魔芋葡甘聚糖及其衍生物治療乳糖不耐受癥

張東霞，張琪，鄧麗玲,2，鐘耕*

1(西南大學(xué) 食品科學(xué)學(xué)院，重慶，400715) 2(重慶市生物技術(shù)研究所有限責(zé)任公司，重慶，401121)

乳糖不耐受癥(lactose intolerance，LI)在醫(yī)學(xué)上是指與乳糖不完全消化相關(guān)的胃腸道癥狀，即由于小腸乳糖酶缺乏，牛奶中的乳糖不能被分解吸收，從而進(jìn)入結(jié)腸，被腸道細(xì)菌分解后，產(chǎn)生大量短鏈脂肪酸和氫氣，造成滲透壓升高，使腸腔內(nèi)的水分增多，引起腹鳴、腸鳴、腹絞痛甚至腹瀉等癥狀[1]。其機(jī)制尚不清楚，除了乳糖酶缺乏，還包括個(gè)體乳糖消化量、胃腸道傳送、直腸動(dòng)力異常、性別、年齡等因素的差異[2]。目前，乳糖不耐受癥的治療主要通過添加乳糖酶，飲食調(diào)理，應(yīng)用益生菌等。HE等[3]對11名中國乳糖不耐受癥患者補(bǔ)充雙歧桿菌膠囊和富含乳酸桿菌酸奶2 w后，明顯提高了其結(jié)腸菌群乳糖代謝活性，顯著改善了患者乳糖不耐受癥狀。SAVAIANO等[4]的一項(xiàng)隨機(jī)、雙盲臨床試驗(yàn)證明，新型半乳寡糖(RP-G28)是改善乳糖消化和乳糖不耐受癥狀的一個(gè)潛在的方法。一些研究表明，結(jié)腸發(fā)酵可能在乳糖不耐受癥中起作用[5-6]，因此，改變結(jié)腸細(xì)菌以有效代謝乳糖是一種新穎且可能有用的改善乳糖消化和耐受性的方法。

魔芋葡甘聚糖(konjac glucomannan，KGM)是魔芋塊莖中通過β-1, 4-糖苷鍵連接而成的葡萄糖和甘露聚糖聚合物。臨床研究表明，KGM具有緩解便秘，降低超重和肥胖人群的體重，防止糖尿病，降低癌癥風(fēng)險(xiǎn)等生理功效，食用KGM對健康有益，是一種潛在的益生元[7-8]。魔芋葡甘低聚糖(konjac oligoglucomannan，KOGM)是KGM降解形成的低聚糖，避免了KGM相對分子量大、黏度高、溶解度小等缺陷。在過去的幾十年里，已經(jīng)有研究表明低聚糖的益生元作用[7,9]，美國等已有KOGM食品以及功能食品上市[10]。之前研究表明，KGM和KOGM可以選擇性刺激雙歧桿菌、乳酸桿菌等有益菌的生長并產(chǎn)生有利的短鏈脂肪酸(short chain fatty acids，SCFA)[11-13]。雙歧桿菌可促進(jìn)小腸絨毛上皮細(xì)胞增生，分泌乳糖酶，腸道內(nèi)形成“乳糖酶-低聚半乳糖-雙歧桿菌”的微生態(tài)循環(huán)平衡體系，3者具有相互協(xié)同作用，維持腸道內(nèi)的微生態(tài)平衡[14]。因此適量的補(bǔ)充雙歧桿菌可以減少乳糖不耐受癥的發(fā)生。

本文通過人體體外發(fā)酵實(shí)驗(yàn)，探究KGM和KOGM在健康受試者和乳糖不耐受受試者糞便體外發(fā)酵特性，驗(yàn)證其益生性。通過小鼠動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，以及KGM和KOGM對乳糖體外發(fā)酵特性的影響研究，討論KGM和KOGM治療乳糖不耐受癥的可行性，為開發(fā)一款益生元治療乳糖不耐受癥的新型產(chǎn)品提供理論研究基礎(chǔ)和應(yīng)用參考。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

雄性KM小鼠，購自重慶醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，許可證號(hào)：SCXK(湘)2016-0002。

