新型鵝細小病毒研究進展

王 輝，王秀云，焦緒娜，尹延敏，逄賓賓

（濰坊華英生物科技有限公司，濰坊 261108）

小鵝瘟是由我國學者方定一[1]于1956年首先發(fā)現的，經過國內學者多年的研究，成功研制出小鵝瘟種鵝弱毒疫苗、雛鵝弱毒疫苗及高免血清，使該病已經得到良好的控制。但自2015年以來，在我國肉鴨群中不斷出現鴨短喙、舌外伸、生長發(fā)育受阻為特征性的疾病，該病自發(fā)生以來給我國養(yǎng)鴨業(yè)造成嚴重的經濟損失。后經病原體的分離鑒定知，引起該病的主要病原體為新型鵝細小病毒（Novel goose parvovirus）[2-9]。本文將從“鴨短喙侏儒綜合癥”的流行病學、臨床癥狀及剖檢病理變化、部分生物學特性、檢測方法四個方面與小鵝瘟進行對比綜合闡述。

1 流行病學

小鵝瘟自然感染僅引起雛鵝和雛番鴨發(fā)病，鵝的易感性隨著年齡的增長而減弱。主要侵害4～20日齡雛鵝，1周齡以內的雛鵝死亡率可達100%，10日齡以上死亡率一般不超過60%。小鵝瘟病毒可通過直接或間接接觸傳播和垂直傳播。相比較于經典小鵝瘟病毒，新型鵝細小病毒同樣能接觸傳播和垂直傳播，Chen等[10]從鴨胚和剛出殼雛鴨中檢測到該病毒，并且分離到2株病毒。新型鵝細小病毒具有更廣泛的宿主，能引起櫻桃谷鴨、北京鴨、半番鴨、臺灣白鴨等商品肉鴨發(fā)病[2-7,11-12]，發(fā)病日齡為6～40日齡，發(fā)病率為5%～20%，病死率低，發(fā)病鴨絕大多數成為僵鴨。

2015年陳浩等[2]從山東、江蘇等地發(fā)病的櫻桃谷肉鴨群首次分離到病毒并報道到該病的發(fā)生，同年李傳峰等[3]從安徽某發(fā)病鴨群中對該病毒進行了分離并鑒定。至此，安徽、山東、江蘇、甘肅、四川等地陸續(xù)出現該病的報道，逐漸成流行趨勢并且發(fā)病率越來越高[2-13]。

2 臨床癥狀及病理變化

小鵝瘟臨床表現為精神委頓、食欲減少、打盹，排灰白色或淡黃綠色稀糞，并混有氣泡；剖檢發(fā)現，出現空腸和回腸的急性卡他性-纖維素性壞死性腸炎，以及脫落腸粘膜與纖維素性滲出物形成栓子堵塞腸腔。新型鵝細小病毒主要感染商品肉鴨，患病鴨臨床癥狀表現為短喙、舌外伸、脛骨短粗、跛行、發(fā)育遲緩，也有報道患病鴨出現癱瘓、拉稀及翅腿易折斷的臨床癥狀；剖檢胰腺針尖樣出血點，肺臟充血、出血，胸腺輕微出血，脾臟少萎縮。陳浩等[2]人工感染雛鴨，出現短喙、舌腫大，舌尖彎曲、變形癥狀（圖1），剖檢胸腺腫大、出血。李琦等[5-6]使用鴨胚傳代尿囊液接種雛鴨同樣復制出鴨短喙大舌的臨床癥狀。劉榮昌等[7]對患病半番鴨與同場正常鴨測量對比顯示，發(fā)病鴨比正常鴨體重減輕49%，鴨喙縮短22%?；疾▲喕蛘卟∷励喤R床剖解表現為胸腺腫大出血、肝臟腫大、腎臟腫大、胰腺肺臟等組織出血。但是Li等[8]從短喙侏儒綜合征鴨病料中檢測到新型鵝細小病毒和鴨圓環(huán)病毒共感染的現象，并且這種現象在我國東部省份普遍存在，懷疑鴨短喙癥狀是由這倆種病毒共同作用的結果。

圖1 短喙、大舌臨床癥狀Fig.1 Clinical symptoms of short beak and big tongue

3 生物學特性

3.1 培養(yǎng)特性 小鵝瘟病毒在感染細胞的核內復制，初次分離可用鵝胚或番鴨胚，也可用其原代細胞培養(yǎng)。新型鵝細小病毒僅可用鴨胚或其原代細胞分離，未見有使用鵝胚或雞胚分離病毒的報道。但初期對鴨胚不具有致死特性，需要盲傳幾代后，鴨胚才呈現規(guī)律性死亡。李琦等[5]將新型鴨細小病毒DS15株接種SPF鴨胚，盲傳3代鴨胚才出現規(guī)律性死亡，病毒滴度（egg infectious dose，ELD50）達到10-4.2/0.2 mL。宮曉華等[6]在鴨胚中對新型鴨細小病毒進行增殖發(fā)現，接種鴨胚后96～120 h出現死亡，胚體全身出血，病毒滴度可到達（ELD50）10-5.5/0.2 mL。

