基于HPLC法研究廣藿香中加入陳皮后水溶性成分的變化規(guī)律*

齊樂輝，龍丹丹，孟 鑫，田 園，許樹軍

（黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，黑龍江 哈爾濱150040）

廣藿香，為唇形科植物廣藿香（Pogostemon cablin（Blanco）Benth）的干燥地上部分，其拉丁名為Pogostemonis Herba[1]。廣藿香是中醫(yī)臨床治療過程中經(jīng)常使用的中藥，常用于鼻淵頭痛、腹痛吐瀉等癥狀的防治。有關(guān)于廣藿香的研究文獻(xiàn)表明，揮發(fā)油成分和水溶性成分是廣藿香發(fā)揮藥理作用的主要成分[2,3]?！吨袊幍洹罚?015年版）中選用了廣藿香的揮發(fā)性成分百秋李醇作為標(biāo)準(zhǔn)品對廣藿香進(jìn)行了鑒定。

中醫(yī)臨床上經(jīng)常使用廣藿香和陳皮兩種藥材，陳皮和廣藿香都可用于治療惡心嘔吐，并且中醫(yī)臨床中二者的配伍應(yīng)用廣泛，《醫(yī)學(xué)從眾錄》中記載“陳皮藿香湯”，陳皮和廣藿香各用5錢，主治霍亂吐瀉。因此，對于加入陳皮后對廣藿香中某種化學(xué)成分的提取效率的影響的研究是有證可循的。中藥藥對中兩味藥物的配伍比例不同，使用時其有效的化學(xué)成分往往會發(fā)生變化，或是有新的成分產(chǎn)生，或是化學(xué)成分的含量發(fā)生變化[4-6]。藥物的藥理效應(yīng)基礎(chǔ)在于其化學(xué)成分，尤其是有效活性成分[7,8]。可以結(jié)合運用“藥對”的相關(guān)知識，探討陳皮對廣藿香中某些成分的提取效率是否有積極的影響，可對將來增強廣藿香的有效藥理活性或者降低廣藿香的某些不良反應(yīng)的相關(guān)研究提供切實可行的研究方法。

1 實驗部分

1.1 材料及儀器

LT502型電子天平；KQ-500DB型數(shù)控超聲波清洗器；HR-20 1000g大功率粉碎機；Ultimate 3000超快速液相色譜儀；SHB-III循環(huán)水式多用真空泵；98-I-B型電子調(diào)溫電熱套。

廣藿香藥材產(chǎn)于廣東肇慶；陳皮購買于北京本草方源藥業(yè)公司；香草酸和原兒茶酸對照品購買于上海源葉生物科技有限公司；甲醇（色譜純）購買于天津星馬克科技發(fā)展有限公司；乙腈（色譜純）購買于成都市科隆化學(xué)品有限公司、磷酸（色譜純）購買于天津科密歐化學(xué)試劑有限公司；純凈水為娃哈哈集團(tuán)生產(chǎn)。

1.2 供試品溶液的制備

稱取粉碎后的廣藿香藥材粉末2.5g兩份，分別加入到250mL圓底燒瓶中。每個圓底燒瓶中都加50mL蒸餾水，搭好回流裝置，開始加熱。使用500mL抽濾瓶和真空泵進(jìn)行減壓抽濾，保留濾渣，用藥匙將其小心的舀回圓底燒瓶中。重復(fù)上述步驟3次，合并濾液于蒸發(fā)皿中，100℃水浴蒸干，用色譜純甲醇溶解殘渣，定容至10mL容量瓶中，并用。

1.3 對照品溶液的制備

精密稱取香草酸標(biāo)準(zhǔn)品0.0039g、原兒茶酸標(biāo)準(zhǔn)品0.0036g，分別置于10mL容量瓶中，用色譜純甲醇溶解，定容至刻度，作為標(biāo)準(zhǔn)品儲備液。

1.4 色譜條件

表1 HPLC色譜條件Tab.1 HPLC chromatographic conditions

1.5 線性關(guān)系的考察

1.5.1 線性及相關(guān)系數(shù) 精密吸取混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液0.5、3、5、7、9、11、13μL 共 7 份，進(jìn)高效液相色譜儀，分別記錄原兒茶酸所出峰和香草酸所出峰的峰面積，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.5.2 重復(fù)性考察 取同一批廣藿香單味藥材粉末、廣藿香-陳皮混合藥材粉末，按照“1.4”項下的實驗步驟平行進(jìn)行6次提取，取適量供試品溶液，按照“1.4”項下的色譜條件進(jìn)行測定，使用中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)進(jìn)行處理，得到色譜圖。分別記錄原兒茶酸、香草酸所對應(yīng)的色譜峰峰面積并計算求得RSD值。

