絨毛訶子對(duì)小鼠毒性的影響

王晨曉，馬貝貝，天 宇，梁耀月，高 陽(yáng)，左澤平，王志斌

（1.北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院，北京 100102；2.北京市藥品檢驗(yàn)所，北京 100035；3.北京中醫(yī)藥大學(xué)北京中醫(yī)藥研究院，北京 100029）

訶子為使君子科植物訶子Terminalia chebulaRetz.或絨毛訶子Terminalia chebulaRetz.var.tomentellaKurt.的干燥成熟果實(shí)［1］，是蒙藥、藏藥等民族藥的常用藥，原產(chǎn)于印度、斯里蘭卡、緬甸，在國(guó)內(nèi)嶺南也有分布，云南為訶子的道地產(chǎn)地，有8 個(gè)變種：絨毛柯子、恒河訶子、檸檬色訶子、馬來(lái)亞訶子、斯里蘭卡訶子、粗毛葉訶子、矮訶子、銀葉訶子［2］。訶子性平和，酸苦澀三味并具，歸肺經(jīng)、大腸經(jīng)，能止咳止瀉、斂肺澀腸、利咽降火等，常用于治療長(zhǎng)咳不止、脫肛便血、喉痛音啞、長(zhǎng)痢久瀉、肺虛咳喘等多種病癥，更是臨床治療失音的良藥，與余甘子、毛訶子組成三果湯散，可單獨(dú)使用，或配伍其他藏藥組成復(fù)方［3］。在蒙醫(yī)藏醫(yī)中，訶子用于治療“龍”病、“赤巴”病、“培根”?。?］，廣泛用于調(diào)和藥性、消除病邪、解毒、生肌長(zhǎng)骨等方面［5］?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究［6］表明，訶子有抗金黃色葡萄球菌、福氏痢疾桿菌，抗真菌，抗氧化，抗誘變作用，還有一定的解痙鎮(zhèn)咳作用，其所含訶黎勒酸、訶子酸等有抗腫瘤和降糖作用，也對(duì)治療阿爾茨海默病有一定療效。

訶子的藥理作用多有研究，但對(duì)毒性方面少有報(bào)道。Prabal Ghosh 等［7］研究了不同溶劑的訶子提取液對(duì)雄激素關(guān)鍵酶（D5、3β-HSD、17β-HSD）與血清睪酮水平的影響，結(jié)果表明，訶子水提液顯著上調(diào)睪丸Bax基因和下調(diào)Bcl-2 基因，導(dǎo)致睪丸活性成分較低，流式細(xì)胞檢測(cè)發(fā)現(xiàn)精子活力明顯降低，表明訶子通過(guò)減少睪丸基因組傳感器并提升可能導(dǎo)致男性避孕的精子凋亡傳感器發(fā)揮避孕作用。研究［8］表明，在重復(fù)劑量28 d 的口服毒性研究中，給予1 000 mg／kg 80%乙醇訶子提取物后，小大鼠食物攝入量和飲水量明顯減少，葡萄糖和AST 水平顯著變化，表明肝腎功能紊亂；在組織病理學(xué)篩查中，口服給藥組在肝臟中顯示出輕微的肉芽腫性炎癥，所有其他器官正常，在28 d后，訶子提取物會(huì)導(dǎo)致肝臟和腎臟功能輕度紊亂。本課題組前期通過(guò)小鼠急性毒性實(shí)驗(yàn)和大鼠亞急毒性實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)訶子靶器官是肝臟，整體動(dòng)物實(shí)驗(yàn)與高內(nèi)涵篩選分析技術(shù)技術(shù)在毒性結(jié)果判斷上有一致性［9］。由于國(guó)外并沒有指出訶子具有明顯的肝毒性和受試動(dòng)物死亡的現(xiàn)象，故相關(guān)是不可或缺的。

1 材料

1.1 動(dòng)物 ICR 小鼠70 只，SPF 級(jí)，雌雄各半，購(gòu)自北京市維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司，飼養(yǎng)于北京市藥檢所藥理毒理室，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)SCXK（京）2016-0011，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào)SYXK（京）2015-0033。

