安徽省兒童白血病的融合基因及染色體核型分析

朱麗娟， 蘇曉霽， 余 霞， 王 洋

安徽省兒童醫(yī)院檢驗科，合肥 230051

兒童白血病是兒童腫瘤中最常見的惡性疾病，是造血干細(xì)胞克隆性增生的血液病，我國兒童的發(fā)病率逐年上升。惡性細(xì)胞因調(diào)控發(fā)生錯誤，導(dǎo)致增殖分化凋亡失控使細(xì)胞停滯在代謝的不同階段。不同類型的血液病危險程度、治療方案以及預(yù)后都不同，所以對白血病進(jìn)行正確的分型和精準(zhǔn)的病情評估是非常重要的[1-3]。本研究分析安徽省87例兒童白血病的融合基因和染色體核型情況，探討白血病融合基因和染色體核型的分析對白血病具體分型的意義，為臨床制定個性化的治療方案提供指導(dǎo)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2018年4月至2019年4月在安徽省兒童醫(yī)院明確診斷為白血病的患兒87例，其中男47例，女40例，年齡0～18歲。

1.2 方 法 回顧性分析白血病患兒的融合基因和染色體核型分析的結(jié)果。采用SPSS 19.0統(tǒng)計軟件分析數(shù)據(jù)，計量資料運用χ2檢驗，檢驗水準(zhǔn)(α)為0.05。

2 結(jié) 果

2.1 白血病患兒年齡分析 白血病患兒年齡集中在1～10歲，此年齡段人數(shù)為75(86.2%)。根據(jù)骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)和免疫分型結(jié)果將白血病分為淋系和髓系2組，其中淋系60例(69.0%)，髓系27例(31.0%)。免疫分型結(jié)果與骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)分析結(jié)果完全一致，其中淋系60例有7例T淋巴母細(xì)胞白血病(2例檢出特有的融合基因SIL-TAL1)，其他53例為B淋巴母細(xì)胞白血病，髓系的27例免疫分型結(jié)果均支持骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)的判斷。白血病患兒未見性別差異，詳見表1。

表1 87例兒童白血病的整體分布情況

2.2 融合基因分析 融合基因陽性患兒38例(43.7%)：淋系26例，占所有淋系白血病的43.3%； 髓系12例，占所有髓系白血病的44.4%。常見基因型主要有TEL-AML1(26.3%)，AML1-ETO(18.4%)，E2A-PBX1(15.8%)，BCR-ABL(13.2%)。融合基因類型檢測結(jié)果與骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)診斷以及免疫分型結(jié)果相互支持，詳見表2。

2.3 染色體核型分析 染色體核型異常共55例(63.2%)；未檢出任何異常染色體的29例，占33.1%；有3例未做此項檢驗。與融合基因匹配的特異性典型核型18例，占32.7%，其中淋系6例(33.3%)，髓系11例(61.1%)，混合譜系1例(5.6%)；沒有特定指向的復(fù)雜核型37例，占67.3%。最常見的融合基因TEL-AML1共10例，值得注意的是該融合基因與染色體核型結(jié)果完全不匹配，見表2。

2.4 融合基因和染色體核型的整體分布情況 融合基因陽性率在淋系和髓系中無差異，但染色體特異性典型核型易出現(xiàn)在髓系中，與融合基因匹配度較高(100%)，淋系中易出現(xiàn)復(fù)雜核型(50%)，與融合基因匹配的只有7例(25.9%)，見表3。

表2 融合基因陽性患兒融合基因的分布以及與染色染核型的比較

表3 融合基因和染色體核型的整體分布情況

3 討 論

急性白血病在兒童腫瘤中所占比例約為25%，其中主要為急性淋巴細(xì)胞白血病[4]。在白血病的發(fā)生發(fā)展過程中，通常伴隨著染色體的斷裂和融合，從而導(dǎo)致融合基因的產(chǎn)生，而由這些融合基因表達(dá)出來的融合蛋白又進(jìn)一步參與調(diào)控白血病的發(fā)展。隨著分子生物學(xué)技術(shù)的精進(jìn)，人類對融合基因的了解也越來越全面。它是由2個基因的編碼區(qū)發(fā)生連接，然后被同一基因控制元件調(diào)控表達(dá)，這樣形成了嵌合體基因。融合基因作為分子遺傳學(xué)的標(biāo)志物在白血病診斷治療過程中起到了不可或缺的作用，為判斷疾病的預(yù)后提供了新的依據(jù)[5-6]。在我國，常見的白血病融合基因有BCR-ABL、TEL-AML1、E2A-PBX1以及AML1-ETO等[7-8]。

