• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    RON及其致癌型變異體RONΔ160在乳腺癌中的表達(dá)

    2020-04-09 04:38:13許國富黃國強
    中國現(xiàn)代醫(yī)生 2020年2期
    關(guān)鍵詞:免疫組化乳腺乳腺癌

    許國富 黃國強

    [摘要] 目的 探討RON及其致癌型變異體RONΔ160在60例乳腺癌組織中的表達(dá)特征及其在診斷、臨床靶向治療及預(yù)后判斷中的潛在價值。 方法 用免疫組化、qPCR、Western blot等方法分析RON及RONΔ160在我院2016年10月~2018年1月收集的30例正常乳腺組織、30例乳腺良性腫瘤、60例乳腺癌患者及相對應(yīng)的60例癌旁組織中的表達(dá)特征及其與乳腺癌臨床分期、復(fù)發(fā)、組織學(xué)分型和組織轉(zhuǎn)移的關(guān)系。 結(jié)果 免疫組化結(jié)果顯示,RON在正常和癌旁及良性乳腺腫瘤組織中都低表達(dá)而在乳腺癌中高表達(dá);而RONΔ160在正常和癌旁都不表達(dá),在良性乳腺腫瘤組織中有輕微表達(dá),而在乳腺癌中高表達(dá)。qPCR及Western blot結(jié)果與免疫組化結(jié)果一致。而結(jié)合臨床分析發(fā)現(xiàn)RON及RONΔ160的高表達(dá)與臨床分期、組織學(xué)分級及是否發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)且具有統(tǒng)計學(xué)差異。 結(jié)論 RON及RONΔ160的表達(dá)與乳腺癌的發(fā)生相關(guān)及與其臨床分期和組織學(xué)分級及是否淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān),是乳腺癌診斷、臨床靶向治療及預(yù)后判斷的關(guān)鍵標(biāo)志。

    [關(guān)鍵詞] 乳腺癌;RON;RONΔ160;臨床分期

    [中圖分類號] R735.2? ? ? ? ? [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A? ? ? ? ? [文章編號] 1673-9701(2020)02-0005-04

    Expression of RON and its oncogenic variant RON Δ160 in breast cancer

    XU Guofu? ?HUANG Guoqiang

    Department of Pathology, the Second Affiliated Hospital of Zhejiang University of Traditional Chinese Medicine, Hangzhou? ?310005, China

    [Abstract] Objective To investigate the expression characteristics of RON and its oncogenic variant RON Δ160 in 60 cases of breast cancer and their potential value in diagnosis, clinical targeted therapy and prognosis. Methods Immunohistochemistry, qPCR, Western blot and other methods were used to analyze the expression characteristics of RON and RONΔ160 in 30 normal breast tissues, 30 benign breast tumors, 60 para-breast cancer patients and 60 cases breast cancer tissues in our hospital from October 2016 to January 2018, and their relationship with clinical stage, recurrence, histological type and tissue metastasis of breast cancer. Results The results of immunohistochemistry showed that RON was lowly expressed in normal, para-breast cancer tissues and benign breast tumor tissues and highly expressed in breast cancer. RONΔ160 was not expressed in normal and para-breast cancer tissues, slightly expressed in benign breast tumor tissues, while highly expressed in breast cancer. qPCR and Western blot were consistent with the results of immunohistochemistry. Combined with clinical analysis, it was found that high expression of RON and RONΔ160 was associated with clinical stage, histological grade, and whether lymph node metastasis occurred, with statistically significant difference. Conclusion The expression of RON and RONΔ160 is positively correlated with the occurrence of breast cancer and its clinical stage and histological grade and lymph node metastasis. It is a key marker for breast cancer diagnosis, clinical targeted therapy and prognosis.

    [Key words] Breast cancer; RON; RONΔ160; Clinical stage

    乳腺癌作為女性最常見的惡性腫瘤,已經(jīng)威脅到了越來越多女性的生活,且發(fā)病趨勢年輕化。受體型酪氨酸激酶(RON)屬于MET原癌基因家族成員[1],研究表明與正常組織相比,RON在乳腺癌組織中高表達(dá),且與乳腺癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)[2],但具體機制不知。RON表達(dá)的變化??梢酝ㄟ^產(chǎn)生不同的mRNA剪切體、選擇性轉(zhuǎn)錄、蛋白平截等來產(chǎn)生不同的剪切異構(gòu)體,現(xiàn)已知有9種RON變異體[3],研究顯示部分與癌癥的發(fā)病相關(guān)。其中RONΔ160具有誘導(dǎo)細(xì)胞轉(zhuǎn)化、刺激腫瘤形成、促進(jìn)腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的功能,同時還能誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞發(fā)生上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化及改變RON的磷酸酶活性[4,5]。由此我們猜測乳腺上皮細(xì)胞的癌變及惡化可能與RON的異型性表達(dá)相關(guān)。因此,本研究對我院2016年10月~2018年1月收集的60例乳腺癌患者及相對應(yīng)的60例癌旁組織、30例正常乳腺組織及30例乳腺良性腫瘤組織用免疫組化、實時熒光定量PCR(Real-time qPCR,qPCR)、Western blot等方法對RON及致癌性變異體RONΔ160在乳腺癌組織中的表達(dá)特征,及其與乳腺癌診斷的關(guān)系、與臨床的相關(guān)性進(jìn)行了分析,現(xiàn)報道如下。

