人參二醇?；a(chǎn)物的合成及其對(duì)大鼠離體胸主動(dòng)脈的影響

周金娜，張榮平，鄒 澄，楊為民，段文越，陳 晨，胡建林

昆明醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院暨云南省天然藥物藥理重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，昆明 650500

三七屬五加科人參屬植物，又名田七，金不換，具有止血、散瘀、定痛的功效。三七是我國云南省文山市的道地藥材，在我國已經(jīng)有600年以上的藥用歷史，臨床上常用于治療血管疾病，如動(dòng)脈粥樣硬化[1,2]，冠心病[3]和高血壓[4]。三七發(fā)揮藥理活性的主要有效成分是三七皂苷[5-7]，以三七總皂苷為主要成分的藥物—血塞通，具有通脈活絡(luò)和增加腦血流量的作用。血塞通里的三七皂苷可以在體內(nèi)發(fā)生代謝，典型代謝為逐步脫糖至生成苷元[8]。因此，對(duì)三七皂苷元進(jìn)行結(jié)構(gòu)改造具有重要意義。

新藥研究開發(fā)的一條有效途徑是通過對(duì)豐產(chǎn)易得的天然產(chǎn)物進(jìn)行結(jié)構(gòu)改造以期發(fā)現(xiàn)新的活性成分[9]。三七中苷元類型主要分為原人參二醇和原人參三醇，目前，大量的結(jié)構(gòu)改造工作集中于三七皂苷，主要包括酸水解，堿水解，酶裂解等方法，而針對(duì)三七苷元改造的研究方法則較少。為了充分開發(fā)利用這一植物資源，本文以人參二醇為原料，將其3位OH通過與酰氯化合物(圖1中1～10)反應(yīng)，合成了10個(gè)人參二醇?；苌?圖1中PD-1～10)，利用Wire Myograph System DMT血管張力測(cè)定儀測(cè)定其舒張大鼠胸主動(dòng)脈活性，結(jié)構(gòu)與合成路線如圖1所示，這10個(gè)化合物均為新化合物。

1 儀器和材料

78-1型磁力攪拌器(杭州儀器電機(jī)廠)；BUCHI R-200旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(瑞士)；TN型托盤式扭力天平(上海第二天平儀器廠)；FA 2004電子天平(上海舜宇恒平科學(xué)儀器有限公司)HH-2型數(shù)顯恒溫水浴鍋(國華電器有限公司)；DF-101S集熱式恒溫加熱磁力攪拌器(鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司)；KQ-100型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；SHZ-D循環(huán)水式真空泵(鞏義市予華儀器有限公司)瑞士AM-400型核磁共振波譜儀(全部化合物的波譜數(shù)據(jù)均由中國科學(xué)院昆明植物研究所儀器中心測(cè)定)；Wire Myograph System DMT血管張力測(cè)定儀(Danish Myo Technology Company)；PowerLAB數(shù)據(jù)記錄和分析系統(tǒng)(澳大利亞Adinstruments公司)；Motic SMZ168-TL解剖顯微鏡(麥克奧迪實(shí)業(yè)集團(tuán)有限公司)；WA3010顯微鏡(上海醫(yī)療器械集團(tuán))；維納斯眼科剪(江蘇蘇科醫(yī)療器械有限公司)；烏拉坦(天津市軒昂科工貿(mào)有限公司)。

樣品(20R)-人參二醇(含量≥90%)購買于上海思達(dá)醫(yī)藥化工科技有限公司，并經(jīng)核磁共振氫譜與碳譜確定其結(jié)構(gòu)正確。所有化學(xué)合成試劑主要為分析純，購買于上海晶純實(shí)業(yè)有限公司(阿拉丁)和上海泰坦科技股份有限公司(阿達(dá)瑪斯)，柱層析硅膠為青島海洋化工廠生產(chǎn)的300～400目硅膠，薄層層析硅膠為默克公司生產(chǎn)的高效薄層層析板，顯色劑為5%的硫酸乙醇溶液。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 PD-1～7的制備

