中藥治療干燥綜合征的動物實驗研究進展

趙江 劉維

【摘 要】 中藥可以有效改善干燥綜合征患者的臨床癥狀，且安全性好。近年來，隨著對干燥綜合征發(fā)病機制研究的不斷深入，關(guān)于中藥治療本病的動物實驗研究日益增多。文章通過對中國知網(wǎng)、萬方、維普等數(shù)據(jù)庫自建庫至2019年6月的相關(guān)文獻進行梳理，從不同作用機制總結(jié)其研究現(xiàn)狀，以期為進一步明確中藥治療干燥綜合征的作用機制提供參考，為中藥新藥的開發(fā)提供思路。

【關(guān)鍵詞】 干燥綜合征;中藥;動物實驗;綜述

干燥綜合征（Sj?gren's syndrome，SS）是一種主要以累及外分泌腺體、高度淋巴細胞浸潤為特點的慢性炎癥性自身免疫病，病理表現(xiàn)主要為腺體間質(zhì)有大量淋巴細胞浸潤、腺體導管管腔擴張和狹窄等[1]，據(jù)其口干、眼干、關(guān)節(jié)痛等臨床表現(xiàn)可歸為中醫(yī)學“燥證”“痹證”等范疇。本病目前尚無根治方法，以糖皮質(zhì)激素、免疫抑制劑為主，但存在不良反應(yīng)較大的問題。近年來，大量臨床研究表明，中醫(yī)藥治療本病療效確切，安全性好，部分學者亦從實驗研究方面探討其療效機制，本文對近年來中藥治療SS的動物實驗研究從作用機制方面進行梳理，綜述如下。

1 抑制上皮細胞的異?；罨?/p>

1.1 上調(diào)上皮細胞膜水通道蛋白（AQP）的表達 AQP是一組細胞跨膜轉(zhuǎn)運蛋白，現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)13種亞型（AQP0～AQP12），參與機體水液的分泌、吸收及細胞內(nèi)外水的平衡[2]，較多研究表明，AQP5的表達減少和分布異常與SS的發(fā)病密切相關(guān)。姜兆榮等[2]研究表明，解毒化瘀生津方能夠上調(diào)模型鼠頜下腺腺泡細胞膜AQP5的表達，擴大頜下腺水分子的濾過，從而調(diào)節(jié)唾液分泌，與硫酸羥氯喹作用相似。王丹等[3]研究表明，解毒通絡(luò)生津方及其拆方（解毒藥、通絡(luò)藥及生津藥）均可增加模型鼠頜下腺腺泡細胞膜AQP5的表達，其中生津組優(yōu)于解毒組及通絡(luò)組，全方組療效最佳。此外，中藥單體如麥冬多糖[4]、雷公藤多苷[5]等，單味藥如白花蛇舌草、紫草、青蒿、蒲公英、大青葉、板藍根、半枝蓮、玄參、積雪草、七葉一枝花等[6]，

中藥復(fù)方如增液潤燥湯[7]、養(yǎng)肺滋陰湯[8]、活血解毒方[9]、麥冬地芍湯[10]等均可上調(diào)模型鼠頜下腺AQP5的表達。劉燕等[11]認為，解除毒蕈堿3型受體（M3R）對頜下腺AQP5表達的抑制，是津血源顆粒介導的唾液分泌功能增強的部分機制，解毒通絡(luò)生津湯[12]、半夏芩連湯[13]亦可下調(diào)M3R的表達。陳劍梅[14]認為，津血源及其標志性單體的療效可能與其影響唾液腺津液代謝的M3-Ca2+-AQP5途徑有關(guān)，津血源、芍藥苷、麥冬皂苷D可以激動M3R，G蛋白介導腺苷酸環(huán)化酶激活產(chǎn)生環(huán)腺苷酸（cAMP），促使蛋白激酶C活化，促進頜下腺細胞鈣離子通道開放，增加胞內(nèi)Ca2+濃度，從而增加AQP5表達，促進唾液分泌。