    1 資料與方法

    1.1 一般資料

    收集我院2016年10月~2018年1月60例乳腺癌患者及相對應(yīng)的60例癌旁組織,同時收集30例正常乳腺組織和30例乳腺良性腫瘤組織。乳腺癌患者性別女,年齡25~81歲,中位年齡51歲。腫瘤直徑0.61~5.2 cm,平均3 cm。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移35例(58%)。組織學(xué)分級:高、中級分化46例(77%),低級分化14例(23%)。臨床分期:Ⅰ期4例(6.7%),Ⅱ期6例(10.0%),Ⅲ/Ⅳ期50例(83.3%)。

    1.2 方法

    1.2.1 實驗試劑? 4%PFA上海翊圣,TaKaRa RNAiso試劑盒,免疫組化試劑盒碧云天,逆轉(zhuǎn)錄試劑盒,SYBR購自TaKaRa,抗體購自CST,熒光定量PCR儀,包埋切片機,顯微鏡等儀器。

    1.2.2 免疫組化? 乳腺組織經(jīng)收集后4%PFA固定2 d后,用石蠟進(jìn)行包埋,切成4 μm厚的切片后用于免疫組化染色。切片梯度脫蠟后,抗原修復(fù),之后恢復(fù)室溫,封閉1 h后,一抗過夜,此后以推薦濃度滴加相應(yīng)二抗37℃濕盒孵育20~30 min,PBS搖床漂洗5 min×3次,3% H2O2封閉10 min去除內(nèi)源性過氧化物酶。DAB顯色后,蘇木素復(fù)染,鹽酸酒精分化后反藍(lán),此后用中性樹脂封片。以PBS為陰性,已知RON及RONΔ160表達(dá)組織為陽性,觀察著色情況。根據(jù)每張切片的陽性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)和染色強度計分的乘積來判定,<2分為陰性,2~3分為弱陽性,4~6分為陽性,>6分為強陽性。

    1.2.3 qPCR? 用TaKaRa RNAiso試劑盒來提取組織中的總RNA后用分光光度計測定總mRNA的濃度。測定外濃度后用于逆轉(zhuǎn)成cDNA,所得產(chǎn)物用于熒光定量,20 μL體系,10 μL SYBR,上下游引物各0.5 μL,逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物1 μL,雙蒸水8 μL。以18 s作為內(nèi)參基因。數(shù)值以(RQ=2-△△Ct)進(jìn)行比較。CT=靶基因CT值-內(nèi)參考基因子CT值。

    1.3 觀察指標(biāo)

    Western blot顯示結(jié)果及免疫組化染色情況和qPCR的比值與臨床之間的關(guān)系。

    1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

    數(shù)據(jù)結(jié)果用SPSS12.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析。計量資料采用t 檢驗,計數(shù)資料行χ2檢驗,P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 RON及RON△160在乳腺癌組織中表達(dá)情況

    封三圖1免疫組化結(jié)果所示,RON在乳腺的正常組織、乳腺癌癌旁組織及乳腺癌良性腫瘤中的表達(dá)量較低,而在乳腺癌中呈現(xiàn)出明顯的高表達(dá)狀態(tài);RONΔ160在正常和乳腺癌癌旁組織中不表達(dá),在良性乳腺腫瘤組織中輕微表達(dá),而在乳腺癌中呈高表達(dá)狀態(tài)。表1的qPCR及圖1的Western blot實驗的結(jié)果也證實了以上在免疫組化中得到的結(jié)論。

    表1? qPCR檢測RON及RONΔ160在不同類型乳腺組織的表達(dá)量比較(x±s)

    2.2 RON及RONΔ160的表達(dá)與乳腺癌進(jìn)展的關(guān)系

    將Western blot結(jié)果分成相應(yīng)的四個等級,陰、弱、中、強。然后通過結(jié)合臨床收集資料后進(jìn)行分析。由表2,3可知RON及RONΔ160表達(dá)高低與乳腺癌是否發(fā)生淋巴轉(zhuǎn)移相關(guān),且RON及RONΔ160表達(dá)越高的患者,組織學(xué)分級及臨床分期都越高。

    表2、3顯示,RON及RONΔ160的表達(dá)量與乳腺癌患者的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān),在乳腺癌患者中,兩者的表達(dá)量越高預(yù)示著腫瘤的轉(zhuǎn)移,同時也意味著組織學(xué)分級及臨床的病理分期越高,并且三個指標(biāo)都具有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)。

    表2? ?RON在不同病理分型分級的乳腺癌樣本中的表達(dá)量[n(%)]

    表3? RONΔ160在不同病理分型分級的乳腺癌樣本中的表達(dá)量[n(%)]

