維磷葡鈣片質(zhì)量標準提升研究

王 靜，郭社民

（河南省濮陽市食品藥品檢驗檢測中心，河南 濮陽457000）

維磷葡鈣片是由葡萄糖酸鈣、磷酸氫鈣、甘油磷酸鈉、維生素B2、維生素D2組成的復(fù)方制劑，用于防治鈣鐵缺乏癥，如佝僂病及妊娠期和哺乳期鈣的補充。其現(xiàn)行質(zhì)量標準為《國家藥品標準·化學(xué)藥品地方標準上升國家標準（第五冊）》，但未對維生素B2的含量進行控制。本研究中參考文獻[1-6]，采用高效液相色譜（HPLC）法測定該制劑中維生素B2的含量，并考察了其含量均勻度，為該制劑的質(zhì)量標準提升提供參考?，F(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

1260型高效液相色譜儀（美國安捷倫公司），包括四元泵，在線脫氣機，紫外檢測器等；Sartorius CPA225D型電子分析天平（德國賽多利斯，精度為0.01 mg）。

1.2 試藥

維生素B2對照品（批號為100369-201214，含量98.7%，中國食品藥品檢定研究院）；維磷葡鈣片（市售品，批號分別為20180103，20180709，20180114，20181011，20181108，20181206）；甲醇、乙腈均為色譜純（美國Tedia公司），水為純化水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：XBridge C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：0.01 mol/L庚烷磺酸鈉的0.5%冰醋酸溶液-乙腈-甲醇-（80∶13∶7，V/V/V）；流速：1.0mL/min；檢測波長：444 nm；柱溫：30℃；進樣量：20 μL。

2.2 溶液制備

避光操作。取105℃干燥2 h的維生素B2對照品11.42 mg，精密稱定，置100 mL容量瓶中，加鹽酸溶液（1→2）2 mL，振搖，使維生素B2溶解，加水20 mL繼續(xù)振搖數(shù)分鐘，再加水稀釋至刻度，搖勻，作為對照品貯備液。精密量取對照品貯備液5 mL，置50 mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。取本品50片，研細，精密稱取適量（約相當于維生素B22mg），置200 mL容量瓶中，加鹽酸溶液（1→2）2 mL，振搖使溶解，加水40 mL繼續(xù)振搖數(shù)分鐘，再加水稀釋至刻度，搖勻，濾過，即得供試品溶液。按處方比例制備不含維生素B2的陰性對照樣品，并按供試品溶液項下方法制備陰性對照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

系統(tǒng)適用性試驗：取2.2項下供試品溶液、對照品溶液各20 μL，按擬訂色譜條件測定，色譜圖見圖1。結(jié)果理論板數(shù)按維生素B2峰計應(yīng)不低于3 500，分離度大于1.5，基線分離良好。

專屬性試驗：分別精密吸取對照品溶液、陰性對照品溶液各20 μL，按擬訂色譜條件測定，色譜圖見圖1。結(jié)果陰性對照品溶液色譜中，在與對照品溶液色譜相同保留時間處無干擾峰，表明方法專屬性良好。

線性關(guān)系考察：精密量取對照品貯備液0.4，0.6，0.8，1.0，1.2，1.4，1.6 mL，分別置10 mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻。按擬訂色譜條件分別進樣20 μL，記錄色譜圖，以質(zhì)量濃度（X，μg/mL）為橫坐標、峰面積（Y）為縱坐標進行線性回歸，得回歸方程Y=1.589 3+74.812 1X，r=0.999 9（n=7）。結(jié)果表明，維生素B2質(zhì)量濃度在4.508～18.032 μg/mL范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

精密度試驗：精密量取2.2項下對照品溶液20 μL，連續(xù)進樣6次，記錄峰面積。結(jié)果的RSD為0.36%（n=6），表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗：取同一份供試品溶液（樣品批號為20181206），于室溫下放置0，2，4，6，7，8 h，精密吸取20 μL注入液相色譜儀，記錄峰面積。結(jié)果的RSD為0.65%（n=6），表明供試品溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗：取同一批（批號為20180114）樣品，按2.2項下方法制備供試品溶液，重復(fù)測定6次。結(jié)果維生素B2的平均含量為99.89%，RSD為0.81%（n=6），表明方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗：取已知含量的同一批（批號為20180114，每片含量0.095 9 mg，平均片重0.592 5 g）樣品細粉約12.53 g，共9份，精密稱定，分別置200 mL容量瓶中，分為3組，每組3份。分別精密加入維生素B2對照品溶液（0.399 4 mg/mL）4，5，6 mL，依法制備供試品溶液，分別精密吸取20 μL注入液相色譜儀，按擬訂色譜條件進樣測定，計算回收率。結(jié)果見表1。

表1 維生素B2加樣回收試驗結(jié)果（n=9）

圖1 高效液相色譜圖

2.4 樣品含量及含量均勻度測定

含量測定：取6批樣品，依法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件進樣測定，按外標法以峰面積計算各樣品中維生素B2的含量。結(jié)果見表2。

表2 樣品含量及含量均勻度測定結(jié)果

含量均勻度測定：取6批樣品各10片，分別置10 mL容量瓶中，加鹽酸溶液（1→2）0.2 mL振搖使溶解，加水稀釋至刻度，搖勻，濾過，按擬訂色譜條件進樣測定，按外標法以峰面積計算每片的標示量，按2015年版《中國藥典（四部）》（通則0941）含量均勻度檢查法[7]，計算A+2.2 S和A+S。結(jié)果見表2。

3 討論

在流動相組分考察時，分別試用水-甲醇、水-乙腈-甲醇、0.5%冰醋酸溶液-甲醇及0.01 mol/L庚烷磺酸鈉的0.5%冰醋酸溶液-乙腈-甲醇流動相系統(tǒng)，結(jié)果表明，加入離子對試劑庚烷磺酸鈉可有效改善主峰的峰形、保留時間；通過調(diào)整各組分的比例，使流動相呈酸性，被測組分維生素B2在測定過程中處于酸性環(huán)境中，性質(zhì)更穩(wěn)定。故選用0.01mol/L庚烷磺酸鈉的0.5%冰醋酸溶液-乙腈-甲醇（80∶13∶7，V/V/V）為流動相。

維生素B2性質(zhì)不穩(wěn)定，遇光變質(zhì)更快，試驗需在避光條件下進行，采用棕色容量瓶配制對照品溶液和供試品溶液，且盡快測定，盡量縮短放置時間。

6批樣品中，維生素B2的含量測定結(jié)果中有5批低于標示量的90%；含量均勻度A+2.2 S和A+S均大于15.0，按2015年版《中國藥典（四部）》（通則0941）含量均勻度檢查法[7]判斷含量結(jié)果偏低，不符合規(guī)定。其原因一是由于該產(chǎn)品現(xiàn)行標準中無維生素B2的含量控制方法，廠家無法準確測定制劑中間品與成品的含量；二是維生素B2對光極不穩(wěn)定，在生產(chǎn)過程中，含量會降低。建議在產(chǎn)品的標準中增加維生素B2的含量測定及含量均勻度項目，以更好地進行質(zhì)量控制。