苦參種子深加工過程油脂類副產(chǎn)物發(fā)酵產(chǎn)靈菌紅素的 研究

倪亮 張森 郭盛 曾飛 徐明明 段金廒

（1. 南京中醫(yī)藥大學(xué) 江蘇省中藥資源產(chǎn)業(yè)化過程協(xié)同創(chuàng)新中心 中藥資源產(chǎn)業(yè)化與方劑創(chuàng)新藥物國家地方聯(lián)合工程研究中心 國家中醫(yī)藥管理局中藥資源循環(huán)利用重點研究室，南京 210023；2. 南京中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，南京 210029）

靈菌紅素（Prodigiosin）是由粘質(zhì)沙雷氏菌、放線菌及海洋細(xì)菌等微生物產(chǎn)生的一種具有3 個吡咯環(huán)骨架結(jié)構(gòu)的生物堿類天然紅色素［1-4］，具有抑菌、免疫抑制、抗腫瘤、抗瘧疾等廣泛的生理活性［5-7］，現(xiàn)已成為抗腫瘤藥物研發(fā)的重要前體物質(zhì)，相關(guān)藥物研究已進入FDA 臨床II 期［8］。靈菌紅素也廣泛應(yīng)用于傳統(tǒng)染織品，具有良好的上染度和色牢度，染色織物對金黃色葡萄球菌和大腸桿菌具有的較高的抑菌率［9-12］。近年來，采用微生物發(fā)酵法生產(chǎn)靈菌紅素已成為國內(nèi)外研究的熱點［13-14］。在研究過程中，研究人員發(fā)現(xiàn)以植物油脂為碳源，可以顯著提高靈菌紅素的產(chǎn)量，如Giri 等［15］以花生粉的油脂加入培養(yǎng)基時，粘質(zhì)沙雷氏菌產(chǎn)靈菌紅素的產(chǎn)率有較顯著提高。

中藥資源產(chǎn)業(yè)化過程中產(chǎn)生的非藥用部位及廢棄藥渣依然含有大量值得開發(fā)的資源性物質(zhì)，任由其丟棄不僅浪費資源，且會導(dǎo)致一系列環(huán)境污染等問題。本課題組前期研究顯示，在苦參藥材生產(chǎn)過程中產(chǎn)生的大量苦參種子資源可作為提取苦參堿類生物堿資源性物質(zhì)的重要原料，并建立了其提取純化工藝［16］。但是提取完生物堿類成分的藥渣等固廢物因缺乏有效利用途徑而廢棄，造成資源浪費與環(huán)境污染［17］。對該類固廢物進一步研究顯示，其含有較高比例的脂肪油，是具有一定開發(fā)潛力的油脂原料。據(jù)此，本研究以提取生物堿類成分后所產(chǎn)生的苦參種子固廢物油脂為原料，進行發(fā)酵生產(chǎn)靈菌紅素工藝研究，以期為苦參種子固廢物的資源化利用提供科學(xué)依據(jù)，為苦參資源產(chǎn)業(yè)的提質(zhì)增效提供 支撐。

1 材料與方法

1.1 材料

篩選培養(yǎng)基（（NH4）2SO40.03 g/L、尿素0.3 g/L、KH2PO40.2 g/L、苦參種子油5 g/L、MgSO40.1 g/L）、種子培養(yǎng)基（蛋白胨10 g/L，酵母膏5 g/L，NaCl 10 g/L）、酵母膏蔗糖培養(yǎng)基（酵母膏5 g/L，蔗糖5g/L，KH2PO40.2 g/L，NaCl 10 g/L） 均 為 自 制， 其 中 （NH4）2SO4、尿素、KH2PO4、MgSO4以及NaCl 購自國藥集團化學(xué)試劑有限公司；蛋白胨、酵母膏、牛肉膏購自南京良緯生物科技有限公司。

苦參種子藥渣為采用酸水提取工藝提取生物堿后所得，經(jīng)烘干、粉碎、過60 目篩后，自然壓榨法制得種子油。樣品置于4℃冰箱保存?zhèn)溆??；ㄉ?、橄欖油為市售自然壓榨商品，樣品置?℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

