血液中乙醇含量測(cè)定-異戊醇內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)曲線法

趙曉華

摘 要：目的：建立用異戊醇作為內(nèi)標(biāo)的標(biāo)準(zhǔn)曲線定量法來(lái)測(cè)定血液中的乙醇含量，并與方法GA/T 1073-2013進(jìn)行比較。方法：用頂空進(jìn)樣器-氣相色譜聯(lián)用儀，采用內(nèi)標(biāo)工作曲線法的定量方式分析血液中乙醇含量[1-2]。結(jié)果：用本方法測(cè)得的乙醇加標(biāo)回收率為99.4～101.9%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在1%以內(nèi)，一元性回歸方程式的相關(guān)系數(shù)r>0.999。結(jié)論：用該法分析血液中的乙醇含量準(zhǔn)確度和精密度均能滿足要求，內(nèi)標(biāo)物的適用性更廣泛。

關(guān)鍵詞：乙醇;血液;異戊醇;氣相色譜;內(nèi)標(biāo)-標(biāo)準(zhǔn)曲線

中圖分類號(hào)：O657 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1671-2064（2020）01-0210-02

血液中的乙醇含量測(cè)定目前現(xiàn)有的方法是GA/T 1073- 2013，采用的內(nèi)標(biāo)物為叔丁醇，但是筆者在實(shí)際運(yùn)用中發(fā)現(xiàn)：叔丁醇的熔點(diǎn)為25.7℃，冬天的時(shí)候，叔丁醇是固體狀態(tài)，配制內(nèi)標(biāo)液的時(shí)候需要加熱等候很長(zhǎng)時(shí)間，給稱量或移取帶來(lái)不便。因此筆者想要尋找熔點(diǎn)較低的化合物來(lái)作為內(nèi)標(biāo)，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)GA/T 1073-2013，其不但可以測(cè)試乙醇含量，還用于測(cè)試甲醇、正丙醇、乙醛、丙酮、異丙醇和正丁醇，因此內(nèi)標(biāo)物的選擇需要避開(kāi)以上化合物，經(jīng)過(guò)尋找，筆者找到了異戊醇，其熔點(diǎn)為-117℃，溶解性：微溶于水，與乙醇混溶，因此筆者認(rèn)為異戊醇比較適合作為內(nèi)標(biāo)物。

1 材料與方法

1.1 儀器

Aglient氣相色譜7890B、Aglient頂空進(jìn)樣器7697A、Eppendorf移液器（20-200μL和100-1000μL）、頂空進(jìn)樣瓶（10mL，配有鋁帽及密封墊）。

1.2 試劑

乙醇系列標(biāo)準(zhǔn)品（Cerilliant進(jìn)口標(biāo)準(zhǔn)品）、異戊醇（國(guó)藥試劑>98.5%）、蒸餾水（屈臣氏）、血液樣品。

1.3 試劑配制

1.3.1 內(nèi)標(biāo)物溶液

用移液器移取25.1μL的異戊醇（密度0.81g/mL，純度98.5%）于一預(yù)先裝有適量蒸餾水的500mL容量瓶中，再用蒸餾水定容至刻度，搖勻，得濃度為4mg/100mL的異戊醇內(nèi)標(biāo)工作液。

1.3.2 乙醇標(biāo)準(zhǔn)品

市售，濃度為10mg/100mL、20mg/100mL、50mg/100mL、80mg/100mL、100mg/100mL、200mg/100mL、300mg/100mL。

1.4 實(shí)驗(yàn)條件

1.4.1 頂空進(jìn)樣器條件（如表1）

1.4.2 氣相色譜條件（如表2）

1.5 實(shí)驗(yàn)方法

1.5.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線制作

用移液器分別移取500μL的異戊醇內(nèi)標(biāo)工作液于7個(gè)10mL頂空瓶中，再向這7個(gè)頂空瓶中分別移取100μL的10mg/100mL、20mg/100mL、50mg/100mL、80mg/100mL、100mg/100mL、200mg/100mL、300mg/100mL乙醇標(biāo)準(zhǔn)品，用硅膠墊和鋁帽密封，混勻。置于頂空進(jìn)樣器中，按1.4實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)樣分析。以待測(cè)組分（乙醇）和內(nèi)標(biāo)物（異戊醇）的峰面積之比作為縱坐標(biāo)，以待測(cè)組分（乙醇）和內(nèi)標(biāo)物（異戊醇）的含量之比作為橫坐標(biāo)，制作內(nèi)標(biāo)工作曲線。

1.5.2 樣品測(cè)定

用移液器分別移取100μL的全血樣品和500μL的異戊醇內(nèi)標(biāo)工作液于一個(gè)10mL頂空瓶中，用硅膠墊和鋁帽密封，混勻，置于頂空進(jìn)樣器中，按1.4實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)樣分析。跟據(jù)待測(cè)樣品中乙醇和異戊醇的峰面積之比，即可在工作曲線上查出待測(cè)樣品中乙醇的濃度，進(jìn)而得出待測(cè)樣品中乙醇的含量。

2 結(jié)果與討論

2.1 方法的可行性

從圖1可知，乙醇的出峰時(shí)間為1.394min，異戊醇的出峰時(shí)間為5.112min，實(shí)驗(yàn)條件能達(dá)到分離效果，實(shí)驗(yàn)方法可行。

2.2 內(nèi)標(biāo)工作曲線的建立

乙醇/異戊醇峰面積之比-乙醇/異戊醇含量之比對(duì)照表見(jiàn)表3;內(nèi)標(biāo)工作曲線見(jiàn)圖2。

2.3 加標(biāo)回收

向空白血液中加入適量乙醇，分別制得乙醇含量為50mg/100mL和80mg/100mL的血液樣品，用此方法測(cè)其乙醇含量，結(jié)果如表4。

2.4 精密度

隨機(jī)抽取一血液樣品，按此方法重復(fù)分析6次，得出6個(gè)乙醇含量結(jié)果，計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差如表5。

3 結(jié)語(yǔ)

應(yīng)用異戊醇作為內(nèi)標(biāo)測(cè)定血液中乙醇含量，加標(biāo)回收率為99.4～101.9%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.78%，滿足測(cè)試要求，異戊醇代替叔丁醇作為內(nèi)標(biāo)的可操作性更強(qiáng)，特別是當(dāng)室溫比較低時(shí)，異戊醇保持液體狀態(tài)，方便了檢測(cè)人員的操作。

參考文獻(xiàn)

[1] 陳君，彭峰.氣相色譜法直接測(cè)定血液中乙醇的含量[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2010，7（5）：418-419.

[2] 代娟，陳曼，賴翼，等.直接進(jìn)樣毛細(xì)管氣相色譜法測(cè)定血液中乙醇含量的研究[J].中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2010，20（2）：283-284.