茶多酚對(duì)牙齒的著色效果觀察

金晨曦 陳偉亮 陳肖伊 沈振宇 鄭沛

茶多酚又名茶單寧、茶鞣質(zhì)，是一類存在于茶葉中的多羥基酚性化合物，包括兒茶素、黃酮醇、酚酸和縮酚酸類以及其他多酚類。茶多酚具有抗氧化、抗腫瘤、抗動(dòng)脈粥樣硬化、抗齲護(hù)齒、抑菌等多種藥理作用，逐漸被應(yīng)用于口腔疾病的防治[1]。例如，茶多酚與維生素C聯(lián)合應(yīng)用可治療口源性口臭；根管充填材料加入茶多酚能抑制白色念珠菌生物膜的生成；茶多酚可作為治療慢性牙周炎的輔助用藥等。飲茶雖然有益健康，但是茶湯中的茶色素易沉積于牙齒的表面，引起牙外源性著色，進(jìn)而影響牙面的美觀，影響患者的社交和心理。那么，茶多酚應(yīng)用于牙科領(lǐng)域是否會(huì)引起牙齒染色這一隱患，目前似乎并沒有明確的結(jié)論。本研究利用影像證據(jù)來確定牙齒表面顏色變化情況，以研究茶多酚是否存在染色牙齒的能力，探討其應(yīng)用于牙科領(lǐng)域的可行性，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 牙齒準(zhǔn)備 選取新鮮拔除的牛切牙24顆，牙冠釉質(zhì)面平均長(zhǎng)寬比為2.5。每顆牙的唇面釉質(zhì)使用2 000目砂紙、金相試樣磨拋機(jī)（中國(guó)蔚儀公司，型號(hào)：M-1）拋光處理；使用體式顯微鏡（中國(guó)速邁公司，型號(hào)：OMS2350）觀察，確保牙表面平整，對(duì)光反射均勻，避免過度拋光而使牙本質(zhì)暴露。牙齒準(zhǔn)備好后于0.9%氯化鈉溶液中浸泡保存。

1.1.2 溶液配制 茶多酚溶液：用茶葉濃縮粉（杭州怡倍嘉茶業(yè)科技有限公司，茶多酚含量為98.37%）與純凈水分別配制濃度為1、2.5、5和7.5mg·ml-1的茶多酚溶液，配置過程中避免發(fā)生氧化反應(yīng)。溶液配置前充分清洗實(shí)驗(yàn)器皿達(dá)到洗滌標(biāo)準(zhǔn)，配置過程在較暗環(huán)境中進(jìn)行，輕揉攪拌，盡量縮短配置時(shí)間，得到澄清透明溶液后倒入廣口瓶中避光保存于4℃冰箱中。

1.2 方法

1.2.1 分組、切牙與浸泡 將牙齒分為A、B、C、D 4組，每組 6顆，準(zhǔn)備分別浸泡于 1、2.5、5和 7.5mg·ml-1的茶多酚實(shí)驗(yàn)溶液中。每顆牙以英文字母+數(shù)字的方式命名，如A1表示浸泡于1mg·ml-1茶多酚溶液的第1顆牙，C2表示浸泡于5mg·ml-1茶多酚溶液的第2顆牙。用硬組織切片機(jī)（美國(guó)標(biāo)樂公司，型號(hào)：IsoMet）將每顆牙縱向切為兩半，切面使用自酸蝕粘接劑（美國(guó)登士柏公司，型號(hào)：XENO-V Plus）進(jìn)行牙本質(zhì)封閉。左半部分為實(shí)驗(yàn)側(cè)，浸泡于實(shí)驗(yàn)溶液中，右半部分為對(duì)照側(cè)，浸泡于純凈水中（水溫均為37℃恒溫）。組別標(biāo)記見圖1。

圖1 組別標(biāo)記圖

1.2.2 顏色變化記錄 實(shí)驗(yàn)過程中，在保留表面水分即避免脫水的前提下，每隔30min取出牙齒并在30s之內(nèi)拍攝照片1次，共8次。采用閃光燈作為照明光源，雙側(cè)45°對(duì)稱照明。拍攝環(huán)境由黑色亞克力板和黑色絨布組合，實(shí)現(xiàn)拍攝環(huán)境的最低反射干擾。使用照相機(jī)（日本佳能公司，型號(hào)：700D）的原始格式及標(biāo)準(zhǔn)灰卡校準(zhǔn)，共同確保影像的采集和還原結(jié)果的一致性。拍照時(shí)將同一顆牙齒的左右兩半合并同時(shí)拍攝，以方便軟件對(duì)照分析。

1.2.3 顏色對(duì)比分析 本研究采用口腔醫(yī)學(xué)最常用的國(guó)際照明委員會(huì)1976 L*a*b*標(biāo)準(zhǔn)色度系統(tǒng)。其中L*代表明度，a*表示紅綠色相，b*表示黃藍(lán)色相。色差ΔE*ab=（[ΔL*）2+（Δa*）2+（Δb*）2]1/2。色差ΔE*ab是用數(shù)量來描述的兩種顏色之間的差別，ΔE*ab值越大表明顏色的差異越明顯。本研究以色差值ΔE*ab＞2.3視為肉眼可見的顏色差異，反之則無顏色差異。

