三丫苦葉提取物對(duì)高尿酸血癥模型大鼠尿酸合成相關(guān)酶調(diào)節(jié)作用研究

胡向陽(yáng)，李 安，林春淑，楊 璇

（中山大學(xué)附屬第五醫(yī)院中醫(yī)科，廣東 珠海 519000）

高尿酸血癥（Hyperuricemia，HUA）是由于長(zhǎng)期體內(nèi)嘌呤代謝障礙致尿酸（uric acid，UA）產(chǎn)生增多及UA排泄減少而引起的代謝性疾病，其中UA生成過(guò)多是HUA的重要生化基礎(chǔ)［1］。別嘌呤醇是黃嘌呤氧化酶（XOR）抑制劑，自1963年上市以來(lái)，目前仍是臨床常用抑制尿酸合成藥物，但報(bào)道其有皮膚及其附件損害、胃腸道損害、骨髓毒性和變態(tài)反應(yīng)等毒副作用［2］。中藥如土茯苓、萆薢、金錢草等［3-4］單方或復(fù)方治療HUA研究受到重視和關(guān)注，相關(guān)臨床或?qū)嶒?yàn)研究發(fā)現(xiàn)中藥治療HUA有促尿酸排泄、肝腎毒性小、作用和緩等優(yōu)勢(shì)。三丫苦［Melicope ptelefolia（Champ ex Benth）Hartley］為蕓香科（Rutaeeae）蜜茱萸屬植物，又名三椏苦、三叉苦、三丫虎等。三丫苦性味苦、寒，有清熱解毒、行氣止痛、燥濕的功效，主治熱病、咽喉腫痛、風(fēng)濕骨痛等［5］。三丫苦化學(xué)成分為黃酮類、生物堿類、揮發(fā)油等化合物，有抑菌抗炎、鎮(zhèn)痛、抗氧化等作用。我們前期研究發(fā)現(xiàn)三丫苦葉對(duì)胰島素抵抗模型大鼠有干預(yù)作用［6-7］。本研究觀察三丫苦葉提取物對(duì)HUA模型大鼠尿酸合成相關(guān)酶的調(diào)節(jié)作用，報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

Wistar雄性大鼠48只，SPF級(jí)，體質(zhì)量（140±10）g，由中山大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào)：粵檢證字2017D216。每籠4只分籠飼養(yǎng)，自由飲水，及時(shí)更換墊料，定期清洗鼠籠，適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后用于實(shí)驗(yàn)。

1.2 實(shí)驗(yàn)藥物

別嘌醇片（上海信宜萬(wàn)象藥業(yè)股份有限公司，批準(zhǔn)文號(hào)H31020334，產(chǎn)品批號(hào)07130806，規(guī)格100mg/片），臨用前以生理鹽水溶解濃度為50mg/mL。三丫苦葉購(gòu)于廣東省中醫(yī)院，以每克生藥加水10mL，冷水浸泡60min后，武火煎煮，煮沸后用文火慢煎20min，過(guò)濾藥液。采用FLT-U系列膜過(guò)濾系統(tǒng)（湖北菲爾特公司）過(guò)濾藥液，115℃、30min濕熱滅菌，60℃恒溫下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，濃縮為含生藥10g/mL的藥液，置4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 試劑與儀器

氧嗪酸鉀、羧甲基纖維素和鈉酵母粉由廣州天馬精細(xì)化工廠生產(chǎn)，腺嘌呤由Amresco公司生產(chǎn)，XOR和PRPS檢測(cè)試劑盒，均購(gòu)自南京建成生物工程有限公司。LD4-2型低速離心機(jī)，北京醫(yī)用離心機(jī)廠生產(chǎn)，Alpha-150p紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)，上海譜元儀器有限公司生產(chǎn)。

1.4 動(dòng)物分組、模型制備與給藥方法

Wistar大鼠48只，采用數(shù)字隨機(jī)分組法分為正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、別嘌醇組、三丫苦葉提取物組。按參考文獻(xiàn)［8］造模方法，除正常對(duì)照組外，其余各組均給予10%酵母飼料飼喂，給予腹部皮下注射配置的羧甲基纖維素鈉粉和氧嗪酸鉀配乳懸液100mg/kg。每天1次，連續(xù)15天，制備高HUA模型。正常對(duì)照組給予普通大鼠顆粒飼料和同體積的生理鹽水，模型對(duì)照組給予等體積生理鹽水灌胃，別嘌醇組灌胃給予別嘌醇片100mg/kg，三丫苦葉提取物組灌胃給予三丫苦葉提取物10g/kg。每天1次，連續(xù)30天。

1.5 指標(biāo)檢測(cè)

分別于造模前、造模后15天和給藥后7天、15天、30天當(dāng)晚大鼠禁食不禁水6h，腹腔注射10% 水合氯醛麻醉大鼠，眼眶后靜脈采血，將采取的新鮮血加入含肝素抗凝的試管中，4℃，離心15min（3500轉(zhuǎn)/min），分離收取血清。酶比色法檢測(cè)血XOR和PRPS，操作按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