1.1.2 主要實(shí)驗(yàn)材料

KGM，重慶康家客有限公司，符合NY/T 494—2010《魔芋粉》標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)量要求，葡甘聚糖含量≥90%；β-甘露聚糖酶(食品級(jí)60 000 U/g)，昆明愛科特生物科技有限公司；乙酸、丙酸、異丁酸、丁酸、異戊酸、戊酸(色譜純)標(biāo)準(zhǔn)品，北京振翔科技有限公司；思連康雙歧桿菌四聯(lián)活菌片，杭州遠(yuǎn)大生物制藥有限公司；二糖酶試劑盒(乳糖酶)，南京建成生物工程研究所；其他試劑如未特別說明均為分析純。

1.1.3 主要儀器和設(shè)備

MAGM-Ⅱ微波快速制樣系統(tǒng)，上海新儀公司；DZF-6020真空干燥箱，上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司；RE-52旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，上海亞榮生化儀器廠；172F-602電熱鼓風(fēng)干燥箱，上海精密實(shí)驗(yàn)儀器有限公司；PHS-3C精度酸度計(jì)，上海大普儀器有限公司；5810臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)，德國Eppendorf公司；GC-2010 Plus氣相色譜儀，日本島津公司；FFAP氣相色譜柱(30 m×0.53 mm×0.50 μm)，安捷倫科技有限公司；HXF-DY高速分散器，寧波新芝生物科技股份有限公司；SYNERGYH1MG酶標(biāo)儀，美國基因公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 魔芋葡甘低聚糖的制備

根據(jù)秦清娟等[15]的方法并稍作改動(dòng)。采用微波輔助半干法酶解制備KOGM，稱取20 g魔芋粉，加入34.0 mL pH 6.0檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液，固液比為1∶1.7(g∶mL)，以1 600 U/g加入β-甘露聚糖酶，高速攪拌均勻，將樣品用可透氣玻璃紙密封，于55 ℃條件下反應(yīng)3.2 h。反應(yīng)完全之后微波加熱，使反應(yīng)體系中酶的活性喪失(700 W加熱1 min，物料中心溫度達(dá)到95 ℃)，產(chǎn)物置于45 ℃的真空干燥箱中干燥。將干燥樣品溶于10倍(g∶mL)的蒸餾水中，充分?jǐn)嚢韬螅? 000 r/min 離心20 min，收集上清液，經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)將上清液濃縮至原體積的1/8～1/12，得到濃縮液，逐步加入9倍體積的無水乙醇，乙醇體積分?jǐn)?shù)達(dá)到90%，醇沉1 h，8 000 r/min離心20 min，得醇沉物。低溫(40 ℃)烘干，粉碎過篩(160目)，得KOGM樣品。得率達(dá)到48.4%，樣品密封并于4 ℃低溫保存，以備后續(xù)使用。

1.2.2 KGM和KOGM在不同人群糞便中的體外發(fā)酵特征

1.2.2.1 體外發(fā)酵實(shí)驗(yàn)溶液的制備

參照羅凱云[16]的方法制備體外發(fā)酵實(shí)驗(yàn)溶液，并在121 ℃高壓滅菌20 min后加入0.25 g/L的L-鹽酸半胱氨酸，于厭氧室中過夜待用。實(shí)驗(yàn)分為4組：空白組、葡萄糖組、KGM組、KOGM組，即準(zhǔn)確稱量(100±0.5)mg對應(yīng)樣品于已滅菌的50 mL離心管中，加入8 mL預(yù)還原的體外發(fā)酵實(shí)驗(yàn)溶液使樣品完全水合。

1.2.2.2 糞便樣本的收集和處理

取健康志愿者和乳糖不耐受癥志愿者(每組各2男2女，22～28歲，至少在實(shí)驗(yàn)前3個(gè)月沒有服用抗生素類藥物)新鮮糞便，將其分為2組(健康組和乳糖不耐受癥組)，分別在組內(nèi)將志愿者糞便樣品等量混合，按質(zhì)體比1∶5的比例(6倍稀釋)向糞便中加入37 ℃的體外發(fā)酵實(shí)驗(yàn)溶液，混勻后過濾，收集濾液(2 mL)加入到完全水合好的樣品管中，氮吹密封， 37 ℃厭氧培養(yǎng)箱中孵育。分別孵育0、3、6、12、24、48 h采集發(fā)酵液樣品。

1.2.2.3 發(fā)酵液相關(guān)指標(biāo)測定

用酸度計(jì)測定發(fā)酵液在不同發(fā)酵時(shí)間段的pH值。發(fā)酵液在4 000 r/min、4 ℃條件下離心5 min，取上清液測定發(fā)酵液SCFA含量。

