新疆維吾爾族腸道中高產(chǎn)胞外多糖雙歧桿菌的篩選及其抗氧化活性

蔡靜靜，徐曉裕，張 艷，張亞川，魏小晶，闞澤宇，倪永清

（石河子大學食品學院，新疆 石河子 832000）

雙歧桿菌（Bifidobacterium）是人體腸道內(nèi)一類重要的益生菌，具有抗腫瘤、抗氧化、降膽固醇、維持腸道菌群平衡和免疫調(diào)節(jié)等生理功能[1-6]。雙歧桿菌胞外多糖（exopolysaccharides，EPS）是其生長代謝過程中產(chǎn)生的次級代謝產(chǎn)物，屬于高分子生物聚合物，它們附著在細胞表面或分泌到環(huán)境中[7]。目前報道的產(chǎn)生EPS的雙歧桿菌包括B. animalis、B. breve、B. longum、B. bifidum、B. longumsubsp. infantis、B. pseudocatenulatum和B. adolescentis[8]。近年來，關于乳酸菌EPS的功能及其在奶制品中的應用報道有很多，然而關于雙歧桿菌EPS的研究卻很少。研究表明，雙歧桿菌產(chǎn)生的EPS不僅可以調(diào)節(jié)腸道菌群結構并發(fā)揮其生物活性作用促進宿主健康[9]，還可以作為保護層幫助雙歧桿菌在胃腸道逆環(huán)境中存活[10]，Alp等[11]從母乳喂養(yǎng)的嬰兒糞便中分離出31 株雙歧桿菌，發(fā)現(xiàn)EPS產(chǎn)量與其耐酸耐膽鹽能力之間呈正相關。高產(chǎn)EPS是選擇益生雙歧桿菌的一個重要特征[12]。

生物體內(nèi)的氧化應激是由活性氧（reactive oxygen species，ROS）的負荷或積累增加引起的，當ROS在生物體中的積累過多時會對DNA、碳水化合物、脂質(zhì)和蛋白質(zhì)造成損害[13]，一般使用抗氧化劑中和這些ROS。國內(nèi)外許多研究表明雙歧桿菌EPS具有一定的抗氧化活性，Li Shengjie等[14]發(fā)現(xiàn)從人糞便內(nèi)分離的B. bifidumWBIN03產(chǎn)生的EPS對1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl，DPPH）自由基、羥自由基和超氧陰離子自由基有較強的清除能力；有學者比較了從廣西長壽老人糞便中分離的B. animalisRH兩個級分EPS（中性EPS和酸性EPS）的體外抗氧化活性，發(fā)現(xiàn)它們對脂質(zhì)過氧化和DPPH自由基、羥自由基和超氧陰離子自由基均顯示出抑制作用[15]。

新疆獨特的地理位置、特殊的文化習俗和飲食習慣為天然益生菌的開發(fā)提供了豐富的資源。本研究對新疆維吾爾族腸道中篩選的雙歧桿菌進行EPS產(chǎn)量測定，并探究其所產(chǎn)EPS的抗氧化活性，菌株在模擬胃腸液中的存活情況以及體外黏附性，進而篩選出EPS產(chǎn)量高、抗氧化活性好且能夠以較高的數(shù)量在胃腸道中存活的雙歧桿菌，以期為后續(xù)開發(fā)適合少數(shù)民族群體的抗氧化型產(chǎn)品提供理論支持。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

Wilkins-Chalgren厭氧菌瓊脂參考文獻[16]；BSM培養(yǎng)基[17]：在MRS培養(yǎng)基基礎上每升添加0.5 g半胱氨酸鹽酸鹽、50 mg莫匹羅星、25 mg制霉菌素；脫脂乳培養(yǎng)基[18]：每升90 g脫脂乳、3.5 g酵母提取物、3.5 g蛋白胨和10 g葡萄糖，105 ℃滅菌10 min。

DNA提取試劑盒 北京全式金生物技術有限公司；Tris堿、乙二胺四乙酸（ethylene diamine tetraacetic acid，EDTA）、鄰苯三酚、濃鹽酸、硫酸亞鐵、過氧化氫、無水乙醇、無水甲醇、三氯化鐵、鐵氰化鉀、三氯乙酸（trichloroacetic acid，TCA）（均為分析純） 北京博奧拓達科技有限公司。

