SIRT1、Phospho－SIRT1在結(jié)腸癌組織中的表達(dá)及臨床意義＊

龔 磊，呂真冰，喻 晶，任明揚(yáng)，田云鴻，彭 洪

1.川北醫(yī)學(xué)院第二臨床學(xué)院（四川省南充市中心醫(yī)院）胃腸外科（南充637000）；2.川北醫(yī)學(xué)院第二臨床學(xué)院（四川省南充市中心醫(yī)院）中西醫(yī)結(jié)合肛腸科（南充637000）

結(jié)腸癌作為一種常見的胃腸道惡性腫瘤，其發(fā)病率居全球常見惡性腫瘤的第三位，目前臨床上治療結(jié)腸癌的首選方法為手術(shù)切除并輔以化療［1］。沉默信息調(diào)節(jié)因子1（Silent information regulator 1，SIRT1）是煙酰胺腺嘌呤二核異酸輔酶依賴的去乙?；D(zhuǎn)移酶，是重要的抗衰老、抗代謝性疾病的蛋白［2］。SIRT1通過去乙?；谀[瘤發(fā)展中起到的作用，磷酸化的SIRT1（Phospho－SIRT1）是其去乙?；闹匾{(diào)節(jié)方式［3］。本研究檢測(cè) SIRT1、Phospho－SIRT1在結(jié)腸癌組織中的表達(dá)結(jié)果，分析兩者在結(jié)腸癌組織中的表達(dá)及臨床意義。

資料與方法

1 一般資料 選取2015年6月至2016年6月該院行手術(shù)切除的結(jié)腸癌存檔蠟塊和癌旁正常組織（距病變部位＞5cm處，且證實(shí)為無(wú)癌浸潤(rùn)）蠟塊各60例。其中，男性32例，女性28例；年齡37～78歲，平均（58.64±6.09）歲；I期3例，II期19例，Ⅲ期28例，Ⅳ期10例。納入標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)細(xì)胞學(xué)及組織學(xué)病理確診為結(jié)腸癌，可以明確腫瘤大小、部位、浸潤(rùn)程度；②無(wú)放化療治療史。排除標(biāo)準(zhǔn)：①術(shù)前經(jīng)影像學(xué)檢查無(wú)法確定TNM［4］分期；②已診斷為遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移者；③伴隨其它惡性腫瘤；④合并嚴(yán)重肝腎疾??；⑤患有血液系統(tǒng)疾病或傳染病等。兩組性別、年齡等一般資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

2 免疫組化方法［5］選取3μm厚度的切片，經(jīng)烤片水化后，修復(fù)抗原，封閉非特異性結(jié)合。試驗(yàn)中使用的一抗分別為：兔抗人 SIRT1、Phospho－SIRT1（pS47）、Ki67和鼠抗人P53單克隆抗體。均滴加DBA進(jìn)行顯色。陰性對(duì)照用PBS溶液代替，陽(yáng)性對(duì)照是SIRTl和Phospho－SIRT1陽(yáng)性標(biāo)本。

3 隨訪情況 采用門診和電話的方式隨訪3年，第1年，每3個(gè)月隨訪1次，第2～3年每6個(gè)月隨訪1次，末次隨訪時(shí)間為2019年6月。隨訪主要通過體格檢查、血常規(guī)、胸片、結(jié)腸鏡檢查確定患者傷口腫瘤的復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移情況。

4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 選用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件，計(jì)量資料采用計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，采用χ2檢驗(yàn)；單因素分析有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的則納入多因素分析，多因素分析采用采用Kaplan－Meier法繪制生存曲線，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1 SIRT1、Phospho－SIRT1在結(jié)腸癌組織中的表達(dá) SIRT1在癌組織和正常組織中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為66.67%（40／60）和25.00%（11／60），Phospho－SIRT1在癌組織和正常組織中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為46.67% （28／60）和 15.00% （8／60）。SIRT1、Phospho－SIRT1在結(jié)腸癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率均高于癌旁正常組織（P＜0.05），見表1。

