• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    層粘連蛋白調(diào)控奶牛乳腺上皮細胞乳蛋白合成途徑研究

    2020-07-01 10:18:26王春梅王保勝門晶晶
    關(guān)鍵詞:酪蛋白泌乳培養(yǎng)液

    王春梅,王保勝,門晶晶,趙 鋒

    (東北農(nóng)業(yè)大學(xué)乳品科學(xué)教育部重點試驗室,哈爾濱 150030)

    乳腺導(dǎo)管上皮細胞和腺泡上皮細胞附著于基底膜(Basement membrane,BM)的細胞外基質(zhì)(Extracellular matrix,ECM)上。乳腺組織局部上皮發(fā)生細胞與細胞外基質(zhì)相互作用及上皮與間質(zhì)之間長距離通訊對乳腺發(fā)育和功能具有重要作用[1-2]。在乳腺發(fā)育階段,ECM蛋白和重塑酶表達在時間、空間上受嚴格調(diào)控。原位雜交和免疫熒光試驗表明,I型膠原、IV型膠原和層粘連蛋白-γ 2鏈表達和沉積與青春期、妊娠期乳腺上皮細胞(Mammary gland epithelial cells,MECs)增殖及間質(zhì)侵襲有關(guān)[3]。與其在導(dǎo)管伸長過程中作用一致,I型膠原蛋白主要位于乳腺導(dǎo)管內(nèi),而IV型膠原蛋白和層粘連蛋白(Laminin,LN)則集中在端芽附近和腺泡周圍,表明這些ECM成分有助于正常腺泡生成和功能分化[3]。作為ECM主要受體,整聯(lián)蛋白將ECM與細胞骨架和信號通路相關(guān)聯(lián),建立ECM-整聯(lián)蛋白信號軸。整聯(lián)蛋白作為微環(huán)境感受器控制細胞表型和命運決定。有條件地敲除乳腺腺泡基底側(cè)細胞整聯(lián)蛋白β1使上皮細胞喪失再生能力,并損害妊娠期導(dǎo)管分支和小葉腺泡發(fā)育,表明整聯(lián)蛋白介導(dǎo)的ECM信號對于正常組織形態(tài)發(fā)生十分必要[4]。

    催乳素(Prolactin,PRL)是正常MECs增殖和分化以及乳汁生成刺激所需垂體激素。PRL與MECs細胞膜表面催乳素受體(Prolactin receptor,PRLR)結(jié)合,激活JAK2-STAT5信號途徑,繼而調(diào)控乳腺細胞信號轉(zhuǎn)錄反應(yīng),即促進與分化相關(guān)基因和編碼牛乳蛋白(如β-酪蛋白)基因轉(zhuǎn)錄,而STAT5持續(xù)激活需整聯(lián)蛋白β1-層粘連蛋白相互作用[5]。

    作為一種細胞外基質(zhì),LN可影響其細胞表面受體整聯(lián)蛋白β1表達水平,通過其潛在信號樞紐作用增強BMECs對PRL信號應(yīng)答水平,上調(diào)β-酪蛋白蛋白合成[6]。報道指出,ILK與Rho GTPase家族成員(Rac1,cdc42等)均是整聯(lián)蛋白轉(zhuǎn)導(dǎo)過程中關(guān)鍵節(jié)點[7-8]。整聯(lián)蛋白無法直接與Rac1結(jié)合,但招募信號和接頭蛋白,調(diào)節(jié)Rac1(與其他GTPase)激活。目前對整聯(lián)蛋白在MECs分化過程中如何控制GTPase功能研究較少。在分化MECs中,ILK已被確認為連接整聯(lián)蛋白和Rac1激活。利用富含層粘連蛋白基膜(Laminin-rich basement membrane,lrBM)開展體外三維培養(yǎng)時,妊娠期MECs中ILK缺失,抑制細胞分化與乳蛋白合成。ILK-/-MECs降低Rac1激活,且在PRL處理時無法刺激JAK2/STAT5信號傳導(dǎo)[9]。乳腺特異性缺失Rac1基因不影響青春期或妊娠期腺體發(fā)育[10],用Rac1抑制劑NSC23766處理乳腺組織器官型培養(yǎng)物可抑制導(dǎo)管分支[11],表明器官型培養(yǎng)難以完全概括體內(nèi)乳腺發(fā)育。Rac1缺失推遲乳腺退化,則歸因于溶酶體介導(dǎo)的凋亡和乳腺退化啟動所必需STAT3激活延遲[12-13]。

    小鼠乳腺研究發(fā)現(xiàn),細胞-ECM相互作用調(diào)控乳腺發(fā)育分化,整聯(lián)蛋白介導(dǎo)這一調(diào)控作用[4]。但奶牛乳腺發(fā)育分化中,細胞-ECM相互作用以及整聯(lián)蛋白介導(dǎo)的相關(guān)機制尚不明確。本研究利用transwell細胞培養(yǎng)模型,模擬機體內(nèi)細胞所處極性環(huán)境,獲得奶牛乳腺上皮細胞功能調(diào)控試驗?zāi)P?。通過在小室內(nèi)包被不同蛋白成分(BSA、LN、Matrigel)作為細胞培養(yǎng)底物,在分化培養(yǎng)液誘導(dǎo)下,檢測整聯(lián)蛋白β1及其下游信號分子ILK與Rac1表達變化,揭示LN調(diào)控泌乳分化重要作用和信號途徑。通過添加AIIB2抗體調(diào)控整聯(lián)蛋白β1活性,確定整聯(lián)蛋白β1及下游信號分子介導(dǎo)細胞-LN相互作用調(diào)控乳蛋白合成機制。研究為進一步揭示LN如何參與經(jīng)典的泌乳調(diào)控信號途徑,了解其泌乳分化階段作用提供新見解。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    1.1.1 細胞