    3 討論

    乳腺癌作為危害女性健康的首要疾病,成為表達(dá)女性主要病亡原因之一。且其近年來有發(fā)病比率升高及發(fā)病患者呈年輕化等趨勢[6]。乳腺癌作為一種高度異質(zhì)性腫瘤,目前的療法是以手術(shù)為主的化療、放療、生物及內(nèi)分泌治療等綜合療法,但是療效不佳。隨著近年來臨床研究和基礎(chǔ)研究的相結(jié)合,科研工作者發(fā)現(xiàn)很多信號通路都參與到乳腺癌的發(fā)生發(fā)展過程中,如PR、HER-2、Ki-67、BRCA1、BRCA2等分子通過對不同信號通路的調(diào)控來影響乳腺癌的發(fā)病進(jìn)程[7,8],通過對乳腺癌患者這些基因的檢測診斷后進(jìn)行分子分型治療,能夠?qū)崿F(xiàn)對乳腺癌患者的精準(zhǔn)醫(yī)療同時能夠有效的提高乳腺癌患者的預(yù)后生存水平[9]。而隨著基礎(chǔ)研究的深入及與臨床的結(jié)合,RON與乳腺癌的關(guān)系逐漸被研究者關(guān)注。

    RON作為一種受體型酪氨酸激酶,是MET家族的一員,首先作為一種原癌基因被認(rèn)識。最先在人的皮膚角化細(xì)胞中發(fā)現(xiàn),后研究表明其表達(dá)具有組織和細(xì)胞特異性,主要表達(dá)于上皮細(xì)胞。在肺泡、甲狀腺等處幾乎全部缺失。作為其唯一配體,巨噬細(xì)胞刺激蛋白(MSP)與其結(jié)合有關(guān)[10],能使RON快速二聚化后影響下游信號通路從而影響細(xì)胞行為。近年來,研究表明RON的信號失常是腫瘤發(fā)生及惡化的原因之一。現(xiàn)已在多種癌癥中發(fā)現(xiàn)其異?;罨彤惓1磉_(dá),但表現(xiàn)形式不同,大致分為表達(dá)增高,剪切異構(gòu)體的生成及與下游信號共同激活等幾種形式。此外,RON與信號轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白間的功能交聯(lián)可導(dǎo)致腫瘤進(jìn)展和惡變[11-12]。

    同時基礎(chǔ)研究表明,RON的表達(dá)對于胚胎的正常發(fā)育具有必須的作用。RON全敲轉(zhuǎn)基因小鼠會死于胚胎形成期。而轉(zhuǎn)錄因子SP1(transcription factor Sp1,SP1)對于RON的激活具有重要的作用,SP1導(dǎo)致的RON的激活與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。

    近年來研究表明,RON在正常乳腺組織中低表達(dá),而在50%的臨床分型乳腺癌樣本中高表達(dá),且基礎(chǔ)小鼠體內(nèi)研究表明,構(gòu)建RON過表達(dá)或RON受體組成性激活的轉(zhuǎn)基因小鼠后乳腺組織RON表達(dá)明顯增高,乳腺增生和乳腺細(xì)胞高度轉(zhuǎn)移。RON過表達(dá)會導(dǎo)致乳腺癌的轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)[13],當(dāng)乳腺癌沒有出現(xiàn)淋巴轉(zhuǎn)移時,RON和c-MET之間的共表達(dá)的產(chǎn)生也會導(dǎo)致患者的預(yù)后變差,十年生存率僅11.8%,遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于無兩者表達(dá)的患者的生存率,提示我們兩者可能相互協(xié)同作用,促進(jìn)了乳腺癌的轉(zhuǎn)移及侵襲[14]。而MSP和RON位于染色體的3p21位置,研究表明兩者在癌癥中,同時該基因區(qū)在包括乳腺癌在內(nèi)的多種腫瘤和癌癥細(xì)胞系中發(fā)生基因擴增,該擴增可能會導(dǎo)致MSP或RON在乳腺癌患者中呈高表達(dá)狀態(tài)[15-16],從而導(dǎo)致乳腺癌的惡化。而體外實驗表明,RON過表達(dá)會導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞的遷移侵襲能力增強,抑制腫瘤細(xì)胞凋亡,促進(jìn)細(xì)胞的增殖。而抑制RON的活性則會出現(xiàn)相反的結(jié)果。

    但目前對于RON如何導(dǎo)致乳腺癌侵襲和轉(zhuǎn)移的機制尚不清楚。而其剪切異構(gòu)體表達(dá)的變化可能是導(dǎo)致乳腺癌發(fā)生及惡化的原因。RON的改變同時常常與選擇性前-mRNA剪接、蛋白的截短以及選擇性轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生RON變異體生成相伴隨[17]。在各種原發(fā)癌樣本和腫瘤細(xì)胞系中,目前至少有9個RON變異體已被識別出來,包括RONΔ160、RONΔ165、RONΔ155、RONΔ170、RONE5/6in等。根據(jù)缺陷部位的不同,RON變異體可以分為組成型激活、致瘤性或無生物活性[18]。而在乳腺癌等腫瘤中,主要的以RON△155、RONΔ165,RONΔ160出現(xiàn)較高的表達(dá)[19]。其中RONΔ160的作用是誘導(dǎo)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化,通過各種因子刺激腫瘤發(fā)生,提高腫瘤的遷移侵襲能力。而RONΔ160的形成是由于RON的5號及6號外顯子109個氨基酸的缺失形成的,使得其在細(xì)胞外的半胱氨酸殘基失衡,從而導(dǎo)致自身二聚體的形成,引發(fā)持續(xù)激活[20-21],從而誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的內(nèi)生長相關(guān)信號處于級聯(lián)激活狀態(tài),導(dǎo)致腫瘤在體內(nèi)的持續(xù)增長。同時研究表明,RONΔ160可以誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞發(fā)生上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化,腫瘤細(xì)胞發(fā)生上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的過程中,細(xì)胞黏連相關(guān)蛋白如E-鈣粘蛋白等表達(dá)減少,而間質(zhì)細(xì)胞相關(guān)蛋白表達(dá)量上升,細(xì)胞變成梭形后具有更強的遷移和侵襲能力。因此我們推測RON過表達(dá)導(dǎo)致的乳腺癌的轉(zhuǎn)移及惡化可能與其剪切變異體RONΔ160的異常表達(dá)相關(guān)。

