豬繁殖與呼吸綜合征病毒抗體水平測(cè)定與分析

（福建省寧德市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，福建寧德 352100）

豬繁殖與呼吸綜合征（Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS），是一種由豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）誘發(fā)的急性、高度接觸性傳染病，也稱(chēng)為“豬藍(lán)耳病”，該病主要引起妊娠母豬繁殖障礙以及仔豬的呼吸道癥狀[1]。PRRS于1987年在美國(guó)首次被發(fā)現(xiàn)，于1991年在荷蘭首次分離出病毒，世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）將其列為B類(lèi)傳染?。辉谖覈?guó)于1996年首次被發(fā)現(xiàn)，并于2006年在全國(guó)20多個(gè)省份呈暴發(fā)式流行，我國(guó)將該病列為一類(lèi)動(dòng)物傳染病，在2008年將其列入我國(guó)強(qiáng)制免疫接種病種。

自從2017年國(guó)家取消對(duì)豬藍(lán)耳病的強(qiáng)制免疫以及2018年8月非洲豬瘟傳入我國(guó)之后，由于疫苗費(fèi)用及生物安全等因素，大部分豬場(chǎng)工作重心都有所轉(zhuǎn)移，致使豬藍(lán)耳病有抬頭的趨勢(shì)。

鑒于豬藍(lán)耳病為免疫抑制性疾病，感染該病的豬群極易繼發(fā)細(xì)菌性疾病，導(dǎo)致死亡率驟升，從而造成很大的經(jīng)濟(jì)損失。為了解在取消強(qiáng)制免疫之后豬藍(lán)耳病的免疫狀況，準(zhǔn)確掌握豬群的豬藍(lán)耳病免疫抗體水平，筆者對(duì)福建省寧德市2017年秋至2019年春季豬藍(lán)耳病免疫抗體進(jìn)行監(jiān)測(cè)，同時(shí)對(duì)結(jié)果進(jìn)行分析，以便及時(shí)發(fā)現(xiàn)工作中存在的問(wèn)題，為今后更好地開(kāi)展疫病防控工作提供參考依據(jù)?，F(xiàn)將免疫抗體監(jiān)測(cè)結(jié)果作如下報(bào)告。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 樣品來(lái)源

在福建省寧德市9縣（市、區(qū)）規(guī)模豬場(chǎng)內(nèi)隨機(jī)抽取78場(chǎng)（次），共采集1 230份豬全血，冷藏送至實(shí)驗(yàn)室，分離血清，4℃保存待檢。豬繁殖與呼吸綜合征滅活疫苗，由齊魯動(dòng)物保健品有限公司及上海海利生物技術(shù)股份有限公司生產(chǎn)；豬繁殖與呼吸綜合征弱毒疫苗，由勃林格殷格翰動(dòng)物保健品有限公司及哈爾濱維科生物技術(shù)開(kāi)發(fā)公司生產(chǎn)。

1.1.2 檢測(cè)試劑

豬繁殖與呼吸綜合征病毒抗體ELISA檢測(cè)試劑盒，購(gòu)自北京愛(ài)德士元亨生物科技有限公司。

1.1.3 主要設(shè)備

高速臺(tái)式冷凍離心機(jī)，SW-CJ凈化工作臺(tái)，電熱恒溫培養(yǎng)箱，酶標(biāo)儀，可調(diào)微量移液器。

1.2 方法

1.2.1 檢測(cè)方法

按照GB/T 18090-2008，使用間接ELISA方法進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)合檢測(cè)試劑盒使用說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.2.2 結(jié)果判定

試驗(yàn)成立條件，即陽(yáng)性對(duì)照平均OD650－陰性對(duì)照平均OD650≥0.150，而且陰性對(duì)照平均OD650≤0.150。結(jié)果用S/P表示，S/P＝[（樣品OD650－陰性對(duì)照平均OD650）]/[（陽(yáng)性對(duì)照平均OD650－陰性對(duì)照平均OD650）]＊100。S/P＜0.4表示陰性，S/P≥0.4表示陽(yáng)性。

2 結(jié)果與分析

2.1 豬藍(lán)耳病整體免疫抗體陽(yáng)性率

由表1可以看出，自2017年秋至2019年春，從9個(gè)縣（市、區(qū)）共采集樣品1 230份，其中陽(yáng)性樣品1 045份，平均陽(yáng)性率為84.96%。G縣的陽(yáng)性率最高，為93.33%；陽(yáng)性率最低的是H縣，為70.00%。各縣（市、區(qū)）免疫抗體陽(yáng)性率均達(dá)到國(guó)家規(guī)定的陽(yáng)性率（70%）以上，說(shuō)明該病整體免疫水平較為良好，但各縣（市、區(qū)）之間的抗體水平差異較為明顯。