    本試驗采用健康泌乳期中國荷斯坦奶牛乳腺組織作為試驗原材料,膠原酶消化法分離培養(yǎng)奶牛乳腺上皮細胞。奶牛乳腺上皮細胞經(jīng)純化培養(yǎng)后角蛋白18(Cytokeratin 18,CK18)鑒定與肌球蛋白重鏈11(Myosin heavy chain 11,MYH11)檢測。

    1.1.2 試驗試劑

    胎牛血清購自加拿大WISENTING公司;DMEM/F12、0.25%胰酶-EDTA消化液購自Gibco公司;Laminin、牛胰島素、牛血清白蛋白購自美國Sigma公司;氫化可的松、膜再生液、蛋白上樣緩沖液購自北京Solarbio公司;催乳素購自美國Abcam公司;SDS-PAGE快速凝膠試劑盒購自上海碧云天公司;ILK和Rac1購自美國CST公司;CSN2購自英國Biorbyt;AIIB2購自美國DSHB公司;Prime ScriptTMRT Reagent Kit with gDNA Eraser和TB GreenTMPremix Ex TaqTMⅡ購自大連TaKaRa公司。

    1.2 方法

    1.2.1 原代奶牛乳腺上皮細胞CK18鑒定及MYH11陽性細胞檢測

    對分離培養(yǎng)純化后細胞作CK18鑒定及MYH11陽性細胞檢測,確定是否為奶牛乳腺上皮細胞及其純度是否可用于后續(xù)試驗。制作細胞爬片,將細胞懸液以適當濃度接種于無菌蓋玻片六孔板中,待細胞生長至60%~70%時,棄去培養(yǎng)液,預(yù)冷PBS漂洗3×5 min,4%多聚甲醛固定10 min,PBST(0.1%Tween-20)漂洗3×5 min,5%BSA(PBST)37℃封閉1 h,棄去封閉液,以1∶200加入AF488標記的CK18及MYH11抗體,4℃避光過夜。PBST漂洗3×5 min,加入1 μg·mL-1DAPI細胞核染色10 min。棄去DAPI染液,PSBT漂洗3×5 min。潔凈載玻片上滴加適量抗熒光淬滅劑,將載玻片取出,濾紙吸取載玻片上多余液體,倒置在抗熒光淬滅劑處,避免產(chǎn)生氣泡,指甲油封邊。激光共聚焦顯微鏡檢測CK18和MYH11熒光信號。

    1.2.2 不同基質(zhì)上培養(yǎng)細胞

    將細胞以適當濃度接種在預(yù)先分別包被BSA 30 μg·mL-1、LN 30 μg·mL-1與 Matrigel 1∶100 的transwell上室內(nèi),添加無血清培養(yǎng)基至1.5 mL,下室添加完全培養(yǎng)基2.6 mL。置于37℃,5%CO2培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng),待細胞生長至80%~90%匯合,上下室內(nèi)培養(yǎng)基均更換為無血清培養(yǎng)基饑餓培養(yǎng)12 h,下室培養(yǎng)液更換為HIP分化培養(yǎng)液分化處理24 h。

    1.2.3 細胞的AIIB2阻斷培養(yǎng)

    將細胞以適當濃度接種在預(yù)先分別包被BSA 30 μg·mL-1、LN 30 μg·mL-1與 Matrigel 1∶100 的transwell上室內(nèi),添加無血清培養(yǎng)基至1.5 mL,下室添加完全培養(yǎng)基2.6 mL。置于37℃,5%CO2培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng),待細胞生長至80%~90%匯合,上下室內(nèi)培養(yǎng)基均更換為無血清培養(yǎng)基,饑餓培養(yǎng)12 h,下室培養(yǎng)液更換為HIP分化培養(yǎng)液并分別添加AI?IB2抗體和同型IgG處理24 h。

    1.3 熒光定量PCR

    細胞處理24 h后,棄去培養(yǎng)液,預(yù)冷PBS洗滌兩次,采用Trizol法提取細胞總RNA,使用核酸檢測儀測定總RNA的OD260/280值與濃度。其OD260/280值在1.8~2.0,說明純度較高,可用于后續(xù)試驗。應(yīng)用Prime ScriptTMRT reagent Kit反轉(zhuǎn)錄試劑盒,將RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA。根據(jù)合成引物序列使用TB GreenTMPremix Ex TaqTMⅡ試劑盒,作qRT-PCR反應(yīng)檢測相關(guān)基因表達量,引物由上海生物工程有限公司合成,引物序列:ITGB1,F(xiàn):5'TCAAATC CAGCCACAGCAGC3', R: 5'CCGTGTCACATTCCAC CAAC3';CSN2,F(xiàn):5'CCCTAACAGCCTCCCACA3',R:5'AGCCATAGCCTCCTTCAC3';β-actin,F(xiàn):5'CTG TCCCTGTATGCCTCTG3',R:5'AT GTCAC GCACG ATTTCC3'。RT-PCR反應(yīng)程序95℃,30 s預(yù)變性。95℃,5 s;60℃,30 s;40個循環(huán)。根據(jù)ct值,以β-actin為內(nèi)參,采用2-ΔΔCt法計算目的基因試驗組與對照組相對表達量,根據(jù)樣本相對表達量分析差異顯著性。

    1.4 蛋白免疫印跡

    各組細胞培養(yǎng)處理后棄去培養(yǎng)液,PBS清洗2次,向小室內(nèi)各加入100 μL細胞裂解液,反復(fù)吹打數(shù)次,直至細胞完全裂解。冰上放置5 min,將細胞裂解液轉(zhuǎn)移至1.5 mL離心管,12 000 r·min-14℃離心15 min。將上清液轉(zhuǎn)移至新1.5 mL EP管,加入適量上樣緩沖液,煮沸10 min,用于后續(xù)檢測。各組蛋白樣品加入配制SDS-PAGE上樣孔中,電泳分離。