    本研究首先用免疫組化的方法檢測了RON在乳腺組織的表達(dá),結(jié)果顯示RON在正常組織中及癌旁和良性乳腺腫瘤中都表達(dá)量較低,而在乳腺癌組織中卻異常高表達(dá)。同時,獲取特異制備的RONΔ160抗體后,同樣用免疫組化的方法對相關(guān)組織進(jìn)行檢測。發(fā)現(xiàn)RONΔ160在正常組織及癌旁組織中都不表達(dá),在良性的乳腺腫瘤組織中有輕微表達(dá),而在乳腺癌中卻呈現(xiàn)高表達(dá)。同時用熒光定量以及Western blot來檢測兩者在不同乳腺組織中的表達(dá),結(jié)果都和組化顯示的結(jié)果一致,證明在乳腺癌中RON的高表達(dá)導(dǎo)致了RONΔ160的高表達(dá),有可能是引起RON過表達(dá)所致乳腺癌的遷移和侵襲能力增強及惡化的原因。此后收集60例乳腺癌患者病灶及癌旁組織,通過Western blot實驗結(jié)合臨床記錄發(fā)現(xiàn)RON和RONΔ160高表達(dá)的患者的臨床分期以及組織學(xué)分級等級高,同時其高表達(dá)與淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移的發(fā)生相關(guān)。且結(jié)果顯示具有統(tǒng)計學(xué)差異。

    綜上所述,RON和RONΔ160在乳腺癌組織中相比正常組織高表達(dá),并且其高表達(dá)導(dǎo)致了乳腺癌患者病情的惡化及淋巴轉(zhuǎn)移。因此對RON和RONΔ160在乳腺癌患者的異常表達(dá)及對腫瘤的影響,使得其有可能成為腫瘤進(jìn)行分子分型的標(biāo)志。同時可以作為臨床上判斷腫瘤惡性程度及是否轉(zhuǎn)移的標(biāo)志。而對RON和RONΔ160表達(dá)與乳腺癌患者的耐藥與預(yù)后的相關(guān)性還有待研究。同時,臨床和基礎(chǔ)上對RON和RONΔ160在細(xì)胞生物學(xué)上如何影響細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)來影響細(xì)胞的生物學(xué)行為將成為重要及必要的研究。

    [參考文獻(xiàn)]

    [1] Wang MH,Wang D,Chen YQ. Oncogenic and invasive potentials of human macrophage stimulating protein receptor,the RON receptor tyrosine kinase[J]. Carcinogenesis,2003,23(8):1291-1300.

    [2] Zinser GM,Leonis MA,Toney K,et al.Mammary-specific Ron receptor overexpression induces highly metastatic mammary tumors associated with beta-catenin activation[J].Cancer Res,2006,66(24):11967-11974.

    [3] Lu Yi,Yao HP,Wang MH. Multiple variants of the RON receptor tyrosine kinase:Biochemical properties,tumorigenic activities, and potential drug targets[J]. Cancer Letters,2007,257(2):157-164.

    [4] Kretschmann KL,Eyob H,Buys SS,et al.The macrophage stimulating protein /Ron pathway as a potential therapeutic target to impede multiple mechanisms involved in breast cancer progression[J].Curr Drug Targets,2010,11(9):1157-1168.

    [5] Greenbaum A,Rajput A,Wan G.RON kinase isoforms demonstrate variable cell motility in normal cells[J].Heliyon,2016,2(9):e00153

    [6] Goldhirsch A,Wood WC,Coates AS,et al. Strategies for subtypes-dealing with the diversity of breast cancer:Highlights of the St.Gallen international expert consensus on the primary therapy of early breast cancer 2011[J]. Ann Oncol,2011,22(8):1736-1747.

    [7] Robidoux A,Tang G,Rastogi P,et al. Lapatinib as a componen of neoadjuvant therapy for HER2-positive operable breast cancer(NSABP protocol B-41):An open label,randomised phase 3 trial[J]. Lancet Oncol,2013, 14(12):1183-1192.

    [8] Venkitaraman AR. Cancer suppression by the chromosome custodians,BRCA1 and BRCA2[J].Science,2014, 343(6178):1470-1475.

    [9] 李挺.乳腺癌分子分型及臨床意義[J].中國實用外科雜志,2011,31(10):952-954.

    [10] Wang MH,Lee W,Luo YL,et al.Altered expression of the RON receptor tyrosine kinase in various epithelial cancers and its contribution to tumourigenic phenotypes in thyroid cancer cells[J].J Pathol,2007,213(4):402-411.