1.2 儀器與設備

多功能酶標儀 美國BioTek儀器有限公司；pH計梅特勒-托利多儀器有限公司；聚合酶鏈式反應（polymerase chain reaction，PCR）儀 英國Techne公司；HWS智能型恒溫恒濕培養(yǎng)箱 太倉市華美生化儀器廠；H2050R-2離心機 長沙湘儀離心機儀器有限公司；厭氧培養(yǎng)箱 英國DWS公司；水平電泳儀、凝膠成像系統(tǒng)美國Bio-Rad公司。

1.3 方法

1.3.1 樣品采集及預處理

樣品采自新疆維吾爾族的嬰兒糞便及其母親糞便。使用糞便采樣器采集樣品，置于車載冰箱中-20 ℃保存，24 h之內(nèi)轉運至實驗室。

1.3.2 雙歧桿菌的分離、純化和保藏

樣品用無菌生理鹽水稀釋至10-5、10-6、10-7、10-8，分別吸取原液和樣品稀釋液100 μL涂布均勻于Wilkins-Chalgren厭氧菌瓊脂和BSM平板上，每個梯度3 個平行。將平板置于37 ℃厭氧培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2～3 d，挑取平板上的單菌落進行革蘭氏染色，并使用相差顯微鏡觀察細胞形態(tài)，選擇具有雙歧桿菌典型特征的菌落在平板上繼續(xù)劃線純化，直至鏡檢菌體細胞的形態(tài)和排列方式一致。將所選菌株液體富集后加甘油和新鮮液體培養(yǎng)基用2 mL凍藏管放置于-20 ℃冰箱保藏備用。

1.3.3 雙歧桿菌的生物學鑒定

1.3.3.1 基因組DNA的提取

使用細菌基因組DNA提取試劑盒提取菌株DNA。

1.3.3.2 重復基因外回文序列-聚合酶鏈式反應（repetitive extragenic palindromic-polymerase chain reaction，rep-PCR）指紋圖譜去重

表 1 PCR擴增體系和程序Table 1 PCR amplification system and program

使用引物BOXA1R（5’-CTACGGCAAGG CGACGCTGACG-3’）對提取的菌株DNA進行PCR擴增。rep-PCR擴增體系和條件如表1所示，35 個循環(huán)，擴增產(chǎn)物用1.2 g/100 mL的瓊脂糖凝膠電泳檢驗，電泳結束后，在紫外凝膠成像儀中觀察電泳結果并拍照，用軟件Gel Compar II對DNA圖譜進行聚類分析。DNA帶型完全一致的菌株通常被認為屬于同一物種，可據(jù)此將分離所得菌株歸為若干種系型，并從每組中選取至少1 株代表菌株進一步測序分析。

1.3.3.3 16S rDNA片段擴增與檢測

為確保準確性，使用雙歧桿菌屬引物（Bifid-R：5’-GGTGTTCTTCCCGATATCTACA-3’；Bifid-F：5’-CTCCTGGAAACGGGTGG-3’）對去重后的菌株DNA進一步擴增，體系和程序如表1所示，35 個循環(huán)，選擇單一且明亮的條帶用細菌的通用引物27F（5’-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3’）和1492R（5’-TACGGYTACCTTGTTACGACTT-3’）進行16S rDNA基因片段擴增。擴增體系和程序參考Prasanna等[19]的方法進行。擴增產(chǎn)物送至上海生工生物科技有限公司測序。序列在NCBI核酸數(shù)據(jù)庫中進行BLAST在線分析，搜索與其相似性最高的序列，利用MEGA 5.0.5構建發(fā)育樹，確定待測菌株的種屬。

1.3.4 產(chǎn)EPS雙歧桿菌的篩選

1.3.4.1 產(chǎn)糖菌株初篩

菌株活化后，吸取100 μL菌液涂布于MRS平板，另取200 μL接種至100 mL脫脂乳培養(yǎng)基中，37 ℃厭氧培養(yǎng)32～48 h。觀察平板上單菌落生長情況以及在脫脂乳培養(yǎng)基中的黏稠拉絲情況，并作記錄。