    根據(jù)蛋白Marker,將目的蛋白轉(zhuǎn)移至適宜NC膜,TBST配制5%脫脂奶粉對NC膜非特異性封閉2 h,將NC膜置于一抗中4℃搖床孵育過夜,隔日,取出TBST漂洗3次,每次10 min,置于二抗中37℃搖床孵育2 h。取出TBST漂洗3次,每次10 min。將NC膜置于凝膠成像儀中,均勻滴加超敏發(fā)光液,曝光獲取蛋白條帶,使用imagine Proplus 6.0讀取蛋白灰度值。

    1.5 統(tǒng)計分析

    試驗3次重復(fù),使用SPSS 21.0分析試驗數(shù)據(jù)顯著性;使用GraphPad Prism 8作圖。數(shù)據(jù)均以平均值±標準差表示,樣本間差異比較作t檢驗或單因素方差分析,*為差異顯著(P<0.05),**為差異極顯著(P<0.01)。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 奶牛乳腺上皮細胞生物學(xué)特性鑒定

    膠原酶消化法獲得奶牛乳腺上皮細胞,純化培養(yǎng)后,通過免疫細胞熒光對其作CK18和MYH11檢測。CK18在奶牛乳腺上皮細胞中特異性表達,激光共聚焦顯微鏡檢測如圖1所示,綠色熒光為CK18,藍色熒光為細胞核。拉絲狀細胞骨架CK18信號陽性表達率表明已獲得純化奶牛乳腺上皮細胞。MYH11為腺泡肌上皮細胞分子標志,檢測結(jié)果如圖2所示,并未檢測到MYH11陽性信號,表明分離培養(yǎng)純化后所獲得細胞為具有泌乳潛能的腺泡腔上皮細胞,可用于后續(xù)泌乳誘導(dǎo)試驗。

    圖1 奶牛乳腺上皮細胞CK18鑒定Fig.1 Identification of CK18 in BMECs

    圖2 奶牛乳腺上皮細胞中MYH11檢測Fig.2 Detection of MYH11 in BMECs

    2.2 層粘連蛋白對奶牛乳腺上皮細胞泌乳分化的影響

    2.2.1 層粘連蛋白對奶牛乳腺上皮細胞中整聯(lián)蛋白β1途徑的影響

    奶牛乳腺上皮細胞分別生長在BSA、LN與Matrigel 3種不同基質(zhì)上,HIP分化培養(yǎng)液分化處理24 h后,檢測BSA、LN與Matrigel 3組細胞模型中泌乳相關(guān)基因在mRNA與蛋白質(zhì)水平表達情況。結(jié)果如圖3所示,在mRNA水平上,與BSA組相比,LN與Matrigel組中ITGB1基因表達量顯著升高(P<0.05)。在蛋白質(zhì)水平上,與BSA組相比,LN與Matrigel組中整聯(lián)蛋白β1、ILK與Rac1蛋白合成顯著升高(P<0.05)。

    2.2.2 層粘連蛋白對奶牛乳腺上皮細胞中β-酪蛋白表達的影響

    本試驗分別在mRNA和蛋白質(zhì)水平檢測BSA、LN與Matrigel 3組細胞模型中β-酪蛋白的表達情況。結(jié)果如圖4所示,在mRNA水平上,與BSA組相比,LN與Matrigel組中β-酪蛋白編碼基因CSN2 mRNA表達量顯著升高(P<0.01)。在蛋白質(zhì)水平上,與BSA組相比,LN與Matrigel組中β-酪蛋白表達量顯著升高(P<0.05)。

    2.3 整聯(lián)蛋白β1活性對奶牛乳腺上皮細胞中泌乳分化的影響

    2.3.1 整聯(lián)蛋β1活性對奶牛乳腺上皮細胞中泌乳相關(guān)蛋白表達的影響

    AIIB2阻斷處理后,分別收集BSA、LN與Matri?gel組細胞蛋白樣品,Western blot檢測與泌乳分化相關(guān)的整聯(lián)蛋白β1下游蛋白表達情況。試驗結(jié)果如圖5所示,結(jié)果顯示,在BSA組中,與同型IgG相比,AIIB2阻斷后ILK蛋白表達量無明顯變化(P>0.05),Rac1蛋白表達量顯著上升(P<0.05)。在LN組中,與同型IgG相比,AIIB2阻斷后ILK蛋白表達量顯著降低(P<0.05),Rac1蛋白表達量顯著上升(P<0.05)。在Matrigel組中,與同型IgG相比,AIIB2阻斷后ILK與Rac1蛋白表達量顯著降低(P<0.05)。結(jié)合圖4結(jié)果,LN和Matrigel可增強整聯(lián)蛋白β1活性,提高ILK表達,阻斷抗體抑制整聯(lián)蛋白β1活性增強引起的ILK表達,阻斷抗體對于BSA組中ILK表達無明顯影響。

    圖3 奶牛乳腺上皮細胞中整聯(lián)蛋白信號途徑關(guān)鍵分子表達Fig.3 Expression of key integrin signaling mediators in BMECs

    圖4 奶牛乳腺上皮細胞中乳蛋白基因表達Fig.4 Expression of milk protein gene in BMECs

    圖5 整聯(lián)蛋白β1活性對奶牛乳腺上皮細胞中泌乳相關(guān)蛋白的影響Fig.5 Effect of integrin β1 activity on lactation related proteins in BMECs

