探究暴馬丁香葉中總黃酮的超聲提取工藝

王 碩，申雨沐，俞天奇，李 望，王 薇，秦佳梅*

（通化師范學(xué)院·吉林通化·134002）

暴馬丁香樹(shù)皮入藥，有清肺化痰、止咳平喘、消炎、利尿等功能[1]。其嫩葉、枝條、花還可加工成保健茶，對(duì)呼吸系統(tǒng)具有很好的保健作用[2]。暴馬丁香含有多種天然活性成分[3]，其中黃酮類(lèi)化合物有良好的抗氧化、抗過(guò)敏、抗炎癥、抑制細(xì)菌、抑制寄生蟲(chóng)、保護(hù)心血管、防治心與腦血管疾病等作用[4]。本項(xiàng)目探究暴馬丁香葉中總黃酮的提取工藝，旨為充分利用暴馬丁香資源提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

2018年春季采集的暴馬丁香葉，自然陰干，粉碎，過(guò)篩，裝袋備用。

1.2 方法

1.2.1 繪制蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線

圖1 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線

用FA2004C電子天平精密稱(chēng)取10mg蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品 （沈陽(yáng)鼎國(guó)生物技術(shù)有限公司，批號(hào)151008）于25mL容量瓶中，用70%乙醇定容至25mL，震蕩混勻，制得濃度為0.4mg/mL標(biāo)準(zhǔn)品母液。精密吸取0、0.5、1、1.5、2mL于10mL容量瓶中，分別加入70%乙醇2、1.5、1、0.5、0mL。 再均加入 0.3mL5%NaNO2溶液，靜置6min后加入0.3mL10%Al(NO3)3溶液，靜置6min，最后加入4mL4%NaOH溶液，用70%乙醇定容至刻度，靜置15min，形成紅色絡(luò)合物。用722s可見(jiàn)分光光度計(jì)在500nm[5]波長(zhǎng)處測(cè)吸光度值。以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，詳見(jiàn)圖1，并得回歸方程為y=9.58x+0.1028，R2=0.9994。在0.00～0.08mg/mL 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

1.2.2 供試溶液配制與測(cè)定

參考王宇希[6]、姜玉梅[7]等人的實(shí)驗(yàn)方法，將粉碎后的暴馬丁香葉2g置于250mL錐形瓶中，分別探究徑粒大?。?0、40、60、80、100 目）、液料比（1∶15、1∶20、1∶25、1∶30、1∶35）、乙醇濃度（50%、60%、70%、80%）、超聲時(shí)間 （10、20、30、40、50min） 四個(gè)因素， 用 KQ-300DE型數(shù)控超聲波清洗器在超聲功率為150W、恒定溫度50°C下，超聲提取50min，用SHZ-D(III)循環(huán)水式真空泵減壓過(guò)濾，收集濾液于50mL容量瓶中，用相應(yīng)濃度的乙醇進(jìn)行定容，三次重復(fù)。精確吸取1mL，加純凈水稀釋到一定倍數(shù)后，取稀釋后的溶液1mL置于10mL容量瓶中，照2.1方法測(cè)定吸光度值，代入標(biāo)準(zhǔn)方程計(jì)算。

1.3 數(shù)據(jù)分析

所獲數(shù)據(jù)用Excel和Minitab19軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果分析

2.1 單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果

圖2 徑粒大小對(duì)暴馬丁香總黃酮提取含量的影響

圖3 液料比對(duì)暴馬丁香總黃酮提取含量的影響

圖4 乙醇濃度對(duì)暴馬丁香總黃酮提取含量的影響

圖5超聲時(shí)間對(duì)暴馬丁香總黃酮提取含量的影響

圖2 表明材料顆粒越小提取效率越高，暴馬丁香總黃酮含量在材料過(guò)80目篩時(shí)提取率最高，達(dá)11.078mg/g。顆粒過(guò)大可能導(dǎo)致提取液不能充分的浸入。圖3示液料比在1∶15～1∶35范圍內(nèi)暴馬丁香總黃酮提取含量整體呈下降趨勢(shì)，當(dāng)液料比在1∶15時(shí)暴馬丁香總黃酮提取含量最大為23.653mg/g，認(rèn)為提取劑量大后可能導(dǎo)致其他雜質(zhì)浸出。圖4在乙醇濃度50%～80%范圍內(nèi)，暴馬丁香總黃酮提取含量先升后降，乙醇濃度在低于60%時(shí)，含量較可能因?yàn)榻?rùn)性及溶解性較差[8]，當(dāng)乙醇濃度過(guò)高時(shí)，可能會(huì)同時(shí)溶解出其他雜質(zhì)[9]，當(dāng)乙醇濃度在70%時(shí)，暴馬丁香總黃酮提取含量最大為26.116mg/g。圖5隨著超聲時(shí)間的延長(zhǎng)呈現(xiàn)上升后下降認(rèn)為超聲時(shí)間過(guò)長(zhǎng)可能會(huì)導(dǎo)致暴馬丁香葉中的總黃酮分解[10]，超聲時(shí)間在20min時(shí)暴馬丁香總黃酮提取含量最高為26.158mg/g。

2.2 正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果及分析

根據(jù)單因素實(shí)驗(yàn)，以A徑粒大小、B液料比、C乙醇濃度、D超聲時(shí)間為考察，因素水平表見(jiàn)表1，按照四因素三水平設(shè)計(jì)L9（34）正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，

表1 正交因素水平

表2 L9（34）正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析

由表2可以得知影響暴馬丁香總黃酮提取因素是液料比＞料徑＞超聲時(shí)間＞液料比，優(yōu)化得到的最佳工藝條件為A2B1C3D3，即徑粒大小為60目，液料比為1∶15，乙醇濃度為 80%，超聲時(shí)間為 40min。

3 結(jié)論與討論

通過(guò)對(duì)暴馬丁香葉的徑粒大小、液料比、乙醇濃度、超聲時(shí)間四個(gè)單因素實(shí)驗(yàn)，得出徑粒大小為80目時(shí)暴馬丁香總黃酮提取含量最高為11.078mg/g，液料比為 1∶15時(shí)暴馬丁香總黃酮提取含量最高為23.653mg/g，乙醇濃度為70%時(shí)暴馬丁香總黃酮提取含量最高為26.116mg/g，超聲取時(shí)間為20min時(shí)暴馬丁香總黃酮提取含量高為26.158mg/g。為探討其交互作用，采用正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)化得到的最佳工藝條件為徑粒大小為60目、料液比為1∶15、乙醇濃度為80%、超聲時(shí)間為40min。

關(guān)于暴馬丁香葉中的總黃酮的研究較少，不同生長(zhǎng)期暴馬丁香葉中的總黃酮含量不同，五月份采收的暴馬丁香葉中總黃酮含量較高[13]。本項(xiàng)檢測(cè)結(jié)果與文獻(xiàn)[11、12]相近。本實(shí)驗(yàn)沒(méi)有排除色素的干擾，還需進(jìn)一步進(jìn)行分離純化總黃酮[14]，以得到更精確的結(jié)果。暴馬丁香以樹(shù)皮入藥，從葉中提取總黃酮，可以更好的利用暴馬丁香資源。