加入20 pmol siRNA或者4 μg DNA，混勻。A和B液室溫放置5 min后混合，靜置20 min，使得DNA或者siRNA與脂質(zhì)體形成復(fù)合物，將該復(fù)合物加入到細(xì)胞培養(yǎng)基中，緩慢溫和地混勻。放入培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。待4 h后將6孔板的液體替換成完全培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

TRIZOL法提取RNA經(jīng)過(guò)處理后的細(xì)胞培養(yǎng)到一定數(shù)量時(shí)，用冷PBS清洗細(xì)胞2次，加入1 ml Trizol吹打細(xì)胞收集到1.5 ml EP管中，再向管中加入200 μl三氯甲烷，劇烈混勻，冰上放置10 min。4℃離心機(jī)中，15 402×g離心20 min。取上層水層到新的無(wú)RNA酶的EP管，加入等量的異丙醇，混勻，冰上放置20 min，4 ℃離心機(jī)中15 402×g離心30 min。棄上清，加入75%的酒精(用DEPC水配制)震蕩混勻，于4℃離心機(jī)中，12 579×g離心8 min。棄去上清，室溫放置20 min，加入30～50 μl DEPC水在EP管中溶解RNA。取2 μl RNA溶液在NANODROP 2000C儀器上測(cè)量提取的RNA濃度，并標(biāo)注在EP管壁。

提取細(xì)胞總蛋白待細(xì)胞經(jīng)過(guò)處理后，數(shù)量達(dá)到一定數(shù)目時(shí)，用配置好的PBS清洗細(xì)胞2～3次，加入適當(dāng)胰酶消化細(xì)胞(不同類型細(xì)胞消化時(shí)間不同)，然后加入完全培養(yǎng)基終止消化，用滴管吹打細(xì)胞將細(xì)胞懸液加入離心管中，然后在離心機(jī)里770 ×g離心5 min，棄上清，加入細(xì)胞裂解液和PMSF(100∶1)混合液(該混合液現(xiàn)用現(xiàn)配，因?yàn)镻MSF在水溶液中易降解)重懸細(xì)胞，裂解1 h左右。待細(xì)胞裂解充分后，在4℃離心機(jī)中，15 402×g離心20 min，取上清到新的EP管中。

細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)利用直尺，以Marker筆在6孔板背面均勻劃豎線，每隔0.5～1.0 cm劃1道，每孔至少穿過(guò)4條線。在每個(gè)孔中加入5×105個(gè)細(xì)胞，具體細(xì)胞數(shù)量因細(xì)胞種類不同而不同，過(guò)夜能鋪滿。次日用槍頭比著直尺，盡量垂直6孔板背面豎線，槍頭要垂直，不能傾斜。用PBS清洗細(xì)胞3次，去除漂浮的細(xì)胞，加入不含血清的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞。放入37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中，分別在0、6、12、24、48、72 h取樣拍照，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)的數(shù)據(jù)重復(fù)測(cè)量3次。

MTS法測(cè)細(xì)胞增殖曲線將細(xì)胞均勻鋪于96孔板中，每孔種2000個(gè)細(xì)胞。6 h待細(xì)胞貼壁后，避光配制MTS試劑，1 ml電子偶聯(lián)化合物染料中加入20 μl四氮唑，混勻后，按每孔15 μl加入96孔板中，于37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中避光孵育2 h后，在492 nm處測(cè)OD值。檢測(cè)時(shí)間點(diǎn)分別為0、24、48、72、96 h，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)的數(shù)據(jù)重復(fù)測(cè)量3次。

Transwell實(shí)驗(yàn)在Transwell小室中加入(1～2)×105個(gè)細(xì)胞，上室加入500 μl無(wú)血清培養(yǎng)基，下室內(nèi)加入600 μl含10% FBS培養(yǎng)基。待細(xì)胞遷移14 h后，棄去濾膜上下室的培養(yǎng)基，用預(yù)熱的PBS清洗小室，重復(fù)1次。在24孔板的1個(gè)孔中加入4%多聚甲醛，將小室移動(dòng)到該孔中，使濾膜下表面浸沒在4%多聚甲醛中，固定15～20 min。棄去固定液，倒置Transwell小室20 min，自然風(fēng)干。將Transwell小室浸沒在結(jié)晶紫溶液中，染色20～60 min。蒸餾水清洗Transwell小室下表面，風(fēng)干后用棉球擦去小室內(nèi)未遷移的細(xì)胞，在倒置顯微鏡下計(jì)數(shù)。

