訶子鞣質(zhì)與一線(xiàn)二線(xiàn)抗結(jié)核藥物聯(lián)合對(duì)耐藥性結(jié)核分枝桿菌活性研究

宋青山 賈芳

[摘? ? ? ? ? ?要]? 從臨床分離得到439株MDR菌株，得到38株XDR菌株。訶子鞣質(zhì)對(duì)敏感株的抑菌濃度為50μg/mL～100μg/mL， 訶子鞣質(zhì)對(duì)MDR、XDR菌株的抑菌濃度為50μg/mL～200μg/mL。訶子鞣質(zhì)與三種一線(xiàn)抗結(jié)核藥物中任意一種聯(lián)合作用于MDR的協(xié)同效果顯著高于XDR。訶子鞣質(zhì)與三種二線(xiàn)抗結(jié)核藥物中任意一種聯(lián)合作用于MDR的協(xié)同效果顯著高于XDR。

[關(guān)? ? 鍵? ?詞]? 訶子鞣質(zhì);結(jié)核分枝桿菌;抗結(jié)核藥物

[中圖分類(lèi)號(hào)]? R52? ? ? ? ? ? ? ?[文獻(xiàn)標(biāo)志碼]? A? ? ? ? ? ?[文章編號(hào)]? 2096-0603（2020）44-0086-03

結(jié)核病仍然是一個(gè)世界公共衛(wèi)生問(wèn)題，全世界每年大約有900萬(wàn)新增病例[1]。

尤其是廣泛耐藥結(jié)核?。╔DR-TB）的出現(xiàn)，給全球結(jié)核病控制帶來(lái)了極大的挑戰(zhàn)。

研究報(bào)道中藥或中藥提取物或中藥制劑聯(lián)合標(biāo)準(zhǔn)化抗結(jié)核化療治療耐多藥結(jié)核分枝桿菌取得了一定進(jìn)展，在茜草素聯(lián)合標(biāo)準(zhǔn)抗結(jié)核化療方案治療耐多藥肺結(jié)核協(xié)同作用的研究中發(fā)現(xiàn)，茜草素對(duì)人型結(jié)核分枝桿菌標(biāo)準(zhǔn)菌株（H37RV）最低抑菌濃度為80ug/mL，聯(lián)合西藥時(shí)顯示出對(duì)耐藥菌株抑殺作用，而又不表現(xiàn)出傷肝的缺點(diǎn)[2]。訶子（Terminalia chebula Retz）是君子科植物訶子成熟的果實(shí)，是蒙藥、藏藥中的最常用藥[3]。本研究為進(jìn)一步研究訶子鞣質(zhì)抗結(jié)核分枝桿菌活性提供試驗(yàn)數(shù)據(jù)，在臨床治療耐藥結(jié)核病中提供理論指導(dǎo)。

一、材料與方法

（一）藥物

一線(xiàn)二線(xiàn)抗結(jié)核藥物購(gòu)于銀科醫(yī)學(xué)工程股份有限公司。訶子鞣質(zhì)購(gòu)于中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。

（二）菌株

菌株分離于2016年11月—2017年7月北京胸科醫(yī)院國(guó)家結(jié)核病臨床實(shí)驗(yàn)室確診的住院結(jié)核分枝桿菌培陽(yáng)的結(jié)核患者痰液。

（三）方法

1.單獨(dú)藥敏試驗(yàn)

藥敏試驗(yàn)按照中國(guó)防癆協(xié)會(huì)《結(jié)核病檢驗(yàn)細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)規(guī)程》，采用WHO推薦的微孔板法，進(jìn)行16種（包括抗結(jié)核一線(xiàn)和二線(xiàn)藥物）抗結(jié)核菌藥敏實(shí)驗(yàn)組套。接種菌懸液的制備：挑取一菌環(huán)菌體于Middlebrook 7H9液體培養(yǎng)基中并研磨，1：20稀釋后使用。用MABA法（阿爾馬蘭法）與Middlebrook 7H9液體培養(yǎng)基二倍稀釋法測(cè)定訶子鞣質(zhì)或者抗生素類(lèi)藥物對(duì)人型結(jié)核分枝桿菌標(biāo)準(zhǔn)菌株（H37RV）、敏感株、MDR、XDR菌株的最低抑菌濃度[4]。判定方法為粉紅色記錄為陽(yáng)性生長(zhǎng)孔。最低抑菌濃度（MIC）定義為阻止顏色變?yōu)榉奂t色的最低藥物濃度。

2.聯(lián)合藥敏試驗(yàn)

聯(lián)合藥用的方法采用棋盤(pán)法。利用部分抑菌濃度指數(shù)（fractional? inhibitory concentration index，F(xiàn)ICI） 判定聯(lián)合用藥效果，F(xiàn)ICI=（MICa聯(lián)合/MICa單獨(dú)）+（MICb聯(lián)合/MICb單獨(dú)），F(xiàn)ICI≤0.5，兩者協(xié)同;0.5﹤FIC≤1，兩者不相關(guān);FIC>1，兩者拮抗。

（四）統(tǒng)計(jì)方法

針對(duì)XDR-TB患者一線(xiàn)二線(xiàn)抗結(jié)核藥物耐藥情況各組分間的差異用卡方檢驗(yàn)或Fisher′確切值檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

二、結(jié)果

（一）敏感株、MDR、XDR菌株的篩選

在此次藥敏試驗(yàn)中一共收集到敏感株2494株，MDR菌株439株，XDR菌株38株。其中XDR菌株中耐藥卡那霉素有13例，卷曲霉素有10例，阿米卡星有16例，里面包括同時(shí)耐卡那霉素和卷曲霉素5例，同時(shí)耐卡那霉素、卷曲霉素和阿米卡星2例。