表1 2017年秋至2019年春各縣 （市、區(qū)）豬藍(lán)耳病免疫抗體陽(yáng)性率

2.2 各縣 （市、區(qū)）豬藍(lán)耳病免疫抗體陽(yáng)性率

自2017年秋至2019年春，共采集血液樣品4次，分別為270份、270份、420份、270份；除2018年秋以外，每個(gè)縣（市、區(qū)）采集的樣品均為30份。由圖1可以看出，這4批樣品中，不同縣（市、區(qū)）檢測(cè)得到的陽(yáng)性率均不盡相同；部分縣（市、區(qū)）4次檢測(cè)所得抗體合格率也存在明顯差異，這說(shuō)明了其免疫水平不夠穩(wěn)定，而且C、E、H 3縣的免疫抗體合格率均有低于國(guó)家規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)（70%）的情況出現(xiàn)，需要引起重視。

2.3 4批次豬藍(lán)耳病病毒免疫抗體檢測(cè)結(jié)果

由表2可以看出，2017年秋豬藍(lán)耳病免疫抗體陽(yáng)性率為87.41%；2018年春豬藍(lán)耳病免疫抗體陽(yáng)性率為86.67%；2018年秋豬藍(lán)耳病免疫抗體陽(yáng)性率為85.00%；2019年春豬藍(lán)耳病免疫抗體陽(yáng)性率為80.74%。4批次抗體均達(dá)到農(nóng)業(yè)農(nóng)村部規(guī)定的70%以上合格率的標(biāo)準(zhǔn)。

表2 2017年秋至2019年春豬藍(lán)耳病免疫抗體檢測(cè)結(jié)果

2.4 豬藍(lán)耳病一免與二免抗體陽(yáng)性率比較

根據(jù)采樣單，此4批次共1 230份豬血清樣品中，有745份僅免疫1次，剩余485份免疫2次。一免樣品的豬藍(lán)耳病抗體平均陽(yáng)性率為77.72%，二免樣品的豬藍(lán)耳病抗體平均陽(yáng)性率為96.08%?？梢钥闯觯庖?次后豬藍(lán)耳病抗體平均陽(yáng)性率高于免疫1次，而且二者的抗體平均陽(yáng)性率差異極顯著（＜0.01） （表 3）。

2.5 豬藍(lán)耳病滅活苗與弱毒苗免疫效果比較

在1 230份豬血清樣品中，有410份豬血清樣品來(lái)自采用滅活苗免疫的豬只，剩余的820份血清樣品來(lái)源的豬只采用弱毒苗免疫。滅活苗免疫的樣品豬藍(lán)耳病抗體平均陽(yáng)性率為83.41%，弱毒苗免疫的樣品豬藍(lán)耳病抗體平均陽(yáng)性率為86.59%?？梢钥闯觯瑴缁蠲缑庖吆筘i藍(lán)耳病抗體平均陽(yáng)性率略高于弱毒苗免疫后豬藍(lán)耳病抗體平均陽(yáng)性率，二者的抗體平均陽(yáng)性率差異不顯著（＞0.05） （表 4）[2]。

3 討論

豬藍(lán)耳病與豬瘟、口蹄疫一樣，是當(dāng)前豬場(chǎng)流行的主要傳染病之一，對(duì)養(yǎng)殖業(yè)來(lái)說(shuō)，該病極具毀滅性。2008—2017年，國(guó)家對(duì)豬藍(lán)耳病實(shí)行強(qiáng)制免疫。雖然2017年后該病退出強(qiáng)制免疫，但不代表著豬藍(lán)耳病消失，廣大養(yǎng)殖場(chǎng)（戶）切不可掉以輕心。豬藍(lán)耳病主要引起懷孕母豬的流產(chǎn)，及豬群整體（特別是仔豬）的呼吸系統(tǒng)疾病。豬藍(lán)耳病病原為豬藍(lán)耳病病毒，是一種易重組、變異頻率高的RNA病毒。該病毒極易引起豬群免疫抑制，從而引起繼發(fā)性感染，促使死亡率增高。在非洲豬瘟流行環(huán)境下，為提高豬群整體抵抗力，規(guī)模豬場(chǎng)更應(yīng)當(dāng)繼續(xù)按照早前國(guó)家制定的強(qiáng)制免疫計(jì)劃、方案進(jìn)行免疫。

表3 豬藍(lán)耳病一免與二免抗體陽(yáng)性率比較

表4 豬藍(lán)耳病滅活苗與弱毒苗免疫抗體陽(yáng)性率比較

按照國(guó)家免疫計(jì)劃要求，我市于2017年開(kāi)始取消了對(duì)豬藍(lán)耳病的強(qiáng)制免疫。本文選取2017年秋季以來(lái)我市規(guī)模豬場(chǎng)進(jìn)行監(jiān)測(cè)及分析，用以了解強(qiáng)制免疫取消后我市豬藍(lán)耳病免疫情況。