統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用GraphPad Prism7軟件[16]，數(shù)據(jù)均由多次(大于等于3次)重復(fù)實(shí)驗(yàn)得出，以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，兩樣本比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

獲得TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)中胃癌及癌旁RNA-seq數(shù)據(jù)下載TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)中胃癌及癌旁組織RNA-seq數(shù)據(jù)，得到407個(gè)胃癌及癌旁樣本數(shù)據(jù)，其中胃癌樣本375個(gè)，癌旁樣本32個(gè)。

形成剪接因子庫(kù)通過(guò)統(tǒng)計(jì)已經(jīng)報(bào)道的剪接因子以及對(duì)收錄剪接因子的在線網(wǎng)站ASTD(ftp：//ftp.ebi.ac.uk/pub/databases/astd/altsplice/human/latest)的查閱，組建成了含有975個(gè)剪接因子的剪接因子庫(kù)，部分剪接因子見表1。

胃癌中差異表達(dá)的選擇性剪接因子對(duì)胃癌中表達(dá)差異的選擇性剪接因子進(jìn)行篩選，共得到胃癌差異表達(dá)的剪接因子48個(gè)，其中，表達(dá)上調(diào)35個(gè)，表達(dá)下調(diào)13個(gè)(表2、圖1)。

SRSF10在胃癌組織中表達(dá)上調(diào)在TCGA可視化數(shù)據(jù)庫(kù)網(wǎng)站gepia在線分析了SRSF10基因在胃癌和正常組織中的表達(dá)情況，結(jié)果顯示，與正常組織相比，胃癌組織中SRSF10基因表達(dá)與上述結(jié)果一致，SRSF10在胃癌組織中的mRNA表達(dá)量上調(diào)(圖2)。

siRNA使用的確定以及干擾目的基因的效率利用qRT-PCR實(shí)驗(yàn)和Western blot實(shí)驗(yàn)分別從RNA水平和蛋白質(zhì)水平檢測(cè)siRNA的干擾效率，結(jié)果顯示，與對(duì)照組siNC相比，SRSF10的siRNA-1有較為明顯的干擾效率(圖3、4)。

敲低SRSF10基因可減慢胃癌細(xì)胞SGC-7901的增殖將SRSF10的siRNA和非特異性siRNA轉(zhuǎn)染至胃癌SGC-7901細(xì)胞中，MTS方法檢測(cè)結(jié)果顯示，敲低SRSF10基因的胃癌細(xì)胞SGC-7901增殖減慢(圖5)。

表2 胃癌中表達(dá)差異的剪接因子Table 2 Differentially-expressed splicing factors in gastric cancer

FC：倍數(shù)變化；FDR：錯(cuò)誤發(fā)現(xiàn)率
FC：fold change；FDR：false discovery rate

FC：倍數(shù)變化；FDR：錯(cuò)誤發(fā)現(xiàn)率；圖中每個(gè)點(diǎn)代表1個(gè)基因，紅色表示基因表達(dá)上調(diào)，綠色表示基因表達(dá)下調(diào)
FC：fold change；FDR：false discovery rate；each point in the figure represents a gene，among which red indicates up-regulated gene expression and green indicates down-regulated gene expression
圖1胃癌中表達(dá)差異剪接因子的火山圖
Fig1Volcanic map of differentially-expressed splicing factors in gastric cancer

SRSF10：富含絲氨酸蘇氨酸蛋白家族中的剪接因子10；左邊是胃癌組織樣本，右邊是正常組織樣本，SRSF10基因在胃癌組織中mRNA表達(dá)量(測(cè)序量的reads數(shù))上調(diào)
SRSF10：serine/arginine-rich splicing factor 10；on the left is a sample of gastric cancer tissue，and on the right is a sample of normal tissue,the mRNA of the SRSF10 gene is up-regulated in gastric cancer tissue
圖2gepia網(wǎng)站中分析SRSF10在胃癌中表達(dá)上調(diào)
Fig2SRSF10 is up-regulated in gastric cancer(Gepia website)

aP<0.05，bP<0.01
圖3qRT-PCR檢測(cè)siSRSF10的干擾效果
Fig3The interference effect of siSRSF10(by qRT-PCR)