稱取7份人參二醇，每份46 mg，編號(hào)1～7，催化劑量的DMAP，依次加入25 mL兩口反應(yīng)瓶中，用5mL無水吡啶充分溶解后，1～7號(hào)兩口反應(yīng)瓶分別滴加15滴苯甲酰氯，20滴鄰氯苯甲酰氯，5滴4-三氟甲基苯甲酰氯，15滴對(duì)甲基苯甲酰氯，15滴2，4-二氯苯甲酰氯，5滴3-苯基丙酰氯，5滴特戊酰氯，加熱攪拌反應(yīng)，TLC檢測(cè)反應(yīng)進(jìn)程。至原料不再消耗后，反應(yīng)到達(dá)終點(diǎn)。室溫放冷，將反應(yīng)液傾入裝有100 mL水的燒杯中，稍攪拌，靜置待酰氯水解完全。用棉花柱過濾，蒸餾水和飽和食鹽水沖洗三次，乙酸乙酯沖洗三次，收集酯層。酯層用無水Na2SO4干燥，濃縮回收酯層，反應(yīng)物1～3經(jīng)300～400目硅膠柱分離，以石油醚∶乙酸乙酯(15∶1)洗脫，反應(yīng)物4～6經(jīng)300～400目硅膠柱分離，以石油醚：乙酸乙酯(12∶1)洗脫，反應(yīng)物7經(jīng)300～400目硅膠柱分離，以石油醚：乙酸乙酯(25∶1)洗脫，得到化合物PD-1～7(結(jié)構(gòu)如圖1所示)。

圖1 人參二醇酰化衍生物結(jié)構(gòu)與合成路線

2.2 PD-8～10的制備

稱取人參二醇3份，每份46mg，編號(hào)8～10，分別將對(duì)甲氧基苯甲酰氯250 mg，2，3-二氯苯甲酰氯80 mg，3，5-二硝基苯甲酰氯60 mg，以及催化劑量的DMAP，依次加入25 mL兩口反應(yīng)瓶中，加入10 mL無水吡啶，稍加熱使反應(yīng)物大部分溶解后，置于室溫下攪拌反應(yīng)，TLC檢測(cè)反應(yīng)進(jìn)程，至原料消耗完全，停止反應(yīng)。后處理方法同上。濃縮回收酯層，經(jīng)300～400目硅膠柱分離，分別以石油醚∶乙酸乙酯(10∶1、15∶1、12∶1)洗脫。得到化合物PD-8～10(結(jié)構(gòu)如圖1所示)。

2.3 波譜數(shù)據(jù)

化合物PD-1白色針狀結(jié)晶(CHCl3)；mp.198～200 ℃；1H NMR(400 MHz，CDCl3)δ：0.89(3H，s，H-30)，0.92(3H，s，H-18)，0.95(3H，s，H-19)，0.99(3H，s，H-28)，1.01(3H，s，H-29)，1.18(3H，s，H-26)，1.22(3H，s，H-27)，1.26(3H，s，H-21)，4.72(1H，dd，J= 4.0，12.0 Hz，H-3)，6.31(1H，brs，-OH)，7.54(1H，s，H-5′)，8.04(2H，d，J= 8.0 Hz，H-3′ and 7′)，7.43(2H，d，J= 8.0 Hz，H-4′ and 6′)；13C NMR(100 MHz，CDCl3)δ：38.5(t，C-1)，25.1(t，C-2)，81.4(d，C-3)，38.2(s，C-4)，55.9(d，C-5)，18.1(t，C-6)，34.7(t，C-7)，39.7(s，C-8)，49.7(d，C-9)，36.3(s，C-10)，30.5(t，C-11)，69.8(d，C-12)，49.0(d，C-13)，51.1(s，C-14)，31.1(t，C-15)，23.7(t，C-16)，54.6(d，C-17)，16.2(q，C-18)，16.1(q，C-19)，76.6(s，C-20)，19.3(q，C-21)，35.6(t，C-22)，16.7(t，C-23)，37.0(t，C-24)，73.1(s，C-25)，28.1(q，C-26)，33.0(q，C-27)，15.6(q，C-28)，27.0(q，C-29)，17.0(q，C-30)，166.2(s，C-1′)，130.9(s，C-2′)，129.5(d，C-3′)，128.2(d，C-4′)，132.6(s，C-5′)，128.2(d，C-6′)，129.5(d，C-7′)?；衔锊ㄗV數(shù)據(jù)與未?；幕衔飻?shù)據(jù)[10]進(jìn)行對(duì)比后，鑒定化合物為3-苯甲酰酯-人參二醇。

