商品化豬圓環(huán)病毒2型疫苗：效果和臨床應(yīng)用

劉國(guó)民 宋慶慶 林文耀

摘? 要：豬圓環(huán)病毒2型（Porcine Circovirus type 2，PCV2）是影響豬群健康的最重要的病原體之一。1991年加拿大西部首次報(bào)道了仔豬斷奶后多系統(tǒng)衰竭綜合征（Postweaning Multisystemic Wasting Syndrome，PMWS），但直到13年后的2004年，法國(guó)和德國(guó)才持特殊許可證成功上市了第一個(gè)商品化PCV2疫苗。除了能引起PMWS外，PCV2還與一系列疾病和癥狀有關(guān)，人們將其統(tǒng)稱(chēng)為豬圓環(huán)病毒相關(guān)?。≒orcine Circovirus-associated Disease，PCVAD）。截至目前，國(guó)際市場(chǎng)共有5個(gè)可供選擇的商品化PCV2疫苗。這些疫苗起初只用來(lái)控制PMWS，但現(xiàn)在人們也用它們控制PCVAD。本文主要探討：（1）商品化疫苗的種類(lèi);（2）疫苗免疫效果評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn);? ? ? ? ?（3）疫苗的臨床學(xué)、病毒學(xué)、免疫學(xué)和病理學(xué)效果;（4）針對(duì)不同PCVAD臨床表現(xiàn)使用PCV2疫苗。

關(guān)鍵詞：豬圓環(huán)病毒2型;斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征;豬圓環(huán)病毒相關(guān)疾病;疫苗

中圖分類(lèi)號(hào)：S851.33 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：C 文章編號(hào)：1001-0769（2020）03-0069-06

1991年加拿大西部首次報(bào)道了仔豬斷奶后多系統(tǒng)衰竭綜合征（Postweaning Multisystemic Wasting Syndrome，PMWS），但直到13年后的2004年，法國(guó)和德國(guó)才持特殊許可證成功上市了第一個(gè)商品化豬圓環(huán)病毒2型（Porcine Circovirus type 2，PCV2）疫苗。除了能引起PMWS外，PCV2還與一系列疾病和癥狀有關(guān)，人們將其統(tǒng)稱(chēng)為豬圓環(huán)病毒相關(guān)?。≒orcine Circovirus-associated Disease，PCVAD）。

PCV2疫苗問(wèn)世前，人們主要通過(guò)改善管理和控制共同感染來(lái)遏制PCVAD。目前控制PCV2感染的主要策略是接種疫苗。商品化PCV2疫苗起初只用來(lái)控制PMWS，但在臨床使用中發(fā)現(xiàn)疫苗對(duì)其他PCVAD也能起到很好的控制效果。商品化的PCV2疫苗在抗原含量、佐劑類(lèi)型、推薦接種的動(dòng)物類(lèi)型（母豬或仔豬，或兩者均適用）以及免疫劑量（單次免疫或二次免疫）等方面有所差異。

大量綜述文獻(xiàn)報(bào)道了PCVAD和PMWS的病理學(xué)、免疫學(xué)和流行病學(xué)等方面的研究結(jié)果，但有關(guān)PCV2疫苗的應(yīng)用效果評(píng)價(jià)鮮有報(bào)道。過(guò)去5年，多項(xiàng)研究報(bào)道了5個(gè)商品化PCV2疫苗在試驗(yàn)條件和田間條件下的效果。

本綜述主要討論：（1）商品化疫苗的種類(lèi);（2）疫苗效果評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn);（3）疫苗的臨床學(xué)、病毒學(xué)、免疫學(xué)和病理學(xué)效果;（4）針對(duì)不同PCVAD臨床表現(xiàn)使用PCV2疫苗。

1? 商品化的豬圓環(huán)病毒2型疫苗

1.1 抗原

2006年梅里亞公司（Merial）推出第一個(gè)商品化PCV2疫苗（Circovac PCV2疫苗），其為全病毒滅活油佐劑疫苗。該疫苗最初只允許在繁殖母豬上使用（每頭份? ? ? ?2 mL），之后允許降低劑量用于仔豬（每頭份0.5 mL）。隨后，四種僅允許在仔豬上使用的PCV2疫苗相繼推向國(guó)際市場(chǎng)，其中三種（即Circoflex PCV2疫苗，Circumvent PCV2疫苗和Porcillis PCV疫苗）是亞單位疫苗，基于桿狀病毒表達(dá)的開(kāi)放閱讀框蛋白（Open Reading Frame 2，ORF2）制成。ORF2包含主要的中和表位，具有誘導(dǎo)保護(hù)性免疫反應(yīng)的潛力。將ORF2序列插入桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)，ORF2衣殼蛋白表達(dá)后，經(jīng)滅活和純化，制成的病毒樣顆粒在形態(tài)上與PCV2顆粒無(wú)差異。Circumvent PCV2疫苗和Porcillis PCV疫苗是同一核心疫苗的不同制劑，除韓國(guó)外，不在同一國(guó)家銷(xiāo)售。Circumvent PCV2疫苗主打北美市場(chǎng)，Porcillis PCV主打歐洲市場(chǎng)。