1.2 藥材與試劑 訶子 ［北京同仁堂總店（大柵欄店）］，經(jīng)北京市藥檢所中藥室主任陳友根老師經(jīng)鑒定為絨毛訶子，產(chǎn)地為云南?？辔端幔ㄅ?hào)20180527，天津華特化研科技有限公司）；滅菌注射用水（批號(hào)1809013205，石家莊四藥有限公司）；甲醛（批號(hào)20180606，北京益利精細(xì)化學(xué)品有限公司）；丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶檢測(cè)試劑盒（ALT，批號(hào)180841）、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶檢測(cè)試劑盒（AST，批號(hào)180791）、總蛋白檢測(cè)定試劑盒（TP，批號(hào)180771）、總膽固醇檢測(cè)試劑盒（CHO，批號(hào)181611）、總膽紅素檢測(cè)試劑盒（TBIL，批號(hào)180891）、尿素檢測(cè)試劑盒（Urea，批號(hào)180901）、肌酸激酶檢測(cè)試劑盒（CK，批號(hào)180851）、堿性磷酸酶檢測(cè)試劑盒（ALP，批號(hào)180951）、γ-谷氨?；D(zhuǎn)移酶檢測(cè)試劑盒（GGT，批號(hào)181001）、肌酐檢測(cè)試劑盒（Crea，批號(hào)180671）、白蛋白檢測(cè)試劑盒（ALB，批號(hào)180831）、甘油三醋檢測(cè)試劑盒（TG，批號(hào)180811）、葡萄糖檢測(cè)試劑盒（GLU，批號(hào)180831）均購(gòu)自中生北控生物科技股份有限公司。

1.3 儀器 TE2101-L、BS224S 電子天平［賽多利斯科學(xué)儀器（北京）有限公司］；AU400 生化儀（日本Olympus 光學(xué)株式會(huì)社）；DM3000 光學(xué)顯微鏡、EG1150H 組織包埋機(jī)、RM2245 半自動(dòng)切片機(jī)、Auto Stainer×1 染色、HI1210烤片機(jī)、ASP-200 組織脫水機(jī)、HI1210 攤片機(jī)（德國(guó)Lecia公司）；Multifuge X3 R 高速冷凍離心機(jī)［賽默飛世爾科技（中國(guó)）有限公司］。

2 方法

2.1 訶子水煎液制備 把絨毛訶子去除雜質(zhì)和核，加8 倍量蒸餾水浸泡60 min，用煮藥砂鍋煎煮2 次，合并藥液，濃縮，得2 g／mL 水煎液。使用前，用滅菌注射用水將其配制成組間劑量系數(shù)為0.85 的不同質(zhì)量濃度藥液，T2～T7 組給藥劑量分別為35.7、30.34、25.79、21.92、18.63、15.83 g 生藥／kg，相當(dāng)于人用最大劑量的278、237、201、181、145、123 倍。

2.2 絨毛訶子水煎液半數(shù)致死量測(cè)定 根據(jù)隨機(jī)數(shù)表將70 只ICR 小鼠（雌雄各半）分為7 組，依次為T1～T7 組，T1 組為對(duì)照組，T2～T7 組為“2.1”項(xiàng)下給藥劑量，每組10 只，雌雄各半。所有動(dòng)物均處于SPF 級(jí)屏障系統(tǒng)，溫度控制在（24±2）℃，每天12 h 光照／12 h 暗室，并給予充足的飲用水和標(biāo)準(zhǔn)的顆粒飼料喂養(yǎng)。給藥前禁食12 h，各給藥組小鼠分別一次性灌胃不同濃度的藥液，給藥量為0.1 785 mL／10 g；對(duì)照組小鼠灌胃等體積的滅菌注射用水，給藥后，禁食4 h。

