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    測試片方法快速檢測活性乳酸菌飲料中的乳酸菌總數(shù)

    2020-05-21 02:51:09霍建偉
    食品安全導(dǎo)刊·中旬刊 2020年4期
    關(guān)鍵詞:提高效率

    作者簡介:霍建偉(1983-),男,工程師,從事食品微生物檢測及食品安全質(zhì)量控制工作。

    摘要: 國標(biāo)乳酸菌檢測方法中,對于僅含乳桿菌類的檢測,需要3天的時間,且需要在厭氧環(huán)境中培養(yǎng),3M乳酸菌測試片方法,測試片自帶厭氧環(huán)境,可在正常有氧環(huán)境下培養(yǎng),檢測時間2天,提高檢測效率,本文針對活性乳酸菌飲料(僅含乳桿菌類)在乳酸菌檢測時,對2種方法進(jìn)行了一致性比較,為企業(yè)更好的應(yīng)用該產(chǎn)品提供有效數(shù)據(jù)。

    關(guān)鍵詞:測試片方法,乳酸菌檢測,提高效率

    0引言

    活性乳酸菌飲料(僅包含乳桿菌類)含有大量的乳酸菌,一般出廠時乳酸菌含量大于107 CFU/ml, 目前國標(biāo)的檢測方法是GB 4789.35-2016乳酸菌檢測, 對于乳桿菌類的檢測,需要厭氧培養(yǎng),72小時出具結(jié)果,企業(yè)多數(shù)采用的是厭氧罐加厭氧袋加厭氧指示劑的方式,為厭氧培養(yǎng)提供條件。

    3M 乳酸菌測試片是一種即用型培養(yǎng)基系統(tǒng),測試片含有氧氣清除的成分,使其能夠自帶厭氧環(huán)境,可直接在培養(yǎng)箱中培養(yǎng),無需厭氧罐等輔助設(shè)備,且可以在48小時出具結(jié)果。

    本文對2種方法進(jìn)行比較,通過大量實驗數(shù)據(jù)表明2種方法的一致性,并且3M 乳酸菌測試片方法能提高效率和快速出具檢測結(jié)果。

    1 實驗

    1.1材料、試劑和儀器

    活性乳酸菌飲料(僅包含乳桿菌類),市場購買。

    恒溫培養(yǎng)箱:36 ℃±1 ℃;天平:感量為0.1 g;均質(zhì)器;無菌吸管:1 mL(具0.01 mL 刻度)、10 mL(具0.1 mL 刻度)或微量移液器及吸頭;無菌錐形瓶:容量250 mL、500 mL;無菌培養(yǎng)皿:直徑90 mm; 3MTM PetrifilmTM乳酸菌測試片;厭氧罐;厭氧劑;厭氧指示劑,MRS瓊脂培養(yǎng)基。

    1.2方法:

    1.2.1 樣品的處理

    樣品應(yīng)先將其充分搖勻后,以無菌吸管吸取樣品25 mL 放入裝有225 mL生理鹽水(提前滅菌)的無菌錐形瓶中,充分振搖,制成1:10 的樣品勻液。用1 mL微量移液器吸取1:10 樣品勻液1 mL,沿管壁緩慢注于裝有9 mL 生理鹽水的無菌試管中,制成1:100 的樣品勻液。 按上述操作順序,依次稀釋至10-6,10-7,10-8。

    1.2.2? GB 4789.35-2016乳酸菌檢驗方法

    GB 4789.35-2016乳酸菌檢驗中6.2.3.4 乳桿菌計數(shù)要求,根據(jù)待檢樣品活菌總數(shù)的估計,選10-7,10-8適宜稀釋度,每個稀釋度吸取1mL樣液到平皿內(nèi),每個稀釋度做兩個平皿。稀釋液移入平皿后,將冷卻至48 ℃的MRS瓊脂培養(yǎng)基,傾注入平皿約15mL,轉(zhuǎn)動平皿使混合均勻。36℃±1℃厭氧培養(yǎng)72h±2h。從樣品稀釋到平板傾注要求在15min內(nèi)完成。

    1.2.3? 3M乳酸菌測試片方法

    將上述對應(yīng)稀釋度的樣品,吸取1mL,揭開測試片上層膜,垂直加到測試片中央,將上層膜緩慢蓋下,避免氣泡產(chǎn)生,切勿使上層膜直接落下,將壓板放置在上層膜中央處,輕輕地壓下,使樣液均勻覆蓋于圓形的培養(yǎng)面積上,切勿扭轉(zhuǎn)或滑動壓板,拿起壓板,靜置至少1min以使培養(yǎng)基凝固,每個稀釋度做兩個測試片。將測試片的透明面朝上置于培養(yǎng)箱內(nèi),堆疊片數(shù)不超過20片,36℃±1℃下需氧培養(yǎng)48h±2h。

    2實驗結(jié)果與分析

    2.1實驗結(jié)果見表1

    2.2結(jié)果分析

    2.2.1? Log差值分析方法:

    統(tǒng)計2種檢測結(jié)果Log值差值的平均值,經(jīng)計算兩種方法的log差值平均值的絕對值為0.08,小于0.50,表明本次實驗中3M乳酸菌測試片方法和GB4789.35-2016方法有很好的一致性。(見表2)

    2.2.2 配對t檢驗分析方法

    以上檢測結(jié)果的配對t檢驗,P值是0.075,P值大于0.05,表明本次實驗中3M乳酸菌測試片方法和GB4789.35-2016方法的結(jié)果沒有統(tǒng)計學(xué)上的差異。

    2.2.3結(jié)論

    本次實驗表明,針對活性乳酸菌飲料(僅含乳桿菌類)的乳酸菌檢測,3M乳酸菌測試片方法和GB4789.35-2016乳酸菌檢測方法,無顯著性差異,一致性很好。

    測試片方法操作簡單,自帶厭氧環(huán)境,無需厭氧罐和厭氧試劑等設(shè)備及耗材,提高了檢測效率,檢測時間為48h,相比傳統(tǒng)GB方法,能在更短時間內(nèi)獲得樣品的檢測結(jié)果。

    參考文獻(xiàn):

    [1] GB 4789.35-2016 《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物檢驗 乳酸菌檢驗》

    [2]SN/T 2775-2011 《商品化食品檢測試劑盒評價方法》

    [3]ISO 16140-2:2016 Microbiology of the food chain – Method validation –Part 2: Protocol for the validation of alternative(proprietary) methods against a reference method

    [4]AOAC 041701 3MTM PetrifilmTM Lactic Acid Bacteria Count Plate

    霍建偉

    3M中國有限公司 北京技術(shù)中心 北京 100176

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