山西特產(chǎn)“泗交綠茶”抗氧化活力評價

李 蕓，姚依林，解 慶*

（1 山西農(nóng)業(yè)大學林學院，山西太谷 030801；2 北京林業(yè)大學林學院）

茶作為世界三大飲料之一，是一種良好的營養(yǎng)保健品，備受世界人民青睞。綠茶是中國主要茶類之一，富含酚類、多糖、茶氨酸等多種天然活性成分[1-4]。人體在正常情況下會不斷地產(chǎn)生自由基，同時還存在自由基清除系統(tǒng)，兩者處于動態(tài)平衡狀態(tài)[5]，過量的自由基產(chǎn)生以及脂質(zhì)過氧化會導致衰老和疾病，將自由基含量維持在一個氧化和抗氧化防御調(diào)節(jié)的最低平衡是目前努力的方向[6-7]。何念武等[8-9]研究了綠茶多糖和抗腫瘤活性研究，張牧等[10]對茶多酚在醫(yī)藥領域進行了研究，Shen 等[11]研究了中國綠茶傳統(tǒng)加工過程中抗氧化物質(zhì)含量及抗氧化活性的變化，這些研究有力地推動了綠茶抗氧化的研究進程。山西省茶樹種植始于2009年，由陳厚民在中條山腹地泗交鎮(zhèn)引種耐寒耐旱的茶種——“泗交綠茶”，該茶已被評為中國優(yōu)秀綠色環(huán)保產(chǎn)品，主要對泗交綠茶的品質(zhì)進行抗氧化活性評價。

選取綠茶名品“漢中仙毫”“日照綠茶”和“信陽毛尖”以及山西特產(chǎn)“泗交綠茶”共4 種茶品，測定其含水率、水浸出物含量以及抗氧化物質(zhì)總酚和黃酮的含量，并采用DPPH 法、ABTS 和FRAP（鐵離子還原能力）法測定抗氧化活性，旨在對山西特產(chǎn)“泗交綠茶”的品質(zhì)進行評價，對今后山西省綠茶品牌的發(fā)展壯大具有重要的指導價值。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

所購4 種茶均為同等價位，其中，漢中仙毫購自陜西鵬翔茶葉有限公司（特級）；日照綠茶購于日照東盛茶葉（特級）；信陽毛尖購于信陽芳香茶廠（特級）；泗交綠茶購于厚民茶場有限公司（一級，無特級）。

1,1-二苯基-2-苦基肼自由基（DPPH），產(chǎn)于東京化成工業(yè)株式會社；2,2-連氮基-雙-（3-乙基苯并二氫噻唑啉-6-磺酸）（ABTS）與福林酚，產(chǎn)于生工生物工程（上海）股份有限公司；沒食子酸標準品、2,4,6-三（2-吡啶基）-1,3,5-三嗪（TPTZ）和6-羥基-2,5,7,8-四甲基-苯并二氫吡喃-2-羧酸（Trolox），購于北京索萊寶科技有限公司；槲皮素，產(chǎn)于上海阿拉丁生化科技股份有限公司；過硫酸鉀、氯化亞鐵、甲醇、無水乙醇、氯化鋁和碳酸鈉，產(chǎn)于國藥集團；Spectra Max i3x型酶標儀，產(chǎn)于奧地利美谷分子儀器有限公司。

1.2 試驗方法

1.2.1 茶含水率測定。此法參照國家標準法并略作改動，分別稱取4 種茶葉試樣m0約為1g（準確至0.001g）置于已洗凈干燥的鋁盒中，稱茶與鋁盒重m1，將其置于103℃恒溫干燥箱4h 后取出放入干燥器中冷卻，稱重，繼續(xù)加熱1h 后冷卻至恒重，得茶和鋁盒重m2。