Mr：相對(duì)分子質(zhì)量；GAPDH表達(dá)相同時(shí)，siSRSF10-1具有最淺的條帶，siSRSF10-1干擾靶基因表達(dá)的效率最高
Mr：relative molecular mass；when the expression of GAPDH is the same，siSRSF10-1 has the shallowest band，and siSRSF10-1 has the highest efficiency in interfering with target gene expression
圖4Western blot檢測(cè)siSRSF10的干擾效率
Fig4Interference efficiency of siSRSF10(by Western blotting)

圖5SRSF10敲低后的胃癌細(xì)胞增殖曲線
Fig5Growth curve of gastric cancer cells after SRSF10 knockdown

敲低SRSF10基因可降低胃癌細(xì)胞SGC-7901的劃痕愈合能力將SRSF10的siRNA和非特異性siRNA轉(zhuǎn)染至胃癌SGC-7901細(xì)胞中，顯微鏡下觀察細(xì)胞在0、12、24、48、72 h時(shí)劃痕愈合情況，結(jié)果顯示，敲低SRSF10基因的胃癌細(xì)胞SGC-7901劃痕愈合能力降低(圖6)。

敲低SRSF10基因可降低胃癌細(xì)胞SGC-7901的遷移能力將SRSF10的siRNA和非特異性siRNA轉(zhuǎn)染至胃癌SGC-7901細(xì)胞中，倒置顯微鏡下拍攝不同區(qū)域的照片，結(jié)果顯示，敲低SRSF10基因的胃癌細(xì)胞SGC-7901遷移能力明顯下降(t=13.03，P=0.002)(圖7)。

討 論

胃癌作為一種常見的消化系統(tǒng)惡性腫瘤之一，其死亡率一直居高不下[16]。為了提高胃癌患者的診斷率和術(shù)后治愈率，研究人員從胃癌的早期診斷、治療方法和術(shù)后愈合等不同方面進(jìn)行了研究。雖然治療胃癌方法以及術(shù)后愈合的研究比較普遍，但在胃癌早期診斷中缺少有效的分子標(biāo)志物，80%的胃癌患者就診時(shí)已到晚期，導(dǎo)致疾病進(jìn)一步發(fā)展、腫瘤轉(zhuǎn)移，甚至步入終末期[17]，錯(cuò)過(guò)了最佳治療時(shí)間，因此急需加強(qiáng)對(duì)早期胃癌診斷標(biāo)志物的尋找。

越來(lái)越多的證據(jù)表明，選擇性剪接與細(xì)胞的生理病理、發(fā)育調(diào)控甚至疾病的發(fā)生有關(guān)。盡管選擇性剪接位點(diǎn)對(duì)于組裝功能性剪接是必須的，但是調(diào)節(jié)選擇性剪接事件的輔助元件也必不可少。SR蛋白家族成員是選擇性剪接調(diào)節(jié)的重要因子，其成員是多細(xì)胞生物中高度保守的剪接因子家族，具有多個(gè)拷貝RRM，參與選擇性剪接過(guò)程中通常作為反式作用因子而發(fā)揮作用，因此，SR蛋白家族成員發(fā)揮著調(diào)控選擇性剪接的作用[18]。SRSF10基因是SR蛋白家族中重要的成員之一，具有經(jīng)典的SR蛋白結(jié)構(gòu)域，是一個(gè)重要的剪接因子。本研究在TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)中下載了胃癌組織與正常組織RNA-seq數(shù)據(jù)，樣本量共計(jì)407個(gè)，其中胃癌組織樣本包含375個(gè)，癌旁樣本32個(gè)。分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)，胃癌患者中存在較多表達(dá)差異的剪接因子，它們可能調(diào)控轉(zhuǎn)錄后mRNA以及l(fā)ncRNA的表達(dá)[19]。剪接因子SRSF10在臨床胃癌樣本中mRNA表達(dá)量上調(diào)，這可能是其在胃癌組織中拷貝數(shù)擴(kuò)增的結(jié)果。生物學(xué)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)到敲低SRSF10的胃癌細(xì)胞增殖曲線減慢，Transwell細(xì)胞能力下降，劃痕愈合能力降低，證實(shí)了SRSF10可促進(jìn)胃癌增殖和轉(zhuǎn)移。

