紫景天黃酮對實驗性牙周炎大鼠血清中IL-6、IL-18表達的影響

王歡歡,劉 新*,孔晨飛,王 偉，張殿文

(1.吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院 a.口腔科;b.科研中心,吉林 長春130033；2.吉林省中醫(yī)藥科學(xué)院)

牙周炎是發(fā)生在牙周組織的慢性炎癥疾病，病因常為菌斑等多種因素，常出現(xiàn)如深牙周袋、牙槽骨破壞等臨床表現(xiàn)，長期發(fā)展會造成牙松動、失牙，對人們的心理生理具有極大的影響[1]。IL-6是一種生物功能十分復(fù)雜的炎性因子，其來源廣泛，可作用于機體各種靶細胞[2]，牙周炎時，IL-6促進成骨細胞產(chǎn)生破骨細胞分化因子從而加速破骨細胞增殖，使牙槽骨破壞加重；此外IL-6還可作用于牙周膜細胞，降低牙周膜修復(fù)與再生能力，致使牙周組織發(fā)生病理改變[3]。IL-18屬IL-1細胞因子家族，由單核/巨噬、Th1細胞等分泌,可造成牙周的炎性損傷[4]。本實驗采用ELISA法檢測牙周炎大鼠紫景天黃酮治療前后血清內(nèi)IL-6、IL-18的水平，報道如下。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

28只6-8周的SPF級Wistar大鼠(吉林大學(xué)動物實驗研究所)，每只體重180-220g，雌、雄大鼠分籠常規(guī)喂養(yǎng)、飲水2周。

1.2 實驗試劑、儀器

ELISA試劑盒(RnD)，牙齦卟啉單胞菌(吉林大學(xué)病原生物學(xué)系提供)，1%濃度紫景天黃酮凝膠(吉林省中醫(yī)藥科學(xué)院提供)，磨牙機(吉林大學(xué)口腔醫(yī)學(xué)院提供)，多功能酶標儀(加拿大BioTek公司)

1.3 大鼠牙周炎模型建立與分組

2周后，從所有大鼠中隨機取出8只健康大鼠作為正常對照組，不作特殊處理，繼續(xù)正常喂養(yǎng)、飲水。剩余20只大鼠按參考文獻[5]采用帶牙齦卟啉單胞菌的絲線結(jié)扎并將其包埋于大鼠后磨牙牙頸部的齦溝內(nèi)，可降低其脫落率，加強局部持續(xù)刺激。4周后，有兩只大鼠因絲線結(jié)扎脫落而被淘汰，剩余大鼠隨機處死兩只做病理學(xué)觀察，鏡下可見牙齦中炎細胞彌漫浸潤，出現(xiàn)微小膿腫；可見深牙周袋形成；骨小梁結(jié)構(gòu)紊亂，牙槽嵴頂出現(xiàn)破壞。臨床可見牙頸部菌斑堆積，牙齦色鮮紅、質(zhì)脆、出血，牙周袋膿液溢出，出現(xiàn)重度牙周炎癥狀，證明大鼠牙周炎模型建立成功。將建模完成的16只牙周炎大鼠隨機分成模型對照組(n=8)和治療組(n=8)。治療組大鼠牙周袋內(nèi)注入1%紫景天黃酮凝膠劑，每日兩次，每次0.5 ml,連續(xù)上藥2周。

1.4 血清樣本采集

在三組大鼠腹部注射100 g/L水合氯醛(0.3%/kg)的麻醉劑，腹主動脈取血5 ml置于真空采血管中，分離上層血清,于-80℃冰箱中凍存。

1.5 大鼠血清IL-6、IL-18的表達量檢測

取各組凍存的血清樣本，按ELISA試劑盒操作步驟檢測IL-6、IL-18在血清中的表達量，將反應(yīng)板置于掃描儀中測得光密度值(OD值)。

1.6 統(tǒng)計學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 血清中IL-6的表達水平

由圖1結(jié)果可見，模型組大鼠IL-6為147.02±12.87 pg/ml顯著高于未做任何處理的正常組的表達量100.46±11.26 pg/ml(P<0.01)；與模型組相比，治療組大鼠使用紫景天黃酮凝膠牙周袋內(nèi)用藥一段時間后IL-6的表達量為101.93±10.11 pg/ml(P<0.01)，有明顯降低。

2.2 血清中IL-18的表達水平

由圖2結(jié)果可見，正常組與模型組大鼠血清中IL-18表達量分別為93.23±28.56 pg/ml和190.74±19.74 pg/ml，模型組其表達量增高明顯(P<0.05)；與模型組相比，治療組IL-18表達量為103.34±10.83 pg/ml，表明紫景天黃酮凝膠具有明顯的治療作用，可降低牙周炎大鼠血清中IL-18的表達(P<0.05)。

圖1 紫景天黃酮凝膠對大鼠血清中IL-6表達量的影響

圖2 紫景天黃酮凝膠對大鼠血清中IL-18表達量的影響

3 討論

牙周炎是我們在臨床上常見的慢性感染性疾病，嚴重時可造成牙齒的松動、移位甚至脫落，其不僅可造成局部牙周組織破壞[6]，并且有研究報道牙周炎時局部分泌的一些炎性介質(zhì)可經(jīng)血液等途徑引起內(nèi)分泌、呼吸、心腦血管等機體各系統(tǒng)疾病，具有嚴重危害[7-9]。IL-6、IL-18通過機體組織與免疫細胞之間的相互作用來調(diào)節(jié)牙周組織的病理生理過程。IL-6是一種具有多種生物學(xué)活性的炎癥因子，可調(diào)節(jié)宿主對細菌微生物感染的反應(yīng)[10]。IL-6還可誘導(dǎo)多種炎性介質(zhì)的產(chǎn)生如基質(zhì)金屬蛋白酶-1、組織蛋白酶L等，加重牙周病變[11]。據(jù)文獻[12]報道，牙周病時，機體免疫應(yīng)答的核心是維持Th1/Th2的相對穩(wěn)定，IL-18通過干預(yù)Th1和Th2分化，破壞其平衡狀態(tài)，從而使牙周組織發(fā)生破壞，加速牙周病進展。牙周炎的治療一直是國內(nèi)外醫(yī)學(xué)研究的熱點，目前牙周炎的治療主要為牙周袋內(nèi)局部用藥，即將藥物放置在牙周袋內(nèi)[13]，其優(yōu)點在于袋內(nèi)含量明顯高于最小抑制濃度(MIC)，并可緩慢作用，維持時間較長。臨床上常用的牙周炎局部治療藥物有抗生素類、免疫調(diào)節(jié)劑類、中藥制劑等[14]，抗生素類藥物長期使用易產(chǎn)生耐藥性且毒性作用較大[15]。紫景天是生長在長白山的一種野生植物，具有消炎止痛、收斂止血、調(diào)節(jié)機體的免疫功能、恢復(fù)蛋白質(zhì)代謝障礙的功效，其中所含的黃酮類元素如山柰素有較好的抑菌作用[16，17]。用其制成的紫景天黃酮凝膠為純中藥制劑，對機體毒性作用小，刺激性小，可抑制細胞分泌IL-6、IL-18等介質(zhì)，對牙周炎有較好的治療效果[18,19]。

本實驗應(yīng)用紫景天黃酮凝膠劑可明顯抑制牙周炎大鼠血清中IL-6、IL-18的表達，并且可調(diào)節(jié)大鼠體內(nèi)的免疫反應(yīng)，促使牙周病變恢復(fù)到正常，但牙周炎為多因子參與并相互作用而發(fā)生的，其余致炎、抑炎因子對牙周病的影響有待后期進行研究。