1.3.4.2 產(chǎn)糖菌株復篩

將初篩中明顯黏稠拉絲的菌株按2%（V/V）的接種量接種于MRS液體培養(yǎng)基中，37 ℃厭氧培養(yǎng)36 h制得發(fā)酵液。發(fā)酵液4 ℃、8 000 r/min離心20 min去除菌體，將上清液用旋轉蒸發(fā)儀濃縮為原體積的1/3，并加入3 倍體積預冷無水乙醇4 ℃沉淀過夜，取沉淀用超純水溶解，使用質(zhì)量分數(shù)為6%的TCA溶液去除蛋白，8 000 r/min離心20 min后將上清液置于4 ℃超純水中透析48 h，每8 h換一次水。

1.3.4.3 EPS含量的測定

采用苯酚-硫酸法測定EPS含量，參照文獻[20]配制不同質(zhì)量濃度的標準葡萄糖溶液，然后測定波長490 nm處的吸光度。以葡萄糖質(zhì)量濃度為橫坐標，吸光度為縱坐標繪制標準曲線。根據(jù)標準曲線回歸方程y=0.005x-0.011 9，R2=0.996 6，計算菌株EPS的含量。

1.3.5 菌株EPS體外抗氧化活性測定

1.3.5.1 EPS的提取

參考1.3.4.2節(jié)方法提取粗多糖，冷凍干燥得到粗多糖樣品[21]，調(diào)整糖液質(zhì)量濃度為0.6 mg/mL備用。

1.3.5.2 過氧化氫自由基清除能力測定

參考文獻[22]，稍作修改。向0.6 mL濃度為40 mmol/L H2O2溶液中加入2.4 mL磷酸鹽緩沖液（0.1 mol/L，pH 7.4），搖勻，加入1 mL樣品，振蕩混勻，室溫反應10 min，測定體系230 nm波長處的吸光度，3 個平行實驗。根據(jù)式（1）計算樣品的過氧化氫自由基清除能力：

式中：A0為未加樣品的吸光度，即以水代替樣品；A1為樣品溶液與自由基反應后的吸光度；A2為樣品溶液的吸光度，即以水代替自由基溶液，排除樣品本身吸光度對結果的影響。

1.3.5.3 超氧陰離子自由基清除能力測定

參考文獻[23]，稍作修改。將3 mL 50 mmol/L pH 8.2 的Tris-HCl緩沖液與1 mL樣品充分混勻，25 ℃保溫30 min，加入0.3 mL 30 mmol/L鄰苯三酚溶液，搖勻，25 ℃反應5 min。最后向反應體系中加入1 mL濃鹽酸以終止反應。紫外分光光度計以Tris-HCl緩沖液調(diào)零，測定反應體系325 nm波長處吸光度。3 次平行實驗。根據(jù)式（1）計算樣品的超氧陰離子自由基清除率。

1.3.5.4 羥自由基清除能力測定

參考文獻[24]，稍作修改。取 1 mL樣品，加入1 mL 9 mmol/L的FeSO4溶液、1 mL 9mol/L的水楊酸-乙醇溶液，振蕩混勻，立即加入1 mL 9 mmol/L的H2O2溶液以開始發(fā)生反應，搖勻，37 ℃反應40 min，測定反應體系510 nm波長處吸光度，3 次平行實驗。按式（1）計算樣品的羥自由基清除率。

1.3.5.5 DPPH自由基清除能力測定

參考文獻[25]，稍作修改。吸取2 mL樣品，加入2 mL 0.2 mmol/L DPPH-乙醇溶液，搖勻，暗反應40 min，測定混合液517 nm波長處的吸光度，3 次平行實驗。根據(jù)式（1）計算樣品的DPPH自由基清除率。

1.3.6 產(chǎn)糖菌株模擬胃腸液耐受性

1.3.6.1 模擬胃液中的存活情況

人工模擬胃液：參考Liao Ning等[26]的方法稍作修改，在每升MRS肉湯里添加3 g胃蛋白酶。將菌株以2%（V/V）的接種量接入MRS培養(yǎng)基，37 ℃厭氧培養(yǎng)28 h后，4 000 r/min離心10 min收集菌體沉淀，用磷酸鹽緩沖液洗滌菌體沉淀2 次后重懸于生理鹽水中，混勻制得菌懸液。采用稀釋涂布平板法計算此時的菌液濃度（CFU/mL）。用濃度為12 mol/L HCl溶液調(diào)節(jié)模擬胃液pH值至2.0、2.5、3.0、3.5、4.0，滅菌冷卻后，將1 mL菌懸液分別接入9 mL模擬胃液中，37 ℃厭氧培養(yǎng)3 h。記錄不同條件下的活菌數(shù)（CFU/mL）。每組3 個平行實驗。以0 h菌落總數(shù)為對照，根據(jù)式（2）計算菌株存活率：