1.2.2 茶水浸提物測定。參照GB/T 8305-2013《茶水浸出物》[12]測定方法，進行4 種茶葉水浸出物的測定。

1.2.3 茶抗氧化活性測定。①茶醇提取液的制備。稱取適量（約0.5g）不同種類的茶，研磨后通過20 目篩，準確稱取0.25g 粉末，加入50%甲醇溶液，室溫靜置提取1h，再以2000r/min 的速度離心15min，取上清液備用，沉淀中加入10mL 70%丙酮溶液[13]，方法同上，得上清液；將2 次上清液合并，以水定容至25mL 得醇提取液，將其保存于4℃，用于后續(xù)試驗。②總酚含量測定。參考許志誠[14]的測定方法并略作改動，總酚含量測定中，按以下濃度梯度配制沒食子酸標準溶液：6.25μg/mL、12.5μg/mL、25μg/mL、50μg/mL、100μg/mL、150μg/mL。標準曲線以吸光值為橫坐標，沒食子酸含量（μg）為縱坐標，測定時將醇提取液稀釋80 倍，其含量以每克茶葉中沒食子酸當量（μg/g）表示。③總黃酮含量測定。參考隋煥平等[15]的黃酮測定方法并略作改動，槲皮素標準溶液濃度為1.25μg/mL、2.5μg/mL、5μg/mL、10μg/mL、20μg/mL、40μg/mL、80μg/mL、100μg/mL、150μg/mL、200μg/mL。標準曲線以吸光值為橫坐標，槲皮素含量（μg）為縱坐標，其含量以每克茶葉中槲皮素當量（μg/g）表示。④DPPH 自由基清除法。參照許志誠配制DPPH 工作液[14]。標準曲線以吸光值為橫坐標，Trolox 含量（μg）為縱坐標，測定時將4種茶葉提取物稀釋80 倍。最終結(jié)果以μmol/g Trolox含量評價其抗氧化能力。⑤ABTS 自由基清除法。參照隋煥平配制ABTS 工作液[15]。標準曲線同上。⑥鐵離子還原法（FRAP）。根據(jù)三價鐵與TPTZ 在酸性條件下可被茶葉中的還原物質(zhì)還原為二價鐵形式會呈現(xiàn)出明顯的藍紫色，測其593 nm 處吸光值，以計算樣品抗氧化能力的強弱[16]。TPTZ 溶液的配制參照[17]。

1.2.4 數(shù)據(jù)分析。采用IBM SPSS Statistics 24.0 軟件進行數(shù)據(jù)分析，主要是對方差異顯著性和相關性進行分析，以平均值±標準誤差方式表示，試驗數(shù)據(jù)均為3 次重復試驗所得。

2 結(jié)果與分析

2.1 含水率、水浸出物含量

茶葉喜燥怕潮，茶葉含水率的高低直接反映茶葉的干燥特性和加工工藝，含水率較高時容易發(fā)霉變質(zhì)，影響口感甚至威脅人的健康。而水浸出物中含有較多的兒茶素、咖啡堿、維生素等保健物質(zhì)，能夠有效清除體內(nèi)自由基，延緩衰老、抗菌消炎等。

表1 4 種茶葉含水率、水浸出物含量

從表1 可知，4 種茶葉的含水率差異顯著，含水率高低為日照綠茶＞漢中仙毫＞信陽毛尖＞泗交綠茶。其中，日照綠茶的含水率最高，為6.64%±0.13%，泗交綠茶的含水率最低，為3.53%±0.03%，茶葉含水率反映茶葉的干燥特性和加工工藝，對茶葉品質(zhì)有重要影響[18]，可知泗交綠茶的加工工藝高，品質(zhì)較好。

茶水浸出物中，除泗交綠茶外，其他3 種茶葉水浸出物差異不明顯。泗交綠茶水浸出物含量為33.84%±1.96%，相對較低。茶水浸出物中富含茶多酚、茶多糖、咖啡堿等有效保健成分，被浸提出來后能發(fā)揮保健功效[19]，泗交綠茶含有較多的水浸出物，具有良好的保健功效。

2.2 4 種茶葉醇提物總酚、黃酮含量

2.2.1 4 種茶葉醇提物總酚含量。測定總酚含量時，沒食子酸的標準曲線為：y=3.4018x-0.0371，其決定系數(shù)R2=0.0991，標準曲線的相關性較高，線性關系良好，方程可用。

由表2 可知，4 種茶葉醇提物的總酚含量差異較大，信陽毛尖＞日照綠茶＞漢中仙毫＞泗交綠茶。其中，信陽毛尖的總酚含量最高，達到261.97±4.74mg/g沒食子酸；泗交綠茶的總酚含量較低，為210.90±8.46mg/g 沒食子酸，仍具有較高含量的總酚。

表2 4 種茶葉醇提物總酚、黃酮含量的含量比較

2.2.2 4 種茶葉醇提物黃酮含量。測定黃酮含量時，槲皮素的標準曲線為：y=7.2443x-0.3567（R2=0.0991），標準曲線的線性關系良好，方程可用。

由表2 還可看出，4 種茶葉醇提物總黃酮含量泗交綠茶＞日照綠茶＞信陽毛尖＞漢中仙毫。其中，泗交綠茶的黃酮含量最高，達到8.53±0.23 mg/g 槲皮素；漢中仙毫的黃酮含量最低，為5.36±0.28mg/g 槲皮素。由此可知，山西特產(chǎn)“泗交綠茶”含有較高的黃酮。

4 種茶葉中總酚和黃酮含量差異顯著，結(jié)果表明，“泗交綠茶”的總酚和黃酮含量較高?？偡雍忘S酮具有較強的抗氧化活性，可以阻止細胞的退化，尤其是抑制癌癥的發(fā)生[8]。結(jié)果表明，“泗交綠茶”有較強的抗氧化活性。