化合物PD-2白色針狀結(jié)晶(CHCl3)；mp.208～210 ℃；1H NMR(400 MHz，CDCl3)δ：0.89(3H，s，H-30)，0.93(3H，s，H-18)，0.95(3H，s，H-19)，0.96(3H，s，H-28)，0.99(3H，s，H-29)，1.18(3H，s，H-26)，1.22(3H，s，H-27)，1.26(3H，s，H-21)，4.76(1H，dd，J= 4.0，12.0 Hz，H-3)，6.39(1H，brs，-OH)，7.3～7.8(4H，m)；13C NMR(100 MHz，CDCl3)δ：38.5(t，C-1)，25.1(t，C-2)，82.5(d，C-3)，38.0(s，C-4)，56.0(d，C-5)，18.1(t，C-6)，34.7(t，C-7)，39.7(s，C-8)，49.7(d，C-9)，36.3(s，C-10)，30.4(t，C-11)，69.9(d，C-12)，49.0(d，C-13)，51.1(s，C-14)，31.1(t，C-15)，23.6(t，C-16)，54.6(d，C-17)，16.2(q，C-18)，16.1(q，C-19)，76.6(s，C-20)，19.3(q，C-21)，35.6(t，C-22)，16.7(t，C-23)，37.0(t，C-24)，73.1(s，C-25)，28.1(q，C-26)，32.9(q，C-27)，15.5(q，C-28)，27.0(q，C-29)，17.0(q，C-30)，165.6(s，C-1′)，131.2(s，C-2′)，132.1(s，C-3′)，130.9(d，C-4′)，133.4(d，C-5′)，126.5(d，C-6′)，130.9(d，C-7′)。化合物波譜數(shù)據(jù)與未?；幕衔飻?shù)據(jù)[10]進(jìn)行對(duì)比后，鑒定化合物為3-鄰苯甲酰酯-人參二醇。

化合物PD-3淡黃色無定型粉末(CHCl3)；mp.191～192 ℃；1H NMR(400 MHz，CDCl3)δ：0.91(3H，s，H-30)，0.93(3H，s，H-18)，0.96(3H，s，H-19)，1.01(3H，s，H-28)，1.02(3H，s，H-29)，1.20(3H，s，H-26)，1.23(3H，s，H-27)，1.28(3H，s，H-21)，4.76(1H，dd，J= 4.0，10.7 Hz，H-3)，6.55(1H，brs，-OH)，8.14(2H，d，J= 8.2 Hz，H-2′ and 6′)，7.70(2H，d，J= 8.2 Hz，H-3′ and 5′)；13C NMR(100 MHz，CDCl3)δ：38.5(t，C-1)，25.1(t，C-2)，82.2(d，C-3)，38.2(s，C-4)，55.9(d，C-5)，18.1(t，C-6)，34.7(t，C-7)，39.7(s，C-8)，49.8(d，C-9)，36.3(s，C-10)，30.4(t，C-11)，70.0(d，C-12)，49.0(d，C-13)，51.1(s，C-14)，30.1(t，C-15)，23.7(t，C-16)，54.6(d，C-17)，16.2(q，C-18)，16.1(q，C-19)，76.6(s，C-20)，19.3(q，C-21)，35.6(t，C-22)，16.7(t，C-23)，37.0(t，C-24)，73.2(s，C-25)，28.1(q，C-26)，32.9(q，C-27)，15.6(q，C-28)，27.0(q，C-29)，16.9(q，C-30)，165.0(s，C-1′)，125.3(s，C-2′)，129.8(d，C-3′)，125.3(d，C-4′)，134.1(s，C-5′)，125.3(d，C-6′)，129.8(d，C-7′)，29.6(s，-CF3)?；衔锊ㄗV數(shù)據(jù)與未?；幕衔飻?shù)據(jù)[10]進(jìn)行對(duì)比后，鑒定化合物為3-對(duì)三氟甲基苯甲酰-人參二醇。