1.2.2.4 SCFA分析

氣相混標(biāo)液的配制：分別取乙酸、丙酸、異丁酸、丁酸、異戊酸、戊酸標(biāo)準(zhǔn)品各100 μL，置于10 mL容量瓶中，用蒸餾水定容，即為10 mL/L的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，試驗(yàn)中需要稀釋現(xiàn)配的7個(gè)稀釋梯度的標(biāo)準(zhǔn)溶液做標(biāo)準(zhǔn)曲線如表1所示。

表1 標(biāo)準(zhǔn)溶液中SCFA的響應(yīng)時(shí)間、標(biāo)準(zhǔn)曲線Table 1 Retention time, calibration curves of differentshort-chain fatty acids in standard solution

SCFA的提取和測定[17]：取人糞發(fā)酵液或小鼠糞便上清液(見1.2.3)測定其SCFA含量。配制50%酸性乙醇：取25 mL無水乙醇和3.29 mL 38%濃鹽酸混合，用50%乙醇定容500 mL；0.5 mL體外發(fā)酵液和0.5 mL酸性乙醇混合，旋渦，超聲20 min (40 W)，5 000 r/min 離心20 min，過0.45 μm濾膜。取1 μL上清液經(jīng)氣相色譜儀測定SCFA含量。

1.2.3 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

分別將3、5、7、9 w齡雄性KM小鼠處死，用二糖酶試劑盒(乳糖酶)經(jīng)酶標(biāo)儀測定小鼠小腸乳糖酶活性，以此選擇合適的實(shí)驗(yàn)小鼠[18]。

動(dòng)物飼喂在西南大學(xué)藥學(xué)院[SYXK(渝)2014-0002)]標(biāo)準(zhǔn)動(dòng)物房內(nèi)開展。溫度保持在(25±0.5) ℃，相對濕度(50±5)%，12 h/12 h的燈光/黑暗循環(huán)。標(biāo)準(zhǔn)飼料，自由飲水，適應(yīng)性喂養(yǎng)1 w后，小鼠隨機(jī)分為4組：空白組、藥物組、KGM組和KOGM組，分別經(jīng)口灌胃純水、思連康雙歧桿菌四聯(lián)活菌片、KGM和KOGM，灌胃劑量均為195 mg/kg體重，根據(jù)實(shí)驗(yàn)室推薦成人每日KGM劑量(2 g/60 kg)和藥物推薦劑量調(diào)整確定，每組9只小鼠。

灌胃28 d期間，每周1次收集小鼠新鮮的糞便，立即放入?yún)捬醮?，轉(zhuǎn)移至冰塊中冷凍?？焖贉y定糞便樣品的含水量、pH值[19]。另取1份小鼠糞便，按照1∶5(g∶mL)的比例加入飽和NaCl溶液，10 000 r/min離心10 min，取上清液用于SCFA測定。

1.2.4 KGM和KOGM對乳糖體外發(fā)酵特性的影響

實(shí)驗(yàn)4 w后，將空白組小鼠處死，取其結(jié)腸內(nèi)容物按照1∶9的比例加入9倍(mL∶g)生理鹽水稀釋，制備結(jié)腸內(nèi)容物稀釋液。采用MENKE等[20]的方法配制6份基礎(chǔ)發(fā)酵液進(jìn)行小鼠結(jié)腸內(nèi)容物體外發(fā)酵。樣品分組如表2所示，置于37 ℃、160 r/min的搖床中進(jìn)行酵解培養(yǎng)24 h后，測定發(fā)酵液pH值、SCFA含量，用二糖酶試劑盒(乳糖酶)測定小鼠小腸乳糖酶活性。