    [11] Sehrawat A,Singh SV.Short-form RON overexpression augments benzyl isothiocyanate-induced apoptosis in human breast cancer cells[J]. Mol Carcinog,2016,55(5):473-485.

    [12] 馬琪,虞碧霞,陳俊豐,等.受體型酪氨酸激酶RON及其在惡性腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用研究進(jìn)展[J].中國藥理學(xué)與毒理學(xué)雜志,2016,30(7):784-789.

    [13] Camp ER,Liu W,F(xiàn)an F,et al. RON,a tyrosine kinase receptor involved in tumor progression and metastasis[J].Annals of Surgical Oncology,2015,12(4):273-281.

    [14] Thangasamy A,Rogge J,Ammanamanchi S.Regulation of RON tyrosine kinase-mediated invasion of breast cancer cells[J].J Biol Chem,2008,283(9):5335-5343.

    [15] Zabarovsky ER,Lerman MI,Minna JD,et al.Tumor suppressor genes on chromosome 3p involved in the pathogenesis of lung and others cancers[J].Oncogene,2002, 21:6915-6935.

    [16] Welm AL,Sneddon JB,Taylor C,et al. The macrophage stimulating protein pathway promotes metastasis in a mouse model for breast cancer and predicts poor prognosis in humans[J].Proc Natl Acad Sci USA,2007,104(18):7570-7575.

    [17] Chakedis J,F(xiàn)rench R,Babicky M,et al. A novel protein isoform of the RON tyrosine kinas receptor transforms human pancreatic duct epithelial cells[J]. Oncogene,2016, 35(25):3249-3259.

    [18] Wang MH,Kurtz AL,Chen YQ.Identification of a novel splicing product of the RON receptor tyrosine kinase in human colorectal carcinoma cells[J]. Carcinogenesis,2000, 21:1507-1512.

    [19] Zhou YQ,He C,Chen YQ,et al. Altered expression of the RON receptor tyrosine kinase in human colorectal adenocarcinomas:Generation of different splicing variants and their oncogenic potential[J]. Oncogene,2003, 22:186-197.

    [20] Ronsin C,Muscatelli F,Mattei MG,et al. A novel putative receptor protein tyrosine kinase of the met family[J].Oncogene,1993,8:1195-1202.

    [21] Zhang K,Zhou YQ,Yao HP,et al. Alterations in a defined extracellular region of the RON receptor tyrosine kinase promote RON-mediated motile and invasive phenotypes in epithelial cells[J]. Int J Oncol,2010;36:255-264.

    (收稿日期:2019-07-09)