化合物PD-4白色針狀結(jié)晶(CHCl3)；mp.213～215 ℃；1H NMR(400 MHz，CDCl3)δ：0.91(3H，s，H-30)，0.92(3H，s，H-18)，0.96(3H，s，H-19)，1.01(3H，s，H-28)，1.20(3H，s，H-29)，1.24(3H，s，H-26)，1.26(3H，s，H-27)，1.28(3H，s，H-21)，4.72(1H，dd，J= 5.0，10.0 Hz，H-3)，2.41(3H，s，H-4′-CH3)，7.94(2H，d，J= 8.1 Hz，H-2′ and 6′)，7.24(2H，d，J= 8.0 Hz，H-3′ and 5′)；13C NMR(100 MHz，CDCl3)δ：38.5(t，C-1)，25.1(t，C-2)，81.1(d，C-3)，38.2(s，C-4)，55.9(d，C-5)，18.1(t，C-6)，34.7(t，C-7)，39.7(s，C-8)，49.7(d，C-9)，36.3(s，C-10)，30.4(t，C-11)，70.0(d，C-12)，49.0(d，C-13)，51.1(s，C-14)，31.1(t，C-15)，23.7(t，C-16)，54.6(d，C-17)，16.2(q，C-18)，16.1(q，C-19)，76.7(s，C-20)，19.3(q，C-21)，35.6(t，C-22)，16.7(t，C-23)，37.0(t，C-24)，73.2(s，C-25)，28.0(q，C-26)，32.9(q，C-27)，15.5(q，C-28)，27.0(q，C-29)，17.0(q，C-30)，166.3(s，C-1′)，128.1(s，C-2′)，129.5(d，C-3′)，128.9(d，C-4′)，143.2(s，C-5′)，128.9(d，C-6′)，129.5(d，C-7′)，21.6(q，-CH3)?；衔锊ㄗV數(shù)據(jù)與未?；幕衔飻?shù)據(jù)[10]進(jìn)行對(duì)比后，鑒定化合物為3-對(duì)甲基苯甲酰酯-人參二醇。

化合物PD-5白色針狀結(jié)晶(CHCl3)；mp.198～201 ℃；1H NMR(400 MHz，CDCl3)δ：0.89(3H，s，H-30)，0.92(3H，s，H-18)，0.94(3H，s，H-19)，0.94(3H，s，H-28)，0.98(3H，s，H-29)，1.17(3H，s，H-26)，1.21(3H，s，H-27)，1.24(3H，s，H-21)，4.74(1H，dd，J= 4.4，11.2 Hz，H-3)，6.34(1H，brs，-OH)，7.45(1H，s，J= 2.0 Hz，H-1′)，7.28(1H，d，J= 8.4 Hz，H-2′)，7.76(1H，d，J= 8.4 Hz，H-3′)；13C NMR(100 MHz，CDCl3)δ：38.5(t，C-1)，25.1(t，C-2)，82.9(d，C-3)，38.0(s，C-4)，55.9(d，C-5)，18.1(t，C-6)，34.7(t，C-7)，39.7(s，C-8)，49.7(d，C-9)，36.3(s，C-10)，30.5(t，C-101)，69.8(d，C-12)，49.0(d，C-13)，51.1(s，C-14)，31.0(t，C-15)，23.6(t，C-16)，54.6(d，C-17)，16.2(q，C-18)，16.1(q，C-19)，76.6(s，C-20)，19.3(q，C-21)，35.6(t，C-22)，16.7(t，C-23)，37.0(t，C-24)，73.1(s，C-25)，28.1(q，C-26)，32.9(q，C-27)，15.5(q，C-28)，27.0(q，C-29)，17.0(q，C-30)，164.7(s，C-1′)，132.3(s，C-2′)，137.9(s，C-3′)，129.1(d，C-4′)，130.8(s，C-5′)，126.9(d，C-6′)，134.6(d，C-7′)?；衔锊ㄗV數(shù)據(jù)與未酰化的化合物數(shù)據(jù)[10]進(jìn)行對(duì)比后，鑒定化合物為3-(2，4-二氯苯甲酰酯)-人參二醇。