在灌胃給藥后6 h 內(nèi)，認(rèn)真觀察小鼠的生理狀況［飲水情況及其對(duì)外反應(yīng)情況（如瞳孔反應(yīng)）］。在其后6～12 h，每隔2 h 觀察記錄1 次。從給藥后的第2 天開始，每天觀察記錄1 次動(dòng)物的基本狀況，著重于運(yùn)動(dòng)行為（背部是否出現(xiàn)弓起或強(qiáng)直、怪叫、豎尾、腹部抽搐、俯臥還有其自主神經(jīng)活動(dòng)，如豎毛等）及其異常情況（如大小便異常或其他分泌物）。小鼠分別在第0、1、3、5、7、9、11、13、14 天上午9：00 稱定質(zhì)量，仔細(xì)記錄出現(xiàn)異常癥狀小鼠的數(shù)量、癥狀開始時(shí)間、結(jié)束時(shí)間、死亡時(shí)間等。觀察結(jié)束后，所有存活小鼠麻醉，打開腹腔，腹主靜脈取血，全血4 ℃、2 500 r／min 離心15 min，分離血清，測(cè)定生化指標(biāo)，肉眼觀察體內(nèi)臟器病變情況。觀察結(jié)束后，迅速取出肝臟與腎臟，于預(yù)冷的生理鹽水中漂洗數(shù)次，稱定質(zhì)量，取肝臟大葉中部、腎臟，10%中性福爾馬林溶液固定。

2.3 絨毛訶子蓄積毒性實(shí)驗(yàn) 采用20 d 定期遞增劑量法評(píng)價(jià)絨毛訶子水煎液的蓄積毒性作用。取ICR 小鼠60 只（雌雄各半），對(duì)照組20 只，給藥組40 只。對(duì)照組以灌服滅菌注射用水組為陰性對(duì)照；給藥組小鼠每天灌胃絨毛訶子水煎液，第一階段的的劑量為0.1LD50，第二階段的劑量為0.15 LD50，4 d 為一階段，以此類推。連續(xù)灌胃20 d 后終止實(shí)驗(yàn)，計(jì)算蓄積系數(shù)，實(shí)驗(yàn)期間觀察給藥小鼠的一般狀況并記錄體質(zhì)量（“2.2”項(xiàng)下觀察一樣），灌胃劑量如表1 所示。

表1 蓄積毒性遞增劑量法染毒方案（g／kg）

2.4 小鼠生化指標(biāo)檢測(cè) 急性毒性觀察14 d，蓄積毒性在20 d 末次給藥后，禁食不禁水12 h，處死存活小鼠，進(jìn)行腹主靜脈取血，全血4 ℃、2 500 r／min 離心15 min，分離血清，進(jìn)行相關(guān)生化檢測(cè)。反映膽汁淤積的主要指標(biāo)有ALP、GGT，反映肝臟受損的主要指標(biāo)有AST、ALT，反映肝臟膽排泄、分泌及解毒功能的主要指標(biāo)有TBIL。

2.5 小鼠體質(zhì)量、肝臟指數(shù)計(jì)算 在急性毒性實(shí)驗(yàn)中，每日觀察存活小鼠情況，并隔日稱定體質(zhì)量。觀察期結(jié)束時(shí)并取血結(jié)束后，摘取小鼠肝、腎精密稱定質(zhì)量，計(jì)算其臟器指數(shù)。在蓄積毒性實(shí)驗(yàn)中，每日同樣時(shí)間對(duì)小鼠稱定體質(zhì)量并觀察現(xiàn)象，20 d 實(shí)驗(yàn)結(jié)束后禁食12 h，取其心、肝、脾、腎、肺等重要臟器，計(jì)算各臟器指數(shù)。

2.6 病理切片觀察 實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，肉眼觀察體內(nèi)臟器病變情況。觀察結(jié)束后迅速摘取小鼠心、肝、脾、肺、腎，于預(yù)冷的生理鹽水中漂洗數(shù)次，并稱定質(zhì)量，將主要臟器用10%中性福爾馬林溶液固定，制作病理切片，而后常規(guī)修整蠟塊、脫水至透明、浸蠟、包埋、切片并進(jìn)行HE 染色，在顯微鏡下觀察病理組織變化。

2.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 使用SASS9.4 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，數(shù)據(jù)以（±s）表示，組間比較采用單因素方差分析。以P＜0.05 表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 急性毒性實(shí)驗(yàn)