    猜你喜歡
    免疫組化乳腺乳腺癌
    絕經(jīng)了,是否就離乳腺癌越來越遠(yuǎn)呢?
    中老年保健(2022年6期)2022-08-19 01:41:48
    夏枯草水提液對實驗性自身免疫性甲狀腺炎的治療作用及機制研究
    乳腺癌是吃出來的嗎
    嬰幼兒原始黏液樣間葉性腫瘤一例及文獻(xiàn)復(fù)習(xí)
    結(jié)直腸癌組織中SOX9與RUNX1表達(dá)及其臨床意義
    胸大更容易得乳腺癌嗎
    體檢查出乳腺增生或結(jié)節(jié),該怎么辦
    別逗了,乳腺癌可不分男女老少!
    祝您健康(2018年5期)2018-05-16 17:10:16
    得了乳腺增生,要怎么辦?
    媽媽寶寶(2017年2期)2017-02-21 01:21:22
    子宮瘢痕妊娠的病理免疫組化特點分析
    一二三四在线观看免费中文在| 亚洲av五月六月丁香网| 淫妇啪啪啪对白视频| 色av中文字幕| 久久久国产成人精品二区| 三级毛片av免费| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 国产精华一区二区三区| 丝袜人妻中文字幕| 俄罗斯特黄特色一大片| 亚洲九九香蕉| a级毛片a级免费在线| 国产欧美日韩一区二区三| 91字幕亚洲| 女同久久另类99精品国产91| 国产探花在线观看一区二区| 99久久综合精品五月天人人| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| av有码第一页| 国产不卡一卡二| 久久亚洲精品不卡| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 五月伊人婷婷丁香| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 久久久久久九九精品二区国产 | 国产欧美日韩精品亚洲av| 国产精品,欧美在线| 免费高清视频大片| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 国产高清视频在线观看网站| 丰满人妻一区二区三区视频av | 麻豆国产av国片精品| 在线观看美女被高潮喷水网站 | 国产高清视频在线播放一区| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 久久久久久人人人人人| 免费在线观看影片大全网站| 一进一出抽搐gif免费好疼| 999精品在线视频| 18禁观看日本| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 男女午夜视频在线观看| 男女午夜视频在线观看| 男女午夜视频在线观看| 亚洲自拍偷在线| 亚洲片人在线观看| 国产不卡一卡二| 久久99热这里只有精品18| 男女做爰动态图高潮gif福利片| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 男女午夜视频在线观看| www.自偷自拍.com| 日韩精品青青久久久久久| 国产99白浆流出| 久久精品人妻少妇| 日韩免费av在线播放| 国产av在哪里看| 搡老岳熟女国产| 在线观看一区二区三区| 日韩三级视频一区二区三区| 亚洲av美国av| 黄色视频不卡| 国产av不卡久久| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 听说在线观看完整版免费高清| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 一夜夜www| 1024视频免费在线观看| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 最近在线观看免费完整版| 午夜老司机福利片| 欧美极品一区二区三区四区| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 淫妇啪啪啪对白视频| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| av免费在线观看网站| 老汉色∧v一级毛片| 999久久久国产精品视频| 日韩成人在线观看一区二区三区| 国产一区二区在线观看日韩 | 亚洲av电影不卡..在线观看| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 中文字幕高清在线视频| 欧美精品啪啪一区二区三区| 麻豆久久精品国产亚洲av| 国产野战对白在线观看| 美女黄网站色视频| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 欧美成人一区二区免费高清观看 | 欧美黄色淫秽网站| 亚洲第一电影网av| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看 | 国产亚洲欧美98| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 国产亚洲精品综合一区在线观看 | 桃红色精品国产亚洲av| 性欧美人与动物交配| 级片在线观看| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 最好的美女福利视频网| 丰满人妻一区二区三区视频av | 可以在线观看的亚洲视频| 在线观看免费午夜福利视频| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 女警被强在线播放| 日韩有码中文字幕| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 很黄的视频免费| 亚洲一区高清亚洲精品| 欧美成人免费av一区二区三区| 夜夜夜夜夜久久久久| 欧美黄色淫秽网站| 精品午夜福利视频在线观看一区| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 国内精品久久久久久久电影| 国产日本99.免费观看| 午夜老司机福利片| 午夜老司机福利片| 99热6这里只有精品| 国产欧美日韩一区二区精品| 母亲3免费完整高清在线观看| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放 | 九色国产91popny在线| 成人18禁在线播放| 亚洲欧美精品综合久久99| 在线观看免费午夜福利视频| 欧美成狂野欧美在线观看| 这个男人来自地球电影免费观看| 女警被强在线播放| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 老司机午夜福利在线观看视频| √禁漫天堂资源中文www| 国产激情欧美一区二区| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 91在线观看av| 两个人的视频大全免费| 久久欧美精品欧美久久欧美| 亚洲一区二区三区色噜噜| 国产成人啪精品午夜网站| 两个人看的免费小视频| 中文资源天堂在线| 国产高清视频在线播放一区| avwww免费| 91成年电影在线观看| www.www免费av| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 久久久久久久久免费视频了| 亚洲一区中文字幕在线| 国产午夜福利久久久久久| 亚洲成人精品中文字幕电影| ponron亚洲| 国产片内射在线| 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 黄色丝袜av网址大全| 精品国内亚洲2022精品成人| 亚洲av五月六月丁香网| 最近最新中文字幕大全免费视频| 一个人免费在线观看电影 | 欧美精品亚洲一区二区| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 麻豆久久精品国产亚洲av| 国内揄拍国产精品人妻在线| 亚洲乱码一区二区免费版| 久久久国产欧美日韩av| 少妇被粗大的猛进出69影院| 丰满人妻一区二区三区视频av | 亚洲五月婷婷丁香| 久99久视频精品免费| 精品无人区乱码1区二区| 欧美成人免费av一区二区三区| 高潮久久久久久久久久久不卡| 欧美乱色亚洲激情| 欧美精品亚洲一区二区| 老司机靠b影院| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 丰满人妻一区二区三区视频av | 亚洲av熟女| 亚洲人成电影免费在线| 亚洲一区高清亚洲精品| 亚洲avbb在线观看| 欧美成人免费av一区二区三区| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 国产成人欧美在线观看| www.