1.2 抑制上皮細胞凋亡 上皮細胞凋亡可能是SS自身免疫啟動的重要因素[15]。吳國琳等[16]認為，F(xiàn)as及其配體FasL是調(diào)控細胞凋亡的重要因子，F(xiàn)as/FasL在唇腺腺泡及導管上皮細胞內(nèi)的異常表達可能是SS患者唾液腺受損的原因之一，養(yǎng)陰益氣活血方可以下調(diào)模型小鼠頜下腺組織Fas、FasL及mRNA的表達，減少腺泡及導管上皮細胞凋亡，從而減輕頜下腺損傷。宣肺布津顆粒[17]、路氏滋燥湯[18]等亦可降低Fas/FasL的表達。

2 抑制B淋巴細胞的異?；罨?/p>

主要通過抑制B淋巴細胞活化因子（BAFF）的表達發(fā)揮治療作用。B細胞異常活化，可產(chǎn)生多種自身抗體及多種免疫球蛋白，與SS病情進展相關(guān)，BAFF在其中起關(guān)鍵作用，是極具潛力的治療靶點[15]。BAFF及其受體（BAFF-R）水平受到干擾素（IFN）-γ、白細胞介素（IL）-10、IL-4等細胞因子的調(diào)控，IFN-γ又受到Toll樣受體（TLR）等調(diào)節(jié)[19]。研究表明，益氣養(yǎng)陰祛瘀方能顯著降低模型鼠TLR5、TLR9、IFN-α、BAFF mRNA表達水平，調(diào)控TLR、IFN和BAFF組成的TLR-IFN-BAFF信號傳導通路，抑制異?；罨腡LR，從而減少IFN-α的產(chǎn)生，改善BAFF水平，降低血清免疫球蛋白G（IgG）含量，發(fā)揮治療作用[20-21]。史云暉等[19]研究表明，活血解毒方可能是通過干預(yù)IFN/BAFF/BAFF-R信號通路降低模型鼠血清中BAFF、BAFF-R、IFN-γ及頜下腺BAFF、BAFF-R的水平，增加唾液分泌量，發(fā)揮治療作用。酸甘生津方及其拆方均能抑制模型鼠頜下腺BAFF的過度表達，抑制作用活血組 > 全方組 > 養(yǎng)陰組 > 解毒組，但活血組、全方組及養(yǎng)陰組差異無統(tǒng)計學意義

（P > 0.05），且單獨運用解毒中藥對抑制BAFF表達的療效相對較差，說明養(yǎng)陰、活血中藥更能從根本上抑制BAFF的啟動[22]。王丹等[23]研究表明，解毒通絡(luò)生津方可能通過降低BAFF水平，抑制B細胞的增殖活化，進而減少IgG、IgA、IgM的產(chǎn)生，發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用。

