降氮煎劑對(duì)慢性腎衰大鼠腎功能的作用及其對(duì)尿酸的影響

金宇杰　梁亮　王圣治

摘要：目的?研究降氮煎劑對(duì)腺嘌呤所致慢性腎衰竭大鼠模型的腎功能的作用及其對(duì)尿酸的影響。方法?除空白組外，其他大鼠皆用腺嘌呤灌胃法來(lái)復(fù)制慢性腎衰竭的模型。將尿毒清作為對(duì)照組，按照體重層次將造模大鼠隨機(jī)分為模型組，尿毒清組（給予尿毒清顆粒）及實(shí)驗(yàn)組（給予降氮煎劑），治療14?d后，測(cè)試每組大鼠血肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）、尿酸（UA）及腎組織URAT1表達(dá)的水平。結(jié)果?①實(shí)驗(yàn)組SCR、BUN、UA明顯低于尿毒清組及模型組（P<0.05）;②實(shí)驗(yàn)組腎組織URAT1蛋白表達(dá)明顯低于尿毒清組及模型組（P<0.05），而尿毒清組與模型組之間無(wú)顯著差異（P>0.05）。結(jié)論?降氮煎劑可以顯著降低Scr、BUN、UA及腎組織URAT1水平，具有改善腎功能及獨(dú)立降低尿酸的作用。

關(guān)鍵詞：降氮煎劑;慢性腎衰竭;尿酸;URAT1

中圖分類(lèi)號(hào)：R285.5?文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A?文章編號(hào)：1007-2349（2020）03-0069-04

Effects?of?Nitrogen-reducing?Decoction?on?Renal?Function?and?Levels?of?UA?andRenal?Tissue?UTA1?in?Rats?with?Chronic?Renal?Failure

JIN?Yu-jie1，?LIANG?Liang2，?WANG?Sheng-zhi2

（1.?Liaoning?University?of?Traditional?Chinese?Medicine，?Shenyang?110032，?China;2.?The?Affiliated?Hospital?of?Liaoning?University?of?Traditional?Chinese?Medicine，?Shenyang?110032，?China）

【Abstract】Objective：?To?study?the?effects?of?Nitrogen-reducing?Decoction?on?the?renal?function?and?the?levels?of?UA?and?renal?tissue?URAT1?in?rats?with?adenine-induced?chronic?renal?failure.?Methods：?Except?the?rats?in?the?blank?group，?other?rats?were?given?adenine?gavage?to?replicate?the?chronic?renal?failure?model.?By?using?Niaoduqing?as?a?control?group，?the?model?rats?were?randomly?sub-divided?into?model?groups?according?to?their?weight.?The?Niaoduqing?group?（administered?with?Niaoduqing?granules）?and?the?experimental?group?（administered?with?nitrogen-reducing?decoction）?was?both?treated?for?14?days.?The?levels?of?rat?serum?creatinine?（SCR），?blood?urea?nitrogen?（BUN），?uric?acid?（UA）?and?renal?tissue?URAT1?expression?in?each?group?were?detected.?Results：?1）?The?SCR，?BUN，?and?UA?of?the?experimental?group?were?significantly?lower?than?those?of?the?Niaoduqing?group?and?the?model?group?（P<0.05）.?2）?The?expression?of?URAT1?protein?in?the?kidney?tissue?of?the?experimental?group?was?significantly?lower?than?that?of?the?Niaoduqing?group?and?the?model?group?（P<0.05），?but?there?was?no?significant?difference?between?the?Niaoduqing?group?and?the?model?group?（P>0.05）.?Conclusion：?Nitrogen-reducing?decoction?can?significantly?reduce?the?levels?of?SCR，?BUN?and?UA?and?has?the?effect?of?improving?renal?function，?and?has?independent?effects?of?reducing?uric?acid.

【Key?words】nitrogen-reducing?decoction，?chronic?renal?failure，?UA，?URAT1

慢性腎衰竭（CRF）簡(jiǎn)稱(chēng)慢性腎衰，是各類(lèi)慢性腎臟疾病漸進(jìn)地?fù)p害腎功能以致腎臟衰敗的綜合征[1]。其終末期需用腎臟替代療法，但該療法由于費(fèi)用高、腎源不足等原因難以普及，而中醫(yī)中藥療效顯著，又以其相對(duì)低廉的價(jià)格、安全方便等特點(diǎn)而廣泛用于臨床。

降氮煎劑是本院院內(nèi)復(fù)方制劑，臨床應(yīng)用治療慢性腎衰竭氮質(zhì)血癥具有顯著效果。同時(shí)發(fā)現(xiàn)，慢性腎衰患者在使用了降氮煎劑后，其繼發(fā)性高尿酸血癥也有所改善。因此，本實(shí)驗(yàn)主要在研究降氮煎劑對(duì)慢性腎衰竭所致繼發(fā)性高尿酸血癥大鼠模型的氮質(zhì)血癥及高尿酸血癥的作用，并觀察其是否具有獨(dú)立降尿酸的作用。

1?材料與方法

1.1?材料

1.1.1?實(shí)驗(yàn)動(dòng)物?50只SD雄性大鼠購(gòu)自遼寧中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，SPF級(jí)，體重（180±10）g。于遼寧中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心清潔級(jí)動(dòng)物房?jī)?nèi)分籠飼養(yǎng)并觀察。

1.1.2?主要藥品?腺嘌呤（美國(guó)?Amresco?公司：0183，規(guī)格：100?g×1?瓶）;降氮煎劑（遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院制劑室，遼藥制備Z20180191000，規(guī)格：500?mL×1?瓶）;尿毒清顆粒（內(nèi)蒙古康臣藥業(yè)有限責(zé)任公司，國(guó)藥準(zhǔn)字Z20073256，規(guī)格：5?g/袋）。

