辛夷標(biāo)準(zhǔn)湯劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

廖鵬飛　王亞杰　郝單麗　劉麗　趙慶賀

摘要：目的??建立辛夷標(biāo)準(zhǔn)湯劑質(zhì)量控制方法，為辛夷配方顆粒的質(zhì)量評價提供依據(jù)。?方法??制備12批不同產(chǎn)地辛夷飲片的標(biāo)準(zhǔn)湯劑，按2015年版《中華人民共和國藥典》揮發(fā)油測定法測定揮發(fā)油含量，采用超高效液相色譜（UPLC）-二極管陣列檢測器對木蘭脂素進(jìn)行含量測定，計算出膏率和指標(biāo)成分轉(zhuǎn)移率，采用《中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)（2004A）》軟件對UPLC圖譜進(jìn)行分析。結(jié)果??12批辛夷飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑揮發(fā)油含量均大于1.0%（mL/g），出膏率為14.0%～19.7%，木蘭脂素轉(zhuǎn)移率為6.61%～36.63%。UPLC圖譜確定了4個共有峰，特征圖譜相似度均大于0.9。結(jié)論??本研究制備的辛夷標(biāo)準(zhǔn)湯劑質(zhì)量穩(wěn)定，特征圖譜相似度高，方法精密度、穩(wěn)定性和重復(fù)性良好，可為辛夷配方顆粒的質(zhì)量控制提供參考。

關(guān)鍵詞：辛夷;標(biāo)準(zhǔn)湯劑;木蘭脂素;超高效液相色譜法;指紋圖譜

中圖分類號：R284.1????文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A????文章編號：1005-5304（2020）03-0053-04

DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.201903289

Quality?Study?of?Magnoliae?Flos?Standard?Decoction

LIAO?Pengfei1，2，?WANG?Yajie2，?HAO?Danli2，?LIU?Li2，?ZHAO?Qinghe2

1.?Tibetan?Duorui?Pharmaceutical?Company，?Changdu?854000，?China;?2.?Institute?of?Chinese?Materia?Medica，?China?Academy?of?Chinese?Medical?Sciences，?Beijing?100700，?China

Abstract：?Objective?To?establish?the?quality?control?method?for?Magnoliae?Flos?standard?decoction，?and?to?provide?references?for?the?quality?control?protocol?of?Magnoliae?Flos?dispensing?granules.?Methods?Twelve?batches?of?Magnoliae?Flos?standard?decoction?were?prepared.?The?content?of?volatile?oil?was?determined?according?to?the?methods?in?Chinese?Pharmacopoeia?（2015Ed）.?Ultra-high?performance?liquid?chromatography?（UPLC）?-?diode?array?detector?was?used?to?determine?the?content?of?magnolin，?and?the?paste?rate?and?transfer?rate?were?calculated.?UPLC?fingerprint?was?analyzed?by?using?Similarity?Evaluation?System?for?Chromatographic?Fingerprint?of?Traditional?Chinese?Medicine?（2004A）.?Results?The?contents?of?volatile?oil?of?12?batches?of?Magnoliae?Flos?standard?decoction?were?all?more?than?1.0%?（mL/g），?the?extraction?rates?were?14.0%–19.7%，?and?the?transfer?rates?of?magnolin?were?6.61%?36.63%.?Moreover，?4?common?chromatographic?peaks?were?determined?based?on?their?fingerprints.?The?similarity?of?12?batches?of?samples?was?all?higher?than?0.9.?Conclusion?The?quality?of?12?batches?of?Magnoliae?Flos?standard?decoction?is?stable，?the?fingerprint?similarity?is?high，?and?the?precision，?stability?and?repeatability?of?the?method?are?good，?which?can?provide?references?for?the?quality?control?of?Magnoliae?Flos?dispensing?granules.