A.對(duì)照組中SGC-7901細(xì)胞0和72h劃痕寬度比較(×50)；B.敲除SRSF10基因的SGC-7901細(xì)胞0和72h劃痕寬度的比較(×50)；C.siNC組和siSRSF10組中SGC-7901細(xì)胞劃痕愈合能力的比較
A.comparison of 0 and 72 h scratch widths of SGC-7901 cells in the control group(×50)；B.comparison of 0 and 72 h scratch widths of SGC-7901 cells after SRSF10 knockdown(×50)；C.comparison of scratch healing ability of SGC-7901 cells in siNC group and siSRSF10 group
圖6SRSF10敲低后的胃癌細(xì)胞劃痕愈合能力
Fig6Scratch wound-healing of gastric cancer cell after SRSF10 knockdown

A.倒置顯微鏡觀察結(jié)果(×200)；B.siNC和si-SRSF10 組細(xì)胞數(shù)的比較
A.under inverted microscope(×200)；B.comparison of cell numbers between siNC and si-SRSF10 groups
圖7SRSF10敲低前后胃癌細(xì)胞遷移侵襲能力
Fig7Migration and invasion of gastric cancer cells before and after SRSF10 knockdown

與其他胃癌研究相比，本研究從TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)中的RNA-seq著手研究分析，充分利用了TCGA公共數(shù)據(jù)的資源，分析得到大量胃癌中具有顯著表達(dá)差異的剪切因子，篩選出具有巨大潛力的剪接因子進(jìn)行研究，為胃癌早期診斷提供了新的研究方向。另一方面本實(shí)驗(yàn)在研究思路方面需要再提高創(chuàng)新性，對(duì)于選擇性剪接因子SRSF10對(duì)胃癌發(fā)生發(fā)展中的調(diào)控機(jī)制研究需要進(jìn)一步加深研究，后續(xù)實(shí)驗(yàn)會(huì)著重研究SRSF10的調(diào)控機(jī)制。本研究得到的數(shù)據(jù)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表型實(shí)驗(yàn)結(jié)果預(yù)示著剪接因子SRSF10很可能在胃癌中作為原癌基因?qū)ξ赴┑陌l(fā)生發(fā)展發(fā)揮一定作用，具有成為胃癌早期診斷、預(yù)后判斷乃至治療的標(biāo)志物的潛力，為胃癌臨床靶向治療提供了新的研究方向，這也是本研究的意義所在。

近年來(lái)對(duì)胃癌早期診斷標(biāo)志物的研究不勝枚舉，為胃癌早期篩選提供了多種可能。本實(shí)驗(yàn)中還存在一些未解決的問(wèn)題，顯著表達(dá)差異的剪接因子SRSF10對(duì)胃癌發(fā)生發(fā)展調(diào)控機(jī)制，下游作用靶標(biāo)等問(wèn)題都需要進(jìn)一步研究確定。之后的研究方向是利用RNA-seq以及RIP-seq高通量測(cè)序分析剪接因子的結(jié)合位點(diǎn)以及下游的作用靶標(biāo)，詳細(xì)闡述剪接因子SRSF10的調(diào)節(jié)機(jī)制。從國(guó)際形勢(shì)以及醫(yī)學(xué)診斷的需求來(lái)看，我國(guó)作為胃癌的高發(fā)區(qū)，到目前為止一直未能實(shí)現(xiàn)全國(guó)性胃癌普查，因此，尋找胃癌早期診斷和篩查標(biāo)志物的任務(wù)還很艱巨。同時(shí)尋找胃癌早期診斷的生物標(biāo)志物，提高胃癌早期診斷率也是醫(yī)學(xué)診斷的必然要求和趨勢(shì)。

綜上，本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，胃癌患者中存在較多表達(dá)差異的剪接因子，它們可能調(diào)控轉(zhuǎn)錄后靶mRNA以及l(fā)ncRNA的表達(dá)來(lái)影響胃癌發(fā)生。剪接因子SRSF10在臨床胃癌樣本中mRNA表達(dá)量被上調(diào)，這可能是其在胃癌組織中拷貝數(shù)擴(kuò)增的結(jié)果。生物學(xué)實(shí)驗(yàn)證實(shí)了SRSF10可促進(jìn)胃癌增殖和轉(zhuǎn)移，從而影響胃癌的發(fā)生。本研究的不足之處在于，需要后續(xù)實(shí)驗(yàn)深入研究剪切因子SRSF10影響胃癌發(fā)生發(fā)展的調(diào)控機(jī)制。