Waters ACQUITY UPLC 系統(tǒng)（包括四元泵溶劑系統(tǒng)、在線脫氣機和自動進樣器，美國Waters 公司）；Waters Q-TOF Premier 飛行時間質(zhì)譜儀（美國Waters 公司）；BT125 型電子天平（賽多利斯科學(xué)儀器有限公司）；Milli-Q Advantage 超純水系統(tǒng)（美國Millipore 公司）；KQ-250E 型超聲波清洗器（昆山禾創(chuàng)超聲儀器有限公司）；Beckman Coulter Microfuge 16型離心機（美國貝克曼庫爾特有限公司）。乙腈為色譜純，購自德國默克公司；其他化學(xué)試劑均為分析純，購自上海國藥化學(xué)試劑公司。

1.2 方法

1.2.1 菌株的篩選與鑒定

1.2.1.1 菌株篩選 采集自江蘇南京某化工廠周邊土壤，經(jīng)過200 目過篩，稱取1 g 土樣于100 mL滅菌水中，37℃、120 r/min 震蕩6 h。混合菌液在以苦參種子油為唯一碳源的選擇培養(yǎng)基上進行富集，37℃、培養(yǎng)48 h。吸取1 mL 梯度稀釋100 倍、 1 000倍、10 000倍涂布平板后，37℃條件下培養(yǎng)28 h，挑選紅色單菌落于LB 平板上劃線分離純化，獲得單菌落，同時對純化后的菌株進行液體發(fā)酵復(fù)篩。

1.2.1.2 菌株的鑒定 對復(fù)篩后的菌株，進行形態(tài)學(xué)觀察，同時進行16S rDNA 鑒定，測序結(jié)果在NCBI 中進行對比，并利用MEGA7.0 軟件繪制出該菌株的系統(tǒng)發(fā)育樹。

1.2.2 斜面培養(yǎng) 將菌株劃線接種于LB 斜面，30℃培養(yǎng)48 h。種子培養(yǎng)：每支斜面加5 mL 無菌水，取1 mL 接入種子培養(yǎng)基中，轉(zhuǎn)速180 r/min，30℃條件下培養(yǎng)24 h。發(fā)酵培養(yǎng)：500 mL 三角瓶中裝入發(fā)酵培養(yǎng)基150 mL，按3%接種量接入種子培養(yǎng)液，轉(zhuǎn)速180 r/min 搖床培養(yǎng)。

1.2.3 發(fā)酵產(chǎn)物靈菌紅素的分析 供試品溶液的制備：精密量取發(fā)酵液1 mL 12 000 r/min 離心分別收集沉淀和上清液。將沉淀和發(fā)酵液上清液分別精密加入10 mL 和9 mL 酸性甲醇（pH 2-3），震蕩混勻，靜置至沉淀基本無色，4 500 r/min 離心5 min，合并提取液靜置30 min，經(jīng)0.22 μm 的微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

UPLC 色譜條件：采用ACQUITY UPLC BEH C18色譜柱（2.1 mm×100 mm，1.7 μm），以0.1%甲酸溶液（A）和乙腈（B）為流動相，梯度洗脫：0-12 min，5%-100% B；12-13 min，100%-100% B；13-20 min，100%-5% B。流速0.4 mL/min；柱溫30℃；進樣體積 2 μL。檢測波長：535 nm。

Q-TOF-MS/MS 質(zhì)譜條件：ESI+離子化模式；毛細(xì)管電壓3.0 kV，離子源溫度150℃，脫溶劑氣溫度550℃，脫溶劑氣流量1 000 L/h，錐孔氣流量50 L/h，碰撞氣流量0.15 mL/min。

標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：精密稱取對照品靈菌紅素，制成一定濃度的對照品儲備液。甲醇稀釋成不同濃度的對照品溶液（0.005-0.16 mg/mL），以峰面積為縱坐標(biāo)Y，對照品溶液濃度為橫坐標(biāo)X，進行線性回歸分析，繪制靈菌紅素標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.2.4 菌體干重的測定 將粘質(zhì)沙雷氏菌L9 接種于LB 平板，培養(yǎng)24 h 活化。取活化單菌落接種于LB 液體培養(yǎng)基，30℃恒溫，180 r/min 搖瓶培養(yǎng)24 h。分別取發(fā)酵液0.5 mL、1 mL、1.5 mL、2 mL、2.5 mL、3 mL 至10 mL 已知重量的不同離心管中，用于檢測吸光度以及菌體干重。用甲醇稀釋至10 mL，離心，純水重懸并再次離心，重復(fù)兩次，收集沉淀。濕菌體于60℃烘干至恒重，得菌體干重（Dry cell weight，DCW）。將發(fā)酵液按照上述步驟離心收集沉淀，純水稀釋在λ600nm處測試吸光度。