Keywords：?Magnoliae?Flos;?standard?decoction;?magnolin;?UPLC;?fingerprints

隨著科技的進(jìn)步和發(fā)展，超微粉、納米中藥、配方顆粒等新型中藥飲片不斷涌現(xiàn)[1]。這些新型中藥飲片的應(yīng)用具有積極的臨床意義，是對傳統(tǒng)飲片的有益補(bǔ)充，但也存在標(biāo)準(zhǔn)不明確、劑量不統(tǒng)一等問題。中藥飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑是以中醫(yī)理論為指導(dǎo)、臨床應(yīng)用為基礎(chǔ)，參考現(xiàn)代提取方法，經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)化工藝制備而成的單味中藥飲片水煎劑，用于標(biāo)準(zhǔn)化臨床用藥，保障用藥的準(zhǔn)確性和劑量的一致性[2-6]。

辛夷來源于木蘭科植物望春花Magnolia?biondii?Pamp.的干燥花蕾[7]。其味辛，性溫，歸肺、胃經(jīng)，具有發(fā)散風(fēng)寒、通鼻竅的功效，主治風(fēng)寒感冒、鼻塞、鼻淵。《本草綱目》記載：“辛夷之辛溫走氣而入肺，能助胃中清陽上行通于天，所以能溫中治頭面目鼻之病?！爆F(xiàn)代藥理研究表明，辛夷有抗炎、抗變態(tài)反應(yīng)、抗病原微生物、抗氧化及舒張平滑肌等作用[8]。辛夷主要有效成分為揮發(fā)油、木脂素類和黃酮類化合物。本研究按2015年版《中華人民共和國藥典》方法提取并測定辛夷中揮發(fā)油的含量，采用超高效液相色譜（UPLC）-二極管陣列檢測器測定指標(biāo)成分木蘭脂素，并建立辛夷飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑的特征圖譜，以期為辛夷標(biāo)準(zhǔn)湯劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究提供參考，并為辛夷配方顆粒的質(zhì)量控制提供依據(jù)。

1??儀器與試藥

安捷倫1290InfinityⅡ型超高效液相色譜儀（美國安捷倫公司，G7167B型自動進(jìn)樣系統(tǒng)，G7166B型柱溫箱，G7117A型DAD檢測器），Welch?Ultimate?XB-C18色譜柱（2.1?mm×100?mm，1.8?μm），XS205型十萬分之一電子分析天平（瑞士，梅特勒-托利多儀器有限公司），KQ5200DE型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司），JA2003型電子天平（上海舜宇恒平科學(xué)儀器有限公司），TG16-WS型臺式高速離心機(jī)（湖南湘儀有限公司），pH計（Mettler?Toledo）。

木蘭脂素（含量≥98%，批號31008-18-1，北京四面體生物科技有限公司）;甲醇、乙腈為色譜純（Fisher），其他試劑為分析純。

本研究收集3個產(chǎn)地共12批辛夷飲片樣品，經(jīng)DNA條形碼鑒定，均為木蘭科望春花Magnolia?biondii?Pamp.的干燥花蕾。樣品信息見表1。

2??方法與結(jié)果

2.1??辛夷飲片木蘭脂素含量測定

按2015年版《中華人民共和國藥典》方法測定12批辛夷飲片中木蘭脂素的含量[9-11]，結(jié)果表明，12批辛夷飲片均符合木蘭脂素不得少于0.40%的限量要求。

2.2??辛夷標(biāo)準(zhǔn)湯劑制備

取辛夷飲片100?g，置于2000?mL圓底燒瓶中，加12倍量水，浸泡30?min，置揮發(fā)油提取器中提取2?h，得揮發(fā)油，提取液趁熱過濾，藥渣再加10倍量水，于揮發(fā)油提取器中繼續(xù)提取30?min，得揮發(fā)油，提取液過濾，合并濾液，濃縮至適量，定容至500?mL;合并揮發(fā)油，加入到濃縮后的濾液中，得0.2?g/mL的辛夷標(biāo)準(zhǔn)湯劑。

