人參中腐霉利農(nóng)藥殘留量測定研究

宋瑩瑩，郭暢冰，岳樂樂，李 蕾，謝麗娟，王國明，徐芳菲*

（吉林人參研究院·吉林通化·134001）

腐霉利，英文通用名稱為 procymidone，化學(xué)名為N-（3，5-二氯苯基）-1，2-二甲基環(huán)丙烷-1，2-二甲?；鶃啺?，又稱速克靈、殺霉利等[1]，它是一種廣譜內(nèi)吸性殺菌劑，具有保護(hù)和治療作用，對低溫、高溫條件下發(fā)生的各種作物的灰霉病菌核病有顯著防效，對葡萄孢屬和核盤菌屬所引起的病害具有特效[2]。

人參是五加科植物人參（Panax ginsengC.A.Mey.）的干燥根，味甘、微苦、微溫，歸脾、肺、心、腎經(jīng)[3]，首載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，具有大補(bǔ)元?dú)?，補(bǔ)脾益肺，生津，安神益智的功效。人參是我國馳名中外的名貴藥材，被譽(yù)為“百草之王”，已有數(shù)千年的藥用和保健歷史，也是我國主要出口藥材[4]。由于人參在種植過程中，生長周期長，一般5～6年或更長時(shí)間收獲，易受病蟲害的侵襲。所以，腐霉利在人參防治病蟲害方面應(yīng)用較多，主要用于栽前和其它藥劑合用進(jìn)行土壤消毒和疫霉病、灰霉病的防治，從而導(dǎo)致了其殘留問題嚴(yán)重[5]。對于腐霉利殘留量的測定，國外有高效液相色譜法、氣相色譜法和氣相色譜一質(zhì)譜法。但是，國內(nèi)目前尚未有相應(yīng)的國家標(biāo)準(zhǔn)和行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，此方面的文獻(xiàn)也很鮮見[6]。由于氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法具有高分辨度、高靈敏度、分析速度快、鑒別能力強(qiáng)等特點(diǎn)，可同時(shí)完成待測組分的分離、鑒定和定量。因此，本文建立了一種氣相色譜—質(zhì)譜聯(lián)用法（GC—MS）測定人參中腐霉利的方法，該方法對我國人參產(chǎn)品的市場監(jiān)管以及農(nóng)產(chǎn)品安全具有重要意義[7]。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

美國AgiLent 7820A-5977E型GC-MS聯(lián)用儀（配EI源）；DE-100g型中藥粉碎機(jī) （浙江紅景天）；SQP型電子天平（賽多利斯）；MX-S型可調(diào)式混勻儀（北京大龍）；THZ-92A型氣浴恒溫振蕩器 （上海博迅）；3H16RI型智能高速冷凍離心機(jī)；XT-NS 1型全自動(dòng)氮吹濃縮儀（上海新拓）。

正己烷（AR）；冰醋酸（AR）；乙腈（HPL）；無水硫酸鎂（AR）；無水乙酸鈉（AR）；N-丙基乙二胺(PSA)；十八烷基硅烷鍵合硅膠；硅膠（試劑級）；人參樣品，市場購買。

腐霉利標(biāo)準(zhǔn)品，100μg/mL，購自農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護(hù)科研監(jiān)測所。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 儀器條件

氣相色譜條件：HP-5MS色譜柱 （30m×0.25mm×0.25μm）（美國 AgiLent）；進(jìn)樣口溫度：250℃；升溫程序：初始柱溫為100℃，保持1 min，以10℃ /min的速率升溫至280℃，保持11 min；進(jìn)樣方式：不分流進(jìn)樣，1min后開閥；載氣：氦氣，純度大于99.995%，載氣流速1.0mL/min；進(jìn)樣量：1μL 。

質(zhì)譜條件：離子源：230℃；接口溫度：150℃；掃描方式：選擇離子監(jiān)測方式（SIM）；監(jiān)測離子（m/z）：255，283，285；定量離子：283；溶劑延遲：8min。

1.2.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：將腐霉利標(biāo)準(zhǔn)品（100μg/mL）置于50mL容量瓶中，加入正己烷定容至刻度，得到2μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。

標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：用玻璃移液管移取適量標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，再用正己烷稀釋成檢測所需的系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，即為 0.008、0.01、0.025、0.05、0.1、0.2μg/mL。

