梅毒抗體篩檢不合格獻血者的梅毒確認及梅毒感染狀況分析*

胡曉玉 吳學(xué)忠 程衛(wèi)芳 金惠新 魯晉 吳君勝 尹萍 郭曉婕 魏家余 張恒萍

梅毒是由蒼白密螺旋體（TP）感染引起的一種慢性、系統(tǒng)性性傳播疾病，除經(jīng)性傳播、母嬰垂直轉(zhuǎn)播外，可經(jīng)血液傳播。梅毒自然疾病過程中部分TP感染者通常存在潛伏期，梅毒血清學(xué)檢測是梅毒診斷（尤其是無明顯臨床表現(xiàn)的潛伏梅毒、隱性梅毒）的重要實驗室手段。梅毒螺旋體顆粒凝集試驗（TPPA）是目前公認的梅毒確診的首選檢測方法，可適用于對TP-ELISA檢測陽性的標本進行驗證[1]。為了保證血液安全，血站血液檢測實驗室可能會在TPELISA篩查結(jié)果判讀時設(shè)置灰區(qū)（設(shè)定值≤S/CO.值≤1），雖降低了漏檢風(fēng)險，但同時增加了血液報廢率和血源流失。本文通過對梅毒抗體篩查不合格獻血者梅毒確認檢測及梅毒感染狀況分析，為獻血者告知及獻血者屏蔽提供參考建議?，F(xiàn)報告如下。

材料與方法

1 標本來源 收集合肥市中心血站2016年3月24日～2016年10月2日期間經(jīng)梅毒抗體ELISA試劑一和試劑二同時檢測結(jié)果為梅毒抗體篩查不合格（雙試劑S/CO值≥1、0.5≤雙試劑S/CO值＜1、單試劑S/CO值≥1）獻血者血液290份，篩查不合格獻血者年齡范圍在18～59歲，平均年齡為34.6歲。

2 儀器與試劑 STAR全自動加樣儀（HAMILTON，瑞士），F(xiàn)AME全自動酶免分析儀（HAMILTON，瑞士），Procleix TIGRIS全自動核酸檢測系統(tǒng)（諾華公司，瑞士），ChiTaS BSS1200血液核酸檢測系統(tǒng)（浩源公司，中國），ROTOFIX32A離心機（Hettich Zentrifugen公司，德國），移液器（BIOHIT公司，芬蘭），數(shù)顯混勻器（WZRH5000，北京卓川電子科技有限公司）、生物安全柜（Haier HR40-ⅡA2，青島海爾股份有限公司）。

梅毒螺旋體抗體ELISA診斷試劑一，梅毒螺旋體抗體ELISA診斷試劑二，梅毒螺旋體抗體檢測試劑盒（TPPA，珠海麗珠試劑股份有限公司，批號/有效期：VN70314/20180323），甲苯胺紅不加熱血清試驗（TRUST，上海榮盛生物藥業(yè)有限公司，批號/有效期：20170404204/20180410），0.9%NaCl溶液（蚌埠豐原涂山制藥有限公司，批號/效期：170116-01/20190115）,純水（由英國ELGA公司生產(chǎn)的PURELAB純水儀制備）。

3 檢測方法 梅毒抗體篩查試驗采用雙試劑ELISA法進行檢測，梅毒實驗室確認試驗采用梅毒螺旋體顆粒凝集試驗（TPPA）檢測，梅毒TPPA陽性標本非特異性凝集滴度采用甲苯胺紅不加熱血清試驗（TRUST）檢測。上述試驗檢測嚴格按照試劑盒說明書操作，且試劑均在有效期內(nèi)使用。

4 統(tǒng)計學(xué)處理 應(yīng)用SPSS 11.5軟件，統(tǒng)計分析采用χ2檢驗行×列表資料多個樣本率的比較，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

結(jié) 果

1 梅毒抗體篩查不合格獻血者梅毒確認和TRUST檢測 梅毒抗體篩查不合格290份標本經(jīng)TPPA確認檢測，結(jié)果有166份TPPA陽性和124份TPPA陰性（單試劑或雙試劑灰區(qū)），166份TPPA陽性標本有98份男性和68份女性。166份TPPA陽性標本進一步經(jīng)TRUST檢測，結(jié)果有50份TRUST陽性，其標本凝集滴度見表1。