2.2.3 4 種茶葉醇提物DPPH 法測定自由基清除能力。DPPH 方法中 Trolox 標準曲線方程為：y=-0.0149x+0.0008，其決定系數(shù)R2=0.9997，標準曲線的相關性較高，線性關系良好，方程可用。

從圖1 中可以看出，4 種茶葉醇提物對DPPH 自由基清除能力如下：信陽毛尖＞漢中仙毫＞日照綠茶＞泗交綠茶。其中，信陽毛尖醇提物清除能力最強，為 2682.89 ±53.39 μmol/g Trolox；山西特產(chǎn)“泗交綠茶”清除能力較低，為1819.09±33.83μmol/g Trolox，但泗交綠茶仍有較強的清除能力。

圖1 DPPH 自由基清除能力

2.2.4 4 種茶葉醇提物ABTS 法測定自由基清除能力。ABTS 方法中Trolox 標準曲線方程為：y=-0.0164x-0.0006（R2=0.998），標準曲線的相關性很高，線性關系良好，方程可用。

圖2 ABTS 自由基清除能力

由圖2 可知，4種茶葉醇提物對ABTS 自由基清除能力如下：日照綠茶＞信陽毛尖＞漢中仙毫＞泗交綠茶。其中，日照綠茶醇提物對ABTS自由基清除能力最高，為3086.89±22.96μmol/g Trolox；“泗交綠茶”的清除能力較低，為2637.31±34.11μmol/g Trolox，與漢中仙毫差異不顯著，表明有較強的抗氧化能力。

2.2.5 4 種茶葉醇提物的鐵離子還原能力（FRAP）。FRAP 方法中 Trolox 標準曲線方程為：y=0.0092x-4E-0.5（R2=0.9999），標準曲線的相關性很高，線性關系良好，方程可用。

圖3 FRAP 還原能力

由圖3 可知，4種茶葉提物對鐵離子還原能力強弱如下：日照綠茶＞信陽毛尖＞漢中仙毫＞泗交綠茶。其中，日照綠茶的鐵離子還原能力最強，為1929.44±17.53μmol/g Trolox；“泗交綠茶”的還原能力較弱，為1219.20±33.28μmol/g Trolox，表明其具有較強的還原能力。

2.2.6 相關性分析。不同方法得到的結(jié)果具有不同的統(tǒng)計學相關性，尤其是基于不同的抗氧化機制，應選用不同的評價方法[20]。由表3 可知，總酚含量與DPPH 法和FRAP 法為極顯著正相關，相關系數(shù)為0.793 和0.874，而黃酮與3 種方法均為負相關，表明總酚相比黃酮更能作為茶葉抗氧化的評價依據(jù)。DPPH 法和FRAP 法之間為極顯著正相關，表明2 種抗氧化方法在清除自由基時具有相似的效力。含水率與水浸出物之間為極顯著正相關，而黃酮與含水率、水浸出物之間為極顯著負相關，表明水分與黃酮合成為脅迫作用，同時表明茶在采摘時節(jié)的物質(zhì)含量關系。

表3 4 種茶葉醇提液抗氧化物質(zhì)含量和不同抗氧化方法的相關性

3 討論與結(jié)論

研究表明，適量飲用綠茶有益于身體健康，能夠延緩衰老、抑制癌癥、降壓降脂、抗菌消毒等，抗氧化越來越成為醫(yī)學和食品學科的研究新寵[1-6,8-10]。山西省自2009 年由陳厚民在中條山腹地成功引種茶葉品種后，開始了山西的茶葉品牌研發(fā)，但一直未有相關研究。研究通過比較“泗交綠茶”及綠茶名品漢中仙毫、日照綠茶和信陽毛尖4 種茶葉的抗氧化活性，評價了山西“泗交綠茶”的相關品質(zhì)。

各茶葉中，泗交綠茶的含水率最低，說明該茶加工工藝水平較高，因相關研究表明含水率高低能反映茶葉的干燥特性和加工工藝[18]。通常人們認為茶葉的水浸出物含量越高，則其抗氧化活性越強[19-20]，本研究中泗交綠茶水浸出物含量最低，其抗氧化水平也相對較低，這與前人研究一致。相關性分析結(jié)果顯示，各茶葉的總酚含量與黃酮含量呈顯著的負相關，而與各茶葉的抗氧化能力表現(xiàn)為顯著的正相關，表明多酚含量可作為評價各綠茶抗氧化活性的唯一指標，此研究結(jié)果與Zeng 等的研究結(jié)果相一致[1]。總體而言泗交綠茶具有較高的抗氧化能力，是一種良好的天然抗氧化物質(zhì)，具有廣泛的市場前景。