3.1.1 急性毒性癥狀和體質(zhì)量變化 口服給藥后6 h 內(nèi)，高劑量組（T2、T3 組）小鼠活動(dòng)減少、安靜、背毛凌亂、扎堆抱團(tuán)，至給藥后12 h，出現(xiàn)呆臥少動(dòng)，腹瀉、水樣下痢，未出現(xiàn)死亡現(xiàn)象。小鼠初步出現(xiàn)死亡現(xiàn)象的時(shí)間在12～24 h 內(nèi)，集中死亡現(xiàn)象的時(shí)間在24～72 h 內(nèi)，3 d 后無(wú)死亡。死亡前，小鼠會(huì)出現(xiàn)走路不穩(wěn)、昏睡、呼吸衰竭、正向反射消失、嘴角有明顯分泌物，死象掙扎，未見其他異常癥狀。對(duì)其及時(shí)剖檢，觀察其臟器的顏色、外形、質(zhì)地等情況，發(fā)現(xiàn)死亡小鼠肝臟與正常小鼠肝臟比較，顏色有明顯變化，其他臟器未見異常。

存活實(shí)驗(yàn)小鼠與對(duì)照組相比，體質(zhì)量增長(zhǎng)緩慢。給藥組小鼠在灌胃24 h 后，體質(zhì)量減輕，T2、T3、T4、T5、T6、T7 組的小鼠出現(xiàn)了負(fù)增長(zhǎng)。見圖1。

圖1 絨毛訶子水煎液對(duì)小鼠體質(zhì)量的影響

3.1.2 LD50各劑量組小鼠出現(xiàn)死亡的時(shí)間隨劑量減少而后移，見表2、圖2。絨毛訶子按生藥量計(jì)算，其LD100為30.34 g／kg，相當(dāng)于人常用劑量的237 倍（《中國(guó)藥典》 規(guī)定訶子臨床劑量是3～9 g，對(duì)于70 kg 成人，臨床上每日可用的最大劑量是0.128 g 生藥），其LD50為18.926 g 生藥／kg，LD50（Feiller 校正）95%的可信限為17.026～20.62 g生藥／kg，為人最大日用量的147.8 倍。

3.1.3 血清生化指標(biāo) 如表3 所示，與對(duì)照組比較，給藥組小鼠血清ALT、AST、TP、ALB、GLO、A／G、TBIL、TG、GLU、ALP 水平上升（P＜0.05，P＜0.01），Crea、CK 水平下降（P＜0.01）。

3.1.4 肝腎臟器指數(shù) 各組小鼠主要臟器心、脾、肺和腎均未見病變等異常，而肝臟有明顯顏色變化。與對(duì)照組對(duì)比，T6 組肝、腎臟器指數(shù)有差異（P＜0.01），T7 組肝、腎臟器指數(shù)無(wú)差異（P＞0.05），見表4。

3.1.5 肝腎臟器病理切片 在光鏡下，對(duì)照組小鼠肝細(xì)胞完整、排列規(guī)則、肝竇未見明顯淤血擴(kuò)張；實(shí)驗(yàn)組小鼠出現(xiàn)了明顯的肝細(xì)胞腫脹，細(xì)胞核增大，胞漿疏松淡染，吞噬了色素的枯否氏細(xì)胞，多見于中央靜脈周圍，有1 例出現(xiàn)了肝細(xì)胞壞死現(xiàn)象。與對(duì)照組相比，給藥組小鼠有3 只腎臟病變嚴(yán)重，表現(xiàn)為腎小管的局灶性病變、腎小管上皮細(xì)胞數(shù)量增加、細(xì)胞核大小不等、淡然胞漿較少嗜堿性，病灶內(nèi)還可見顆粒管型，透明管型和腎小管囊性擴(kuò)張等病變。見圖3。

表2 小鼠灌胃絨毛訶子水煎液后不同時(shí)間的死亡數(shù)