2 梅毒抗體ELISA篩檢S/CO值與TPPA陽性率比較 290份梅毒抗體篩查不合格獻血者經(jīng)TPPA確認檢測結(jié)果為，雙試劑S/CO值≥1.0時TPPA陽性率為90.71%，單試劑S/CO值≥1.0時TPPA陽性率為0%，0.5≤雙試劑S/CO值＜1（稱為“灰區(qū)”）時TPPA陽性率為0%，見表2。

3 梅毒抗體ELISA篩檢試劑的特異性、靈敏度、陽性檢出率比較 TPPA作為金標準設(shè)定為對照，單試劑、雙試劑血清學(xué)檢測結(jié)果為試劑一、試劑二、雙試劑的梅毒抗體篩查不合格獻血者的TPPA陽性均為166份，見表3；梅毒抗體ELISA試劑一、試劑二、雙試劑的敏感性分別為100%、100%、100%，特異性分別為72.58%、58.77%、48.39%，陽性預(yù)測值分別為83.00%、77.93%、72.17%，陰性預(yù)測值分別為100%、100%、100%，見表4。梅毒抗體ELISA試劑一、試劑二的陽性檢出率差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），見表5。

表1 50份TRUST陽性標本凝集滴度

表2 梅毒抗體ELISA篩檢S/CO值與TPPA陽性率比較

表3 單、雙試劑血清學(xué)篩查/確認結(jié)果

表4 單/雙試劑的敏感性/特異性/陰陽預(yù)測值比較（%）

4 梅毒抗體篩查不合格獻血者性別構(gòu)成的TPPA陽性率比較 290份梅毒抗體篩查不合格獻血者中男性171份和女性119份，經(jīng)TPPA確認檢測結(jié)果為，男性TPPA陽性98份，男性TPPA陽性率57.31%（98/171）；女性TPPA陽性68份，陽性率57.14%（68/119）。見表6和表7。

表5 試劑一、試劑二的陽性檢出率比較

表6 梅毒抗體篩查不合格獻血者性別構(gòu)成（n，%）

表7 不同性別梅毒抗體篩查不合格獻血者TPPA陽性率比較

5 不同婚姻狀況梅毒抗體篩檢不合格獻血者TPPA陽性率比較 290份梅毒抗體篩查不合格獻血者中已婚者189份和未婚者101份，經(jīng)TPPA確認檢測結(jié)果為，已婚者TPPA陽性130份、未婚者TPPA陽性36份，已婚梅毒抗體篩查不合格獻血者TPPA陽性率68.78%（130/189），未婚者TPPA陽性率35.64%（36/101），見表8。

290份梅毒抗體篩查不合格獻血者中男性171份和女性119份。男性171份梅毒抗體篩查不合格獻血者中已婚者114份、未婚者57份，經(jīng)TPPA確認檢測結(jié)果為，已婚男性梅毒抗體篩查不合格獻血者TPPA陽性率70.18%（80/114），未婚男性TPPA陽性率31.58%（18/57），見表9；女性119份梅毒抗體篩查不合格獻血者中已婚者75份、未婚者44份，已婚女性梅毒抗體篩查不合格獻血者TPPA陽性率66.67%（50/75），未婚女性TPPA陽性率40.91%（18/44），見表10。

6 不同獻血次數(shù)梅毒抗體篩檢不合格獻血者TPPA陽性率比較 290份梅毒抗體篩查不合格獻血者標本中一次獻血者262份、二次及以上獻血者28份，經(jīng)TPPA確認檢測結(jié)果為，一次獻血者TPPA陽性率61.07%（160/262），二次及以上獻血者TPPA陽性率21.43%（6/28），見表11。

7 不同教育背景梅毒抗體篩檢不合格獻血者TPPA陽性率比較 290份梅毒抗體篩查不合格獻血者標本經(jīng)TPPA確認檢測結(jié)果為，初中及其它、高中、中專、大專、本科、研究生的TPPA陽性率分別為76.19%、64.36%、58.97%、64.00%、53.85%、25.64%。見表12。

表8 不同婚姻狀況梅毒抗體篩查不合格獻血者TPPA陽性率比較

表9 男性不同婚姻狀況梅毒抗體篩查不合格獻血者TPPA陽性率比較

表10 女性不同婚姻狀況梅毒抗體篩查不合格獻血者TPPA陽性率比較

表11 不同獻血次數(shù)梅毒抗體篩查不合格獻血者TPPA陽性率比較

表12 不同教育背景梅毒抗體篩查不合格獻血者TPPA陽性率比較

8 不同ABO血型梅毒抗體篩查不合格獻血者TPPA陽性率比較 290份梅毒抗體篩查不合格獻血者標本經(jīng)TPPA確認檢測結(jié)果為，A型、B型、O型和AB型的TPPA陽性率分別為45.98%、57.50%、65.59%和60.00%。見表13。