融合基因是由于染色體的改變導(dǎo)致的，在白血病的診療過程中染色體核型分析也是非常重要的檢查項目。如BCR-ABL融合基因?qū)?yīng)的染色體核型——費城染色體，是t(9; 22)(q13; q11)2條染色體易位造成的；AML1-ETO主要見于AML患者，是t(8;21)(q22; q22)染色體的易位；同樣，E2A-PBX1融合基因是由t(1;19)(q23;p13)易位產(chǎn)生；兒童ALL中最常見的融合基因類型為TEL-AML1，是t(12;21)(p13;q22)的染色體異常核型[9]。不同的融合基因?qū)?yīng)著特異性的典型染色體核型，而有些復(fù)雜的染色體核型沒有對應(yīng)的特異性融合基因，或許是還沒有被發(fā)現(xiàn)。這些分子遺傳學(xué)檢測方法的聯(lián)合應(yīng)用，在白血病的診斷治療過程中已得到廣泛認(rèn)可。

本研究發(fā)現(xiàn)，在安徽省87例兒童白血病患者中淋系占69.0%(60/87)，髓系占31.1%(27/87)。86.2%(75/87)集中在1～10歲，可見急性淋巴細(xì)胞白血病在兒童白血病中的主導(dǎo)地位，這與兒童白血病的整體情況是一致的[4]。融合基因陽性率為43.7%，主要為常見基因型，如TEL-AML1、AML1-ETO、E2A-PBX1以及BCR-ABL，融合基因的陽性率相對于國內(nèi)其他報道有些偏高[7]，可能是由于本研究檢測儀器的機(jī)型為高端機(jī)型(ABI-DX)，檢測性能較好。融合基因檢出率最高的是TEL-AML1，在其他研究中也有相同報道[8]。同時，本研究還檢出SIL-TAL1和 NPM-ALK，這2種融合基因分別對應(yīng)T淋巴細(xì)胞白血病和淋巴瘤[10-11]，這與骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)診斷及免疫分型結(jié)果相互支持，但與染色體核型不符。在臨床中，不同的融合基因類型有相應(yīng)的治療方案。如檢出率最高的融合基因TEL-AML1，此基因陽性的T急性淋巴細(xì)胞白血病患者治療效果基本良好[12]，本研究隨訪4例患者，均沒有復(fù)發(fā)傾向。而E2A-PBX1、BCR-ABL以及T急性淋巴細(xì)胞白血病中的SIL-TAL1融合基因陽性患者，病情較兇險，預(yù)后較差[13-14]。故分子生物學(xué)手段對白血病臨床診療方案的確立有非常大的幫助。

本研究結(jié)果顯示，染色體核型異常共55例(63.2%，有3例未做此項檢驗)，未檢出任何異常的29例占33.1%。與融合基因匹配的特異性典型核型18例(32.7%)，其中淋系7例(38.9%)，髓系11例(61.1%)；沒有特定指向的復(fù)雜核型37例(67.3%)。融合基因陽性率在淋系和髓系中無差異，但染色體特異性典型核型易出現(xiàn)在髓系中，與融合基因匹配度較高，淋系中易出現(xiàn)復(fù)雜核型，與融合基因匹配的特異性核型較少。染色體核型與融合基因匹配的只有18例，其中TEL-AML1完全不符合，這與其他報道相符[15]，是由于t(12;21)(p13;q22)產(chǎn)生的易位，在核型分析時易位片段G顯帶相似度較高，通常不引起染色體形態(tài)的明顯改變，所以常規(guī)的染色體核型分析對這種易位的檢出率很低，通常不足0.05%[16]，但這一缺陷可以被FISH技術(shù)彌補。本研究還檢出4例混合譜系的融合基因MLL(AF17….)、TEL-ABL和TLS-ERG。其中MLL(AF17….)基因與染色體核型一致，其他2種融合基因類型的白血病很少見[17-20]，本研究中這2種少見型融合基因與染色體核型不符。

綜上所述，融合基因結(jié)合骨髓細(xì)胞形態(tài)能及時判斷出白血病的具體分型，染色體核型特異性較融合基因略差，但在髓系白血病診斷中有很重要的意義。在白血病的診斷和治療過程中，分子遺傳學(xué)檢測手段的聯(lián)合應(yīng)用有很大的價值。