化合物PD-6白色無定型粉末(CHCl3)；mp.192～193 ℃；1H NMR(400 MHz，CDCl3)δ：0.77(3H，s，H-30)，0.82(3H，s，H-18)，0.87(3H，s，H-19)，0.89(3H，s，H-28)，0.97(3H，s，H-29)，1.18(3H，s，H-26)，1.22(3H，s，H-27)，1.26(3H，s，H-21)，4.48(1H，dd，J= 5.0，10.0 Hz，H-3)，6.48(1H，brs，-OH)，2.95(2H，m，H-2′)，2.63(2H，m，H-3′)；13C NMR(100 MHz，CDCl3)δ：38.5(t，C-1)，25.1(t，C-2)，80.9(d，C-3)，37.8(s，C-4)，55.9(d，C-5)，18.1(t，C-6)，34.8(t，C-7)，39.8(s，C-8)，49.8(d，C-9)，36.4(s，C-10)，30.4(t，C-11)，70.0(d，C-12)，49.1(d，C-13)，51.2(s，C-14)，31.0(t，C-15)，23.7(t，C-16)，54.7(d，C-17)，16.2(q，C-18)，16.1(q，C-19)，76.7(s，C-20)，19.4(q，C-21)，35.7(t，C-22)，16.4(t，C-22)，37.0(t，C-23)，73.2(s，C-24)，27.9(q，C-25)，33.0(q，C-26)，15.6(q，C-27)，27.1(q，C-28)，17.0(q，C-29)，172.6(s，C-30)，36.2(t，C-1′)，31.1(t，C-2′)，140.5(s，C-3′)，128.4(d，C-4′)，128.5(d，C-5′)，128.4(d，C-6′)，128.5(d，C-8′)，128.4(d，C-9′)?；衔锊ㄗV數(shù)據(jù)與未?；幕衔飻?shù)據(jù)[10]進(jìn)行對(duì)比后，鑒定化合物為3-苯丙酰酯-人參二醇。

化合物PD-7白色針狀結(jié)晶(CHCl3)；mp.188～189 ℃；1H NMR(400 MHz，CDCl3)δ：0.84(3H，s，H-30)，0.85(3H，s，H-18)，0.86(3H，s，H-19)，0.88(3H，s，H-28)，0.92(3H，s，H-29)，1.19(3H，s，H-26)，1.20(3H，s，H-27)，1.23(3H，s，H-21)，1.28(9H，s，H-2′，3′，4′)，4.44(1H，dd，J= 6.4，10.0 Hz，H-3)；13C NMR(100 MHz，CDCl3)δ：38.4(t，C-1)，25.1(t，C-2)，80.1(d，C-3)，38.0(s，C-4)，55.8(d，C-5)，18.1(t，C-6)，34.7(t，C-7)，39.7(s，C-8)，49.7(d，C-9)，36.3(s，C-10)，30.3(t，C-11)，70.1(d，C-12)，48.9(d，C-13)，51.2(s，C-14)，31.0(t，C-15)，23.5(t，C-16)，54.6(d，C-17)，16.2(q，C-18)，16.1(q，C-19)，76.6(s，C-20)，19.3(q，C-21)，35.6(t，C-22)，16.5(t，C-23)，37.0(t，C-24)，73.2(s，C-25)，27.9(q，C-26)，32.9(q，C-27)，15.5(q，C-28)，27.0(q，C-29)，16.9(q，C-30)，178.1(s，C-1′)，38.9(s，C-2′)，27.1(q，C-3′)，27.1(q，C-4′)，27.1(q，C-5′)?；衔锊ㄗV數(shù)據(jù)與未?；幕衔飻?shù)據(jù)[10]進(jìn)行對(duì)比后，鑒定化合物為3-特戊酰酯-人參二醇。