1.2.3 樣品前處理

稱取已粉碎的人參樣品（過三號(hào)篩），約3g，精密稱定，置50 mL聚苯乙烯具塞離心管中，加入1%冰醋酸溶液15mL，渦旋使藥粉充分浸潤，放置30分鐘，精密加入乙腈15mL，渦旋使混勻，置振蕩器上劇烈振蕩(500次/min)5分鐘，加入無水硫酸鎂與無水乙酸鈉的混合粉末(4∶1)7.5g，立即搖散，再置振蕩器上劇烈振蕩(500次/min)3分鐘，于冰浴中冷卻10分鐘，離心(4000轉(zhuǎn)/min)5分鐘，取上清液9mL，置已預(yù)先裝有凈化材料的離心管 [無水硫酸鎂900mg，N-丙基乙二胺(PSA)300mg，十八烷基硅烷鍵合硅膠300mg，硅膠300mg]中，渦旋使充分混勻，再置振蕩器上劇烈振蕩(500次/min)5分鐘使凈化完全，離心(4000轉(zhuǎn)/min)5分鐘，精密吸取上清液5mL，置氮吹儀上于40℃水浴濃縮至約0.4mL，加乙腈定容至1mL，渦旋混勻，用微孔濾膜 (0.22μm)濾過，取續(xù)濾液，即得，供GC—MS檢測。

2 結(jié)果

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

氣相色譜-質(zhì)譜選擇離子監(jiān)測 (SIM)模式具有靈敏度高、選擇性好和抗干擾能力強(qiáng)的特點(diǎn)[8]，在本實(shí)驗(yàn)選定的色譜條件下，腐霉利標(biāo)準(zhǔn)品的選擇離子(SIM)譜圖和質(zhì)譜圖見圖l、圖2。

分別取 0.008、0.01、0.025、0.05、0.1、0.2μg/mL 腐霉利標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)樣分析，以腐霉利的含量（x）和組分色譜峰面積（y）作標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到線性回歸方程為：y=6.511e5x+7.569e2，相關(guān)系數(shù)r為0.99997。

圖2 腐霉利標(biāo)品的質(zhì)譜圖

2.2 檢出限

本方法的檢出限通過使用不同濃度的腐霉利（速克靈）標(biāo)準(zhǔn)溶液，注入安捷倫7820A/5977E氣相色譜-質(zhì)譜儀上，調(diào)用信噪比檢測報(bào)告，選擇標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)特征峰附近較平穩(wěn)的一段基線作為噪音水平，以3倍信噪比(S/N=3)作為腐霉利的檢出限，得出腐霉利的方法檢出限為0.005μg/mL。

2.3 方法的精密度實(shí)驗(yàn)

精密吸取濃度為0.05μg/mL的腐霉利標(biāo)準(zhǔn)溶液1μL，待基線穩(wěn)定后，重復(fù)進(jìn)樣6次，記錄各譜圖中的峰面積，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為3.96%，結(jié)果見表1。表明方法具有較好的精密度。

表1 精密度測定數(shù)據(jù)

2.4 方法的準(zhǔn)確度實(shí)驗(yàn)

2.4.1 樣品中腐霉利的含量

精密稱取人參樣品平行3份，按1.2.3方法步驟處理后，分別進(jìn)樣，計(jì)算試樣平均含量，結(jié)果見表2。

表2 樣品中腐霉利的含量

2.4.2 方法的加標(biāo)回收率

精密稱取同一人參樣品6份，每份1.5g，分別向其中加入濃度為0.02μg/mL的腐霉利標(biāo)準(zhǔn)溶液各1mL，后按1.2.3步驟操作，在1.2.1儀器條件下測定，計(jì)算腐霉利的平均回收率為87.64%，結(jié)果見表3。表明該方法具有良好的回收率。

表3 方法回收率數(shù)據(jù)

2.5 實(shí)際樣品測定

利用所建立的方法，精密稱取從市場采集的6份人參樣品進(jìn)行分析，按1.2.3步驟操作，分別進(jìn)樣，結(jié)果見表4，其中1份樣品中檢出腐霉利，圖譜見圖3。

表4 樣品中腐霉利含量

圖3 人參樣品的提取離子色譜圖

3 結(jié)論

《中國藥典》2015版四部通則2341農(nóng)藥多殘留量測定法—第四法中的氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法，是包含腐霉利在內(nèi)的76種農(nóng)藥殘留量的測定方法，該方法使用的GC—MS是氣相色譜串聯(lián)三重四級桿并配有EI源的質(zhì)譜。而本實(shí)驗(yàn)是針對人參中腐霉利殘留量的測定研究，因此，本實(shí)驗(yàn)檢測人參中腐霉利殘留量的操作方法是參照了《中國藥典》2015版四部通則2341農(nóng)藥多殘留量測定法—第四法，而采用的GC—MS是氣相色譜串聯(lián)單重四級桿并配有EI源的質(zhì)譜，且色譜條件與質(zhì)譜條件有所改變。經(jīng)過實(shí)際樣品實(shí)驗(yàn)的驗(yàn)證，用本實(shí)驗(yàn)的方法與儀器測定人參中的腐霉利殘留，其回收率均在70%～125%之間，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差小于15%，方法靈敏度和準(zhǔn)確度均能達(dá)到殘留檢測的要求，且腐霉利的出峰時(shí)間也提前了。因此，該方法可適用于人參中腐霉利殘留量的檢測，不僅節(jié)省了時(shí)間也降低了對儀器配置的要求。