    2.3.2 整聯(lián)蛋白β1活性對奶牛乳腺上皮細胞β-酪蛋白合成的影響

    AIIB2阻斷處理后,分別收集BSA、LN與Matrigel組細胞蛋白樣品,Western blot檢測奶牛乳腺上皮細胞中β-酪蛋白含量。試驗結(jié)果如圖5所示,在BSA組中,與同型IgG相比,AIIB2阻斷后奶牛乳腺上皮細胞中β-酪蛋白含量無明顯變化(P>0.05)。在LN組中,與同型IgG相比,AIIB2阻斷后奶牛乳腺上皮細胞中β-酪蛋白含量顯著降低(P<0.05)。在Matrigel組中,與同型IgG相比,AIIB2阻斷后奶牛乳腺上皮細胞中β-酪蛋白含量顯著降低(P<0.05)。結(jié)合圖4結(jié)果,LN和Matrigel可增強整聯(lián)蛋白β1活性,提高β-酪蛋白合成,阻斷抗體抑制LN和Matrigel對于β-酪蛋白合成作用,但阻斷抗體對于BSA組β-酪蛋白合成無明顯影響。

    圖6 整聯(lián)蛋白β1活性對奶牛乳腺上皮細胞中β-酪蛋白合成的影響Fig.6 Effect of integrin β1 activity on the synthesis of β-casein in BMECs

    3討 論

    3.1 層粘連蛋白對于奶牛乳腺上皮細胞泌乳的影響

    乳腺上皮細胞生長在非ECM塑料培養(yǎng)介質(zhì)上2D培養(yǎng)時,無法響應(yīng)PRL刺激,繼而激活STAT5及乳腺特異性基因表達[14]。乳腺上皮細胞對于PRL刺激反應(yīng)取決于PRLR正確暴露。在單層培養(yǎng)模型中,乳腺上皮細胞與頂端加入的PRL結(jié)合能力有限,因為PRLR沿基底外側(cè)表面分布。在體外將乳腺上皮細胞聚集體培養(yǎng)在非粘附介質(zhì)上時使PRLR暴露,與PRL結(jié)合,并在無LN情況下激活STAT5。這種短暫激活無法刺激乳腺特異性基因轉(zhuǎn)錄[15]。ECM與細胞核之間動態(tài)交互對話對于轉(zhuǎn)錄調(diào)控至關(guān)重要,當用LN1或lrECM 3D培養(yǎng)時,MECs形成極化腺泡,PRLR暴露于PRL使STAT5持續(xù)磷酸化和高水平STAT5核轉(zhuǎn)位。LN1與細胞核溝通影響核組織和乳腺特異基因表達的信號通路仍未發(fā)現(xiàn)。近期小鼠乳腺研究表明整聯(lián)蛋白β1可能通過調(diào)控其下游信號通路蛋白FAK、ILK、Rac1等促進核轉(zhuǎn)位和/或STAT5持續(xù)激活,但在奶牛乳腺中尚不清楚。本研究中,利用transwell細胞培養(yǎng)模型,模擬機體內(nèi)細胞所處極性環(huán)境。通過上室底膜包被LN(試驗組)、BSA(對照組)與Matrigel(陽性對照組),下室添加HIP細胞分化培養(yǎng)液,研究LN對于奶牛乳腺上皮細胞泌乳分化的影響。結(jié)果顯示,在HIP分化培養(yǎng)液處理時,與BSA組相比,LN與Matrigel組整聯(lián)蛋白β1、ILK、Rac1及β-酪蛋白翻譯水平顯著上調(diào),整聯(lián)蛋白β1與β-酪蛋白轉(zhuǎn)錄水平顯著上調(diào)。表明HIP誘導(dǎo)乳腺上皮細胞泌乳分化時,LN可通過上調(diào)整聯(lián)蛋白β1信號通路,提高β-酪蛋白表達,促進奶牛乳腺上皮細胞泌乳分化。由此推斷LN通過與其細胞表面受體整聯(lián)蛋白β1結(jié)合激活整聯(lián)蛋白β1,并以整聯(lián)蛋白β1依賴性調(diào)控奶牛乳腺上皮細胞泌乳分化。

    3.2 整聯(lián)蛋白β1活性對于奶牛乳腺上皮細胞泌乳的影響

    目前常用條件缺陷方法研究整聯(lián)蛋白β1在特定組織發(fā)育和功能中作用。表皮中,整聯(lián)蛋白β1條件敲除導(dǎo)致基膜蛋白組裝缺陷,細胞增殖改變,毛囊形態(tài)發(fā)生缺陷,細胞骨架動力學(xué)受損,受傷后減少遷移和上皮再生[16]。角質(zhì)形成細胞時空分化不受影響。骨等間充質(zhì)組織中,軟骨細胞中整聯(lián)蛋白β1的條件缺陷可通過細胞與膠原蛋白和纖連蛋白異常粘附而導(dǎo)致軟骨發(fā)育不良,并通過細胞周期G1/S邊界處缺陷而減少增殖[17]。而肌肉中整聯(lián)蛋白β1條件缺失導(dǎo)致成肌細胞融合和肌節(jié)組裝缺陷。神經(jīng)組織中,整聯(lián)蛋白β1缺失也有顯著表型,例如,在神經(jīng)嵴衍生的周圍神經(jīng)系統(tǒng)中,整聯(lián)蛋白β1對于雪旺細胞遷移和髓鞘形成準確時間、軸突周圍維持過程及神經(jīng)肌肉連接成熟均為必需。抑制乳腺上皮細胞與基膜的接觸改變形態(tài),存活,增殖和分化。通過使用抑制分化的功能阻斷抗體證明整聯(lián)蛋白β1在小鼠乳腺細胞功能中重要性。最近研究發(fā)現(xiàn),小鼠基因敲除模型中已經(jīng)證實整聯(lián)蛋白β1對乳腺發(fā)育和STAT5持續(xù)激活至關(guān)重要[18]。因此提出奶牛乳腺上皮細胞中,功能阻斷整聯(lián)蛋白β1是否對細胞泌乳分化造成影響。本研究中,構(gòu)建transwell細胞培養(yǎng)模型。在分化培養(yǎng)過程中下室分別添加整聯(lián)蛋白β1功能阻斷抗體AIIB2與同型IgG,處理24 h。觀察整聯(lián)蛋白β 1功能阻斷對于泌乳分化的影響。結(jié)果顯示,LN和Matrgel存在時,整聯(lián)蛋白β1下游信號分子ILK表達及β-酪蛋白合成同步下降,表明其處于相互關(guān)聯(lián)的泌乳分化調(diào)控途徑,LN和Matrigel激活整聯(lián)蛋白β1信號途徑,再通過ILK調(diào)控影響乳蛋白合成。而BSA作為非基膜成分陰性對照,無法激活整聯(lián)蛋白β1,即使給予整聯(lián)蛋白功能阻斷抗體也不會對泌乳分化產(chǎn)生影響。