表1 SIRT1、Phospho－SIRT1在結(jié)腸癌組織中的表達(dá)［例（%）］

2 60例患者SIRT1、Phospho－SIRT1表達(dá)與結(jié)腸癌臨床病理參數(shù)間的關(guān)系 TNM分期I～I(xiàn)I期的患者SIRT1、Phospho－SIRT1陽(yáng)性表達(dá)率低于Ⅲ～Ⅳ期患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。P53陽(yáng)性患者SIRT1陽(yáng)性表達(dá)率小于陰性表達(dá)率，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。Ki67陽(yáng)性患者Phospho－SIRT1陽(yáng)性表達(dá)率大于陰性表達(dá)率，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。但不同年齡、性別、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者SIRT1、Phospho－SIRT1陽(yáng)性表達(dá)率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表2。

3 影響結(jié)腸癌患預(yù)后生存的單因素分析 本研究選取60例結(jié)腸癌患者，總生存率為66.67%（40／60），SIRT1陽(yáng)性組和Phospho－SIRT1陽(yáng)性組3年生存率分別為55.00%（22／40）、53.57%（15／28）。單因素分析顯示，TNM分期I～I(xiàn)I期的患者3年生存率為86.36%高于Ⅲ～Ⅳ期患者55.26%，淋巴結(jié)有轉(zhuǎn)移的患者3年生存率44.44%低于淋巴結(jié)無(wú)轉(zhuǎn)移患者76.18%，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；SIRT1陽(yáng)性患者3年生存率為55.00%低于陰性患者90.00%，Phospho－SIRT1陽(yáng)性患者3年生存率為53.57%低于陰性患者78.13%，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），不同年齡、性別的結(jié)腸癌患者生存率比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差 異（P＞0.05）。見表3。

表2 60例患者SIRT1、Phospho－SIRT1表達(dá)與結(jié)腸癌臨床病理參數(shù)間的關(guān)系

表3 影響結(jié)腸癌患者預(yù)后生存的單因素分析

4 影響結(jié)腸癌患者預(yù)后生存的多因素分析 以結(jié)腸癌患者術(shù)后3年生存率為應(yīng)變量，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的單因素為自變量進(jìn)行賦值（TNM分期I～I(xiàn)I期＝1、Ⅲ～Ⅳ期＝0；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移：無(wú)＝1、有＝0；SIRT1：陰性＝1、陽(yáng)性＝0；Phospho－SIRT1表達(dá)：陰性＝1、陽(yáng)性＝0），Logistic回歸分析提示，TNMⅢ～Ⅳ分期、淋巴結(jié)有轉(zhuǎn)移、SIRT1和Phospho－SIRT1陽(yáng)性表達(dá)是影響結(jié)腸癌患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素（P＜0.05），見表4。

5 結(jié)腸癌患者在不同危險(xiǎn)因素影響下的生存曲線 結(jié)腸癌患者在不同TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和不同表達(dá)的SIRT1、Phospho－SIRT1情況下，術(shù)后3年的生存率曲線如圖1～4。

表4 影響結(jié)腸癌患者預(yù)后生存的多因素分析

圖1 不同TNM分期的結(jié)腸癌患者生存曲線

圖2 淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的結(jié)腸癌患者生存曲線

討 論

結(jié)腸癌是一種常見的惡性腫瘤，其發(fā)病率和病死率居高不下，由于飲食習(xí)慣的改變，我國(guó)確診的結(jié)腸癌患者逐年遞增［7］。結(jié)腸癌的發(fā)病機(jī)制和環(huán)境、遺傳等都有相關(guān)性，多個(gè)抑癌基因的失活推測(cè)可能與高脂肪高熱量而少膳食纖維的飲食有關(guān)［8］。針對(duì)直腸癌的新型抗癌藥物不斷出現(xiàn)，但對(duì)患者的生存預(yù)后改變不大，所以，積極開發(fā)可以對(duì)直腸癌進(jìn)行早起診斷的靶點(diǎn)是尤為重要的［9］。