1.2.5 粘質(zhì)沙雷氏菌L9 發(fā)酵條件優(yōu)化

1.2.5.1 發(fā)酵時間對菌體生長與靈菌紅素產(chǎn)率的影響 考察發(fā)酵時間對靈菌紅素產(chǎn)率的影響，取50 mL 酵母膏蔗糖培養(yǎng)基裝入250 mL 錐形瓶中平行三批次，加入已活化24 h 種子液1 mL，以未接種的空白培養(yǎng)基做等量稀釋作對照，30℃、180 r/min 培養(yǎng)50 h，每隔4 h 測定其靈菌紅素產(chǎn)量，以發(fā)酵時間為橫坐標(biāo)，靈菌紅素產(chǎn)量和菌體干重為縱坐標(biāo)繪制曲線圖。

1.2.5.2 不同碳源對靈菌紅素產(chǎn)率的影響 在酵母膏蔗糖培養(yǎng)基基礎(chǔ)上分別選取葡萄糖、甘油、苦參種子油、花生油、橄欖油及可溶性淀粉替代蔗糖作為粘質(zhì)沙雷氏菌L9 發(fā)酵培養(yǎng)基的碳源，每種碳源添加5 g/L、10 g/L 的濃度，平行三批次對碳源進行篩選，測量各發(fā)酵液的靈菌紅素含量。

1.2.5.3 不同氮源對靈菌紅素產(chǎn)率的影響 在已優(yōu)化的單因素基礎(chǔ)上，分別選取牛肉膏、酵母膏、尿素及硫酸銨作為粘質(zhì)沙雷氏菌L9 發(fā)酵培養(yǎng)基的氮源，每種氮源添加5 g/L、10 g/L 的濃度，平行三批次對氮源進行篩選，測量各發(fā)酵液的靈菌紅素含量。

1.2.5.4 不同發(fā)酵溫度對靈菌紅素產(chǎn)率的影響 在已優(yōu)化的單因素基礎(chǔ)上，選取28℃、30℃、32℃、34℃及37℃為L9 菌株的發(fā)酵溫度，測量靈菌紅素的產(chǎn)量和菌體干重。

1.2.5.5 金屬離子對對靈菌紅素產(chǎn)率的影響 在已優(yōu)化的單因素基礎(chǔ)上，分別選擇Mg2+、Ca2+、Fe2+、Cu2+及Zn2+作為考察因素，測量不同濃度金屬離子對于靈菌紅素產(chǎn)量的影響。

2 結(jié)果

2.1 菌株篩選及鑒定

從江蘇南京某化工廠周邊土壤中篩選得到5 株能以苦參種子油為唯一碳源生長的菌株，其中1 株（L9）長勢最佳，挑選該菌株開展后續(xù)研究。

將L9 菌株接種于LB 培養(yǎng)基上30℃培養(yǎng)2 d，其在培養(yǎng)基上呈流動狀蔓延，末端形成樹杈狀蔓延形狀，并將培養(yǎng)基染成紅色。該紅色菌體生長迅速，24 h 后菌落為圓形，表面濕潤粘稠，有特殊臭味。通過將L9 菌株的16 S rDNA 基因序列與NCBI中已知的近源菌株進行多序列比對，利用MEGA7.0繪制系統(tǒng)發(fā)育樹（圖1），結(jié)合形態(tài)特征，最終將L9菌株鑒定為粘質(zhì)沙雷氏菌（Serratia marcescensL9），保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心（CCTCC NO：M 2018694）。

圖1 Serratia marcescens L9 16S rDNA 進化樹分析

2.2 菌株發(fā)酵產(chǎn)物鑒定

利用UPLC-Q-TOF-MS/MS 對純化后的發(fā)酵產(chǎn)物進行定性分析，結(jié)果（圖2）顯示，其質(zhì)譜分子量信息（324.2022）、碎片信息與文獻報道預(yù)測值（324.2070）、碎片信息一致［18-19］，可確定該樣品為靈菌紅素（Prodigiosin）。