    研究表明,小鼠乳腺中Rac1和ILK是介導(dǎo)整聯(lián)蛋白β1泌乳分化作用的下游關(guān)鍵信號分子,且ILK連接整聯(lián)蛋白β1對于Rac1激活[19]。在小鼠乳腺連續(xù)妊娠中,Rac1既控制乳腺分泌功能,也控制乳腺重塑。Rac1基因缺失試驗發(fā)現(xiàn),小葉腺泡發(fā)育受損乳腺導(dǎo)管粗大,表明Rac1在調(diào)節(jié)乳腺上皮組織命運決定中發(fā)揮關(guān)鍵作用,用泌乳激素刺激體外培養(yǎng)Rac1基因缺失細胞時,乳蛋白合成能力降低[20]。但本研究中,BSA和LN作為底物時,整聯(lián)蛋白β1失活Rac1表達反而上升。表明在奶牛乳腺上皮細胞中Rac1可能與整聯(lián)蛋白β1并非上下游直接關(guān)聯(lián),并參與其他ECM激活途徑,當一條途徑失活引起另一條途徑反饋增強,導(dǎo)致Rac1表達不降反升;Rho GTPase與亞家族成員補償機制也造成這種現(xiàn)象[21]。由此推測其他Rho GTPase與亞家族成員與整聯(lián)蛋白β1存在上下游關(guān)聯(lián),整聯(lián)蛋白β1失活時,該家族成員表達下調(diào),觸發(fā)補償機制造成Rac1表達上調(diào)需后續(xù)研究驗證。Matrigel含有多種ECM,成分復(fù)雜,可能抑制反饋效應(yīng)或通過其他方式阻礙Rac1表達上調(diào)。

    4結(jié)論

    研究表明LN協(xié)助并促進誘導(dǎo)的奶牛乳腺上皮細胞β-酪蛋白合成分泌上調(diào),這種上調(diào)作用依賴整聯(lián)蛋白β1-ILK通路活性。