還有一種是PCV1/2嵌合疫苗。2008年，加拿大研究人員通過(guò)PCR檢測(cè)方法在豬組織勻漿中偶然發(fā)現(xiàn)PCV1/2嵌合的病毒毒株，美國(guó)輝瑞動(dòng)物保健品集團(tuán)有限公司（以下簡(jiǎn)稱(chēng)“輝瑞公司”）也因此回收了PCV1/2嵌合疫苗，以調(diào)查該病毒毒株是否為疫苗株。之后輝瑞公司改進(jìn)工藝，2011年8月，PCV1/2嵌合疫苗以全新的品牌（Fostera PCV疫苗）回歸市場(chǎng)。

目前市場(chǎng)上所有的商品化PCV2疫苗都是針對(duì)PCV2a基因型的。PCV2a疫苗對(duì)PCV2b感染豬有一定的交叉保護(hù)作用，這種交叉保護(hù)對(duì)控制PCVAD很有意義，因?yàn)槿蚋鞯氐难芯咳藛T從PCVAD感染豬中分離到的病毒基因型主要是PCV2b型。此外，PCV2b可能是構(gòu)成PCV2感染向PCVAD發(fā)展的一個(gè)誘發(fā)因素。

1.2 佐劑

商品化PCV2疫苗所用的佐劑各不相同，具體見(jiàn)表1。

2? 建議的免疫動(dòng)物

2.1 母豬和仔豬

目前，市場(chǎng)上銷(xiāo)售的PCV2疫苗中，只有一種疫苗可同時(shí)適用于母豬和仔豬免疫接種，其余四種疫苗只能用于3～4周齡仔豬，詳情見(jiàn)表1。給母豬接種PCV2疫苗的目的是向仔豬提供被動(dòng)免疫，新生仔豬通過(guò)初乳可獲得較高水平的母源抗體，免受PCV2感染。給母豬接種疫苗的勞動(dòng)強(qiáng)度要比給仔豬接種的強(qiáng)度低得多。仔豬出生后24 h～48 h內(nèi)吮吸到的初乳量和被動(dòng)獲得的母源抗體的半衰期直接決定其對(duì)疾病的抵抗力。與此相反，給仔豬免疫的基本原則是誘導(dǎo)仔豬產(chǎn)生主動(dòng)免疫力，避免其暴發(fā)PCVAD。

2.2 母源抗體

理想情況下，仔豬應(yīng)在體內(nèi)母源抗體水平降到最低但還能抵抗自然感染之前接種PCV2疫苗。雖然幾乎100%的母豬呈PCV2血清陽(yáng)性，但其抗體水平不盡相同，新生仔豬通過(guò)初乳獲得的母源抗體數(shù)量也不相同，因此，仔豬第一次免疫接種時(shí)，母源抗體是其潛在的干擾因素。

Fort等的研究表明，母源抗體水平會(huì)干擾仔豬接種PCV2疫苗后的免疫效果，當(dāng)仔豬的免疫過(guò)氧化物酶單層細(xì)胞試驗(yàn)（Immunoperoxidase Monolayer Assay，IPMA）滴度較高時(shí)（>10 log2），接種疫苗會(huì)干擾體液免疫反應(yīng)，當(dāng)仔豬IPMA滴度較小時(shí)（<8 log2），接種疫苗不會(huì)干擾免疫反應(yīng)。

上述結(jié)果與2012年Fraile等完成的一項(xiàng)田間試驗(yàn)的結(jié)果一致，即當(dāng)仔豬的IPMA滴度較高時(shí)（>10 log2），注射疫苗21 d后IPMA滴度未得到提高。因此，免疫接種時(shí)母源抗體水平越高，接種后獲得的PCV2 IgG滴度越低。但是這種干擾必須謹(jǐn)慎說(shuō)明，因?yàn)橹泻涂贵w而非PCV2 IgG抗體是保護(hù)仔豬免受PMWS侵害的關(guān)鍵要素之一。