3 抑制T淋巴細胞的異?；罨?/p>

3.1 調(diào)節(jié)輔助T細胞1（Th1）/Th2平衡 Th1細胞主要分泌IL-2、IFN-γ、IFN-α、腫瘤壞死因子（TNF）-β等細胞因子，Th2細胞主要分泌IL-4、IL-5、IL-6、IL-10、IL-13等細胞因子。中藥單體如雷公藤多苷[5]、麥冬多糖[24]、白芍總苷[25]等，中藥復(fù)方如解毒化瘀生津方[26]、燥毒湯[27]、增液布津湯[28]、路氏滋燥湯[29]等均可通過調(diào)節(jié)Th1、Th2相關(guān)細胞因子發(fā)揮治療作用。轉(zhuǎn)錄因子T-bet及GATA-3對Th1、Th2分化起著重要作用，馬武開等[30]研究表明，潤燥靈能降低模型鼠頜下腺T-bet含量，提高GATA-3含量，降低IFN-γ、IL-4表達，降低IFN-γ/IL-4比值，促進Th1/Th2免疫平衡以達到治療作用，中高劑量組降低IFN-γ、IL-4表達方面作用顯著，與醋酸潑尼松療效相當。宋陳惠等[31]認為，Th2細胞特異性表達LincR-Ccr2-5'AS，并參與調(diào)控趨化因子受體CCR5的表達，研究顯示，模型鼠血清CCL5水平明顯增高，頜下腺CCR5與頜下腺、血清CCL5表達均呈正相關(guān)，提示LincR-Ccr2-5'AS-CCR5/CCL5信號通路可能主要參與SS的血液循環(huán)免疫反應(yīng)過程，活血解毒方可通過下調(diào)模型鼠血清CCL5水平，下調(diào)頜下腺中LincR-Ccr2-5'AS表達以減輕免疫反應(yīng)。徐小婷[32]認為，SS的病理特征可能與細胞黏附分子（CAM）相關(guān)，研究表明，模型鼠頜下腺細胞間黏附分子1（ICAM-1）、血管細胞黏附分子1（VCAM-1）和E-選擇素表達顯著升高，甘皂顆粒可以下調(diào)ICAM-1、VCAM-1、E-選擇素的表達，從而緩解病情，CAM的表達受多種細胞因子的影響，因此，可進一步研究CAM與T、B細胞的相關(guān)性，以探討其具體作用機制。

3.2 調(diào)節(jié)Th17/調(diào)節(jié)性T細胞（Treg）平衡 Th17/Treg的失衡是SS發(fā)病的關(guān)鍵因素，Th17主要通過產(chǎn)生細胞因子促進炎癥反應(yīng)，Treg起免疫抑制作用，Th17和Treg的叉頭樣轉(zhuǎn)錄因子3（FoxP3）和視黃醇類核內(nèi)受體（RORγt）/RORα可以相互約束，從而抑制彼此的功能[33-34]。侯雷等[34]研究表明，潤燥靈可以降低FoxP3 mRNA和RORγt mRNA的表達，降低血清IL-17A含量，刺激Treg細胞增殖，抑制Th17細胞，從而達到調(diào)節(jié)Thl7/Treg平衡的作用。生津潤燥方也可降低Th17細胞水平，升高Treg細胞水平，抑制過度亢進的Th17，又能減少激活的自身反應(yīng)性T淋巴細胞，從而維持機體自身的免疫功能[35]。此外，增液潤燥湯[36]、半夏芩連湯[37]等也可降低頜下腺IL-17表達。李成蔭[38]認為，這種調(diào)節(jié)可能與上調(diào)血管活性腸肽（VIP）的表達相關(guān)。

3.3 抑制濾泡輔助T細胞（Tfh）相關(guān)分子的表達 王慶[39]認為，通過阻礙Tfh細胞分化和它們與B細胞之間的相互作用調(diào)節(jié)Tfh細胞可以成為SS新的治療靶點。Bcl-6是Tfh的特異性轉(zhuǎn)錄因子，CXCR5為其表面標志物，模型鼠頜下腺組織的Bcl-6、CXCR5表達明顯升高，養(yǎng)陰益氣活血方通過調(diào)節(jié)Tfh細胞，降低Bcl-6、CXCR5等分子的表達而發(fā)揮治療作用，且中藥濃度符合量效關(guān)系，與羥氯喹聯(lián)合治療效果最佳，但單純使用羥氯喹對此分子通路無影響。