1.3.6.2 模擬腸液中的存活情況

人工模擬腸液[26]：在每升MRS肉湯里添加1 g胰蛋白酶和3 g牛膽鹽，0.1 mol/L NaOH溶液調(diào)節(jié)pH 2.5。參照1.3.6.1節(jié)方法，制備菌懸液。將1 mL菌懸液接入9 mL模擬腸液中，37 ℃厭氧培養(yǎng)3 h。記錄各菌株的活菌數(shù)（CFU/mL）。每組3 個平行實驗。以0 h菌落總數(shù)為對照，根據(jù)式（2）計算菌株存活率。

1.3.7 產(chǎn)糖菌株自凝聚測定

將菌株發(fā)酵液4 000 r/min離心20 min，用無菌生理鹽水洗滌2 次后用磷酸鹽緩沖液調(diào)節(jié)菌懸液濃度為107CFU/mL。取5 mL菌懸液于10 mL試管中旋渦振蕩10 s，在室溫條件下靜置5 h，每隔1 h取出菌懸液置于600 nm波長處測其吸光度[27]。每組3 個平行實驗。菌株自凝聚率按照式（3）計算：

式中：At為時間t為1、2、3、4 h和5 h的吸光度；A0為0 h吸光度。

1.3.8 產(chǎn)糖菌株表面疏水性測定

將菌株發(fā)酵液4 000 r/min離心20 min后，用無菌生理鹽水洗滌2 次重懸于0.1 mol/L KNO3（pH 6.2）溶液中，調(diào)節(jié)菌懸液濃度為107CFU/mL，600 nm波長處測定樣品吸光度A0。分別吸取1 mL二甲苯、乙酸乙酯、氯仿溶劑加到3 mL菌液中混勻，室溫靜置10 min后渦旋振蕩兩相體系2 min，室溫下放置20 min后取水相，測定其在600 nm波長處的吸光度（A1）[28]。疏水性用細菌對溶劑的黏附百分比表示，計算如式（4）所示：

1.4 數(shù)據(jù)分析與處理

采用SPSS 19.0軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學分析；所有實驗重復3 次，結果以 ±s表示，顯著性分析采用Duncan檢驗。采用Gel Compar II凝膠分析軟件進行指紋圖譜聚類分析，并使用Origin 9.0.6進行相關圖表繪制。

2 結果與分析

2.1 雙歧桿菌的鑒定結果

圖 1 BOXA1R擴增菌株的rep-PCR基因指紋圖譜Fig. 1 Rep-PCR gene fingerprints of strains amplified with BOXA1R

將分離得到的73 株疑似雙歧桿菌經(jīng)rep-PCR（圖1）去重后，挑選20 株代表菌株測序，序列在NCBI數(shù)據(jù)庫進行BLAST在線分析，結果有17 株屬Bifidobacterium，3 株屬Propionibacterium。將17 株雙歧桿菌的部分16S rRNA基因序列測序結果在NCBI數(shù)據(jù)庫進行BLAST在線分析，并選取同源性最高的序列構建系統(tǒng)發(fā)育樹，見圖2?？梢钥闯?7 株雙歧桿菌分屬于5 個種，2 個亞種，菌株BF81-22、BF67-14和BF8-3屬于假長雙歧桿菌（B. pseudolongum），菌株BF79-11和MF85-2屬于動物雙歧桿菌乳亞種（B. animalsubsp. lactis），菌株BF66-16屬于長雙歧桿菌嬰兒亞種（B. longumsubsp. infantis），菌株MFX-1屬于長雙歧桿菌（B. longum），菌株MF29-4、BF113-1和BF43-1屬于短雙歧桿菌（B. breve），菌株MF98-1、BF88-5、MF80-22和MF96-12屬于假小鏈雙歧桿菌（B. pseudocatenulatum），菌株MF49-14、BF52-1和BF87-12屬于兩歧雙歧桿菌（B. bifidum）。

