豬藍(lán)耳病滅活苗和弱毒苗免疫效果的對(duì)比研究

隋 超 閆益波 申 超 岳 磊 焦福林 吳志娟 胡廣英 任毅菲

（山西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所，山西太原 030032）

豬病防控

豬藍(lán)耳病滅活苗和弱毒苗免疫效果的對(duì)比研究

隋 超 閆益波 申 超 岳 磊 焦福林 吳志娟 胡廣英 任毅菲

（山西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所，山西太原 030032）

本文通過(guò)觀(guān)察免疫豬藍(lán)耳病滅活苗與弱毒苗后母豬和仔豬抗體水平的變化，比較兩種疫苗的免疫抗體消長(zhǎng)規(guī)律。實(shí)驗(yàn)?zāi)肛i和仔豬都分為4個(gè)組，1組、2組、3組、4組各免疫一次滅活苗、兩次滅活苗、一次弱毒苗、兩次弱毒苗。在計(jì)劃時(shí)間采集血清，檢測(cè)試驗(yàn)豬的抗體水平。由試驗(yàn)結(jié)果可知，弱毒苗的免疫效果略?xún)?yōu)于滅活苗，同種疫苗免疫兩次的效果優(yōu)于免疫一次的效果；弱毒苗的抗體峰值出現(xiàn)的比滅活苗早，但抗體維持時(shí)間略短。滅活苗適用于一般豬場(chǎng)的免疫防治工作，而弱毒苗更適用于急性突發(fā)的豬藍(lán)耳病的防治。

豬藍(lán)耳?。粶缁蠲?；弱毒苗；抗體水平

豬藍(lán)耳病（PRRS）是一種高度接觸性的傳染病，很容易在地方蔓延，在國(guó)內(nèi)外時(shí)有暴發(fā)，對(duì)養(yǎng)豬業(yè)的影響巨大。目前沒(méi)有有效的藥物能徹底根治豬藍(lán)耳病[1]，只能靠預(yù)防為主。豬藍(lán)耳病病毒（PRRSV）的感染只針對(duì)豬，以妊娠母豬和1月齡以?xún)?nèi)的仔豬最為易感[2]。PRRSV對(duì)患病豬和帶毒豬的感染和影響能持續(xù)一段時(shí)間[3]。感染PRRSV的豬群常具有不同的臨床反應(yīng)和癥狀，患病豬有的表現(xiàn)為皮膚變色，包括豬耳頂部發(fā)藍(lán)，腹部和陰部呈深紫色；有的豬只呼吸困難并伴有咳嗽。而一旦有臨床發(fā)病癥狀出現(xiàn)，又極易和其他疾病的病毒混合感染，這就使臨床診斷變得復(fù)雜難定[4]。為了驗(yàn)證滅活苗與弱毒苗對(duì)豬藍(lán)耳病的免疫效果，本研究設(shè)計(jì)以下試驗(yàn)進(jìn)行比較，從而為現(xiàn)階段選擇豬藍(lán)耳病疫苗提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗(yàn)耗材

美國(guó)愛(ài)德士生物有限公司生產(chǎn)的豬藍(lán)耳病病毒ELISA抗體檢測(cè)試劑盒及一次性采血器等。

1.1.2 試驗(yàn)用疫苗

哈爾濱維科生物有限公司生產(chǎn)的經(jīng)典PRRS滅活苗（CH-1R）；南農(nóng)高科技股份有限公司生產(chǎn)的經(jīng)典PRRS弱毒苗（R98株）。

1.1.3 試驗(yàn)豬

試驗(yàn)前在豬場(chǎng)選定一處單獨(dú)的飼喂場(chǎng)地作為試驗(yàn)區(qū)，并提前將試驗(yàn)區(qū)消毒殺菌，為試驗(yàn)的開(kāi)展做好準(zhǔn)備。

對(duì)試驗(yàn)豬群做好其他疫苗的免疫工作。試驗(yàn)前對(duì)挑選的公豬與母豬都提前完成多殺性巴氏桿菌、鏈球菌、副豬嗜血桿菌、豬支原體、圓環(huán)病毒2型、偽狂犬病毒、流感病毒和豬瘟病毒的疫苗免疫，免疫過(guò)程中也會(huì)避開(kāi)PRRS疫苗的免疫時(shí)間。

挑選出20頭PRRSV抗體檢測(cè)為陰性，生育過(guò)2胎次，年齡、體重相近的母豬。在母豬所產(chǎn)仔豬中，挑選20頭體重相近、PRRSV抗體檢測(cè)為陰性的仔豬。