化合物PD-8白色針狀結(jié)晶(CHCl3)；mp.209～210 ℃；1H NMR(400 MHz，CDCl3)δ：0.89(3H，s，H-30)，0.91(3H，s，H-18)，0.94(3H，s，H-19)，0.99(3H，s，H-28)，1.03(3H，s，H-29)，1.18(3H，s，H-26)，1.22(3H，s，H-27)，1.26(3H，s，H-21)，4.69(1H，dd，J= 4.0，8.0 Hz，H-3)，3.85(3H，s，H-4′-OCH3)，6.38(1H，brs，-OH)，6.91(2H，d，J= 8.0 Hz，H-2′ and 6′)，8.00(2H，d，J= 8.0 Hz，H-3′ and 5′)；13C NMR(100 MHz，CDCl3)δ:38.5(t，C-1)，25.1(t，C-2)，81.0(d，C-3)，38.2(s，C-4)，55.9(d，C-5)，18.1(t，C-6)，34.7(t，C-7)，39.7(s，C-8)，49.7(d，C-9)，36.3(s，C-10)，30.4(t，C-11)，69.9(d，C-12)，49.0(d，C-13)，51.1(s，C-14)，31.1(t，C-15)，23.8(t，C-16)，54.6(d，C-17)，16.2(q，C-18)，16.1(q，C-19)，76.6(s，C-20)，19.3(q，C-21)，35.6(t，C-22)，16.7(t，C-23)，37.0(t，C-24)，73.1(s，C-25)，28.1(q，C-26)，32.9(q，C-27)，15.6(q，C-28)，27.0(q，C-29)，17.0(q，C-30)，166.0(s，C-1′)，123.3(s，C-2′)，131.4(d，C-3′)，113.4(d，C-4′)，163.1(s，C-5′)，113.4(d，C-6′)，131.4(d，C-7′)?；衔锊ㄗV數(shù)據(jù)與未?；幕衔飻?shù)據(jù)[10]進(jìn)行對(duì)比后，鑒定化合物為3-對(duì)甲氧基苯甲酰酯-人參二醇。

化合物PD-9白色無定型粉末(CHCl3)；mp.188～189 ℃；1H NMR(400 MHz，CDCl3)δ：0.87(3H，s，H-30)，0.90(3H，s，H-18)，0.92(3H，s，H-19)，0.97(3H，s，H-28)，1.00(3H，s，H-29)，1.19(3H，s，H-26)，1.23(3H，s，H-27)，1.27(3H，s，H-21)，4.77(1H，dd，J= 4.0，11.4 Hz，H-3)，6.47(1H，brs，-OH)，7.24(1H，d，J= 7.6 Hz，H-1′)，7.59(1H，dd，J= 8.0，12.7 Hz，H-2′)，7.61(1H，d，J= 6.7 Hz，H-3′)；13C NMR(100 MHz，CDCl3)δ：38.6(t，C-1)，25.1(t，C-2)，83.1(d，C-3)，38.1(s，C-4)，56.0(d，C-5)，18.2(t，C-6)，34.7(t，C-7)，39.8(s，C-8)，49.8(d，C-9)，36.4(s，C-10)，30.5(t，C-11)，70.0(d，C-12)，49.0(d，C-13)，51.2(s，C-14)，31.1(t，C-15)，23.6(t，C-16)，54.6(d，C-17)，16.2(q，C-18)，16.1(q，C-19)，76.7(s，C-20)，19.4(q，C-21)，35.7(t，C-22)，16.7(t，C-23)，37.0(t，C-24)，73.2(s，C-25)，28.1(q，C-26)，33.0(q，C-27)，15.6(q，C-28)，27.1(q，C-29)，17.0(q，C-30)，165.3(s，C-1′)，132.7(s，C-2′)，128.7(s，C-3′)，134.4(s，C-4′)，133.9(d，C-5′)，127.1(d，C-6′)，128.7(d，C-7′)?；衔锊ㄗV數(shù)據(jù)與未?；幕衔飻?shù)據(jù)[10]進(jìn)行對(duì)比后，鑒定化合物為3-(2，3-二氯苯甲酰酯)-人參二醇。