表2 發(fā)酵樣品的分組及名稱Table 2 Group and name of samples in fermentation

1.2.5 數(shù)據(jù)分析

2 結(jié)果與分析

2.1 KGM和KOGM在不同受試者糞便中的體外發(fā)酵指標(biāo)分析

2.1.1 人糞發(fā)酵液pH值的測定

不同受試者糞便體外發(fā)酵過程中，發(fā)酵液pH值的變化隨時(shí)間呈現(xiàn)一定的規(guī)律性(表3)。在發(fā)酵的0～24 h期間，各組pH值逐漸下降，12 h之后趨于平穩(wěn)，第24小時(shí)時(shí)達(dá)到最小，第48小時(shí)時(shí)，pH值有所上升，這與秦清娟等[21]采用KOGM在小鼠盲腸內(nèi)容物體外厭氧發(fā)酵的研究結(jié)果一致。其中葡萄糖組pH值降低速率最快，KOGM組較KGM組稍快。KGM和KOGM 2組與空白組比較呈顯著效果(P<0.05)，即KGM和KOGM可有效降低健康組和乳糖不耐受癥組發(fā)酵液的pH值。發(fā)酵液的pH值變化主要受微生物生長產(chǎn)生的有機(jī)酸和游離氨影響[22]，可能是因?yàn)椴煌l(fā)酵液中微生物發(fā)酵產(chǎn)酸或游離氨速率不同，從而導(dǎo)致pH值變化速率不同。

表3 不同添加物在體外發(fā)酵液中的不同時(shí)間點(diǎn)的pH變化Table 3 Changes of pH in fermented cultures added with different additives at different time during fermentation

注：同一行中不同大寫字母表示同一組樣品在不同時(shí)間段具有顯著性差異(P<0.05)，即組內(nèi)差異；同一列小寫字母不同表示同一時(shí)間段不同組別之間具有顯著性差異(P<0.05)，即組間差異(下同)

2.1.2 人糞發(fā)酵液SCFA含量的測定

在多糖酵解過程中，乙酸、丙酸和正丁酸是主要生成物，對人體健康是有益的。乙酸能被大腦、心臟和外周組織氧化。丙酸可以影響肝臟和膽固醇代謝。丁酸可作為結(jié)腸上皮細(xì)胞的能量來源，調(diào)節(jié)上皮細(xì)胞和免疫細(xì)胞的生長和凋亡，并能抑制結(jié)腸炎和結(jié)腸癌[23-24]。

由圖1可以看出，KGM和KOGM酵解培養(yǎng)物中的乙酸、丙酸和丁酸在0～6 h之間濃度顯著增加，12 h之后趨于穩(wěn)定。6～24 h內(nèi)，葡萄糖組、KGM組和KOGM組的SCFA產(chǎn)量均顯著高于空白組(P<0.05)。由此可知，KGM和KOGM可以促進(jìn)人體糞便體外發(fā)酵培養(yǎng)物中SCFA的產(chǎn)生，這與之前的研究結(jié)果一致[5,25]。

a- 乙酸;b- 丙酸;c- 丁酸圖1 乳糖耐受和不耐受受試者糞便菌群體外發(fā)酵中乙酸(a)、丙酸(b)和丁酸(c)的產(chǎn)量Fig.1 Content of acetic acid (a), propionic acid (b) and butyric acid (c) in fecalbacteria of lactose tolerant and intolerant subjects

健康受試者和乳糖不耐受癥受試者糞便體外發(fā)酵過程中，兩者的空白組間SCFA含量沒有顯著性差異(P>0.05)，說明SCFA產(chǎn)量與糞便菌群沒有直接的關(guān)系；與健康組人群糞便體外發(fā)酵結(jié)果相比，KGM和KOGM能促進(jìn)乳糖不耐受癥組人群糞便發(fā)酵產(chǎn)生更多的乙酸和丁酸。由此可見，魔芋葡甘聚糖及其衍生物對促進(jìn)乳糖不耐受癥人群糞便體外發(fā)酵液中SCFA的產(chǎn)生也具有促進(jìn)作用[9]。

2.2 各年齡組小鼠小腸乳糖酶活性

如表4所示，隨小鼠年齡增加，小腸乳糖酶活性呈下降趨勢，此結(jié)果與之前研究結(jié)果一致[18]，這也符合人類腸道乳糖酶活性隨年齡增長而下降的情況。另有研究表明[26]，小鼠小腸乳糖酶基因與人類同源性較高，說明選用小鼠作為乳糖不耐受癥的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物是可行的。因此，選用5 w齡成年小鼠作為本次動(dòng)物實(shí)驗(yàn)受試對象。

表4 各周齡組小鼠小腸乳糖酶活性Table 4 Intestine lactase activities of mice in differentage groups