1.2 方法

1.2.1 試驗(yàn)分組

20頭母豬隨機(jī)分為4組。20頭仔豬根據(jù)母本剪耳號(hào)后依然分為4組。

1.2.2 免疫方法

母豬1組受精后20天免疫1次滅活苗（2頭份/頭）。母豬2組產(chǎn)前2周免疫1次滅活苗，受精后20天免疫1次滅活苗（均為2頭份/頭）。母豬3組受精后20天注射1次弱毒苗（1頭份/頭）。母豬4組產(chǎn)前2周免疫1次弱毒苗，受精后20天免疫1次弱毒苗（均為1頭份/頭）。

仔豬1組14日齡免疫1次滅活苗（0.5頭份/頭）。仔豬2組14日齡肌肉注射1次滅活苗（0.25頭份/頭），35天加強(qiáng)免疫，即再肌肉注射1次滅活苗（0.5頭份/頭）。仔豬3組14日齡免疫1次弱毒苗（0.5頭份/頭）。仔豬4組14日齡肌肉注射1次弱毒苗（0.25頭份/頭），35天再肌肉注射1次弱毒苗（0.5頭份/頭）。

1.2.3 血樣采集

母豬1組、3組于免疫前采血，以保證該母豬PRRSV抗體是陰性，在免疫后分別于14、21、35、49、70、91、112天時(shí)采血；母豬2組、4組在首次免疫前采血，保證母豬免疫前為PRRSV抗體陰性豬，在二次免疫前也采血，檢測(cè)抗體水平，二免后于14、21、35、49、70、91、112天時(shí)采血。

在仔豬出生后第7、14、35、42、49、70、90、120日齡分別采集血樣。

1.2.4 檢測(cè)方法

采用美國(guó)愛(ài)德士生物有限公司生產(chǎn)的豬藍(lán)耳病病毒ELISA抗體檢測(cè)試劑盒，按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行血清樣本檢測(cè)。

1.3 計(jì)算結(jié)果

PRRS陽(yáng)性對(duì)照平均值（PC∶PRRS）減去陰性對(duì)照平均值（NC∶PRRS）必須≥0.150；NHC陽(yáng)性孔對(duì)照平均值（PC∶PRRS）必須≤0.120，NHC陰性對(duì)照平均值（NC∶PRRS）必須≤0.250；另外，陰性對(duì)照平均值（NC）必須≤0.150，試驗(yàn)方能有效。

樣本/陽(yáng)性對(duì)照比率的計(jì)算（S/P）∶S/P=〔（樣本A650nm∶PRRS）－（樣本A650nm∶NHC）〕÷〔（PC∶PRRS）－（PC∶NHC）〕。

1.4 結(jié)果判定

如果S/P值≥0.40，樣品應(yīng)被判定為PRRS抗體陽(yáng)性。如果S/P值＜0.40，樣品應(yīng)被判定為PRRS抗體陰性。

1.5 統(tǒng)計(jì)方法

本實(shí)驗(yàn)采用SPSS 18軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 試驗(yàn)?zāi)肛i的結(jié)果

2.1.1 母豬的PRRSV抗體水平

表1 4個(gè)組母豬免疫后不同時(shí)期的PRRSV抗體情況（A650nm）

從表1可以看出，所有母豬免疫后，抗體均逐漸升高，1組、2組和3組的抗體水平在35天時(shí)達(dá)到峰值，4組的抗體水平在21天時(shí)達(dá)到峰值，而后4個(gè)組的抗體水平均逐漸衰減，至112天時(shí)達(dá)到最低。另外整個(gè)試驗(yàn)期，4個(gè)組的母豬抗體水平表現(xiàn)為：4組＞2組＞3組＞1組。2.1.2母豬免疫后的產(chǎn)子情況

圖1 4個(gè)組母豬的死胎率、弱仔率、死亡率、發(fā)病率比較

由圖1知，4個(gè)組母豬的死胎率相比為1組＞2組＞3組＞4組，弱仔率為2組＞3組＞4組＞1組，死亡率為2組＞3組＞1組＞4組，發(fā)病率為1組＞2組＞4組＞3組，其中母豬4組的死胎率和死亡率為零。

2.2 試驗(yàn)仔豬的結(jié)果

從表2可以看出，1組仔豬的免疫抗體水平在70日齡達(dá)到峰值，2組仔豬的免疫抗體在90日齡時(shí)達(dá)到峰值，1組和2組仔豬都是在120日齡時(shí)抗體值最低，3組仔豬的免疫抗體水平在35日齡時(shí)達(dá)到峰值，4組仔豬的免疫抗體水平在49日齡時(shí)達(dá)到峰值，3組和4組仔豬則是在90日齡時(shí)抗體值最低。