2.3??辛夷標(biāo)準(zhǔn)湯劑木蘭脂素含量測定

2.3.1??色譜條件

采用Welch?Ultimate?XB-C18色譜柱（2.1?mm×100?mm，1.8?μm），流動相為水-乙腈-四氫呋喃（59∶40∶1），柱溫30?℃，流速0.4?mL/min，檢測波長278?nm，進(jìn)樣量5??L。色譜圖見圖1。理論塔板數(shù)按木蘭脂素峰計算應(yīng)不低于9000。

2.3.2??對照品溶液制備

取在五氧化二磷減壓干燥器中干燥36?h的木蘭脂素對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1?mL含1.07?mg的溶液，即得。

2.3.3??供試品溶液制備

取辛夷標(biāo)準(zhǔn)湯劑搖勻，精密吸取1?mL，置10?mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，超聲（功率200?W，頻率40?kHz）5?min，12?000?r/min離心5?min，0.22??m濾膜過濾，取續(xù)濾液，即得辛夷標(biāo)準(zhǔn)湯劑供試品溶液。

2.3.4??線性關(guān)系考察

精密吸取“2.3.2”項下木蘭脂素對照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1?mL，分別置于5?mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻。按“2.3.1”項下色譜條件進(jìn)樣，測定木蘭脂素峰面積，以木蘭脂素進(jìn)樣量（?g）為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得回歸方程Y=3887.2X-19.24，r=0.998，表明木蘭脂素線性范圍為0.128?1～0.640?8??g。

2.3.5??精密度試驗

取同一批辛夷標(biāo)準(zhǔn)湯劑供試品溶液，按“2.3.1”項下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，測定并計算木蘭脂素峰面積RSD=0.07%，表明儀器精密度良好。

2.3.6??重復(fù)性試驗

平行制備6份辛夷標(biāo)準(zhǔn)湯劑供試品溶液，按“2.3.1”項下色譜條件進(jìn)樣，結(jié)果標(biāo)準(zhǔn)湯劑中木蘭脂素平均含量為0.92?g/L，RSD=1.18%，表明本方法重復(fù)性良好。

2.3.7??穩(wěn)定性試驗

取辛夷標(biāo)準(zhǔn)湯劑供試品溶液，分別于制備后0、4、8、10、12、24?h，按“2.3.1”項下色譜條件測定，計算木蘭脂素峰面積RSD=0.41%，表明24?h內(nèi)供試品溶液穩(wěn)定性良好

2.3.8??加樣回收率試驗

取已知含量的辛夷標(biāo)準(zhǔn)湯劑（0.80?g/L），根據(jù)其中木蘭脂素含量按約1∶1比例加入木蘭脂素對照品（0.089?3?mg），平行制備6份供試品溶液，按“2.3.1”項下色譜條件進(jìn)行試驗，計算供試品溶液中木蘭脂素平均加樣回收率為101.05%，RSD=3.12%，表明本方法準(zhǔn)確度良好。

2.3.9??樣品測定

精密吸取辛夷標(biāo)準(zhǔn)湯劑供試品溶液5??L，按“2.3.1”項下色譜條件測定，計算木蘭脂素含量。

2.4??辛夷標(biāo)準(zhǔn)湯劑pH值、揮發(fā)油、出膏率、指標(biāo)成分轉(zhuǎn)移率測定

采用pH計測定辛夷標(biāo)準(zhǔn)湯劑的pH值，結(jié)果12批辛夷標(biāo)準(zhǔn)湯劑pH值為5.08～5.68，見表2。

按2015年版《中華人民共和國藥典》揮發(fā)油測定法[9]測定辛夷標(biāo)準(zhǔn)湯劑揮發(fā)油含量，結(jié)果見表2。12批樣品均符合揮發(fā)油含量不得少于1.0?mL/100?g的限量要求。