1.5.3 精密度實驗 取混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液適量，置于進(jìn)樣瓶中，按照“1.4”項下的色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄原兒茶酸所出峰、香草酸所出峰的峰面積，并計算其RSD值。

1.5.4 含量測定 供試品溶液過0.45μm微孔濾膜，進(jìn)行測定，記錄峰面積，從而測得廣藿香中兩種水溶性成分（香草酸，原兒茶酸）的含量。

2 結(jié)果與討論

2.1 混合標(biāo)準(zhǔn)品共有峰的確定

如圖1所示，將混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液所出色譜圖分別與香草酸標(biāo)準(zhǔn)品溶液和原兒茶酸標(biāo)準(zhǔn)品溶液所出色譜峰進(jìn)行比較，確定混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液色譜圖中第一個色譜峰為原兒茶酸的吸收峰，保留時間為2.072min；第二個色譜峰為香草酸的吸收峰，保留時間為2.742min。

圖1 混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液、香草酸標(biāo)準(zhǔn)品溶液和原兒茶酸標(biāo)準(zhǔn)品溶液的HPLC色譜圖Fig.1 HPLC chromatogram of mixed standard solution,vanilla acid standard solution and raw acid standard solution

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

如圖2、3所示，原兒茶酸的標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為y=7.895x+4.5154，R2=0.9998；香草酸的標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為y=7.6977x+1.7205，R2=0.9997。

圖2 原兒茶酸的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖Fig.2 Standard chart of primary catechins

圖3 香草酸的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖Fig.3 Standard chart of vanilla acid

2.3 精密度實驗

表2 原兒茶酸、香草酸的峰面積及RSD值Tab.2 Peak area and RSD value of original catechin

由表2可知，原兒茶酸和香草酸對應(yīng)色譜峰的峰面積平均值分別為79.1426、76.2365，RSD值分別為1.35%、0.25%。二者的RSD值均在0%～2%之間，該結(jié)果顯示HPLC色譜系統(tǒng)具有良好的精密度，可以用于該實驗的測定。

由表2可知，原兒茶酸和香草酸對應(yīng)色譜峰峰面積的RSD值均小于3%，說明該測定方法的重復(fù)性較好。

2.4 含量測定

按上述方法進(jìn)行廣藿香加熱回流后的供試品測定，得色譜圖見圖4和峰面積見表3。

圖4 混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液和廣藿香單味藥材提取藥液得到的HPLC色譜圖Fig.4 HPLC chromatogram obtained from the mixture of standard solution and patchouli herb extract

表3 廣藿香單味藥材提取液的含量測定Tab.3 Determination of extraction liquid of herbal medicine from patchouli

實驗測得，原兒茶酸和香草酸的含量分別為0.001572mg·g-1，0.0004846mg·g-1。

加入配比量為1∶1的陳皮藥材粉末后得到的色譜圖見圖5和峰面積數(shù)據(jù)見表4。

圖5 混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液和廣藿香-陳皮混合藥材提取液得到的HPLC色譜圖Fig.5 HPLC chromatogram obtained from mixture of standard solution and patchouli and parsley mixture

配伍后對廣藿香藥材水溶性成分中的原兒茶酸、香草酸的提取含量有積極的影響見表4。

表4 廣藿香-陳皮混合藥材提取液的含量測定Tab.4 Determination of extraction liquid of patchouli-chen pi mixture

原兒茶酸、香草酸的含量平均值分別為0.003355mg·g-1、0.003216mg·g-1。其中原兒茶酸含量提升了2.13倍，香草酸的含量提升了6.64倍。

3 結(jié)論

與廣藿香單味藥材提取含量測定結(jié)果進(jìn)行比較，廣藿香-陳皮混合藥材提取液中原兒茶酸及香草酸的含量均有所增長。其中原兒茶酸的含量變化較香草酸含量變化明顯，其中原兒茶酸含量為廣藿香單味藥材提取所得的2.13倍，香草酸的含量為廣藿香單味藥材提取所得的6.64倍。加熱回流提取廣藿香中水溶性成分時，加入藥材配比量為1∶1的陳皮藥材，對廣藿香水溶性成分的溶出有促進(jìn)作用，其中對原兒茶酸的影響作用較小，對香草酸的影響作用較為顯著。