表13 不同ABO血型梅毒抗體篩查不合格獻血者TPPA陽性率比較

討 論

梅毒螺旋體血清學(xué)試驗多用作證實試驗，特別是隱性梅毒及一些非螺旋體抗原血清學(xué)試驗陰性而又懷疑為梅毒的患者[2]。TRUST可用于梅毒療效觀察、判愈、判定復(fù)發(fā)或再感染[2]。本研究梅毒抗體篩查不合格獻血者血液標本中TPPA陽性率為57.24%，與王艷彬等[3]報道的無償獻血者梅毒ELISA不合格結(jié)果的TPPA確證陽性率（56.43%）基本一致；本研究TPPA陽性者中TRUST陽性率30.12%且凝集滴度均≥1∶2，排除梅毒治療后的血清學(xué)固定現(xiàn)象，極有可能為梅毒再染、早期或晚期隱性梅毒。因此，針對血站梅毒抗體篩查不合格獻血者血液標本進一步開展TPPA確證、TRUST滴度檢測，對獻血者梅毒抗體檢測結(jié)果告知以及獻血者是否屏蔽提供理論依據(jù)，對于梅毒再染、隱性梅毒感染者做到早告知，能夠及時得到臨床治療，控制病情，防止傳播并感染他人，血站作為公益性衛(wèi)生機構(gòu)，開展梅毒抗體篩查不合格獻血者延伸性服務(wù)勢在必行。

梅毒螺旋體ELISA（TP-ELISA）是用經(jīng)純化及超聲裂解處理的梅毒螺旋體，或經(jīng)純化的梅毒螺旋體重組蛋白作為抗原包被固相板條，并采用雙抗原夾心法檢測血清中梅毒螺旋體IgG或IgM抗體。血站梅毒螺旋體感染標志物為梅毒螺旋體特異性抗體（梅毒），梅毒螺旋體感染標志物采用2個不同生產(chǎn)廠家的血清學(xué)檢測試劑進行檢測，酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）是血源梅毒篩查體外診斷試劑的血清學(xué)檢測方法[4]。梅毒螺旋體顆粒凝集試驗（TPPA）是用梅毒螺旋體提取物致敏明膠顆粒，此致敏顆粒與人血清中的抗梅毒螺旋體抗體結(jié)合產(chǎn)生可見的凝集反應(yīng)。TPPA多用作梅毒確證試驗，特異度和靈敏度都較高，不易出現(xiàn)假陽性反應(yīng)[5]。李仕娟[6]報道ELISA法與TPPA法的陽性符合率為99.12%，TPELISA法適用于大批量標本檢測血清梅毒抗體。因為TP-ELISA試劑的特異性與靈敏度呈反比，所以其特異性降低，假陽性也是不可避免的[7]。本研究結(jié)果顯示，TP-ELISA試劑一、試劑二的陽性檢出率無顯著性差異（P＞0.05），但試劑一的特異性（72.58%）、陽性預(yù)測值（83.00%）高于試劑二的特異性（58.77%）、陽性預(yù)測值（77.93%）。王艷彬等[3]報道在無償獻血者梅毒ELISA檢測中單試劑反應(yīng)性和灰區(qū)標本經(jīng)TPPA確證陽率為7.44%，但本研究中單試劑S/CO≥1.0和雙試劑1＞S/CO≥0.5（灰區(qū)）的血液標本中未檢出TPPA陽性標本。本研究中雙試劑S/CO值≥1.0時，TP-ELISA檢測不合格與TPPA陽性符合率為90.71%，略低于王艷彬等[8]報道的獻血者TP-ELISA檢測結(jié)果S/CO≥1.0時TPPA陽性符合率（93.82%）。因此，選擇靈敏度高、特異性好的TPELISA試劑，科學(xué)合理地設(shè)置灰區(qū)，可減少陽性標本漏檢和血液浪費。