圖2 靈菌紅素Q-TOF-MS/MS 圖譜

2.3 靈菌紅素分析方法學(xué)考察

2.3.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備及線性關(guān)系考察 按1.2.3方法制備系列濃度的對照品溶液進樣測定，并進行線性回歸分析，計算相關(guān)系數(shù)。得回歸方程為y=8.49×106x-1.02×104，R2= 0.999 9（圖3-A），線性范圍0.005-0.16 mg/mL。

2.3.2 精密度、重復(fù)性和穩(wěn)定性試驗 精密度試驗：取靈菌紅素對照品溶液，在上述色譜條件下重復(fù)進樣6 次，以其峰面積的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）來計算其精密度。結(jié)果顯示靈菌紅素的峰面積RSD 為3.2%，表明該方法精密度良好。

重復(fù)性試驗：按照1.2.3 供試品溶液制備方法，取同一發(fā)酵樣品制備供試品溶液平行6 組，經(jīng)檢測分析，計算其含量及RSD。結(jié)果顯示靈菌紅素含量的RSD 為2.1%，表明該方法重復(fù)性良好。

穩(wěn)定性試驗：取重復(fù)性試驗中的一份供試品溶液，分別于0、4、8、12、24、48 h 時注入液相色譜儀，計算靈菌紅素峰面積，結(jié)果顯示峰面積RSD 為 1.7%，表明供試品溶液在48 h 內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.3.3 加樣回收率試驗 取已知含量的靈菌紅素粗品0.1 g，分別按已知含量的80%、100%、120%三個水平加入對照品，按1.2.3 項下供試品溶液制備方法制備供試品溶液，注入液相色譜儀測定，計算加樣回收率。結(jié)果顯示靈菌紅素的平均回收率為98.27%，RSD 為2.9%，表明本方法準(zhǔn)確性較好。

2.4 粘質(zhì)沙雷氏菌L9菌體干重標(biāo)準(zhǔn)曲線的測定

將菌體干重與吸光值 OD600進行回歸分析，結(jié)果顯示（圖3-B）在0.235-0.795 區(qū)間呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系（y=3.306x+0.599 2，R2=0.999 3）。

圖3 線性關(guān)系考察

2.5 粘質(zhì)沙雷氏菌L9發(fā)酵條件優(yōu)化

2.5.1 發(fā)酵時間對菌體生長與靈菌紅素產(chǎn)率的影響 粘質(zhì)沙雷氏菌L9 菌株用酵母膏蔗糖培養(yǎng)基搖瓶發(fā)酵，以發(fā)酵時間為橫坐標(biāo)，靈菌紅素產(chǎn)量和菌體干重為縱坐標(biāo)繪制曲線圖。結(jié)果（圖4）顯示，30℃恒溫，180 r/min 培養(yǎng)下，菌株于接種后10 h 左右進入對數(shù)生長期，于28-36 h 達到最大值并進入穩(wěn)定期，38 h 后進入衰亡期。處于對數(shù)生長期時的菌體靈菌紅素產(chǎn)量較低，菌體進入穩(wěn)定期后大量合成，于38 h 接種后達到最大值約為74.4 mg/L，超過42 h 靈菌紅素含量開始降低。

圖4 粘質(zhì)沙雷氏菌L9 菌株時間-生長曲線與靈菌紅素 產(chǎn)量

2.5.2 不同碳源對靈菌紅素產(chǎn)率的影響 如圖5-A所示，增加蔗糖、甘油、花生油、橄欖油和苦參種子油均能提高靈菌紅素產(chǎn)量，其中以添加苦參種子油的產(chǎn)率最高。添加苦參種子油到10 g/L 時靈菌紅素的產(chǎn)量可達到76.34 mg/L。

2.5.3 不同氮源對靈菌紅素產(chǎn)率的影響 如圖5-B所示，L9 菌株在牛肉膏做為氮源下能大量合成靈菌紅素，當(dāng)牛肉膏添加量為5-10 g/L 時靈菌紅素產(chǎn)量為40.64 g/L，酵母膏、蛋白胨作為氮源靈菌紅素合成量較少，以硫酸銨或尿素為唯一氮源的情況下，L9 菌株不能產(chǎn)生靈菌紅素，生長基本停滯。