4 其 他

SS易合并間質(zhì)性肺病，馮云霞等[40]認為，轉(zhuǎn)化生長因子β1（TGF-β1）-細胞外調(diào)節(jié)激酶1（ERK1）信號通路活化可能參與SS誘導肺組織改變及肺功能的下降，模型鼠肺組織TGF-β1、ERK1及血清TGF-β1的表達升高，新風膠囊能抑制TGF-β1-ERK1信號通路活化，降低TGF-β1、ERK1水平，上調(diào)IL-4表達，抑制IL-17表達，降低免疫炎癥反應(yīng)，從而改善模型大鼠肺功能;SS亦可累及心臟，王芳等[41]研究表明，黃芪多糖可以通過調(diào)節(jié)Kelch樣環(huán)氧氯丙烷相關(guān)蛋白-1（Keap1）-核因子E2相關(guān)因子2（Nrf2）/抗氧化反應(yīng)元件（ARE）信號通路，抑制炎癥反應(yīng)及氧化應(yīng)激狀態(tài)，減少心肌細胞的損傷，從而改善心功能。

5 問題及展望

SS的發(fā)生是感染、遺傳背景、內(nèi)分泌等多種因素相互作用的結(jié)果，有上皮細胞、淋巴細胞、自然殺傷細胞等參與，產(chǎn)生各種細胞因子和炎癥介質(zhì)引起組織損傷而發(fā)病[1]。中藥可以通過上調(diào)AQP的表達、抑制上皮細胞凋亡、抑制BAFF表達、調(diào)節(jié)Th1/Th2平衡、調(diào)節(jié)Th17/Treg平衡、抑制Tfh相關(guān)分子表達等機制調(diào)節(jié)上皮細胞、淋巴細胞的異?；罨癄顟B(tài)，多途徑、多靶點發(fā)揮治療作用，改善模型鼠唾液流量減少、體質(zhì)量減輕、飲水量增加等癥狀，減輕頜下腺組織淋巴細胞浸潤，保護腺體及免疫器官，從而改善頜下腺指數(shù)、脾指數(shù)、胸腺指數(shù)等，且安全性好，因此中藥治療SS優(yōu)勢明顯。但目前的研究尚存在如下不足：動物模型忽視了中醫(yī)的辨證論治，缺乏病證結(jié)合;對中藥單體的研究較少;缺乏對同一中藥復(fù)方的多種機制研究;缺乏對同一中藥復(fù)方不同組分間的研究;缺乏對不同機制間的相互作用研究;對中藥的量效關(guān)系、時效關(guān)系研究較少等。因此，今后還需開展更多更深入的研究，以進一步明確中藥的具體有效成分及作用靶點，為中藥的臨床應(yīng)用提供更多的實驗依據(jù)，為SS的中醫(yī)藥精準醫(yī)療提供參考。

參考文獻

[1] 王辰，王建安.內(nèi)科學[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2015：1215-1219.

[2] 姜兆榮，劉巖巖，王春波.解毒化瘀生津方對干燥綜合征模型小鼠頜下腺AQP5表達的影響[J].中醫(yī)學報，2017，32（11）：123-127.

[3] 王丹，趙浩，陸秋菊，等.解毒藥、通絡(luò)藥及生津藥配伍對干燥綜合征大鼠AQP5表達的對比分析[J].中國醫(yī)藥導報，2012，9（19）：24-26.

[4] 陶依鳳，李成蔭，汪悅，等.麥冬多糖對NOD小鼠頜下腺AQP5和VIPmRNA表達的影響[J].時珍國醫(yī)國藥，2014，25（9）：2072-2074.

[5] 胡旭君，宋欣偉.雷公藤多苷聯(lián)合甲氨蝶呤對干燥綜合征NOD小鼠治療作用及TNF-α、IL-1β、AQP-5的表達[J].中華中醫(yī)藥雜志，2014，29（7）：2362-2366.

[6] 郝桂鋒，溫成平，李涯松.不同清熱中藥對干燥綜合征小鼠頜下腺水分子轉(zhuǎn)運功能的調(diào)控作用[J].中國實驗方劑學雜志，2015，21（2）：178-181.

[7] 袁斯遠，溫彬宇，張允嶺，等.增液潤燥湯對干燥綜合征NOD小鼠頜下腺中T、B淋巴細胞浸潤及AQP5表達水平的影響[J].中華中醫(yī)藥雜志，2017，5（8）：165-168.