另一些試驗(yàn)數(shù)據(jù)表明，當(dāng)以PCV2引起的相關(guān)病變和血清病毒載量為指標(biāo)評(píng)估疫苗效果時(shí)，母源抗體干擾不會(huì)抑制PCV2疫苗效果。綜上所述，在考察母源抗體干擾的同時(shí)，也要分析中和抗體的保護(hù)作用。

2.3 母豬和仔豬免疫效果比較

生產(chǎn)實(shí)踐表明，與接種疫苗獲得主動(dòng)免疫力的仔豬相比，通過(guò)免疫母豬提供的母源抗體產(chǎn)生被動(dòng)免疫力有利于改善仔豬斷奶前的平均日增重（Average Daily Weight Gain，DAWG）。在PCV2試驗(yàn)性攻毒模型下，仔豬8周齡接種疫苗產(chǎn)生主動(dòng)免疫力后，其血液和淋巴組織中的PCV2載量比從接種疫苗的母豬獲得被動(dòng)免疫力的仔豬的小。免疫保護(hù)的持續(xù)時(shí)間與試驗(yàn)條件和豬場(chǎng)環(huán)境相關(guān)，一次免疫后一般能維持12～13周（到15～16周齡）。

以上研究表明，給母豬接種疫苗可以避免新生仔豬早期感染PCV2。給仔豬群接種疫苗可以保護(hù)保育期末和生長(zhǎng)期初的仔豬。養(yǎng)豬從業(yè)者更喜歡給仔豬注射PCV2，因?yàn)槟冈纯贵w不太可能會(huì)給保育期末到生長(zhǎng)期初的豬群提供保護(hù)。

或出于節(jié)省成本的考慮，或暫無(wú)適用于母豬接種的疫苗，一些國(guó)家嘗試用適用于仔豬的PCV2亞單位疫苗給母豬免疫。在實(shí)驗(yàn)條件下，用適用于仔豬的PCV2亞單位疫苗免疫的母豬不能給后代提供充足的獲得性被動(dòng)免疫力。在此敦促養(yǎng)豬從業(yè)者和生產(chǎn)者按照疫苗的適用范圍使用，以優(yōu)化免疫效果。

3? 推薦免疫劑量

仔豬疫苗除一種亞單位疫苗外都采用單次免疫的方式，具體情況見(jiàn)表1。單次免疫的做法在生產(chǎn)中比較常見(jiàn)，因?yàn)樵摲椒梢怨?jié)約勞動(dòng)力成本，減小動(dòng)物應(yīng)激，降低針頭注射引起的其他疾?。ㄓ绕涫秦i繁殖與呼吸綜合征和PCV2）的傳播。接種疫苗時(shí)要嚴(yán)格執(zhí)行免疫程序，確保每頭豬都正確完成接種。在韓國(guó)，78%的仔豬采用單次免疫，該方法也越來(lái)越受到全球養(yǎng)豬生產(chǎn)者的歡迎。

4? 豬圓環(huán)病毒2型疫苗效果

4.1 疫苗評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

目前沒(méi)有統(tǒng)一的PCV2疫苗免疫效果評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，缺少精確和可重復(fù)的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ褪墙⒃囼?yàn)性評(píng)估PCV2疫苗免疫效果明確參數(shù)的主要障礙。目前疫苗免疫效果參數(shù)基于PMWS的診斷標(biāo)準(zhǔn)，包括：（1）出現(xiàn)臨床癥狀;（2）出現(xiàn)特征性顯微病變;（3）病灶內(nèi)出現(xiàn)PCV2。PMWS診斷的另一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)是血清中與臨床癥狀相關(guān)的病毒載量。這些數(shù)據(jù)可以用來(lái)預(yù)測(cè)PCV2感染狀態(tài)。此外，當(dāng)PCV2感染豬的血液出現(xiàn)中和抗體和γ-干擾素分泌細(xì)胞時(shí)，PCV2載量減小。

4.2 臨床效果

田間研究有助于評(píng)估PCV2疫苗的作用，如ADWG改善情況和死亡率降低情況等。不管使用哪個(gè)品牌的PCV2疫苗，給仔豬單次免疫能使仔豬從3周齡到19～26周齡期間的ADWG達(dá)到16 g/d～69 g/d，仔豬死亡率降低1.9 %～9.3%（表2）。還有一些研究表明，PCV2陽(yáng)性豬的數(shù)量和PCV2免疫豬病毒載量的減少可以提高豬群的ADWG，降低死亡率。不同品牌的PCV2疫苗在田間試驗(yàn)中對(duì)仔豬生產(chǎn)性能的不同影響可能不是因?yàn)橐呙绻πУ牟煌?，而是與疫病的混合感染、飼養(yǎng)系統(tǒng)和質(zhì)量、生產(chǎn)條件以及豬舍和環(huán)境設(shè)施等情況有關(guān)。