熟女人妻精品国产| 久久人妻av系列| 丁香六月欧美| 国产激情偷乱视频一区二区| 亚洲专区字幕在线| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 久久久久久九九精品二区国产 | 香蕉国产在线看| 国产av又大| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 国产av一区在线观看免费| 啦啦啦韩国在线观看视频| 黄色毛片三级朝国网站| 又黄又粗又硬又大视频| 欧美日韩精品网址| 久久婷婷成人综合色麻豆| 国产精品av视频在线免费观看| 国产成年人精品一区二区| 我要搜黄色片| 中国美女看黄片| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 国产探花在线观看一区二区| 亚洲专区国产一区二区| 老汉色∧v一级毛片| 亚洲全国av大片| 草草在线视频免费看| 免费高清视频大片| 国产高清有码在线观看视频 | 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 九色国产91popny在线| 欧美日本视频| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 三级国产精品欧美在线观看 | 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 亚洲片人在线观看| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 国产又黄又爽又无遮挡在线| 成人国产综合亚洲| 国产精品综合久久久久久久免费| 波多野结衣高清无吗| 香蕉av资源在线| 国模一区二区三区四区视频 | 制服丝袜大香蕉在线| 99精品久久久久人妻精品| 伦理电影免费视频| 一二三四在线观看免费中文在| 亚洲 国产 在线| 亚洲激情在线av| 性色av乱码一区二区三区2| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 国产片内射在线| 日韩国内少妇激情av| 97碰自拍视频| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 久久香蕉国产精品| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| www.精华液| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 国产亚洲av高清不卡| 国产成人系列免费观看| 亚洲精品美女久久av网站| 两个人视频免费观看高清| a在线观看视频网站| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 淫妇啪啪啪对白视频| 黄色成人免费大全| 在线观看一区二区三区| 久久精品国产亚洲av高清一级| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 国产激情欧美一区二区| 一区二区三区高清视频在线| 久久国产乱子伦精品免费另类| 国产亚洲精品久久久久久毛片| x7x7x7水蜜桃| 亚洲成人久久爱视频| 99久久国产精品久久久| 国产视频内射| 亚洲天堂国产精品一区在线| 欧美一级毛片孕妇| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 亚洲第一电影网av| 久久久精品大字幕| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 在线观看舔阴道视频| 亚洲午夜理论影院| 成年版毛片免费区| 亚洲电影在线观看av| 国产一区二区三区视频了| 大型黄色视频在线免费观看| 国产成人系列免费观看| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 国产成人aa在线观看| 99久久99久久久精品蜜桃| 亚洲电影在线观看av| 亚洲片人在线观看| 中亚洲国语对白在线视频| 国产精品亚洲av一区麻豆| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 99热只有精品国产| 午夜精品在线福利| 欧美久久黑人一区二区| www日本在线高清视频| 男人舔奶头视频| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 亚洲成a人片在线一区二区| 超碰成人久久| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆 | 国产成人欧美在线观看| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 国产主播在线观看一区二区| 老汉色av国产亚洲站长工具| 一本久久中文字幕| 中文在线观看免费www的网站 | 日本精品一区二区三区蜜桃| 免费看十八禁软件| 国产成人啪精品午夜网站| 亚洲成人免费电影在线观看| 草草在线视频免费看| 国产伦人伦偷精品视频| 亚洲人成伊人成综合网2020| 特级一级黄色大片| 精品人妻1区二区| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 在线观看日韩欧美| 午夜精品一区二区三区免费看| 搡老熟女国产l中国老女人| 男人舔女人的私密视频| 一二三四社区在线视频社区8| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| netflix在线观看网站| 午夜福利高清视频| 久久香蕉国产精品| 1024手机看黄色片| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 亚洲成人免费电影在线观看| 日韩欧美三级三区| 精品免费久久久久久久清纯| 欧美成人免费av一区二区三区| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 亚洲av美国av| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 亚洲专区字幕在线| 神马国产精品三级电影在线观看 | 国产日本99.免费观看| 欧美一级a爱片免费观看看 | 久久中文字幕一级| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 亚洲人成网站高清观看| 一二三四在线观看免费中文在| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 国产欧美日韩一区二区三| 成人午夜高清在线视频| 最新在线观看一区二区三区| 99国产精品99久久久久| 99国产精品一区二区三区| 亚洲精品在线观看二区| 亚洲无线在线观看| 欧美日韩福利视频一区二区| 久久久精品大字幕| 一区二区三区激情视频| 欧美黑人精品巨大| 午夜亚洲福利在线播放| 欧美丝袜亚洲另类 | 久久久国产成人免费| 天堂av国产一区二区熟女人妻 | 88av欧美| 三级毛片av免费| 亚洲一区中文字幕在线| 国产精品免费一区二区三区在线| 欧美色视频一区免费| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 国产精品免费一区二区三区在线| 国产成人aa在线观看| 老司机深夜福利视频在线观看| 香蕉av资源在线| 无人区码免费观看不卡| 一本大道久久a久久精品| 国产欧美日韩一区二区三| 黄色片一级片一级黄色片| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 免费看十八禁软件| 久久久精品大字幕| 人妻夜夜爽99麻豆av| 一个人免费在线观看电影 | 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 亚洲人成电影免费在线| 欧美日韩国产亚洲二区| 色综合亚洲欧美另类图片| 久久久国产成人免费| 韩国av一区二区三区四区| 男女午夜视频在线观看| 久久久久国内视频| 欧美最黄视频在线播放免费| 在线视频色国产色| 男人的好看免费观看在线视频 | 亚洲中文av在线| 