從以上檢測(cè)及統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果可以看出，對(duì)采集的1 230份豬血清樣品進(jìn)行免疫抗體水平檢測(cè)，結(jié)果顯示全市豬藍(lán)耳病免疫抗體平均水平為84.96%，雖然達(dá)到農(nóng)業(yè)農(nóng)村部規(guī)定的免疫抗體合格率最低要求（70%），但E、H兩縣平均抗體合格率僅74%、70%，未達(dá)到我省早前所規(guī)定“春秋防期間，免疫抗體合格率需要達(dá)到80%”的要求。此外，各縣（市、區(qū)）陽(yáng)性率參差不齊，存在一定差異。如C、E、H等3縣，豬藍(lán)耳病合格率最高時(shí)分別達(dá)到96.67%、96.67%、93.33%，最低時(shí)僅有46.67%、33.33%、53.33%，差異顯著，存在重大動(dòng)物疫情漏洞，作為疫控工作人員，需引起注意，及時(shí)提醒相關(guān)養(yǎng)殖場(chǎng)（戶）人員，及時(shí)補(bǔ)免。

本研究對(duì)全市9個(gè)縣（市、區(qū)）從2017年秋至2019年春，分4批次抽血、檢測(cè)。雖然每次檢測(cè)所得豬藍(lán)耳病平均抗體合格率均在80%以上，但是通過(guò)觀察可以發(fā)現(xiàn)：豬藍(lán)耳病平均抗體合格率從2017年秋的87.41%，到2019年春的80.74%，一直處于下降狀態(tài)，且隨著時(shí)間的推移，下降的幅度越來(lái)越大。這可能與以下兩個(gè)方面的原因有關(guān)：一方面，隨著國(guó)家對(duì)豬藍(lán)耳病強(qiáng)制免疫取消的時(shí)間推移，部分養(yǎng)殖場(chǎng)（戶）人員思想上有所松懈，認(rèn)為該病免疫不再重要，造成免疫效果不佳；另一方面，從2018年秋季開(kāi)始，全國(guó)暴發(fā)非洲豬瘟疫情，使得各養(yǎng)殖場(chǎng)（戶）工作重心轉(zhuǎn)移至非洲豬瘟防控上，而無(wú)暇顧及豬藍(lán)耳病等疫病的防控與免疫。

就豬群豬藍(lán)耳病疫苗免疫次數(shù)而言，根據(jù)檢測(cè)結(jié)果分析可得，二免的血清樣品平均抗體陽(yáng)性率比一免的血清樣品平均抗體陽(yáng)性率高很多，差異極顯著。只免疫1次的血清樣品豬藍(lán)耳病平均抗體陽(yáng)性率為77.72%，而進(jìn)行2次免疫后平均抗體陽(yáng)性率迅速提升至96.08%，這說(shuō)明在豬場(chǎng)實(shí)際生產(chǎn)活動(dòng)過(guò)程中，一免的豬群免疫抗體合格率較二免而言，有所差距。此次監(jiān)測(cè)還發(fā)現(xiàn)，我市進(jìn)行豬藍(lán)耳病二免的數(shù)量?jī)H為39.43%；雖然一免的合格率能達(dá)到70%以上，但為提高豬群抵抗力及群體保護(hù)力，我們應(yīng)當(dāng)向廣大養(yǎng)殖場(chǎng)（戶）大力推廣二免，以提高免疫抗體合格率。

根據(jù)采樣調(diào)查表可以發(fā)現(xiàn)，相比豬繁殖與呼吸綜合征滅活苗，豬繁殖與呼吸綜合征弱毒苗在我市的使用范圍更廣。此次所采集的1 230份血清樣品中，有三分之二使用的疫苗為弱毒苗。檢測(cè)結(jié)果顯示，弱毒苗及滅活苗二者所得平均抗體陽(yáng)性率分別為86.59%、83.41%，弱毒苗使用效果會(huì)比滅活苗效果好一些，但二者差異不顯著。弱毒苗具有免疫力強(qiáng)、效果好、持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)等優(yōu)點(diǎn)，多用來(lái)對(duì)母豬進(jìn)行免疫，使新生仔豬獲得較多的母源抗體，從而能夠提高仔豬成活率。與此同時(shí)，由于減毒的原因使得抗原性減弱，會(huì)導(dǎo)致其免疫原性受到限制；也會(huì)由于減毒不夠徹底，導(dǎo)致臨床感染、免疫抑制。此外，母源抗體極易對(duì)弱毒苗的免疫過(guò)程產(chǎn)生影響。滅活苗不會(huì)有散毒、毒力返強(qiáng)而造成新疫源地的風(fēng)險(xiǎn)，安全性高；母源抗體對(duì)滅活苗的免疫過(guò)程影響極少；但其效果較弱毒苗差，持續(xù)時(shí)間也較短。總而言之，豬場(chǎng)在實(shí)際生產(chǎn)中應(yīng)該根據(jù)豬群的藍(lán)耳病病毒感染情況、豬群階段等因素，而選擇使用弱毒疫苗或者滅活疫苗免疫。