4.3 病毒學(xué)評(píng)估

4.3.1 接種PCV2疫苗后豬群病毒血癥減少

大量研究表明，PMWS豬群血清中的PCV2 DNA水平較健康豬和亞臨床感染豬的高。用實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)全血中的PCV2病毒載量能鑒別豬群感染狀態(tài)（即亞臨床、疑似和PCVAD陽(yáng)性豬群）。這些分類(lèi)雖然可在實(shí)驗(yàn)條件下和田間條件下評(píng)估PCV2疫苗效果，但具體分類(lèi)與實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法以及評(píng)估指標(biāo)有關(guān)。使用PCV2疫苗能減少出現(xiàn)病毒血癥的豬的數(shù)量和血液中的病毒載量，也能縮短病毒血癥持續(xù)時(shí)間（表3）。研究表明，不同品牌的疫苗單次免疫可在實(shí)驗(yàn)條件下使感染PCV2的豬出現(xiàn)病毒血癥比例降低42.0%～86.1%。未接種PCV2疫苗的仔豬病毒載量明顯提高，而且可向外排毒。

4.3.2 接種PCV2疫苗后豬群排毒量減少

PCV2病毒可以通過(guò)口、鼻和糞便向外排毒。鼻腔是PCV2傳播最有效的途徑之一。經(jīng)鼻分泌物傳播被認(rèn)為是病毒水平傳播的一種可能模式，增加了豬群感染風(fēng)險(xiǎn)以及豬群間PCV2循環(huán)的數(shù)量。接種PCV2疫苗使豬減少鼻和糞便的排毒量。研究表明，接種PCV2疫苗是預(yù)防PCV2感染的有效途徑，是控制個(gè)體與群體感染的有力工具。

4.4 免疫學(xué)評(píng)估

4.4.1 中和抗體

PCV2特異性中和抗體生成受損與PMWS發(fā)展有一定的相關(guān)性。接種PCV2疫苗能減少豬的病毒血癥發(fā)生率，提高中和抗體滴度。研究表明，中和抗體在清除病毒和機(jī)體恢復(fù)中起到了重要的作用。出現(xiàn)中和抗體以及PCV2復(fù)制減少與實(shí)驗(yàn)條件下或田間條件下PCVAD臨床癥狀消失強(qiáng)烈相關(guān)，因此中和抗體在PMWS的免疫保護(hù)中起到了關(guān)鍵作用。還有數(shù)據(jù)表明，PCV2 IgG抗體與中和抗體之間沒(méi)有明顯的相關(guān)性。在商品化的疫苗中，PCV1/2嵌合疫苗誘導(dǎo)的中和抗體效價(jià)顯著高于亞單位疫苗，而亞單位疫苗與滅活疫苗中和抗體效價(jià)之間的差異不顯著。雖然單次免疫能誘導(dǎo)大部分豬產(chǎn)生中和免疫反應(yīng)，但單次免疫產(chǎn)生的中和抗體平均滴度低于二次免疫的。

4.5 γ-干擾素分泌細(xì)胞評(píng)估

γ-干擾素（interferon-γ，IFN-γ）是由抗原刺激性T細(xì)胞生成的重要的免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞因子，能調(diào)控CD4 T細(xì)胞分化成Th1效應(yīng)因子，并調(diào)動(dòng)對(duì)抗病毒感染的細(xì)胞介導(dǎo)免疫。二次免疫14 d～21 d后，可在亞臨床感染的豬體內(nèi)檢測(cè)到PCV2特異性γ-干擾素分泌細(xì)胞，同時(shí)血液病毒載量減小。單次免疫3周后能誘導(dǎo)豬產(chǎn)生PCV2特異性γ-干擾素分泌細(xì)胞，維持4～6周。

4.6? 病理學(xué)評(píng)估

PMWS診斷必須檢測(cè)淋巴組織的特征性病變、病灶內(nèi)的PCV2抗原或DNA。因此，病灶內(nèi)PCV2抗原檢測(cè)的病理學(xué)分析在評(píng)估PCV2疫苗的免疫效果時(shí)至關(guān)重要。一些研究數(shù)據(jù)表明，接種疫苗可明顯改善組織的病變情況（表3）。