為了解無償獻血者梅毒感染分布狀況，近年來，國內(nèi)部分血站調(diào)查并報道了無償獻血者在性別、婚姻、教育背景、獻血次數(shù)、ABO血型等不同因素下梅毒感染分布情況。李永福和趙紅娜等[9,10]均報道了無償獻血人群中女性梅毒感染率高于男性，但本研究結(jié)果顯示，男性梅毒抗體篩查不合格獻血者梅毒陽性率（57.31%）與女性梅毒抗體篩查不合格獻血者梅毒陽性率（57.14%）之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），與徐暢、徐進春、陳紅和孫蕊娟等[11-14]報道一致，說明梅毒陽性率與性別沒有明顯關(guān)系。ABO血型系統(tǒng)中不同血型梅毒抗體篩查不合格獻血者TPPA陽性率（A型45.98%、B型57.50%、O型65.59%、AB型60.00%）之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），與李永福等[9]報道一致，說明了梅毒感染與ABO血型之間尚不存在關(guān)聯(lián)。本研究結(jié)果分析，已婚梅毒抗體篩查不合格獻血者TPPA陽性率（68.78%）高于未婚者TPPA陽性率（35.64%）（P＞0.05），男性已婚梅毒抗體篩查不合格獻血者TPPA陽性率（70.18%）明顯高于未婚者TPPA陽性率（31.58%）（P＜0.05），女性已婚梅毒抗體篩查不合格獻血者TPPA陽性率（66.67%）高于未婚者TPPA陽性率（40.91%）（P＜0.01），孫蕊娟等[14]研究的已婚人群梅毒感染率高于未婚人群的報道一致，已婚人群感染率高的原因可能與性活躍程度密切相關(guān)。獻血1次者TPPA陽性率（61.07%）高于獻血2次及以上者TPPA陽性率（21.43%）（P＜0.05），與李永福等、孫蕊娟等[9,14]報道一致，首次獻血人群梅毒感染率明顯高于2次及上獻血人群，提示無償獻血工作中建立固定獻血隊伍是保障血液安全的基礎(chǔ)。徐暢等[11]報道獻血者的文化程度高低與梅毒感染陽性率成反比關(guān)系，尤其初中及以下低學(xué)歷獻血者梅毒陽性率較高。本研究結(jié)果為，不同教育背景梅毒抗體篩查不合格獻血者TPPA陽性率（初中及其它76.19%、高中64.36%、中專58.97%、大專64.00%、本科53.85%、研究生25.64%）之間差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），低學(xué)歷獻血者TPPA陽性率較高，進一步證實了李永福、陳紅、孫蕊娟和趙紅娜等[9,10,13,14]等報道，至于低教育背景人群陽性率較高可能與預(yù)防性傳播知識淡薄有關(guān)。

根據(jù)本研究結(jié)果分析，現(xiàn)針對梅毒抗體篩查不合格獻血者的血液報廢、結(jié)果告知和屏蔽提出如下建議：①梅毒抗體篩查不合格獻血者所獻的血液及其制品報廢。②梅毒抗體篩查不合格、梅毒確認陽性的獻血者屏蔽，參照確認結(jié)果進行獻血者告知。③梅毒抗體篩查不合格、梅毒確認陰性的獻血者不屏蔽，參照確認結(jié)果進行獻血者告知；待再次獻血前進行血液篩檢，篩檢結(jié)果合格者告知其可以再次獻血，篩檢結(jié)果不合格者屏蔽并告知。

綜上所述，為了保障血液安全，針對TP-ELISA篩查試劑在結(jié)果判讀標準中未設(shè)置灰區(qū)的，應(yīng)對篩查試劑性能進行監(jiān)控、評估，科學(xué)合理地設(shè)置灰區(qū)，以減少不必要的血液浪費。為了避免因假陽性結(jié)果回告給獻血者造成精神壓力，減少糾紛，增加獻血者對血站的信任感，對梅毒抗體篩查不合格獻血者血液標本進行梅毒確證試驗，參照確證結(jié)果進行獻血者告知，更好的為獻血者服務(wù)。參照梅毒確證結(jié)果進行科學(xué)合理地屏蔽獻血者，減少血源浪費和獻血者歸隊工作量。作為血站的無償獻血招募工作人員，除了宣傳無償獻血知識外，還應(yīng)開展與輸血相關(guān)的性傳播知識宣傳，加強獻血者咨詢，勸阻高危行為者自動放棄獻血或保密性棄血，建立低危固定獻血者隊伍，保障血液安全。