BLAST比對的親緣標準菌株和樣品來源如表2所示，與之前相同序列比較，共得到52 株腸道來源的雙歧桿菌，14 株B. pseudocatenulatum，8 株B. pseudolongum，9 株B. bifidum，7 株B. breve，5 株B. longumsubsp.infantis，6 株B. animalsubsp. lactis和3 株B. longum。

圖 2 菌株16S rRNA基因序列的系統(tǒng)發(fā)育樹Fig. 2 Phylogenetic tree of strains based on 16S rRNA gene sequences

表 2 NCBI BLAST比對結果Table 2 Results of alignment based on NCBI BLAST

2.2 產(chǎn)EPS的雙歧桿菌篩選

52 株雙歧桿菌經(jīng)過初篩，發(fā)現(xiàn)有11 株雙歧桿菌（B. longumMFX-1、MFX-2和MFX-3，B. longumsubsp.infantisBF66-16、BF85-15、BF85-36和BF107-4，B. bifidumBF107-7、BF52-1，B. breveMF29-2、MF29-26）在MRS平板和脫脂乳培養(yǎng)基中有產(chǎn)黏拉絲的情況，圖3為產(chǎn)糖與不產(chǎn)糖的菌株表型對比。通過苯酚-硫酸法對11 株雙歧桿菌進行了復篩，實驗結果顯示有7 株雙歧桿菌的EPS含量較高（圖4），可以看出，所測7 株菌EPS產(chǎn)量均達到400 mg/L以上，尤其是來源于嬰兒糞便的B. longumsubsp. infantisBF66-16 EPS產(chǎn)量高達513.06 mg/L，具備工業(yè)生產(chǎn)的可能。

圖 3 產(chǎn)糖與不產(chǎn)糖的菌株表型對比圖Fig. 3 Phenotypic comparison between EPS-producing and non-EPS-producing strains

圖 4 菌株EPS產(chǎn)量Fig. 4 EPS yields of selected strains

2.3 雙歧桿菌粗多糖的體外抗氧化分析

圖 5 菌株抗氧化活性Fig. 5 Antioxidant activities of selected strains

過氧化氫自由基、超氧陰離子自由基和羥自由基都屬于人體內(nèi)細胞衰老的誘導因子，它們能夠通過細胞膜，與大量生物活性分子發(fā)生反應，緩慢地氧化機體，對機體造成氧化損傷[29]。如圖5所示，幾株雙歧桿菌EPS對過氧化氫自由基、超氧陰離子自由基、羥自由基和DPPH自由基均有一定的清除能力，EPS質(zhì)量濃度為0.6 mg/mL，7 株雙歧桿菌EPS對4 種自由基的清除率都超過了20%，表明7 株雙歧桿菌所產(chǎn)的EPS均具有一定的抗氧化活性，有作為這些自由基清除產(chǎn)品的可能。

2.4 產(chǎn)EPS雙歧桿菌的耐受性

人體胃液的pH值通常在3.0左右，受飲食及其他因素影響，胃液pH值也會在1.5～4.0之間浮動，胃液的強酸性及胃蛋白酶會嚴重阻礙雙歧桿菌的轉運，因此雙歧桿菌需要具備耐受胃液低pH值及胃蛋白酶的能力才能進入小腸發(fā)揮作用[30]。7 株菌胃腸耐受實驗結果見圖6，菌株在pH值為2.0時基本無法存活。在pH值大于2.5時，7 株菌均表現(xiàn)出了一定的耐酸性，尤其菌株BF66-16在pH值為4.0時，存活率超過了80%，耐受胃液能力較強，具備益生菌潛質(zhì)。

圖 6 菌株耐受胃液能力Fig. 6 Abilities of selected strains to tolerate gastric juice

人體小腸是可食用益生菌發(fā)揮功效的場所，小腸中過高的膽鹽含量限制了益生菌的使用[31]，能夠在人體腸液中存活一定數(shù)量的的菌株才可以發(fā)揮益生作用。模擬腸液結果見圖7，7 株菌在模擬腸液中培養(yǎng)3 h后均能達到40%以上的存活率，其中BF66-16相比較于其他菌株存活率明顯較高，達到了61.05%，表明菌株對酸性條件和膽汁鹽環(huán)境具有很強的抵抗力，這可能與其高產(chǎn)EPS有關。在Yang Xin等[32]的研究中，轉錄組和生理學分析顯示EPS的產(chǎn)生使B. breveBB8的酸適應性得到改善。B. animalissubsp. lactis在0.3%牛膽鹽存在的條件下誘導eps基因表達，且隨著膽汁鹽添加百分比的增加，EPS的合成量按比例增加[33]。因此雙歧桿菌合成這些聚合物可以作為保護機制，以應對其腸道中遇到的惡劣條件。