表2 4個(gè)組仔豬的PRRSV抗體情況（A650nm）

3 小結(jié)和分析

試驗(yàn)證明，經(jīng)兩次弱毒苗免疫的母豬4組抗體峰值出現(xiàn)最早，在21天。一次弱毒苗免疫的母豬3組與兩次滅活苗免疫的母豬2組免疫效果相似，抗體峰值都出現(xiàn)在35天。何新群等就證明弱毒苗免疫豬后20～35天左右出現(xiàn)抗體峰值，本研究的結(jié)果與此相一致[3]。免疫一次滅活苗的母豬1組抗體峰值出現(xiàn)最晚，在49天。而后4個(gè)組抗體水平逐漸衰減，至112天最低，但也為陽(yáng)性，即在整個(gè)生產(chǎn)周期，母豬都可以抵抗PRRSV相關(guān)毒株的感染。整個(gè)試驗(yàn)期，母豬4組的抗體水平最佳，母豬2組的抗體水平又高于其他2個(gè)組，說(shuō)明經(jīng)兩次疫苗免疫的效果較好，并且經(jīng)兩次弱毒苗免疫的效果最好。但是4個(gè)組母豬抗體水平差異不顯著，只能從表1中顯示免疫效果的差別。另外，比較試驗(yàn)?zāi)肛i的死胎率、弱仔率、死亡率、發(fā)病率，也是母豬4組的最低，說(shuō)明經(jīng)兩次弱毒苗免疫的效果較好。免疫弱毒苗的仔豬3、4組的抗體峰值比免疫滅活苗的1、2組抗體峰值出現(xiàn)早，但抗體衰減速度快。由此可知，免疫PRRS弱毒苗的母豬及仔豬的效果要遠(yuǎn)遠(yuǎn)優(yōu)于PRRS滅活苗的效果。而同種疫苗的免疫也是兩次免疫的效果要好于一次。

曹斌[1]、曹晉蓉[6]等學(xué)者均認(rèn)為，弱毒苗的免疫效果要優(yōu)于滅活苗，本次試驗(yàn)結(jié)論也證明了這一點(diǎn)。但是，曹斌、曹晉蓉等學(xué)者同時(shí)主張滅活苗安全性好，不存在散毒和毒力返強(qiáng)的危險(xiǎn)，但滅活苗存在免疫劑量大，免疫次數(shù)多，產(chǎn)生免疫所需的時(shí)間較長(zhǎng)等缺點(diǎn)。

相比之下，弱毒苗的免疫效果好，免疫力堅(jiān)強(qiáng)，免疫期長(zhǎng)，而此次試驗(yàn)結(jié)果則是弱毒苗免疫抗體維持時(shí)間要短于滅活苗，這點(diǎn)與相關(guān)文獻(xiàn)的報(bào)道不符。由于試驗(yàn)只在一個(gè)豬場(chǎng)進(jìn)行，且試驗(yàn)對(duì)象范圍狹小，所以結(jié)論可能存在一些誤差，但依然有一定的參考價(jià)值。

對(duì)于未來(lái)豬場(chǎng)豬藍(lán)耳病的防控，可以采取以下措施：未發(fā)病豬場(chǎng)加強(qiáng)豬場(chǎng)管理，全面貫徹各項(xiàng)防疫程序，做好消毒措施，堅(jiān)持引種后配種前的疫苗免疫，提高豬群免疫力，可適當(dāng)在飼料中添加有益的中草藥成分。發(fā)病豬場(chǎng)要先確定PRRS病毒株型，根據(jù)病情的急緩選擇弱毒苗或滅活苗，并確定疫苗接種的劑量，必要時(shí)可聯(lián)系相關(guān)科技部門(mén)尋求技術(shù)幫助。

[1]曹斌,王海燕,周廣生,等.不同類(lèi)型豬藍(lán)耳病疫苗的體液免疫效果比較[J].中國(guó)動(dòng)物檢疫,2010(8):51-52.

[2]姚敬明,孟帆,吳忻等.豬繁殖與呼吸綜合征母源抗體和免疫抗體的消長(zhǎng)規(guī)律研究[J].中國(guó)畜牧獸醫(yī),2010,37(4):206-208.

[3]何信群,閏福棟.豬繁殖與呼吸綜合征病毒弱毒株活疫苗抗體應(yīng)答水平的觀(guān)察[J].中國(guó)獸藥雜志,2003,37(11):24-26.

[4]Evans M,Medley G,Green L.Porcine reproductive and respiratory syndrome virus(PRRSV)in GB pig herds:farm characteristics associated with heterogeneity in seroprevalence[J]. BMC Veterinary Research,2008(4):48-62.

[5]孟帆,姚敬明,吳忻.豬群暴發(fā)豬瘟與藍(lán)耳病混合感染的診斷與防制[J].山西農(nóng)業(yè)科學(xué),2010,38(6):66-68.

[6]曹晉蓉,占松鶴,王非,等.不同類(lèi)型豬藍(lán)耳病疫苗的免疫探討[J].中國(guó)動(dòng)物檢疫,2009,26(9):56-57.

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1673-4645(2014)10-0045-03

2014-09-09