[8] 田孟江，胡瑞，朱萱萱，等.養(yǎng)肺滋陰湯對干燥綜合征小鼠模型干預(yù)作用[J].中國中西醫(yī)結(jié)合雜志，2016，36（1）：63-68.

[9] 李方凱，谷新怡，崔民英，等.活血解毒方對干燥綜合征小鼠頜下腺AQP5表達的影響[J].西部中醫(yī)藥，2016，29（9）：19-22.

[10] 張可可，凌園園，汪悅.麥冬地芍湯對NOD小鼠頜下腺的保護作用[J].陜西中醫(yī)學院學報，2016，39（6）：110-113.

[11] 劉燕，汪紅儀，錢先.津血源增加口干癥模型鼠唾液分泌機制的實驗研究[J].中國中藥雜志，2014，39（11）：2112.

[12] 張丹娜.潤燥解毒通絡(luò)法對干燥綜合征小鼠模型血清及頜下腺M3R表達的影響[D].杭州：浙江中醫(yī)藥大學，2017.

[13] 陸妍，陳祎，王亞南，等.半夏芩連湯對干燥綜合征模型NOD小鼠Th17/IL-17免疫炎性途徑的影響[J].中國中西醫(yī)結(jié)合雜志，2015，35（5）：612-617.

[14] 陳劍梅.津血源及其標志性單體對干燥綜合征模型鼠唾液腺M3-Ca2+-AQP5途徑的影響[D].南京：南京中醫(yī)藥大學，2018.

[15] 侯佳奇，薛鸞.原發(fā)性干燥綜合征發(fā)病機制概述[J].現(xiàn)代免疫學，2019，39（1）：60-65.

[16] 吳國琳，李天一，盧雯雯，等.養(yǎng)陰益氣活血方藥對干燥綜合征NOD小鼠頜下腺Fas/FasL及其mRNA表達的影響[J].中國中藥雜志，2013，38（23）：4148-4151.

[17] 韓善夯，金實.宣肺布津顆粒及其拆方組對干燥綜合征模型鼠干預(yù)研究[J].遼寧中醫(yī)藥大學學報，2011，13（12）：74-76.

[18] 張華東，陳祎，姜泉，等.路氏滋燥湯對小鼠頜下腺細胞因子Fas/FasL的影響[J].北京中醫(yī)藥，2011，30（4）：249-251.

[19] 史云暉，柳洋，韋尼，等.活血解毒方對干燥綜合征小鼠干擾素-γ、B細胞活化因子及其受體的干預(yù)作用研究[J].環(huán)球中醫(yī)藥，2016，9（1）：20-24.

[20] 林崇澤，黃綏心，秦源，等.益氣養(yǎng)陰祛瘀中藥對干燥綜合征NOD小鼠頜下腺TLR-IFN-BAFF信號通路的影響[J].中國中西醫(yī)結(jié)合雜志，2017，37（12）：1487-1490.

[21] 李霄鵬，王新昌，白秋蘭，等.益氣養(yǎng)陰祛瘀中藥對干燥綜合征模型NOD小鼠TLR/IFN/BAFF通路的作用研究[J].浙江中西醫(yī)結(jié)合雜志，2016，26（12）：1090-1092.

[22] 顧軍花，楊婭男，張瑾，等.酸甘生津方及其拆方對干燥綜合征模型小鼠頜下腺BAFF的影響[J].世界中西醫(yī)結(jié)合雜志，2012，7（5）：384-387.

[23] 王丹，薛鸞，陸秋菊.解毒通絡(luò)生津法對干燥綜合征大鼠免疫功能影響的初步研究[J].浙江中醫(yī)雜志，2011，46（11）：837-839.

[24] 李成蔭，汪悅，孫麗霞，等.麥冬多糖對NOD小鼠頜下腺保護作用研究[J].中國免疫學雜志，2014，30（2）：198-201.