2.5.4 不同發(fā)酵溫度對靈菌紅素產(chǎn)率的影響 如圖5-C 所示，L9 菌株在28℃時菌體干重最高，菌體生長最適宜。30℃時菌體干重略有下降但靈菌紅素產(chǎn)量最高，溫度高于32℃時菌體干重和靈菌紅素產(chǎn)量逐漸降低，當(dāng)溫度達到37℃時靈菌紅素的合成受到嚴(yán)重抑制。

2.5.5 金屬離子對對靈菌紅素產(chǎn)率的影響 如圖5-D所示，L9 菌株在鎂離子和鈣離子做為金屬離子時可大量合成靈菌紅素，且當(dāng)鈣離子濃度為0.25 g/L 時靈菌紅素產(chǎn)量達到最大值約為162.11 mg/L；亞鐵離子、鋅離子和錳離子為金屬離子添加時靈菌紅素合成量少，L9 菌株幾乎不能產(chǎn)生靈菌紅素，生長基本停滯。

圖5 碳源、氮源、溫度及金屬元素對靈菌紅素產(chǎn)量的影響

2.6 響應(yīng)面法優(yōu)化發(fā)酵培養(yǎng)基

根據(jù)上述單因素試驗結(jié)果，選擇苦參種子油、牛肉膏和氯化鈣做爬坡試驗。苦參種子油濃度對靈菌紅素產(chǎn)量的影響結(jié)果（圖6-A）表明，靈菌紅素的產(chǎn)量隨著苦參種子油的添加量增加而增高，并在10 g/L 時達到最大，之后產(chǎn)量開始下降；牛肉膏濃度對靈菌紅素產(chǎn)量的影響結(jié)果（圖6-B）表明，靈菌紅素的產(chǎn)量隨著牛肉膏的添加量增加而增高，并在5-10 g/L 時達到最大，之后產(chǎn)量開始下降。氯化鈣濃度對靈菌紅素產(chǎn)量的影響結(jié)果（圖6-C）表明，靈菌紅素的產(chǎn)量隨著氯化鈣的添加量增加而增高，并在0.25-0.5 g/L 時達到最大，之后產(chǎn)量開始下降。

圖6 不同濃度苦參種子油、牛肉膏、氯化鈣對靈菌紅素產(chǎn)量的影響

考察因素確定后，采用Design-Expert8.0.6 中Box-Behnken 法設(shè)計因素17 組試驗（表1），結(jié)果見表2。

表1 Box-Behnken 試驗因素

表2 Box-Behnken 試驗設(shè)計及結(jié)果

通過Design-Expert8.0.6 軟件對表2 中的試驗數(shù)據(jù)進行分析，經(jīng)擬合得到L9 菌株靈菌紅素產(chǎn)量的多元回歸模型：靈菌紅素=258.08+49.98A+78.44B-31.74C+48.62AB-13.97AC-25.80BC-73.39A2-59.37B2-98.42C2。

回歸模型的分析結(jié)果如表3 所示，整個模型的P＜0.001，表明該回歸方程成立。失擬項值為0.765 8，大于0.05，不顯著，表明此回歸模型與試驗數(shù)據(jù)擬合度高，試驗誤差小，可用該模型分析并預(yù)測L9 發(fā)酵培養(yǎng)基中各主要因子對靈菌紅素產(chǎn)量的影響。方差檢驗顯示一次項中苦參種子油和牛肉膏的影響極為顯著，氯化鈣為高度顯著。二次項均是極為顯著，交互項中AB 高度顯著，BC 為顯著，表明各因素之間存在著交互作用。

表3 靈菌紅素回歸模型的統(tǒng)計分析

對此回歸模型進一步利用軟件分析，可得各個因素相互作用的響應(yīng)面立體圖，見圖7。

各因子響應(yīng)面曲線顯示交互作用顯著，擬合面有最大值。結(jié)果顯示，苦參種子油、牛肉膏和氯化鈣的最佳濃度分別為12.93 g/L、9.47 g/L 及0.3 g/L。經(jīng)優(yōu)化后的培養(yǎng)基稱為苦參種子油培養(yǎng)基，在30℃條件下，180 r/min 搖瓶發(fā)酵，靈菌紅素產(chǎn)量最高，預(yù)測產(chǎn)量為332.37 mg/L。