化合物PD-10黃色無定型粉末(CHCl3)；mp.222～224 ℃；1H NMR(400 MHz，CDCl3)δ：0.91(3H，s，H-30)，0.94(3H，s，H-18)，0.98(3H，s，H-19)，1.02(3H，s，H-28)，1.06(3H，s，H-29)，1.21(3H，s，H-26)，1.25(3H，s，H-27)，1.29(3H，s，H-21)，4.86(1H，dd，J= 5.9 Hz，9.5 Hz，H-3)，6.77(1H，brs，-OH)；13C NMR(100 MHz，CDCl3)δ：38.4(t，C-1)，25.1(t，C-2)，84.2(d，C-3)，38.2(s，C-4)，55.9(d，C-5)，18.1(t，C-6)，34.6(t，C-7)，39.7(s，C-8)，49.8(d，C-9)，36.3(s，C-10)，30.3(t，C-11)，70.1(d，C-12)，48.9(d，C-13)，51.2(s，C-14)，31.1(t，C-15)，23.7(t，C-16)，54.6(d，C-17)，16.1(q，C-18)，16.1(q，C-19)，76.6(s，C-20)，19.3(q，C-21)，35.6(t，C-22)，16.7(t，C-23)，37.0(t，C-24)，73.4(s，C-25)，28.1(q，C-26)，32.9(q，C-27)，15.6(q，C-28)，27.0(q，C-29)，16.9(q，C-30)，162.1(s，C-1′)，134.5(s，C-2′)，129.3(d，C-3′)，148.6(s，C-4′)，122.1(d，C-5′)，148.6(s，C-6′)，129.3(d，C-7′)?；衔锊ㄗV數(shù)據(jù)與未?；幕衔飻?shù)據(jù)[10]進(jìn)行對(duì)比后，鑒定化合物為3-(3，5-二硝基苯甲酰酯)-人參二醇。

2.4 舒張SD大鼠胸主動(dòng)脈血管的評(píng)價(jià)[11]

2.4.1 制備血管環(huán)

準(zhǔn)備10%的烏拉坦(1.00 mL/100g)將SD大鼠腹腔注射麻醉，迅速取出胸主動(dòng)脈置于4 ℃MOPS-PSS液中。在體式解剖顯微鏡下，用顯微手術(shù)器械將胸主動(dòng)脈周圍組織分離干凈。剪成約2 mm動(dòng)脈環(huán)穿60 μm金屬絲備用(注意盡量不要損傷血管內(nèi)皮等)。

2.4.2 平衡血管環(huán)

浴槽恒溫37°C，盛MOPS-PSS工作液5 mL，并且持續(xù)通入95%O2和5%CO2的混合氣體后將動(dòng)脈血管環(huán)掛置于浴槽固定器上，調(diào)節(jié)微調(diào)裝置，給血管環(huán)15 mN的預(yù)負(fù)荷。每隔20 min換1次MOPS-PSS(37 ℃)工作液，每次5 mL，平衡三次后，然后更換MOPS-KPSS工作液(含60 mM K+)5 mL檢測(cè)血管環(huán)活性，檢測(cè)兩次，每次5 min。當(dāng)收縮力為預(yù)負(fù)荷2倍左右時(shí)認(rèn)為活性合格，用MOPS-PSS(37 ℃)工作液洗滌2～3次后再加入5 mL MOPS-PSS(37 ℃)工作液平衡后用于實(shí)驗(yàn)，然后按照預(yù)先計(jì)算的給藥體積加藥。

2.4.3 受試藥物對(duì)SD大鼠離體胸主動(dòng)脈的舒張實(shí)驗(yàn)