圖2 絨毛訶子不同劑量組小鼠累積死亡數(shù)—時(shí)間曲線

3.2 蓄積毒性

3.2.1 臨床表現(xiàn) 小鼠在給藥后第1 階段，飲食、進(jìn)水、小大便皮毛狀況、日?；顒?dòng)表現(xiàn)、體質(zhì)量增長(zhǎng)正常。在給藥后的第2、3 階段，小鼠背毛凌亂，腹瀉，呆臥少動(dòng)，體質(zhì)量增長(zhǎng)緩慢，未出現(xiàn)死亡。在給藥后第4 階段，小鼠出現(xiàn)死亡，腹部出現(xiàn)輕微鼓脹現(xiàn)象，進(jìn)食量減少，活動(dòng)減少，給藥組雄性小鼠體質(zhì)量出現(xiàn)了負(fù)增長(zhǎng)。在給藥后第5 階段，小鼠腹脹情況加重，進(jìn)食量減少，精神萎靡，反應(yīng)遲鈍，給藥組小鼠體質(zhì)量與第2 階段相比無(wú)差異。見圖4。

表3 絨毛訶子水煎液處理14 d 后對(duì)小鼠血清生化指標(biāo)的影響（±s）

表3 絨毛訶子水煎液處理14 d 后對(duì)小鼠血清生化指標(biāo)的影響（±s）

注：與對(duì)照組比較，?P＜0.05，??P ＜0.01。

表4 絨毛訶子水煎液對(duì)小鼠肝腎臟器指數(shù)的影響（±s）

表4 絨毛訶子水煎液對(duì)小鼠肝腎臟器指數(shù)的影響（±s）

注：與對(duì)照組比較，?P＜0.05，??P ＜0.01。

圖3 小鼠肝腎器官組織學(xué)形態(tài)

圖4 絨毛訶子水煎液對(duì)大鼠蓄積毒性體質(zhì)量的影響

蓄積毒性死亡情況見表5，總計(jì)死亡10 只，K＝LD50（n）／LD50（1），LD50（n）為每只動(dòng)物共攝入受試物相當(dāng)?shù)腖D50數(shù)，LD50（1）為受試物的經(jīng)口LD50。20 d 連續(xù)給藥后，給藥劑量已達(dá)到5.26 LD50，死亡數(shù)未過(guò)半，此時(shí)蓄積系數(shù)K＞5，按蓄積毒性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)［10］，K＜1，高度蓄積；1≤K＜3，明顯蓄積；3≤K＜5，中等蓄積；K≥5，輕度蓄積。由此可知，絨毛訶子為輕度蓄積。

表5 蓄積毒性實(shí)驗(yàn)大鼠死亡情況

3.2.2 臟器指數(shù) 各組小鼠主要臟器心、脾、肺和腎均未見病變等異常，肝臟呈現(xiàn)灰黃色，表面不光滑，有明顯的顏色變化。腹脹小鼠經(jīng)解剖后發(fā)現(xiàn)，腸道和胃里有大量氣體。與對(duì)照組比較，雄性給藥組心、肝、肺臟器指數(shù)增加（P＜0.05，P＜0.01），雌性給藥組肝臟指數(shù)增加（P＜0.01）。見表6。

3.2.3 血清生化指標(biāo) 與對(duì)照組比較，給藥組小鼠血清ALT、AST、TP、ALB、GLO、A／G、CK 水平升高，TBIL、Urea 水平降低（P＜0.05，P＜0.01）。見表7。

3.2.4 肝腎臟器病理切片 在16 只雄性小鼠中，2 只出現(xiàn)肝壞死，表現(xiàn)為肝細(xì)胞腫脹，胞漿稀薄、淡然，細(xì)胞核仁大，染色質(zhì)聚集；1 例有小壞死灶；4 例出現(xiàn)腎小管局灶性病變，表現(xiàn)為腎小管上皮細(xì)胞數(shù)量增加、細(xì)胞核大小不等、淡然胞漿較少嗜堿性。對(duì)照組肺細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整；給藥組肺泡結(jié)構(gòu)破壞，被炎細(xì)胞浸潤(rùn)，有肉芽腫性炎癥；2 組心、脾均未見明顯異常。