2.7 驗證試驗

為驗證模型的準(zhǔn)確性，采用優(yōu)化的苦參種子油培養(yǎng)基進行發(fā)酵。結(jié)果顯示，靈菌紅素實際產(chǎn)量平均值為317.21 mg/L，與模型預(yù)測的最大響應(yīng)值基本吻合，比優(yōu)化前初始產(chǎn)率提高近3.2 倍。

3 討論

圖7 苦參種子油、牛肉膏和氯化鈣對靈菌紅素產(chǎn)量交互影響的響應(yīng)面曲線分析

有文獻報道，溫度對靈菌紅素的合成具有顯著影響，如粘質(zhì)沙雷氏菌在低于20℃或高于37℃時基本不產(chǎn)生靈菌紅素［20］。本試驗中，單因素考察顯示L9 菌株在30℃時，靈菌紅素產(chǎn)量最高，但37℃靈菌紅素的產(chǎn)率顯著下降。Kurbanoglu 等［21］發(fā)現(xiàn)有機氮源較無機氮源更適合靈菌紅素的生產(chǎn)，實驗表明L9 菌株在牛肉膏做為氮源下能大量合成靈菌紅素，以硫酸銨或尿素為唯一氮源的情況下，L9 菌株幾乎不能產(chǎn)生靈菌紅素，生長基本停滯。實驗結(jié)果表明，金屬離子對L9 菌株靈菌紅素的產(chǎn)量有較大影響，F(xiàn)e2+、Cu2+、Zn2+對靈菌紅素和菌體繁殖有抑制作用，Ga2+、Mg2+對靈菌紅素的合成有明顯的促進作用。據(jù)文獻報道，靈菌紅素合成的起始前體為脂肪酸或不飽和脂肪酸自氧化過程中產(chǎn)生的2-辛烯醛［22-23］，實驗結(jié)果表明粘質(zhì)沙雷氏菌L9 利用苦參種子油時靈菌紅素產(chǎn)率最高。

目前，利用廢棄物產(chǎn)靈菌紅素已取得一定的成果，如Kurbanoglu 等［21］利用農(nóng)業(yè)廢棄物羊角蛋白作為氮源，誘導(dǎo)粘質(zhì)沙雷氏菌MO-1 發(fā)酵生產(chǎn)靈菌紅素，但靈菌紅素最高產(chǎn)率僅為277.74 mg/L。在已優(yōu)化發(fā)酵條件下，以橄欖油、花生油分別代替苦參種子油發(fā)酵生產(chǎn)靈菌紅素的產(chǎn)率為237.33 mg/L、153.33 mg/L，顯著低于苦參種子油發(fā)酵生產(chǎn)靈菌紅素的產(chǎn)率317.21mg/L。橄欖油、花生油屬于食用性油脂，其成本相對較高，而苦參種子油脂是苦參種子深加工過程產(chǎn)生的副產(chǎn)物，其廉價易得，且苦參種子副產(chǎn)物油脂中含有一定量的生物堿和黃酮類物質(zhì)，這些物質(zhì)是廣譜的抗菌成分［24］。L9 菌株在極端環(huán)境下依然可以耐受并高效利用油脂類成分產(chǎn)生高附加值的靈菌紅素，由此可見L9 菌株在利用苦參種子等富含油脂類中藥廢棄物產(chǎn)靈菌紅素的過程中具有一定的應(yīng)用前景。

4 結(jié)論

綜上所述，本研究成功篩選得到一株適宜于以中藥副產(chǎn)物為原料產(chǎn)靈菌紅素的粘質(zhì)沙雷氏菌L9 菌株，并以苦參種子副產(chǎn)物油脂作為唯一碳源發(fā)酵生產(chǎn)靈菌紅素，優(yōu)化獲得其最佳培養(yǎng)基組成和培養(yǎng)條件，在有效處置苦參種子固廢物的同時產(chǎn)生靈菌紅素高附加值產(chǎn)品，為苦參資源的提質(zhì)增效提供了科學(xué)依據(jù)，也為種子類藥材深加工過程固廢物的資源化利用提供了借鑒。