甘油-3-磷酸脫氫酶-1-樣基因在重度子癇前期胎盤組織中的表達及意義

付晗，崔世紅，劉靈，陳娟，孟潔，閆書君，綦月，劉貝貝，汪田田

（鄭州大學第三附屬醫(yī)院婦產科，河南 鄭州）

0 引言

重度子癇前期（sPE）常伴有嚴重的并發(fā)癥，嚴重威脅母嬰生命健康，但其病因及發(fā)病機制尚不明確。目前普遍認為胎盤缺血缺氧是子癇前期發(fā)病的關鍵環(huán)節(jié)[1,2]。甘油-3-磷酸脫氫酶-1-樣（GPD1L是新發(fā)現的具有調控細胞的增殖分化、新生血管的形成、能量的產生及免疫應答的生物學功能，參與調節(jié)細胞對低氧環(huán)境的適應[3,4]。因此本文主要通過檢測GPD1L在重度子癇前期胎盤組織中的表達情況，分析其在重度子癇前期中的發(fā)病機制。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2018年3月至2019年3月在鄭州大學第三附屬醫(yī)院產科住院并分娩的孕婦100例，其中50例為患有重度子癇前期的孕婦，即實驗組；50例產前檢查正常的健康孕婦，即為對照組。同時為排除年齡的影響，兩組孕婦的年齡控制在2歲以內。排除標準：自身免疫性疾病、嚴重炎癥、慢性肝腎心功能不全、慢性高血壓、妊娠期高血壓病史及其它產科合并癥或并發(fā)癥者等。重度子癇前期的診斷標準均符合《婦產科學》第9版[5]。同時對兩組孕婦的年齡、孕周、收縮壓、舒張壓等基本數據進行分析。本研究經鄭州大學第三附屬醫(yī)院倫理委員會批準，研究對象均簽署知情同意書。

1.2 方法

胎盤娩出后5分鐘內在母體面4個象限的中央部位避免出血、梗死及鈣化灶等異常組織各取1塊約1 cm3大小的胎盤組織，其中取任意兩塊組織經石蠟包埋后編號；另兩塊組織經過清洗編號后保存于-80℃冰箱。

（1）免疫組化法檢測胎盤組織中GPD1L蛋白的表達情況 將標本制成切片后經過一系列的脫蠟、水化，抗原高溫修復等一系列操作步驟。采用盲法由2名副主任醫(yī)師以上的病理科醫(yī)生在光學顯微鏡（400倍）下觀察免疫組化染色后的組織并評分。陽性細胞判斷標準：根據細胞質染色情況和陽性細胞數來判定蛋白的表達情況；即染色強度分數+陽性細胞百分比≥2分為陽性，染色強度分數+陽性細胞百分比＜2分為陰性。

（2）實時熒光定量PCR法檢測胎盤組織中GPD1L mRNA的表達 提取胎盤組織中的總RNA，進過一系列的沉淀洗滌干燥等操作步驟后測RNA濃度和純度。GPD1L mRNA的上 游 引 物：5’-TCGTTAGTTGTCAGAATA-3’，下 游 引 物：5’-TGTTAATCAGAAGAATGTG-3’；擴張反應條件：95℃預變性10 min；95℃變性30 s；58℃退火；72℃延伸30 s；40個循環(huán)。采用2-ΔΔCt法計算兩組胎盤組織中GPD1L mRNA的相對表達量。

1.3 統(tǒng)計學處理

采用SPSS 21.0軟件進行統(tǒng)計學分析。正態(tài)分布的計量數據采用均數±標準差（±s）表示，行t檢驗；計數資料用百分比表示；P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 一般情況

2組孕婦的年齡控制在2歲以內差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；孕周、收縮壓及舒張壓、孕次及產次比較差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）（見表1）。

表1 兩組孕婦一般情況比較

表1 兩組孕婦一般情況比較

組別 n 年齡（歲） 孕周（天） 收縮壓（mmHg） 舒張壓（mmHg） 孕次 產次實驗組 50 30.480±5.384 230.500±14.967 184.720±19.336 116.920±9.113 2.440±1.013 1.540±6.676對照組 50 29.440±4.891 276.940±7.665 113.140±7.166 71.280±6.698 1.620±0.923 1.140±0.351 t值 - 1.011 -19.528 24.545 28.535 4.224 3.713 P值 - P＞0.05 P＜0.05 P＜0.05 P＜0.05 P＜0.05 P＜0.05

2.2 兩組胎盤組織中GPD1LmRNA的表達水平及GPD1L蛋白的陽性表達情況

與對照組相比，重度子癇前期胎盤組織中GPD1L mRNA的表達量明顯低于對照組（P值＜0.001）；GPD1L蛋白的陽性率（66%，P＜0.05），明顯低于對照組（見表2）。

表2 兩組胎盤組織中GPD1LmRNA，n=50）

表2 兩組胎盤組織中GPD1LmRNA，n=50）

images/BZ_13_201_556_1207_615.png實驗組 50 19（38%） 0.439±0.082對照組 50 33（66%） 1.0061±0.137 t值 - - -25.201 P值 - - ＜0.001

3 討論

重度子癇前期是妊娠期一種特發(fā)性疾病，可導致母體全身多臟器功能受累、胎兒生長受限、胎兒窘迫、早產及死產等不良結局，是母嬰患病率及死亡率死率升高的主要原因之一[6,7]。目前普遍認為子癇前期是一種多因素、多機制及多通路致病的疾病，其中胎盤功能受損導致的胎盤缺血缺氧是子癇前期發(fā)病的關鍵環(huán)節(jié)[5]。因此，參與胎盤在低氧環(huán)境下調解的缺氧因子是目前國內外學者研究熱點之一。

人類的GPD1L基因位于3p22.3染色體上，其編碼的由351個氨基酸組成的蛋白質與GPD有同源性，故二者具有相似的生物學功能[8,9]。研究表明，GPD蛋白參與磷酸甘油穿梭，具有調節(jié)細胞的增殖凋亡、新生血管的形成、滲透調節(jié)及影響能量的產生等功能[10,11]。

Kelly等研究表明[12]，GPD1L蛋白參與調節(jié)HIF-1a蛋白的降解過程，而在低氧條件下，這一調節(jié)作用被抑制導致HIF-1a蛋白大量累積參與細胞對缺氧環(huán)境的適應。馮芝恩等[13]研究證實，GPD1L在腫瘤細胞中同樣具有調節(jié)HIF-1a的作用進而影響腫瘤細胞增殖分化及凋亡。目前大量研究證實[14-19]，HIF-1a參與子癇前期相關的低氧反應基因表達調節(jié)，如血管內皮生長因子（VEGF）及其受體（sFlt-1）、胎盤生長因子（PIGF）、腫瘤壞死因子、及內皮素-1（ET-1）等，進而影響子癇前期胎盤新生血管的形成及滋養(yǎng)細胞的增殖與分化能力。因此可以推測，GPD1L參與細胞及機體的低氧應答調控。本研究結果顯示，與對照組相比，在重度子癇前期患者胎盤組織中GPD1L mRNA低表達且GPD1L蛋白的陽性表達率明顯降低，說明胎盤處于缺氧狀態(tài)及GPD1L參與重度子癇前期胎盤的低氧應答調控。

因此，本研究說明GPD1L可能參與重度子癇前期的發(fā)生發(fā)展過程，但其具體機制尚需進一步探索及大樣本數據的支持。但本研究為重度子癇前的未來提供一個新的思路。