1.1.3?主要試劑?肌酐試劑盒（上海協(xié)和梅迪克斯醫(yī)療器械有限公司），尿素氮、尿酸試劑盒（上海德賽診斷系統(tǒng)有限公司）。大鼠URAT1免疫組化試劑盒（上海圻明生物科技有限公司）。

1.2?方法

1.2.1?分組與造模方法?適應(yīng)性喂養(yǎng)7天后，隨機(jī)選取12只大鼠為空白組，每天予8?mL/（kg·d）純凈水一次灌胃;對(duì)剩余的38只進(jìn)行造模，每天通過(guò)胃內(nèi)給藥，予濃度為2.5%的腺嘌呤混懸液200?mg/（kg·d）。連續(xù)21天后，隨機(jī)選取3只造模組大鼠、2只空白組大鼠，測(cè)定血清肌酐和腎間質(zhì)纖維化程度。結(jié)果顯示，模型組血清肌酐值超過(guò)最大正常值9.7?mmol/L[2]，腎臟體積增大，顏色變?yōu)榛野?，表面被覆顆粒，光鏡下可見(jiàn)縮小的腎小球，毀壞的腎小管，腎間質(zhì)纖維化，有炎癥細(xì)胞浸潤(rùn);空白組大鼠血肌酐及腎臟病理均未見(jiàn)異常，說(shuō)明制備成功。將造模后存活的30只大鼠分為模型組，尿毒清組和實(shí)驗(yàn)組，每組動(dòng)物數(shù)為10只。每次分組皆根據(jù)體重層次隨機(jī)選取大鼠。

1.2.2?給藥與處理方法?每隔1?d，按照15?mL/kg的劑量，予所有大鼠腹腔注射10%的水合氯醛進(jìn)行麻醉，等待5?min進(jìn)行給藥。實(shí)驗(yàn)組大鼠給予13?mL/（kg·d）降氮煎劑保留灌腸，給予純凈水15?mL/（kg·d）灌胃;尿毒清組大鼠給予15?mL/（kg·d）尿毒清顆粒溶液（每2?mL溶液內(nèi)含尿毒清顆粒0.15?g）灌胃，純凈水13?mL/（kg·d）灌腸;空白組和模型組大鼠給予15?mL/（kg·d）純凈水灌胃，13?mL/（kg·d）純凈水灌腸。所有大鼠灌腸深度皆為8?cm，灌腸后倒懸大鼠約1?min，使液體充分接觸腸壁。連續(xù)14?d。最后一次給藥后，講大鼠禁食禁水12?h，稱(chēng)重所有大鼠，用10%水合氯醛腹腔麻醉，剖開(kāi)腹腔，采集腹主動(dòng)脈血液5?mL，并摘取左腎去被膜。取材完成后處死大鼠。

1.2.3?檢測(cè)內(nèi)容與方法

1.2.3.1?一般情況?觀察大鼠的體重，尿量，毛發(fā)顏色，精神，活動(dòng)和食欲。

1.2.3.2?血清檢測(cè)?將采集的血液離心（1500?g，4℃）7min后取血清并采用生化法檢測(cè)，查看血肌酐（Scr）、血尿素氮（BUN）、血尿酸（UA）數(shù)值。

1.2.3.3?腎組織URAT1的檢測(cè)?運(yùn)用免疫組化法制備腎組織切片。測(cè)定陽(yáng)性顆粒積分光密度（IOD）。

1.3?統(tǒng)計(jì)學(xué)方法?使用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS22.0分析數(shù)據(jù)，并且通過(guò)（x±s）來(lái)表示符合正態(tài)分布的測(cè)量數(shù)據(jù)。通過(guò)單因素方差分析對(duì)各組間的數(shù)據(jù)進(jìn)行比較，采用LSD法進(jìn)行兩兩比較，以P<0.05作為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

2?結(jié)果

2.1?一般情況?造模前，所有大鼠毛色光滑潤(rùn)澤，活潑;造模后，造模組大鼠食量逐漸減少，體重增長(zhǎng)較空白組大鼠慢，毛色暗淡，活動(dòng)減少，尿量增加;經(jīng)尿毒清或降氮煎劑治療后的大鼠食量和活動(dòng)量均有所增加。治療期間，實(shí)驗(yàn)組大鼠死亡1只，尿毒清組死亡2只，模型組死亡3只，空白組無(wú)死亡。組間病死率無(wú)差異（P>0.05）。

2.2?血清指標(biāo)?與空白組相比，其他3組的Scr、BUN及UA?3項(xiàng)指標(biāo)的平均值顯著增加（P<0.05）;與模型組相比，尿毒清組和實(shí)驗(yàn)組的Scr、BUN及UA平均值明顯降低（P<0.05）;與尿毒清組相比，實(shí)驗(yàn)組的Scr及BUN均值有所減少（P<0.05），UA均值顯著降低（P<0.05）。具體見(jiàn)表1。

2.3?腎組織URAT1蛋白表達(dá)?與空白組相比，其他三組大鼠腎組織URAT1蛋白表達(dá)IOD均值顯著增多（P<0.01）;模型組和尿毒清組間的IOD均值無(wú)明顯差異（P>0.05）;與模型組和尿毒清組相比，實(shí)驗(yàn)組腎組織URAT1?蛋白表達(dá)IOD均值明顯減少（P<0.05）。具體見(jiàn)表2。