用SPSS20.0 for windows系統(tǒng)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。方差齊，均值間差異比較單因素方差分析；方差不齊，均值間差異比較采用校正t檢驗(yàn)，組間兩兩比較采用q檢驗(yàn)。計(jì)量資料以（±s）表示，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

各實(shí)驗(yàn)組大鼠血XOR比較見(jiàn)表1。與正常對(duì)照組比較，造模前各實(shí)驗(yàn)組大鼠XOR均顯著升高（P＜0.01）；給藥后第7、15、30天，模型對(duì)照組XOR均顯著升高（P＜0.01）；給藥后7天，別嘌醇組XOR升高（P＜0.05）；給藥后7、15天，三丫苦葉提取物組XOR顯著升高（P＜0.01）。與模型對(duì)照組比較，給藥后7、15、30天，別嘌醇組XOR均顯著降低（P＜0.01）；給藥后15、30天，三丫苦葉提取物組XOR降低（P＜0.05）。與別嘌醇組比較，給藥后7、15天，三丫苦葉提取物組XOR升高（P＜0.05）。

表1 各實(shí)驗(yàn)組大鼠血XOR比較 （mg/L，±s）

表1 各實(shí)驗(yàn)組大鼠血XOR比較 （mg/L，±s）

注：與正常對(duì)照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與模型對(duì)照組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01；與別嘌醇組比較，#P＜0.05。

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各實(shí)驗(yàn)組大鼠血PRPS比較見(jiàn)表2。與正常對(duì)照組比較，造模前各實(shí)驗(yàn)組大鼠PRPS均顯著升高（P＜0.01）；給藥后第7天、15天、30天，模型對(duì)照組PRPS均顯著升高（P＜0.01），別嘌醇組PRPS有不同程度升高（P＜0.05或P＜0.01）；給藥后7天，三丫苦葉提取物組PRPS升高（P＜0.05）。與模型對(duì)照組比較，給藥后7天、15天、30天，別嘌醇組PRPS均降低（P＜0.05）；三丫苦葉提取物組PRPS降低或顯著降低（P＜0.05或P＜0.01）。與別嘌醇組比較，給藥后15天、30天，三丫苦葉提取物組PRPS降低（P＜0.05）。

表2 各實(shí)驗(yàn)組大鼠血PRPS比較 （mg/L，±s）

表2 各實(shí)驗(yàn)組大鼠血PRPS比較 （mg/L，±s）

注：與正常對(duì)照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與模型對(duì)照組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01；與別嘌醇組比較，#P＜0.05。

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3 討 論

HUA發(fā)病率呈上升趨勢(shì)，我國(guó)成人HUA患病率為8.4%～13.3%，成為次于糖尿病的第2大代謝性疾?。?］。XOR和PRPS在調(diào)節(jié)UA生成過(guò)程中發(fā)揮著重要酶促作用。XOR可催化次黃嘌呤及黃嘌呤生成UA，有效抑制XOR活性，對(duì)降低體內(nèi)尿酸水平有重要意義［10］。PRPS是嘌呤生物合成的重要前體，催化5'-磷酸核糖和ATP 合成磷酸核糖焦磷酸（Phosphoribosyl pyrophosphate，PRPP），PRPP促進(jìn)嘌呤核苷酸在體內(nèi)的合成代謝，導(dǎo)致血UA增高［11］。傳統(tǒng)服用方式和民間食用習(xí)俗是研究中藥材療效的立足點(diǎn)，同時(shí)，傳統(tǒng)煎熬方式也可借助新技術(shù)改進(jìn)。膜分離技術(shù)是以選擇性透過(guò)膜為分離介質(zhì)，對(duì)混合物中特定組分實(shí)現(xiàn)分離、提純和濃縮的分離技術(shù)。膜分離技術(shù)超濾膜截留相對(duì)分子質(zhì)量范圍為5×103～5×105，中藥有效成分相對(duì)分子質(zhì)量大多不超過(guò)1000，無(wú)效成分如淀粉、樹(shù)脂、果膠等則在5×104以上。膜分離方法實(shí)現(xiàn)中藥有效成分與雜質(zhì)的分離，去除淀粉、蛋白質(zhì)、樹(shù)脂等高分子，藥液顏色透亮及口感較好，保質(zhì)期長(zhǎng)［12］。

實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，三丫苦葉膜分離提取物降低HUA模型大鼠XOR和PRPS水平。值得關(guān)注的是，與別嘌醇比較，三丫苦葉提取物組在第7天、15天，XOR升高；給藥后第15天、30天，三丫苦葉提取物組血PRPS降低。實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示三丫苦葉提取物可降低HUA模型大鼠XOR和PRPS水平，與別嘌醇片比較效應(yīng)和緩持久。相比于西藥，中藥治療代謝性疾病具有多作用靶點(diǎn)、整體調(diào)理等優(yōu)勢(shì)。

膜分離技術(shù)制備三丫苦葉提取物有一定降尿酸作用，但其效應(yīng)成分、量效和毒理學(xué)研究等尚需進(jìn)一步研究。