取辛夷標(biāo)準(zhǔn)湯劑適量，搖勻，精密吸取50?mL置精密吸取10?mL置已恒重的蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，105?℃烘3?h，取出，置干燥器中冷卻30?min，稱定質(zhì)量，計算出膏率。出膏率（%）=（干膏量×標(biāo)準(zhǔn)湯劑體積）÷（取樣體積×飲片量）×100%。結(jié)果12批辛夷標(biāo)準(zhǔn)湯劑出膏率為14.0%～19.7%（見表2），平均出膏率為16.47%。

分別測定辛夷飲片和辛夷標(biāo)準(zhǔn)湯劑中木蘭脂素含量，并計算轉(zhuǎn)移率。轉(zhuǎn)移率（%）=標(biāo)準(zhǔn)湯劑中木蘭脂素含量（mg）÷飲片中木蘭脂素含量（mg）×100%。結(jié)果12批辛夷標(biāo)準(zhǔn)湯劑木蘭脂素轉(zhuǎn)移率為6.61%～36.63%（見表2），平均轉(zhuǎn)移率為17.04%。

2.5??特征指紋圖譜的建立與分析

分別取12批辛夷標(biāo)準(zhǔn)湯劑，按“2.3.3”項下方法制備，按“2.3.1”項下色譜條件測定，記錄UPLC圖，采用國家藥典委員會《中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)（2004A）》軟件進(jìn)行分析。12批樣品圖譜見圖2，辛夷標(biāo)準(zhǔn)湯劑對照特征圖譜見圖3。共確定4個共有峰，12批樣品特征圖譜相似度均大于0.9（見表3），表明各批次辛夷標(biāo)準(zhǔn)湯劑具有較好的一致性。

3??討論

本研究對辛夷標(biāo)準(zhǔn)湯劑的質(zhì)量從以下三方面予以控制：①樣品來自辛夷的主產(chǎn)區(qū)及主要藥材市場，質(zhì)量符合2015年版《中華人民共和國藥典》規(guī)定;②標(biāo)準(zhǔn)湯劑的制備過程遵循統(tǒng)一及標(biāo)準(zhǔn)化操作流程[12];③標(biāo)準(zhǔn)湯劑的質(zhì)量控制采取化學(xué)指紋圖譜、揮發(fā)油含量測定及指標(biāo)成分含量測定相結(jié)合的鑒定模式。對主要共有峰進(jìn)行了成分指認(rèn)，可為辛夷水煎液的制備及質(zhì)量控制提供參照。

本研究以辛夷主要成分木蘭脂素為指標(biāo)，通過測定轉(zhuǎn)移率及出膏率重點(diǎn)考察標(biāo)準(zhǔn)湯劑制備工藝的穩(wěn)定性，通過含量測定主要考察不同批次標(biāo)準(zhǔn)湯劑質(zhì)量的均一性。結(jié)果辛夷標(biāo)準(zhǔn)湯劑的轉(zhuǎn)移率為6.61%～36.63%，不同批次標(biāo)準(zhǔn)湯劑的轉(zhuǎn)移率相差較大。其中轉(zhuǎn)移率較低批次的樣品木蘭脂素含量也較低。分析其原因，部分批次樣品帶花梗，試驗中發(fā)現(xiàn)帶花梗的樣品較等重不帶花梗的樣品木蘭脂素含量低。制備飲片供試品時樣品需要過篩，花梗未能通過藥篩，故所有批次飲片中木蘭脂素含量均符合藥典限量要求。而計算轉(zhuǎn)移率時，帶花梗樣品的木蘭脂素含量偏低，導(dǎo)致轉(zhuǎn)移率范圍較大。測定結(jié)果表明，不同批次辛夷飲片的標(biāo)準(zhǔn)湯劑出膏率較為穩(wěn)定，質(zhì)量均一性較好。

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（收稿日期：2019-03-22）

（修回日期：2019-05-23;編輯：陳靜）