（二）訶子鞣質(zhì)對(duì)敏感株、MDR、XDR菌株的敏感性

訶子鞣質(zhì)對(duì)敏感株的抑菌濃度為50μg/mL～100μg/mL，訶子鞣質(zhì)對(duì)MDR、XDR菌株的抑菌濃度為50μg/mL～200μg/mL。

（三）訶子鞣質(zhì)聯(lián)合一線(xiàn)抗結(jié)核藥物藥敏分析

訶子鞣質(zhì)聯(lián)合INH、RFP和SM作用于結(jié)核分枝桿菌標(biāo)準(zhǔn)株H37Rv（ATCC 27294）和8株MDR、XDR的體外協(xié)同抗菌活性作用效果（見(jiàn)表2）。訶子鞣質(zhì)聯(lián)合INH、RFP和SM作用于4株MDR均具有協(xié)同作用，且MIC值顯著下降。與訶子鞣質(zhì)聯(lián)合后，INH的MIC值下降8～32倍（FICIs 0.250-0.375）、RFP的MIC值下降1～4倍（FICIs 0.240-0.375）、SM的MIC值下降1～4倍（FICIs 0.165-0.275）。訶子鞣質(zhì)對(duì)結(jié)核分枝桿菌標(biāo)準(zhǔn)株H37Rv和XDR的聯(lián)合藥敏結(jié)果表明，它們之間不相關(guān)，F(xiàn)ICIs為0.562～1.063。研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)訶子鞣質(zhì)與三種抗結(jié)核藥物中任意一種聯(lián)合作用于MDR的協(xié)同效果顯著高于XDR。

（四）訶子鞣質(zhì)聯(lián)合二線(xiàn)抗結(jié)核藥物藥敏分析

訶子鞣質(zhì)聯(lián)合Km、Cm和Am作用于結(jié)核分枝桿菌標(biāo)準(zhǔn)株H37Rv（ATCC 27294）和8株MDR、XDR的體外協(xié)同抗菌活性作用效果（見(jiàn)表2）。訶子鞣質(zhì)聯(lián)合Km、Cm和Am作用于4株MDR均具有協(xié)同作用，且MIC值顯著下降。與訶子鞣質(zhì)聯(lián)合后，INH的MIC值下降4～16倍（FICIs 0.250～0.375）、RFP的MIC值下降2～4倍（FICIs 0.281～0.375）、SM的MIC值下降1～2倍（FICIs 0.253～0.321）。訶子鞣質(zhì)對(duì)結(jié)核分枝桿菌標(biāo)準(zhǔn)株H37Rv和XDR的聯(lián)合藥敏結(jié)果表明，它們之間不相關(guān)，F(xiàn)ICIs為0.562～1.063。研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)訶子鞣質(zhì)與三種抗結(jié)核藥物中任意一種聯(lián)合作用于MDR的協(xié)同效果顯著高于XDR。

三、討論

結(jié)核病也是我國(guó)重點(diǎn)控制的慢性呼吸道傳染病之一。經(jīng)過(guò)短程督導(dǎo)治療大多數(shù)肺結(jié)核患者是可以治愈，但是耐多藥的結(jié)核菌出現(xiàn)給臨床的治療帶來(lái)了極大的困難。耐多藥結(jié)核?。∕DR-TB）是至少同時(shí)耐利福平和異煙肼的結(jié)核病[5];對(duì)于MDR-TB患者還需要使用二線(xiàn)抗結(jié)核藥物，但近年來(lái)，在MDR-TB的基礎(chǔ)上，又出現(xiàn)了對(duì)氟喹諾酮類(lèi)藥物和至少對(duì)包括（卡那霉素、卷曲霉素、阿米卡星）三種二線(xiàn)抗結(jié)核注射類(lèi)藥物一種耐藥的廣泛耐藥結(jié)核?。╔DR-TB）[6]。然而XDR-TB的出現(xiàn)給全球結(jié)核病控制帶來(lái)了極大的挑戰(zhàn)。訶子在蒙藥中的應(yīng)用比例最大，功用最廣泛，被稱(chēng)為“蒙藥之王”。訶子對(duì)革蘭陽(yáng)性和革蘭陰性細(xì)菌均有抑制作用。訶子的乙醇提取物對(duì)耐甲氧嘧啶（SXT）/磺胺甲唑（TMP）的大腸桿菌的抗菌活性效果很好[7];訶子的果實(shí)提取物沒(méi)食子酸及其乙酯對(duì)耐甲氧西林的金黃色葡萄球菌具有很強(qiáng)的抑制作用，訶子的酸性乙醚提取物和乙醇提取物均具有一定的抗真菌活性[8]，對(duì)生物被膜的形成也有抑制作用[9];訶子在體內(nèi)、外均能抑制阿昔洛韋耐藥的單純性皰疹病毒;同時(shí)，訶子具有一定的抗瘧原蟲(chóng)和抗阿米巴原蟲(chóng)活性[10]?？梢?jiàn)，訶子及其提取物對(duì)細(xì)菌、真菌、寄生蟲(chóng)及其病毒均有抵抗作用。中藥訶子鞣質(zhì)與INH、RFP和SM聯(lián)合發(fā)現(xiàn)有較好抗結(jié)核分枝桿菌藥理活性，且在MDR中能發(fā)揮出兩者聯(lián)用的協(xié)同作用。

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◎編輯 曾彥慧