圖 7 菌株耐受腸液能力Fig. 7 Abilities of selected strains to tolerate intestinal juice

2.5 產(chǎn)EPS雙歧桿菌的自凝聚能力

益生菌黏附于腸上皮細胞的能力在胃腸道定植中發(fā)揮著重要作用，可以防止菌株因蠕動而減少，從而在生態(tài)系統(tǒng)中提供競爭優(yōu)勢[34]。已有研究證明，體外測量細菌的自凝聚和表面疏水性可用于初步篩選適合商業(yè)應用的潛在黏附細菌[30]。自凝聚是同一種菌株間相互凝集形成多細胞簇的現(xiàn)象，益生菌通過自凝聚作用相互凝集到一定的數(shù)量時黏附才牢固，進而達到菌株發(fā)揮益生功效所需要的數(shù)量。7 株產(chǎn)EPS的雙歧桿菌的自凝聚能力結果見表3，菌株懸液的自凝聚率隨著靜止時間的延長而逐漸增大，且不同的菌株間自凝聚率具有明顯的差異，其中菌株BF66-16與其他菌株相比表現(xiàn)出較好的自凝聚能力，5 h后菌株BF66-16的自凝聚率達到95.59%，有較強的自凝聚性。

表 3 產(chǎn)EPS菌株的自凝聚結果Table 3 Auto-aggregation ability of EPS-producing strains

2.6 產(chǎn)EPS雙歧桿菌的疏水性

表 4 產(chǎn)EPS菌株的疏水性結果Table 4 Hydrophobility of EPS-producing strains

疏水性較高的菌株，會對小腸組織產(chǎn)生較高的黏附能力[35]。由表4可以看出，所有菌株均表現(xiàn)出一定的疏水性，不同菌株的疏水性差異較大，二甲苯是一種非極性溶劑，除菌株BF107-7和BF52-1外，其余5 株菌均表現(xiàn)出對二甲苯較高的疏水性（＞40%），說明這些菌株都具有疏水的細胞表面。氯仿是酸性溶劑，屬于電子受體，而乙酸乙酯是單堿性溶劑，屬于電子供體。7 株雙歧桿菌對氯仿的疏水性都明顯的高于對乙酸乙酯的疏水性，尤其是菌株BF52-1和BF66-16對氯仿的疏水性均大于85%，說明這兩株雙歧桿菌都是電子供體。因此本研究通過自凝聚和疏水性篩選出的菌株BF66-16初步判斷其能夠黏附在胃腸道中，且BF66-16在模擬胃腸液中的存活能力較強，說明菌株可以在胃腸液環(huán)境中以較高的數(shù)量存活下來，發(fā)揮其抗氧化活性。

3 結 論

本研究從新疆維吾爾族腸道中分離出52 株雙歧桿菌，分屬于B. pseudocatenulatum、B. bifidum、B. breve、B. pseudolongum、B. longum五個種以及B. longumsubsp.infantis、B. animalsubsp. lactis兩個亞種。對菌株產(chǎn)EPS的能力進行初篩和復篩后，共得到7 株EPS產(chǎn)量較高的雙歧桿菌，質(zhì)量濃度均在400 mg/L以上，且所產(chǎn)的EPS具有一定的抗氧化活性，對人體健康有益。模擬胃腸液耐受性和體外黏附性實驗結果表明，菌株BF66-16耐受胃腸液能力相比于其他幾株雙歧桿菌較強，在pH 2.0的胃液環(huán)境下，存活率仍可達3.39%，在pH 4.0時存活率為81.13%，模擬腸液中存活率達到了61.05%；同時BF66-16對氯仿和二甲苯的黏附百分比超過60%，5 h后的自凝聚率為95.59%，證明菌株能夠以較高的活菌量黏附于胃腸道中，以發(fā)揮其抗氧化活性。由此可見，來源于嬰兒糞便的BF66-16可以作為潛在抗氧化菌株，為后續(xù)開發(fā)適合少數(shù)民族消費的益生型產(chǎn)品提供新的研究思路和菌株資源。