SIRT1是煙酰胺腺嘌呤二核異酸輔酶依賴的去乙酰基轉(zhuǎn)移酶，是重要的抗衰老、抗代謝性疾病的蛋白［10］。既往研究指出，乙酰／去乙酰化是人體內(nèi)一種應(yīng)用廣泛的修飾手段，通過對(duì)不同底物的作用參與很多種生物學(xué)過程［11］。SIRT1通過去乙?；谀[瘤發(fā)展中起到的作用，磷酸化的SIRT1（Phospho－SIRT1）是其去乙?；闹匾画h(huán)，對(duì)SIRT1的調(diào)節(jié)起一定作用［12］。李合等［13］指出，結(jié)腸癌癌患者SIRT1水平明顯高于健康者。張新元等［14］指出，SIRT1在包括皮膚癌、結(jié)腸癌、卵巢癌在內(nèi)的多種惡性腫瘤中的發(fā)生、發(fā)展中可能發(fā)揮著雙重作用。于娜等［15］指出，SIRT1可以通過影響標(biāo)記蛋白的轉(zhuǎn)移促進(jìn)癌細(xì)胞的遷移。本研究中，SIRT1、Phospho－SIRT1在結(jié)腸癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率均高于癌旁正常組織，說(shuō)明SIRT1和Phospho－SIRT1在腫瘤組織中均呈高表達(dá)。與黃立勇等［16］既往研究一致。

野生型P53是已知體內(nèi)最重要的一種抑癌基因，主要是通過調(diào)劑轉(zhuǎn)錄過程影響細(xì)胞的生長(zhǎng)，而突變型P53則是一種促癌基因，在多種惡性腫瘤的組織中可以觀察到突變型P53的存在［17］。利用免疫組化法檢測(cè)到的腫瘤組織的P53屬于突變型的促癌基因［18］。Ki67是一種與細(xì)胞有絲分裂密切相關(guān)的核抗原，反映了腫瘤增殖的狀態(tài)，現(xiàn)在已經(jīng)被廣泛應(yīng)用于檢測(cè)腫瘤增殖的判斷［19］。賀亞敏等［20］指出，P53可能成為預(yù)測(cè)結(jié)腸癌高度轉(zhuǎn)移的新分子標(biāo)志物。石文靜等［21］分析組織內(nèi)Ki67的蛋白表達(dá)與結(jié)腸癌細(xì)胞增殖和凋亡相關(guān)。本研究分析SIRT1的表達(dá)水平與患者的TNM分期和P53表達(dá)相關(guān)，認(rèn)為SIRT1在結(jié)腸癌中是一個(gè)不利的預(yù)后指標(biāo)。Phospho－SIRT1的表達(dá)水平與患者的TNM分期和Ki67相關(guān)，Phospho－SIRT1與細(xì)胞的增殖有關(guān)。本研究結(jié)果與既往研究［22］相符。

本研究選取60例結(jié)腸癌患者，總生存率為66.67%，單因素和多因素分析顯示，TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、SIRT1、Phospho－SIRT1是影響結(jié)腸癌患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，與董玲玲等［23］研究相似。

綜上所述，SIRT1和Phospho－SIRT1在結(jié)腸癌組織呈高表達(dá)，其中SIRT1的表達(dá)水平與患者的TNM分期和P53表達(dá)相關(guān)，Phospho－SIRT1的表達(dá)水平與患者的TNM分期和Ki67相關(guān)。分析術(shù)后3年結(jié)腸癌患者生存率，提示TNM Ⅲ～Ⅳ分期、淋巴結(jié)有轉(zhuǎn)移、SIRT1和Phospho－SIRT1陽(yáng)性表達(dá)是影響結(jié)腸癌患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。SIRT1和Phospho－SIRT1與腫瘤形成有相關(guān)性，可能直接影響了結(jié)腸癌患者的預(yù)后生存情況。本研究局限于小樣本和隨訪時(shí)間，因此要提高結(jié)果的客觀性還需更進(jìn)一步的開展較大規(guī)模、多中心的研究，并延長(zhǎng)術(shù)后隨訪時(shí)間；另外本研究選擇的磷酸化抗體只針對(duì)SIRT1的某一個(gè)磷酸化位點(diǎn)，不能代表SIRT1的全部磷酸化狀態(tài)，有待制做針對(duì)多個(gè)磷酸化位點(diǎn)的磷酸化抗體。