[25] 李春蕾，何菁，華紅.中藥白芍總苷預(yù)防非肥胖型糖尿病小鼠自發(fā)性涎腺炎的研究[J].華西口腔醫(yī)學雜志，2011，29（2）：187-190.

[26] 姜兆榮，高明利，劉巖巖，等.解毒化瘀生津方對干燥綜合征模型小鼠頜下腺IFN-γ、IL-4影響[J].遼寧中醫(yī)藥大學學報，2017，19（12）：51-54.

[27] 李略.中藥復(fù)方“燥毒湯”治療干燥綜合征模型小鼠的機理研究[D].沈陽：遼寧中醫(yī)藥大學，2016.

[28] 何慧珍，金桂蘭.增液布津湯對干燥綜合征模型鼠細胞因子TNF-α、IL-6的影響[J].時珍國醫(yī)國藥，2012，23（9）：2200-2201.

[29] 葛琳，張華東，姜泉，等.路氏滋燥湯對干燥綜合征小鼠頜下腺細胞因子IFN-γ、IL-10的影響[J].世界中西醫(yī)結(jié)合雜志，2011，6（1）：28-30.

[30] 馬武開，和秀麗，曾蘋，等.潤燥靈方對干燥綜合征模型小鼠血清Th1/Th2的影響[J].中醫(yī)雜志，2017，58（4）：64-68.

[31] 宋陳惠，侯秀娟，張華東，等.活血解毒方對NOD小鼠LincR-Ccr2-5'AS、CCR5及CCL5表達的影響[J].北京中醫(yī)藥，2018，37（11）：49-52.

[32] 徐小婷.甘皂顆粒干預(yù)唾液腺分泌分子機理研究[D].南京：南京中醫(yī)藥大學，2013.

[33] 馬武開，侯雷，曾蘋，等.潤燥靈對干燥綜合征模型小鼠免疫調(diào)節(jié)及抗炎作用研究[J].風濕病與關(guān)節(jié)炎，2017，6（8）：5-9，14.

[34] 侯雷，曾蘋，和秀麗，等.潤燥靈對干燥綜合征模型小鼠Th17/Treg細胞的影響[J].中藥藥理與臨床，2017，33（2）：160-164.

[35] 陸燕，張啟春，汪悅，等.生津潤燥方治療干燥綜合征及調(diào)控CD4+CD25+Foxp3T細胞/Th17機制研究[J].上海中醫(yī)藥雜志，2015，49（12）：68-72.

[36] 李紀高，李增變，靳東亮，等.增液潤燥湯對干燥綜合征模型小鼠頜下腺IL-17表達的影響[J].中醫(yī)研究，2015，28（2）：58-59.

[37] 陸妍，陳祎，王亞南，等.半夏芩連湯對干燥綜合征模型NOD小鼠Th17/IL-17免疫炎性途徑的影響[J].中國中西醫(yī)結(jié)合雜志，2015，35（5）：612-617.

[38] 李成蔭.增液湯調(diào)控神經(jīng)肽VIP的表達治療干燥綜合征的機制研究[D].南京：南京中醫(yī)藥大學，2015.

[39] 王慶.養(yǎng)陰益氣活血方對NOD小鼠Tfh相關(guān)分子的影響研究[D].杭州：浙江大學，2018.

[40] 馮云霞，劉健，程園園，等.新風膠囊通過抑制TGF-β1-ERK1信號通路保護干燥綜合癥模型大鼠肺功能[J].細胞與分子免疫學雜志，2013，29（2）：118-122.

[41] 王芳，葉英法，張曉軍，等.基于Keap1-Nrf2/ARE信號傳導通路探討黃芪多糖改善干燥綜合征模型大鼠心功能的機制[J].中國中西醫(yī)結(jié)合雜志，2014，34（5）：566-574.

收稿日期：2019-11-30;修回日期：2020-01-07