午夜成年电影在线免费观看| 免费在线观看影片大全网站| 91av网站免费观看| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 激情在线观看视频在线高清| 久久久久久久午夜电影| 高清在线国产一区| 国产三级中文精品| 亚洲国产欧美一区二区综合| 亚洲av成人一区二区三| 黄片小视频在线播放| 成年女人毛片免费观看观看9| 国产视频一区二区在线看| 久久久国产精品麻豆| 波多野结衣巨乳人妻| 一个人免费在线观看的高清视频| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 全区人妻精品视频| 国产精品乱码一区二三区的特点| 国产精品av视频在线免费观看| 久久这里只有精品19| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 黄色女人牲交| 麻豆国产av国片精品| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区| 精品日产1卡2卡| 国产高清视频在线播放一区| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 91老司机精品| av在线播放免费不卡| 日本一区二区免费在线视频| 国产乱人伦免费视频| videosex国产| 精品第一国产精品| 无遮挡黄片免费观看| 黄片大片在线免费观看| 特级一级黄色大片| 国产av不卡久久| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 日本五十路高清| 国产精品久久视频播放| 亚洲国产高清在线一区二区三| tocl精华| 又粗又爽又猛毛片免费看| 亚洲人与动物交配视频| 日韩欧美精品v在线| 亚洲精品国产一区二区精华液| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 免费在线观看成人毛片| 成年免费大片在线观看| 亚洲专区字幕在线| 国产成人系列免费观看| 久久性视频一级片| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 日本精品一区二区三区蜜桃| 久久草成人影院| 国产午夜福利久久久久久| 久久中文字幕人妻熟女| 精品久久久久久久久久久久久| 亚洲 国产 在线| 人成视频在线观看免费观看| 窝窝影院91人妻| avwww免费| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 一二三四在线观看免费中文在| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 观看免费一级毛片| 男女下面进入的视频免费午夜| 夜夜夜夜夜久久久久| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 在线观看午夜福利视频| 国产乱人伦免费视频| 51午夜福利影视在线观看| 国产激情偷乱视频一区二区| 1024香蕉在线观看| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 国产伦在线观看视频一区| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 麻豆成人午夜福利视频| 国产片内射在线| 在线观看66精品国产| or卡值多少钱| 国产成人啪精品午夜网站| 成人国产综合亚洲| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 美女午夜性视频免费| 亚洲一区高清亚洲精品| 久久久久久人人人人人| 一边摸一边抽搐一进一小说| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 黄频高清免费视频| 一级毛片高清免费大全| АⅤ资源中文在线天堂| 男女那种视频在线观看| av国产免费在线观看| 国产视频内射| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站 | 亚洲人成77777在线视频| 一级毛片女人18水好多| 亚洲av美国av| 两个人看的免费小视频| 国产av一区二区精品久久| 欧美成人免费av一区二区三区| av天堂在线播放| 在线观看免费午夜福利视频| 全区人妻精品视频| 91av网站免费观看| 免费av毛片视频| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 少妇被粗大的猛进出69影院| bbb黄色大片| 国产高清视频在线播放一区| 日本免费a在线| 亚洲精品国产一区二区精华液| 我的老师免费观看完整版| 1024视频免费在线观看| 在线播放国产精品三级| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 亚洲国产中文字幕在线视频| 午夜免费成人在线视频| 69av精品久久久久久| 不卡av一区二区三区| 国产成+人综合+亚洲专区| a级毛片a级免费在线| 亚洲九九香蕉| 看免费av毛片| 麻豆久久精品国产亚洲av| 日韩大码丰满熟妇| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看 | www.www免费av| 欧美性长视频在线观看| 亚洲av电影在线进入| 91麻豆av在线| 色在线成人网| 无人区码免费观看不卡| 亚洲人成电影免费在线| 亚洲国产精品合色在线| 久久中文看片网| 亚洲人与动物交配视频| 三级国产精品欧美在线观看 | 国产一区二区在线观看日韩 | 日韩欧美免费精品| 欧美不卡视频在线免费观看 | 亚洲人成伊人成综合网2020| 熟女电影av网| 亚洲成人久久爱视频| 色在线成人网| 成年女人毛片免费观看观看9| 日本 av在线| 三级毛片av免费| 色哟哟哟哟哟哟| 久久这里只有精品19| 老熟妇仑乱视频hdxx| 欧美丝袜亚洲另类 | 久久精品国产清高在天天线| 国产成人影院久久av| 一区二区三区激情视频| 久久精品91无色码中文字幕| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 国产成年人精品一区二区| 亚洲国产精品久久男人天堂| 精品人妻1区二区| 中亚洲国语对白在线视频| 身体一侧抽搐| 国产成人影院久久av| 日本成人三级电影网站| 丰满的人妻完整版| 国产精品久久电影中文字幕| 中文字幕av在线有码专区| or卡值多少钱| e午夜精品久久久久久久| 日韩大尺度精品在线看网址| 九色成人免费人妻av| 国产成人精品久久二区二区免费| 最好的美女福利视频网| 日韩大码丰满熟妇| 一级毛片精品| 精品国产乱码久久久久久男人| 久9热在线精品视频| 亚洲专区国产一区二区| 一个人免费在线观看电影 | 黄频高清免费视频| 亚洲中文日韩欧美视频| 在线观看美女被高潮喷水网站 | 免费在线观看黄色视频的| 成人永久免费在线观看视频| 国产伦人伦偷精品视频| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 又紧又爽又黄一区二区| 久久中文字幕人妻熟女| 91在线观看av| 淫秽高清视频在线观看| 男男h啪啪无遮挡| 国产精品爽爽va在线观看网站| 精品一区二区三区av网在线观看| 亚洲av成人av| 夜夜夜夜夜久久久久| 在线永久观看黄色视频| 日韩有码中文字幕| 婷婷精品国产亚洲av在线| 一二三四社区在线视频社区8| 国产在线精品亚洲第一网站| 在线视频色国产色| a在线观看视频网站| 久久午夜综合久久蜜桃| 床上黄色一级片| 亚洲在线自拍视频| 国产av不卡久久| 搡老熟女国产l中国老女人| 国产精品久久久人人做人人爽| 成年女人毛片免费观看观看9| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| aaaaa片日本免费| 久久久久久人人人人人| 老司机午夜十八禁免费视频| 一级毛片女人18水好多| 免费在线观看完整版高清| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 国产精品av久久久久免费| 久久草成人影院| 亚洲色图av天堂| 精品国产乱码久久久久久男人| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 成人国产一区最新在线观看| 久久香蕉激情| 免费无遮挡裸体视频| 岛国视频午夜一区免费看| 国产片内射在线|