2.3 KGM和KOGM對小鼠糞便參數(shù)的影響

2.3.1 小鼠糞便含水量的測定

小鼠在灌胃期間，藥物組、KGM組和KOGM組結(jié)腸糞便中的水分含量顯著高于空白組(P<0.05)。這表明在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程，攝入KGM、KOGM能增加小鼠糞便含水量，可以提高排泄物的體積，形成松弛的糞便[19]。這有利于結(jié)腸的健康，對控制腸道蠕動(dòng)，加速有毒物質(zhì)排除，維持腸道形態(tài)具有促進(jìn)作用[27]。

圖2 灌胃后不同時(shí)間段內(nèi)各組小鼠糞便含水量Fig.2 Mice faeces moisture of each group during differenttimeframes

2.3.2 小鼠糞便pH值的測定

結(jié)腸pH的降低對人體健康有益，較低的結(jié)腸 pH 能抑制有害病原菌的繁殖并影響結(jié)腸微生物酶活性[19]。因此，結(jié)腸糞便pH值的改變可作為評(píng)估KGM和KOGM對小鼠結(jié)腸影響的指標(biāo)之一。如圖3所示，小鼠結(jié)腸糞便 pH 在實(shí)驗(yàn)開始時(shí)均為弱堿性(pH 8.24)。攝入KGM和KOGM 28 d后，KGM組和KOGM組小鼠結(jié)腸糞便的pH值分別從(7.72±0.04)和(7.77±0.02)降低為(6.43±0.04)和(6.33±0.04)(P<0.05)，而空白組小鼠結(jié)腸糞便的pH仍保持在(7.98±0.06)，且在灌胃1～4 w內(nèi)沒有顯著性差異(P>0.05)。結(jié)果表明，KGM和KOGM的攝入可以有效降低小鼠結(jié)腸糞便 pH 值，這可能是由于KGM和KOGM在小鼠結(jié)腸中的酵解所致。有研究結(jié)果表明[5,21]，KGM和KOGM可以通過降低糞便pH和增加糞便中雙歧桿菌和乳酸桿菌的比例來改善結(jié)腸生態(tài)，這些都對促進(jìn)腸道健康有積極作用。

圖3 灌胃后不同時(shí)間段內(nèi)各組小鼠糞便pH值Fig.3 pH of mice faeces during different timeframes ineach group

2.3.3 小鼠糞便SCFA含量分析

不同組小鼠糞便中SCFA含量如圖4所示，均隨著時(shí)間的延長而增多。灌胃3 w后，短鏈脂肪酸的含量迅速增長，且實(shí)驗(yàn)組均顯著高于空白組(P<0.05)。這表明，KGM和KOGM可有效改善小鼠腸道微生物菌群代謝產(chǎn)生SCFA[28]。

由圖4-a,圖4-e可知，KGM對乙酸和戊酸的增加作用顯著，尤其是乙酸(P<0.05)，這與CHEN等[7]研究結(jié)果一致。KOGM對促進(jìn)丙酸、異丁酸、異戊酸，尤其是丁酸的作用顯著(P<0.05)。因此，KGM和KOGM對SCFA含量會(huì)產(chǎn)生影響。

2.4 KGM和KOGM對乳糖體外發(fā)酵特性的影響研究

2.4.1 小鼠結(jié)腸內(nèi)容物體外發(fā)酵液pH值測定

在小鼠結(jié)腸內(nèi)容物體外發(fā)酵過程中，微生物利用不同底物發(fā)酵的pH值變化如表5所示。

a- 乙酸;b- 丙酸;c- 丁酸;d- 異丁酸;e- 戊酸;f- 異戊酸圖4 KGM和KOGM對小鼠糞便SCFA含量的影響Fig.4 Effect of KGM and KOGM on SCFAs of mice faeces

表5 不同原料酵解培養(yǎng)物中pH的變化Table 5 Changes of pH in fermented cultures added with different materials at different time during fermentation

組別發(fā)酵時(shí)間/h0361224空白組9.31±0.01Aa9.23±0.00Ba9.22±0.01Ba9.15±0.01Ca9.00±0.01Da乳糖組9.15±0.01Ab8.98±0.01ABb8.88±0.06Bb8.57±0.06Cb6.76±0.13Db乳糖酶-藥物組9.14±0.01Ab8.99±0.00Bb8.87±0.00Cb7.31±0.01Dd6.52±0.01Ec乳糖-KGM組9.12±0.00Ac8.94±0.01Bc8.81±0.04Cb8.26±0.00Db6.17±0.03Ed乳糖-KOGM組9.09±0.00Ad8.92±0.02Ac8.79±0.04Ab7.79±0.31Bc6.30±0.13Cd