    猜你喜歡
    酪蛋白泌乳培養(yǎng)液
    蛋氨酸對奶牛乳腺酪蛋白合成及其上皮細胞自噬的影響
    中國飼料(2022年5期)2022-04-26 13:42:32
    從一道試題再說血細胞計數(shù)板的使用
    母豬泌乳量不足的危害及提高措施
    不來月經(jīng)加上泌乳,說不定是腦子長瘤了
    調(diào)整蔗糖、硼酸和pH值可優(yōu)化甜櫻桃花粉萌發(fā)培養(yǎng)液
    不來月經(jīng)加上泌乳,說不定是腦子長瘤了
    不同培養(yǎng)液對大草履蟲生長與形態(tài)的影響研究
    不同泌乳階段駝乳理化指標和體細胞數(shù)的測定分析
    酪蛋白磷酸肽-鈣絡(luò)合物對酸乳貯藏特性的影響
    中國釀造(2016年12期)2016-03-01 03:08:23
    超級培養(yǎng)液
    精品电影一区二区在线| 激情视频va一区二区三区| 高清av免费在线| 国产片内射在线| 1024视频免费在线观看| 身体一侧抽搐| 极品人妻少妇av视频| 黄色女人牲交| 国产成+人综合+亚洲专区| 国产精品久久视频播放| www日本在线高清视频| 久久久国产一区二区| 亚洲熟女精品中文字幕| 老鸭窝网址在线观看| 一个人免费在线观看的高清视频| 成人特级黄色片久久久久久久| 高清av免费在线| 成人免费观看视频高清| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 国产在线精品亚洲第一网站| 欧美在线一区亚洲| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 免费av中文字幕在线| 五月开心婷婷网| 国产精品 欧美亚洲| 丝袜美腿诱惑在线| 日韩免费av在线播放| 黄色 视频免费看| 亚洲伊人色综图| 91成人精品电影| 男人舔女人的私密视频| 搡老熟女国产l中国老女人| 高清av免费在线| 婷婷丁香在线五月| 亚洲成a人片在线一区二区| 日韩有码中文字幕| 男人的好看免费观看在线视频 | 制服诱惑二区| 久久久久国内视频| 91av网站免费观看| 成人免费观看视频高清| 一二三四社区在线视频社区8| 男女午夜视频在线观看| 国产高清视频在线播放一区| 一边摸一边做爽爽视频免费| 国产视频一区二区在线看| av不卡在线播放| 亚洲中文日韩欧美视频| 黄片播放在线免费| 午夜久久久在线观看| 亚洲成国产人片在线观看| 麻豆国产av国片精品| 波多野结衣一区麻豆| 女人精品久久久久毛片| 老司机午夜福利在线观看视频| 99精品久久久久人妻精品| 亚洲黑人精品在线| 国产精品久久视频播放| 免费人成视频x8x8入口观看| 俄罗斯特黄特色一大片| 成年人免费黄色播放视频| 日韩欧美三级三区| 在线观看免费视频网站a站| 国产又爽黄色视频| 日韩免费av在线播放| 999精品在线视频| 欧美日韩黄片免| 老司机在亚洲福利影院| 99国产精品一区二区三区| 午夜福利影视在线免费观看| 看免费av毛片| 91老司机精品| 欧美国产精品一级二级三级| 亚洲免费av在线视频| 99国产精品一区二区蜜桃av | 国产伦人伦偷精品视频| 老司机影院毛片| 亚洲精品一二三| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 在线视频色国产色| 变态另类成人亚洲欧美熟女 | 国产亚洲一区二区精品| 成人18禁在线播放| 麻豆av在线久日| av欧美777| 亚洲五月色婷婷综合| 黑人操中国人逼视频| 91精品国产国语对白视频| 美女福利国产在线| 韩国av一区二区三区四区| 在线观看免费高清a一片| a级片在线免费高清观看视频| 国产av又大| 波多野结衣一区麻豆| 国产亚洲精品久久久久5区| 国产有黄有色有爽视频| 在线免费观看的www视频| 久久狼人影院| 一区福利在线观看| 12—13女人毛片做爰片一| 欧美精品亚洲一区二区| 黄色怎么调成土黄色| 大片电影免费在线观看免费| 日本vs欧美在线观看视频| 欧美乱妇无乱码| 亚洲av日韩在线播放| 久久久精品区二区三区| 国产亚洲欧美精品永久| 亚洲欧美色中文字幕在线| 久久久久久免费高清国产稀缺| 国产精品电影一区二区三区 | av不卡在线播放| 激情在线观看视频在线高清 | 日韩成人在线观看一区二区三区| 中文字幕制服av| 欧美日韩黄片免| 又紧又爽又黄一区二区| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 看片在线看免费视频| 人人澡人人妻人| 国产高清国产精品国产三级| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看 | 激情视频va一区二区三区| av免费在线观看网站| www日本在线高清视频| 色播在线永久视频| 高潮久久久久久久久久久不卡| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 精品国产一区二区久久| 后天国语完整版免费观看| 久久午夜亚洲精品久久| 国产精品.久久久| 免费少妇av软件| 亚洲全国av大片| 国产亚洲一区二区精品| 亚洲五月色婷婷综合| 欧美国产精品va在线观看不卡| 91在线观看av| 脱女人内裤的视频| 久久久国产成人精品二区 | 99热只有精品国产| 久久国产乱子伦精品免费另类| 下体分泌物呈黄色| 黑人操中国人逼视频| 91九色精品人成在线观看| 午夜免费鲁丝| 人妻丰满熟妇av一区二区三区 | 精品少妇久久久久久888优播| 国产高清国产精品国产三级| 国产高清国产精品国产三级| 国产单亲对白刺激| 国产成人av教育| 大香蕉久久成人网| 久久久久久久久久久久大奶| 中文字幕人妻丝袜制服| 18禁国产床啪视频网站| 午夜免费观看网址| 国产在线一区二区三区精| 国产一区二区三区视频了| 在线观看舔阴道视频| 国产亚洲精品一区二区www | 他把我摸到了高潮在线观看| 久久亚洲精品不卡| 国产亚洲欧美在线一区二区| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 午夜成年电影在线免费观看| 久久久久精品国产欧美久久久| 捣出白浆h1v1| 999久久久国产精品视频| 午夜视频精品福利| 精品久久久精品久久久| 久久国产精品影院| 亚洲在线自拍视频| 99精品在免费线老司机午夜| 在线观看舔阴道视频| 99国产精品一区二区三区| 国产精品国产高清国产av | 亚洲国产看品久久| 99精品欧美一区二区三区四区| 久久精品国产亚洲av香蕉五月 | 热99久久久久精品小说推荐| 99国产极品粉嫩在线观看| 一本综合久久免费| 看黄色毛片网站| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 多毛熟女@视频| 国产精品永久免费网站| 99久久精品国产亚洲精品| 在线观看免费午夜福利视频| 老司机午夜福利在线观看视频| 777米奇影视久久| 一进一出抽搐动态| 99精品久久久久人妻精品| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 久久久久久免费高清国产稀缺| 一区二区三区激情视频| 亚洲专区中文字幕在线| 亚洲伊人色综图| 国产又爽黄色视频| 一进一出好大好爽视频| 1024香蕉在线观看| 男女床上黄色一级片免费看| 深夜精品福利| 