胸主動(dòng)脈平衡并檢測(cè)血管環(huán)活性合格后，加入200 μmol/L去氧腎上腺素(PE)5 μL收縮血管，待收縮達(dá)到最大值且平衡后，將受試藥物用DMSO配制成800 μmol/L，并且用PowerLAB數(shù)據(jù)記錄和分析系統(tǒng)采集數(shù)據(jù)。每一個(gè)受試藥物取8根血管環(huán)進(jìn)行重復(fù)試驗(yàn)。

2.5.4 數(shù)據(jù)處理

采用SigmaStat10.0統(tǒng)計(jì)分析軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析處理，本實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)結(jié)果采用舒張率(%)來表示，相對(duì)張力值計(jì)算公式為：相對(duì)張力值=(X-平衡值)/(PE收縮值-平衡值)×100%，當(dāng)相對(duì)張力小于50%時(shí)，認(rèn)為受試藥對(duì)SD大鼠胸主動(dòng)脈具有舒張作用，相對(duì)張力越小，受試藥舒張作用越顯著。陽性對(duì)照為人參二醇。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

由表1可以看出，所制備的化合物PD-3、4、7、9、10有明顯的舒張SD大鼠胸主動(dòng)脈活性。其中化合物PD-3和PD-7舒張SD大鼠活性優(yōu)于陽性對(duì)照人參二醇，特別是化合物PD-3(結(jié)果如表1所示)。

4 結(jié)果與討論

制備得到的10個(gè)人參二醇?；衔锞鶠樾禄衔?，未見相關(guān)報(bào)道。實(shí)驗(yàn)集中對(duì)于人參二醇的3-位羥基進(jìn)行結(jié)構(gòu)改造，并且發(fā)現(xiàn)，目標(biāo)產(chǎn)物產(chǎn)率的高低與酰氯試劑的空間位阻有關(guān)，位阻越小則產(chǎn)率越高，反應(yīng)得越完全。實(shí)驗(yàn)操作簡(jiǎn)單，并且各目標(biāo)產(chǎn)物的產(chǎn)率均在50%以上。由于人參二醇的3-位羥基的位阻使得反應(yīng)速度緩慢，因此實(shí)驗(yàn)在選取合適催化劑方面也尤為謹(jǐn)慎，最終選定DMAP為催化劑。與此同時(shí)，采用吡啶為反應(yīng)溶劑也大大加快了反應(yīng)速度并提高了各目標(biāo)產(chǎn)物的產(chǎn)率。值得一提的是，實(shí)驗(yàn)中，要注意在無水環(huán)境下進(jìn)行，以免造成試劑的水解。

表1 化合物舒張SD大鼠胸主動(dòng)脈活性結(jié)果

利用SD大鼠胸主動(dòng)脈建立的離體模型，將所制備得到的人參二醇?；a(chǎn)物進(jìn)行舒張SD大鼠胸主動(dòng)脈活性初步篩選，結(jié)果顯示化合物PD-3、4、7、9、10具有舒張作用，并且化合物PD-3和PD-7舒張血管活性優(yōu)于人參二醇，研究發(fā)現(xiàn)人參二醇?；a(chǎn)物的舒張血管活性與C-3位所連基團(tuán)上的取代基有關(guān)，首先，C-3位連接小分子取代基團(tuán)舒張血管活性優(yōu)于大分子取代基團(tuán)，其次，C-3位連有苯環(huán)并且存在取代基的化合物有舒張血管活性，并且發(fā)現(xiàn)，C-3位連有苯環(huán)并且具有鄰位取代的化合物能抑制舒張血管活性，而間、對(duì)位存在吸電子取代基的化合物活性較好。這些實(shí)驗(yàn)結(jié)果為人參二醇結(jié)構(gòu)修飾及與舒張胸主動(dòng)脈活性的構(gòu)效關(guān)系的研究提供了有利依據(jù)，與此同時(shí)也需要進(jìn)一步的體內(nèi)藥理作用機(jī)制研究。