在發(fā)酵6～24 h內(nèi)，乳糖-藥物組和乳糖-KGM組的發(fā)酵液pH值降低速率最快。發(fā)酵24 h之后，乳糖-KGM組和乳糖-KOGM組的發(fā)酵液pH值顯著低于其他組(P<0.05)。綜上所述，在乳糖中加入KGM和KOGM加速了發(fā)酵液pH值降低的速率，且與其他組相比，pH值更低，這有益于機(jī)體的健康。因此，在乳糖中加入KGM和KOGM能為機(jī)體提供良好的酸性環(huán)境。

2.4.2 小鼠結(jié)腸內(nèi)容物體外發(fā)酵液SCFA含量分析

小鼠結(jié)腸內(nèi)容物體外發(fā)酵24 h后，不同底物的發(fā)酵產(chǎn)物SCFA含量分析如表6所示，乙酸的產(chǎn)生量最高，是結(jié)腸微生物群產(chǎn)生的最豐富的SCFA[11]，其次是丁酸，丙酸含量最低。與乳糖組相比，KGM和KOGM的添加顯著提高了發(fā)酵液中乙酸和丁酸的產(chǎn)量(P<0.05)，且KOGM的作用更顯著，這可能是由于KOGM更易被分解并吸收利用，KGM的分子量影響發(fā)酵速度[12]。KGM和KOGM在發(fā)酵24 h時(shí)與其他組的丙酸產(chǎn)量沒有差異，這與CHIU等[12]在實(shí)驗(yàn)中得到的丙酸含量的結(jié)果不同，這可能是由于小鼠的結(jié)腸吸收率和/或結(jié)腸細(xì)菌和代謝能力的差異所致[12]。簡言之，在乳糖中添加KGM和KOGM可以促進(jìn)小鼠結(jié)腸內(nèi)容物發(fā)酵液中SCFA的產(chǎn)生，這些都可以說明KGM和KOGM對腸道健康具有積極作用。

表6 酵解24 h時(shí)不同原料酵解培養(yǎng)物中的SCFA濃度(n=3)變化Table 6 SCFA concentrations in fermentation cultures at24 h using different materials (n=3)

2.4.3 小鼠結(jié)腸內(nèi)容物體外發(fā)酵液乳糖酶活性測定

乳糖酶是動(dòng)物體內(nèi)消化分解乳糖的主要酶源，由圖5可知，藥物、KGM和KOGM的加入，使小鼠結(jié)腸內(nèi)容物體外發(fā)酵液乳糖酶的活性高于其他組，且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)，可見，KGM和KOGM可促進(jìn)乳糖酶的恢復(fù)和增加。實(shí)驗(yàn)藥物的主要成分是雙歧桿菌，KGM和KOGM分解產(chǎn)生雙歧桿菌，而雙歧桿菌可以產(chǎn)生乳糖酶[14]，故其對乳糖酶活性的增加具有顯著作用。這些結(jié)果表明，KGM和KOGM可以作為治療乳糖不耐受癥的研究對象。但KGM和KOGM對乳糖在小鼠結(jié)腸內(nèi)容物體外發(fā)酵特性的影響涉及其量效關(guān)系還未進(jìn)行研究，值得后續(xù)深入探究。

圖5 酵解24 h時(shí)不同原料酵解培養(yǎng)物中的乳糖酶活性變化(n=3)Fig.5 Lactase activity in fermentation cultures at 24 h usingdifferent materials

3 結(jié)論

本文對KGM和KOGM在健康受試者和乳糖不耐受癥受試者糞便體外發(fā)酵中發(fā)酵液的pH值和SCFA含量隨時(shí)間的變化進(jìn)行研究，并探究了其對小鼠結(jié)腸糞便pH值、含水量和SCFA含量的影響，以及其與乳糖在體外發(fā)酵過程中發(fā)酵液的pH值、SCFA含量和乳糖酶活性的變化。結(jié)果表明，KGM和KOGM對健康受試者和乳糖不耐受癥受試者均具有良好的益生作用，可以為機(jī)體提供良好的酸性環(huán)境，有效改善小鼠腸道微生物菌群代謝產(chǎn)生SCFA，促進(jìn)結(jié)腸發(fā)酵和乳糖酶活性的增加，在治療乳糖不耐受癥的益生元制品開發(fā)具有應(yīng)用潛力。