欧美激情高清一区二区三区| 香蕉丝袜av| 超色免费av| 免费在线观看完整版高清| 一个人免费在线观看的高清视频| 精品国产乱码久久久久久男人| 最近最新中文字幕大全免费视频| 欧美日本中文国产一区发布| 亚洲精品美女久久av网站| 成人亚洲精品一区在线观看| 91成年电影在线观看| 久久性视频一级片| 欧美成狂野欧美在线观看| e午夜精品久久久久久久| 怎么达到女性高潮| 欧美人与性动交α欧美软件| 国产精品99久久99久久久不卡| 日韩免费av在线播放| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 91精品三级在线观看| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| aaaaa片日本免费| 男女高潮啪啪啪动态图| 国产亚洲精品一区二区www | 搡老岳熟女国产| 欧美激情 高清一区二区三区| 国产成人精品无人区| 亚洲五月婷婷丁香| 久久久国产成人精品二区 | 91大片在线观看| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 国产亚洲精品久久久久久毛片 | 亚洲精品中文字幕一二三四区| 国产欧美日韩一区二区精品| 国产亚洲欧美98| 久久热在线av| 搡老熟女国产l中国老女人| 欧美精品啪啪一区二区三区| 亚洲专区国产一区二区| 日本五十路高清| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 日韩三级视频一区二区三区| 国产黄色免费在线视频| 国产区一区二久久| 国产精品一区二区在线不卡| 国产1区2区3区精品| 9热在线视频观看99| 99国产极品粉嫩在线观看| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 大陆偷拍与自拍| 亚洲九九香蕉| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片 | 中文字幕高清在线视频| 亚洲国产精品合色在线| 97人妻天天添夜夜摸| 一进一出抽搐gif免费好疼 | 欧美精品啪啪一区二区三区| 午夜免费成人在线视频| 1024香蕉在线观看| av网站免费在线观看视频| 99热网站在线观看| 夫妻午夜视频| 91精品国产国语对白视频| av不卡在线播放| 999久久久国产精品视频| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 一区二区日韩欧美中文字幕| 黄色视频,在线免费观看| 亚洲精品自拍成人| aaaaa片日本免费| 多毛熟女@视频| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 手机成人av网站| 美女国产高潮福利片在线看| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 两个人免费观看高清视频| 国产av精品麻豆| 交换朋友夫妻互换小说| 欧美成狂野欧美在线观看| 久久午夜综合久久蜜桃| 成人精品一区二区免费| 老司机靠b影院| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区 | videosex国产| 欧美日韩一级在线毛片| www.熟女人妻精品国产| 国产精品久久久久成人av| 国产精品久久久久久精品古装| 新久久久久国产一级毛片| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 热re99久久精品国产66热6| av视频免费观看在线观看| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 亚洲人成电影免费在线| 精品少妇久久久久久888优播| 亚洲专区国产一区二区| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 51午夜福利影视在线观看| 中文字幕色久视频| 在线观看舔阴道视频| 成人国产一区最新在线观看| 视频区欧美日本亚洲| 99久久国产精品久久久| 国产一区二区三区视频了| 男人舔女人的私密视频| 少妇被粗大的猛进出69影院| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 超色免费av| 精品午夜福利视频在线观看一区| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 亚洲 欧美一区二区三区| 日韩免费高清中文字幕av| 水蜜桃什么品种好| ponron亚洲| 午夜视频精品福利| 在线av久久热| 久久影院123| 91老司机精品| 国产精品欧美亚洲77777| 精品国内亚洲2022精品成人 | 久久香蕉国产精品| 女性生殖器流出的白浆| 高清黄色对白视频在线免费看| 99riav亚洲国产免费| 亚洲av电影在线进入| 国产成人精品无人区| 91国产中文字幕| 国产精品久久电影中文字幕 | 国产精品免费大片| 欧美精品亚洲一区二区| 亚洲,欧美精品.| 一区二区三区精品91| 亚洲avbb在线观看| 精品国产国语对白av| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 一本一本久久a久久精品综合妖精| 国产伦人伦偷精品视频| 在线观看免费日韩欧美大片| 免费在线观看亚洲国产| 国产亚洲欧美精品永久| 黄色怎么调成土黄色| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 一进一出抽搐gif免费好疼 | 一级a爱片免费观看的视频| 亚洲,欧美精品.| 一边摸一边抽搐一进一小说 | 黑人操中国人逼视频| 91成人精品电影| 天堂√8在线中文| 电影成人av| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 日韩欧美三级三区| 亚洲av第一区精品v没综合| 日本wwww免费看| 黄色怎么调成土黄色| 在线观看66精品国产| 亚洲精品国产区一区二| av在线播放免费不卡| 日韩欧美三级三区| 91av网站免费观看| 老司机午夜十八禁免费视频| 国产成人免费无遮挡视频| 欧美乱码精品一区二区三区| 国产成人欧美| 国产欧美日韩一区二区三| 亚洲性夜色夜夜综合| 免费观看a级毛片全部| 久久青草综合色| 国产精品1区2区在线观看. | 欧美久久黑人一区二区| 亚洲国产精品合色在线| 国产精品影院久久| av有码第一页| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 午夜两性在线视频| 精品亚洲成a人片在线观看| 欧美黄色片欧美黄色片| 91成年电影在线观看| 在线观看日韩欧美| 日日夜夜操网爽| 无限看片的www在线观看| 国产一区二区三区视频了| 亚洲专区国产一区二区| 久久久久久免费高清国产稀缺| 亚洲国产精品sss在线观看 | 18禁裸乳无遮挡免费网站照片 | 亚洲精品成人av观看孕妇| 日韩免费av在线播放| 免费在线观看完整版高清| 亚洲国产欧美一区二区综合| 欧美黄色淫秽网站| 脱女人内裤的视频| 无遮挡黄片免费观看| 国产精品一区二区在线观看99| 久久九九热精品免费| 亚洲国产欧美网| 亚洲男人天堂网一区| 夜夜夜夜夜久久久久| 欧美激情久久久久久爽电影 | 少妇 