5? 豬圓環(huán)病毒2型疫苗的臨床應(yīng)用

5.1 斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征

商品化PCV2疫苗最初只用來(lái)控制PMWS。接種PCV2疫苗能提高豬群的生長(zhǎng)性能，而且能顯著降低豬群的豬繁殖與呼吸綜合征、細(xì)小病毒病和豬肺炎支原體病的感染情況。免疫接種結(jié)合良好的飼養(yǎng)管理如合理的飼養(yǎng)密度、全進(jìn)全出式生產(chǎn)系統(tǒng)和有效通風(fēng)等，都能有效控制PMWS，維持可接受的感染水平。

5.2 豬呼吸道疾病

PCVAD的模式一直在變，目前呼吸道癥狀是其主要臨床癥狀，接種PCV2疫苗后，豬群的PMWS發(fā)病率降低了。PCV2疫苗可以顯著提高豬群的生長(zhǎng)性能，提高出欄率。自從韓國(guó)使用PCV2疫苗后，6～8周齡和8～14周齡仔豬的PMWS發(fā)病率得到了有效控制。PCV2亞臨床感染的豬能長(zhǎng)時(shí)間存活，而后可能感染其他常見(jiàn)的呼吸道病原體，如豬肺炎支原體和多殺性巴氏桿菌。因此，接種PCV2疫苗能顯著降低豬呼吸道疾病的發(fā)生率。

5.3 公豬PCV2精液排毒

公豬感染PCV2后，可無(wú)癥狀長(zhǎng)期排出病毒或精液質(zhì)量降低。人工授精是PCV2在豬群間傳播的潛在路徑。公豬接種PCV2疫苗后可以減少精液帶毒，降低公豬向外排毒量。因此，接種疫苗可顯著改善精液質(zhì)量。

5.4 母豬繁殖失敗

后備母豬和經(jīng)產(chǎn)母豬接種PCV2疫苗后能提高繁殖性能。母豬接種PCV2疫苗后能顯著提高所產(chǎn)仔豬斷奶前的平均日增重，授精成功率提高7%。PCV2能垂直傳播，如果有細(xì)小病毒混合感染或免疫刺激，新生仔豬易發(fā)PMWS。韓國(guó)和美國(guó)的抽樣調(diào)查表明，PCV2血清陽(yáng)性母豬所產(chǎn)的新生仔豬和哺乳仔豬有33%～40%的豬存在PCV2病毒血癥，病毒血癥會(huì)加劇新生仔豬斷奶前的死亡。母豬在妊娠期接種PCV2疫苗能降低血液中的PCV2載量和經(jīng)胎盤(pán)感染率。因此，母豬接種PCV2疫苗有助于控制繁殖障礙性疾病。

6? 結(jié)論

PCV2與豬的多種疾病和癥狀有關(guān)，我們將其稱(chēng)為PCVAD。PCV2疫苗開(kāi)發(fā)之初是為了控制PMWS疾病，但現(xiàn)在也用來(lái)防控PCVAD。目前，市售的PCV2疫苗大部分存在抗原類(lèi)型、佐劑類(lèi)型、推薦劑量和接種動(dòng)物等方面的不同。目前對(duì)于PCV2疫苗免疫效果的臨床評(píng)估還沒(méi)有統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)。基于實(shí)驗(yàn)條件下和田間條件下的臨床效果、病毒學(xué)、免疫學(xué)和病理組織學(xué)評(píng)估顯示，所有商品化PCV2疫苗非常有效。

原題名：Commercial porcine circovirus type 2 vaccines： Efficacy and clinical application（英文）

原作者：Chanhee Chae（韓國(guó)首爾大學(xué)）

譯者簡(jiǎn)介：劉國(guó)民（1982- ），蒙古族，內(nèi)蒙古通遼人，碩士，執(zhí)業(yè)獸醫(yī)師，就職于金宇保靈生物藥品有限公司，主要從事疫苗技術(shù)服務(wù)工作;E-mail：tlkllgm6661425@163.com

校對(duì)者簡(jiǎn)介：宋慶慶（1985- ），博士，金宇生物技術(shù)部總監(jiān);E-mail：songqingqing@jinyubaoling.com.cn

林文耀（1985- ），碩士，主要從事規(guī)?；i場(chǎng)生產(chǎn)管理及豬病的防控工作;E-mail：linwenyao@? ?jinyubaoling.com.cn