表6 絨毛訶子蓄積毒性實(shí)驗(yàn)大鼠臟器指數(shù)（±s）

表6 絨毛訶子蓄積毒性實(shí)驗(yàn)大鼠臟器指數(shù)（±s）

注：與對(duì)照組比較，?P＜0.05，??P＜0.01。

表7 絨毛訶子蓄積毒性生化指標(biāo)（±s）

表7 絨毛訶子蓄積毒性生化指標(biāo)（±s）

注：與對(duì)照組比較，?P＜0.05，??P＜0.01。

4 討論

訶子在《中國(guó)藥典》 中有2 個(gè)基源，一個(gè)是使君子科植物訶子，另一個(gè)是絨毛訶子，經(jīng)過(guò)河北安國(guó)實(shí)地調(diào)查和在北京各藥房采購(gòu)調(diào)研發(fā)現(xiàn)，有些藥商賣出藥材標(biāo)明為使君子科訶子，但經(jīng)專家鑒定后為訶子的其他變種，例如恒河訶子和大訶子。課題組前期已經(jīng)對(duì)使君子科訶子做了毒性靶器官的探討，但查詢國(guó)內(nèi)外相關(guān)文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)，鮮有對(duì)絨毛訶子的相關(guān)研究。

圖5 蓄積毒性小鼠器官組織學(xué)形態(tài)

本實(shí)驗(yàn)用14 d 急性毒性和20 d 蓄積毒性實(shí)驗(yàn)相結(jié)合的方法來(lái)探討絨毛訶子的毒性，為合理用藥提供參考。通過(guò)急性毒性實(shí)驗(yàn)，確定絨毛訶子LD50為18.926 g 生藥／kg，是70 kg 人最大日用量的147.8 倍；給藥劑量為人常用劑量的145 倍時(shí)，其肝臟、腎臟指數(shù)與對(duì)照組相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，結(jié)合血清生化指標(biāo)，ALT、AST、TP、ALB、GLO、A／G、TBIL、Crea、CK、TG 水平與對(duì)照組相比也有顯著差異，表明小鼠肝臟和腎小管都出現(xiàn)了不同程度的損傷，推測(cè)絨毛訶子的急性毒性靶器官可能是肝臟和腎臟。

20 d 蓄積毒性實(shí)驗(yàn)是在一定期限內(nèi)，以低于致死劑量的標(biāo)準(zhǔn)確定給藥劑量后每日染毒，以此判斷藥物毒性在代謝過(guò)程中是否有蓄積現(xiàn)象。絨毛訶子在蓄積毒性中，其蓄積系數(shù)為K＞5，為輕度蓄積，同時(shí)小鼠體質(zhì)量增長(zhǎng)緩慢。在前3 個(gè)階段時(shí)，給藥組小鼠與正常組相比，日常表現(xiàn)都正常；在第4、5 階段，給藥組小鼠活動(dòng)遲緩、背毛凌亂、腹瀉、腹?jié)q、呆臥不動(dòng)現(xiàn)象明顯。通過(guò)觀察蓄積毒性靶器官，雄性給藥小鼠與對(duì)照組小鼠相比心肺、肝臟指數(shù)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，推測(cè)給藥過(guò)程中小鼠有脹氣、進(jìn)食不順、心肺供應(yīng)消耗不足，造成萎縮；雌性給藥小鼠與對(duì)照組比較，肝臟指數(shù)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)合生化指標(biāo)和病理切片的結(jié)果來(lái)推測(cè)，絨毛訶子蓄積毒性的靶器官不如急性毒性明確，蓄積毒性不高，可能與小鼠的日常代謝有關(guān)，由于多次反復(fù)給藥過(guò)程中毒性物質(zhì)可能在體內(nèi)有一定的降解，故一次性給藥和多次反復(fù)給藥的主要毒性靶器官可能有所不同。

訶子中的主要成分為鞣質(zhì)類及酚酸類，包括沒食子酸、沒食子酰葡萄糖等。研究［11］發(fā)現(xiàn)，何首烏中沒食子酸對(duì)肝細(xì)胞具有損傷作用，可能為何首烏致肝損傷的主要成分；吳宇等［12］采用細(xì)胞毒性篩選、高內(nèi)涵技術(shù)探索沒食子酸對(duì)HepaRG 肝細(xì)胞損傷的機(jī)理，它可有劑量依賴性地誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，并通過(guò)分子生物學(xué)技術(shù)篩選出11 個(gè)差異蛋白，集中在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的功能蛋白折疊加工方面。但訶子致肝毒性的物質(zhì)基礎(chǔ)及其作用機(jī)制尚不明確，需要作進(jìn)一步的研究。