在线观看| 黄色女人牲交| 国产精华一区二区三区| 99精品在免费线老司机午夜| 亚洲色图av天堂| 午夜福利乱码中文字幕| 亚洲性夜色夜夜综合| 国产单亲对白刺激| 欧美中文综合在线视频| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 国产99白浆流出| 91精品三级在线观看| 高清毛片免费观看视频网站 | 亚洲国产精品sss在线观看 | 美女午夜性视频免费| 国产精品 国内视频| 久久久国产一区二区| 国产精品1区2区在线观看. | 日韩欧美一区二区三区在线观看 | 午夜精品在线福利| 黑人欧美特级aaaaaa片| 国产亚洲精品久久久久久毛片 | 国产精品秋霞免费鲁丝片| 多毛熟女@视频| 久久久久久免费高清国产稀缺| 国产男女超爽视频在线观看| 在线av久久热| av免费在线观看网站| av在线播放免费不卡| 亚洲av欧美aⅴ国产| 一级片'在线观看视频| 国产99白浆流出| 久久久久久久久久久久大奶| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 欧美日韩精品网址| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 男人操女人黄网站| 一级毛片精品| 一进一出好大好爽视频| 亚洲黑人精品在线| 一级毛片女人18水好多| 国产99白浆流出| 国产av一区二区精品久久| 久久亚洲真实| 中文字幕高清在线视频| 精品久久久久久,| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 日本一区二区免费在线视频| 欧美日韩精品网址| 亚洲精品中文字幕一二三四区| 精品一区二区三区av网在线观看| 精品亚洲成a人片在线观看| 男女下面插进去视频免费观看| 国产片内射在线| 两性夫妻黄色片| 亚洲精品乱久久久久久| 妹子高潮喷水视频| 久久国产精品大桥未久av| 久久国产精品人妻蜜桃| 韩国精品一区二区三区| 母亲3免费完整高清在线观看| 真人做人爱边吃奶动态| 亚洲熟妇中文字幕五十中出 | 久99久视频精品免费| av国产精品久久久久影院| 久久精品国产清高在天天线| 很黄的视频免费| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 亚洲av成人av| 人妻久久中文字幕网| 在线观看www视频免费| 一夜夜www| 国产99久久九九免费精品| tube8黄色片| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 看片在线看免费视频| 在线观看一区二区三区激情| 精品国产一区二区久久| 麻豆乱淫一区二区| 久久中文字幕人妻熟女| 久久久久精品国产欧美久久久| 精品亚洲成国产av| 久9热在线精品视频| 国产亚洲一区二区精品| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 日韩制服丝袜自拍偷拍| 成人手机av| 在线观看免费视频网站a站| 国产成人精品无人区| 狂野欧美激情性xxxx| 欧美激情久久久久久爽电影 | www日本在线高清视频| 国产主播在线观看一区二区| 最近最新免费中文字幕在线| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 热99久久久久精品小说推荐| 中亚洲国语对白在线视频| 黑人操中国人逼视频| 国产三级黄色录像| 欧美另类亚洲清纯唯美| 涩涩av久久男人的天堂| 日本wwww免费看| 国产亚洲av高清不卡| 一夜夜www| 国产1区2区3区精品| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 美女 人体艺术 gogo| 亚洲色图av天堂| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 午夜91福利影院| 91精品三级在线观看| 性少妇av在线| 丰满饥渴人妻一区二区三| 夜夜爽天天搞| av电影中文网址| 亚洲九九香蕉| 老司机福利观看| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 免费不卡黄色视频| 中文字幕制服av| 两性夫妻黄色片| 欧美日韩黄片免| 麻豆av在线久日| www日本在线高清视频| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 丝瓜视频免费看黄片| 日本一区二区免费在线视频| 一边摸一边抽搐一进一出视频| 少妇被粗大的猛进出69影院| 午夜成年电影在线免费观看| 色在线成人网| 久久这里只有精品19| 乱人伦中国视频| 69精品国产乱码久久久| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 叶爱在线成人免费视频播放| 丰满迷人的少妇在线观看| 99re在线观看精品视频| 少妇的丰满在线观看| 欧美日韩亚洲高清精品| 亚洲七黄色美女视频| 亚洲专区字幕在线| 91精品三级在线观看| 高清av免费在线| 精品一品国产午夜福利视频| 女警被强在线播放| 亚洲精品在线美女| 亚洲熟妇熟女久久| av天堂久久9| 国产不卡一卡二| 校园春色视频在线观看| av线在线观看网站| 亚洲精品自拍成人| 看黄色毛片网站| 欧美日本中文国产一区发布| 午夜久久久在线观看| 乱人伦中国视频| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 亚洲av片天天在线观看| 亚洲精品粉嫩美女一区| 成人18禁在线播放| 国产不卡一卡二| √禁漫天堂资源中文www| 999久久久国产精品视频| 国产精华一区二区三区| 久久久久久免费高清国产稀缺| 满18在线观看网站| 91精品国产国语对白视频| 99热只有精品国产| 老司机午夜福利在线观看视频| 免费在线观看影片大全网站| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 香蕉久久夜色| 女人久久www免费人成看片| 久久久国产成人免费| 亚洲欧美激情在线| 99国产精品一区二区蜜桃av | 9热在线视频观看99| 最近最新中文字幕大全免费视频| 热re99久久国产66热| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 久久人妻av系列| 国产免费现黄频在线看| 国产成人免费无遮挡视频| 新久久久久国产一级毛片| 久久精品国产99精品国产亚洲性色 | 两人在一起打扑克的视频| 日韩成人在线观看一区二区三区| 99久久精品国产亚洲精品| 一二三四在线观看免费中文在| 久久精品国产清高在天天线| 黑人欧美特级aaaaaa片| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 亚洲三区欧美一区| 19禁男女啪啪无遮挡网站| xxx96com| 热99久久久久精品小说推荐| 亚洲免费av在线视频| www.自偷自拍.com| 国产精品久久视频播放| 中文字幕精品免费在线观看视频| 一区二区日韩欧美中文字幕| 波多野结衣一区麻豆| 午夜福利影视在线免费观看| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 两人在一起打扑克的视频| a级毛片黄视频|