1.3 觀察指標(biāo) （1）肉眼觀察牙齒浸泡后顏色的變化；（2）觀察并比較A、B、C、D組牙齒浸泡后左右兩側(cè)色差；（3）分析牙齒著色程度與茶多酚浸泡時(shí)間的相關(guān)性；（4）分析牙齒著色程度與茶多酚溶液濃度的相關(guān)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料以表示，組內(nèi)比較采用重復(fù)測(cè)量數(shù)據(jù)的方差分析，組間比較采用單因素分析方差分析，兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)。相關(guān)性分析采用Spearman秩相關(guān)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 牙齒顏色變化的肉眼觀察 從各組選擇有代表性的牙齒照片見圖2（插頁(yè)）。

圖2 各組牙齒顏色變化的肉眼觀察可見

由圖2可見，A、B、C、D組牙齒左側(cè)對(duì)比右側(cè)，均出現(xiàn)了肉眼可見的釉質(zhì)著色。

2.2 4 組牙齒浸泡后左右兩側(cè)色差比較 見表1。

由表1可見，組內(nèi)比較，A、B、C、D組牙齒不同浸泡時(shí)間左右兩側(cè)色差比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05）。隨著浸泡時(shí)間的延長(zhǎng)，A、B組牙齒左右兩側(cè)在第3次拍攝時(shí)出現(xiàn)肉眼可見的色差，C、D組牙齒左右兩側(cè)分別在第2、1次拍攝時(shí)出現(xiàn)肉眼可見的色差。組間比較，各時(shí)間點(diǎn)4組牙齒浸泡后左右兩側(cè)色差比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05）。

2.3 A、B、C、D組牙齒著色程度與茶多酚浸泡時(shí)間的相關(guān)性分析 A、B、D組牙齒著色程度與茶多酚浸泡時(shí)間呈正相關(guān)（r=0.684、0.742、0.783，均 P＜0.05），即浸泡時(shí)間越長(zhǎng)，著色越深。但C組牙齒著色程度與茶多酚浸泡時(shí)間無相關(guān)性（r=0.314，P＞0.05）。

2.4 不同浸泡時(shí)間下牙齒著色程度與茶多酚溶液濃度的相關(guān)性分析 浸泡于不同濃度茶多酚溶液的A、B、C、D 組牙齒，除第 4、7 次（r=0.216、0.195）外，其余每次（r=0.895、0.873、0.882、0.583、0.748、0.875）的牙齒著色程度與茶多酚溶液濃度均呈正相關(guān)（均P＜0.05），即濃度越高，牙齒著色程度越深。

表1 4組牙齒浸泡后左右兩側(cè)色差比較（ΔE*ab）

3 討論

天然牛牙的釉質(zhì)在組成、粗糙度、表面親疏水性以及表面剪切力等方面與人牙非常接近，有學(xué)者曾通過附著力和口腔潤(rùn)滑測(cè)試證明，發(fā)育成熟的天然牛牙釉質(zhì)和人牙釉質(zhì)的理化性質(zhì)非常相似[2]。首先，兩者有非常相似的晶體排列方向，并且釉質(zhì)基質(zhì)蛋白的氨基酸組合物也非常相似；其次，兩者鈣含量也非常接近，天然人牙釉質(zhì)鈣含量為37.9，天然牛牙釉質(zhì)鈣含量為36.8，從表面向釉牙本質(zhì)界逐漸減少，并且天然牛牙的釉質(zhì)厚度是天然人牙的1.7倍（63nm：36nm），唇側(cè)表面積大，被認(rèn)為是天然人牙建模的理想替代品[3]。因此，本研究選擇天然牛牙釉質(zhì)建模。

李鳴宇等[4]曾采用體外實(shí)驗(yàn)的方法比較了茶多酚對(duì)口腔主要致病菌的抑制作用，結(jié)果發(fā)現(xiàn)茶多酚溶液對(duì)變形鏈球菌的最低抑菌濃度為2.5mg/ml。本研究設(shè)計(jì)的4種濃度的茶多酚溶液是根據(jù)其最小抑菌濃度而制定的。本研究結(jié)果顯示，A、B、C、D組均出現(xiàn)肉眼可見的色差，且牙齒著色程度隨溶液濃度的增加而加深，這說明茶多酚溶液對(duì)牙齒的結(jié)構(gòu)產(chǎn)生了影響；其次，A、B、D組牙齒著色程度與茶多酚浸泡時(shí)間呈正相關(guān)，即著色程度隨浸泡時(shí)間的增加而加深，C組牙齒著色程度與茶多酚浸泡時(shí)間無相關(guān)性，這說明茶多酚導(dǎo)致牙外源性著色的程度存在差異，但這種差異目前還沒有明確的原因，需進(jìn)一步探究。

馬夢(mèng)君等[5]曾從色差、透光率、pH值等方面探討質(zhì)量濃度和溫度對(duì)茶多酚水溶液穩(wěn)定性的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)不同質(zhì)量濃度的茶多酚溶液穩(wěn)定性差異都較大，且質(zhì)量濃度低的茶多酚溶液較穩(wěn)定。因此，在臨床應(yīng)用時(shí)仍應(yīng)選擇適宜濃度的茶多酚溶液來治療口腔疾病，如配制茶多酚漱口液時(shí)要選取適量的茶多酚粉末，濃度過高、在口腔中停留時(shí)間較長(zhǎng)均有可能不會(huì)抑制或減少牙菌斑的數(shù)量及其在牙面上的黏附，反而導(dǎo)致牙齒著色。長(zhǎng)期飲濃茶的人最好在飲完后及時(shí)用清水漱口，避免多酚類氧化物附著在牙間縫隙和其他隱蔽部位，造成著色。根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，建議使用低濃度的茶多酚溶液避免牙齒著色。

綜上所述，本研究結(jié)果顯示茶多酚可能會(huì)使牙齒著色，且與其濃度、浸泡時(shí)間有一定相關(guān)性。