3.2 病毒基因組特性 小鵝瘟病毒基因組為單鏈線性DNA，全長5106 bp。鄭肖強[11]分離的新型鵝細小病毒（SDLC01株）基因組全長5006 bp，與經典GPV核苷酸同源性為92.3%～97.2%。Ge等[12-13]分離的新型鵝細小病毒（NGPVSC16）基因組全長5109 bp，該分離株與鄭肖強[11]分離株病毒核苷酸同源性達到99.6%，但SDCL01分離毒株出現明顯的核苷酸缺失。Li等[14]對7株新型鵝細小病毒進行了全基因組測序，并與經典的鵝細小病毒進行比對發(fā)現新型鵝細小病毒與經典鵝細小病毒核苷酸同源性為92.2%～97.1%。7株新型鵝細小病毒存在5處共同的核苷酸突變，其中有6株在反向末端重復序列存在2處14個堿基對的缺失。由基因進化樹可以看出新型鵝細小病毒與經典鵝細小病毒在不同分支上，但同屬于鵝細小病毒（圖2）。與張經偉等[15]對新型鴨細小病毒NS1基因序列分析結果相符合。

圖2 新型鵝細小病毒基因進化樹Fig.2 Phylogenetic tree of novel goose parvovirus

4 檢測方法

經典鵝細小病毒常用的檢測方法包括PCR方法、病毒中和試驗、瓊脂擴散試驗、酶聯免疫吸附試驗（ELISA）、免疫熒光試驗（IFA）、膠體金免疫層析技術、核酸探針技術、環(huán)介導等溫擴增技術等。隨著近年來新型鵝細小病毒的出現，檢測該病毒的方法也不斷建立。高莎莎等[16-17]根據鴨細小病毒保守序列設計引物分別建立了半套式PCR、套式PCR和熒光定量PCR檢測方法[16-18]，Yang等[19]建立了快速檢測新型鵝細小病毒的實時等溫環(huán)介導擴增方法，上述方法都具有較高的靈敏度，最低檢出量為100 copies，是普通PCR靈敏度的100倍。鄭肖強等[20]制備鴨細小病毒的地高辛標記探針，該探針與其他鴨病毒雜交反應均為陰性，最低檢出量為25 pg，并使用該探針進行臨床樣本檢測，結果與病毒的分離符合率到達98%。程龍飛等[21]制備的檢測水禽源細小病毒的膠體金試紙條，可以檢測到鵝細小病毒、番鴨細小病毒和新型番鴨細小病毒，該方法最低檢出量為10-4.7～-5.7ELD50/mL。上述方法具有簡單、快速、靈敏度高、特異性好的優(yōu)點，適用于快速臨床診斷和流行病學調查。

Li等[22]建立的鑒別檢測經典鵝細小病毒和新型鵝細小病毒的雙重半巢式PCR檢測方法。通過對臨床樣本檢測得知，所有鴨短喙的病料中新型鵝細小病毒均為陽性，而其余鴨病料中并未檢測到經典鵝細小病毒，這與鵝細小病毒只感染鵝和番鴨相符合。由此可以看出，近年來在我國肉鴨中引起短喙侏儒綜合征的病毒是新型鵝細小病毒，而不是其他病原體。

5 小結

鴨短喙侏儒綜合征是由新型鵝細小病毒引起的鴨傳染病，臨床癥狀表現為鴨生長發(fā)育遲緩、鴨喙變短、舌外伸、腿翅骨骼易折、跛行癱瘓。新型鵝細小病毒具有更廣泛的宿主，感染宿主包括番鴨、半番鴨、北京鴨、櫻桃谷鴨、臺灣白鴨等[23-24]，發(fā)病致死率低但多數成為僵鴨，導致出欄合格率明顯下降，一周齡以后的肉鴨均可能發(fā)病。該病毒可以通過鴨胚及其原代細胞進行分離培養(yǎng)，盲傳幾代后可在96～120 h致死鴨胚?；蜻M化樹分析表明新型鵝細小病毒來源于經典鵝細小病毒，但病毒基因組相較于經典鵝細小病毒發(fā)生明顯的突變和缺失，可能與病毒基因調控、免疫應答和宿主改變有關[25]。PCR方法、地高辛探針法、膠體金試紙條等方法都可用于該病的流行病學調查和病原檢測。病原的不斷變異與進化對疫病的防控提出更高的挑戰(zhàn)，本文總結了關于新型鵝細小病毒的流行病學、生物學特性、檢測方法等最新的研究，以期為該病的流行病學調查、疾病診斷、病原檢測提供依據。