酶聯(lián)免疫試驗(yàn)兩步法檢測(cè)乙型肝炎病毒表面抗原的影響因素研究

孫四力

(駐馬店市中心血站，河南 駐馬店 463000)

血篩兩步法從2010年10月1日開始，所有的試劑全都采用兩步法，停止使用其它方式[1，2]。本文通過駐馬店市中心血站于2016年8月～2018年12月期間的獻(xiàn)血員乙肝標(biāo)本300例，分析酶聯(lián)免疫試驗(yàn)兩步法在乙型肝炎病毒表面抗原的檢測(cè)中的效果。

1 資料和方法

1.1 一般資料

將駐馬店市中心血站于2016年8月～2018年12月期間的獻(xiàn)血人員乙肝標(biāo)本300例作為本次研究對(duì)象，利用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)將乙肝表面抗原大于10的陽性標(biāo)本進(jìn)行分離，將血清進(jìn)行混合，作為陽性參照血清；乙肝表面抗原小于1的陰性標(biāo)本進(jìn)行分離，將血清進(jìn)行混合，作為陰性參照血清，將生物科技公司提供的乙肝表面抗原的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)作為弱陽性參照血清。

1.2 方法

a)儀器和試劑：全自動(dòng)酶標(biāo)儀器和乙型肝炎病毒表面抗原診斷的試劑盒[3]。b)分別在陽性、弱陽性、陰性血清中按照以下的方法進(jìn)行，每種血清重復(fù)加入不少于10次，與標(biāo)本的S/CO平均值進(jìn)行對(duì)比[4]：按照說明書進(jìn)行，加入20 μL的稀釋液進(jìn)行稀釋，再將其加入陽性、弱陽性、陰性的參照血清100 μL，混合均勻，進(jìn)行溫育，并且封板后放置，溫度為(37±1.1)℃，溫育時(shí)間為(60±1.3) min[5]；進(jìn)行加酶，除空白孔之外每個(gè)孔中加入酶標(biāo)準(zhǔn)試劑50 μL，也需要混合均勻；溫育—封板后放置，溫度為(37±1.1)℃，溫育時(shí)間為(30±1.4) min[3]；洗板—利用洗板機(jī)進(jìn)行洗滌，不少于5遍，并將其扣干；顏色顯露時(shí)間的變化—在每個(gè)孔中加入顯色劑A、B液為50 μL，混合均勻，溫度為(37±1.1)℃，顏色顯露的時(shí)間為(30±1.4) min；進(jìn)行最終的測(cè)定—在孔中加入50 μL的終止液，均勻混合，10 min內(nèi)進(jìn)行結(jié)果的測(cè)定。

加入1滴稀釋液，除將第一步的稀釋變成為用滴瓶進(jìn)行滴加1滴之外，其余的方式和標(biāo)準(zhǔn)法一致；沒稀釋液即第一步不加入任何稀釋液，其余和標(biāo)準(zhǔn)法的一致；加入血清之后溫育時(shí)間的變化，將標(biāo)準(zhǔn)方法里溫育的時(shí)間調(diào)整為45 min，其余方法一致；洗板，除先加入血清孵育之后再洗板，其余也與標(biāo)準(zhǔn)法一致；加入酶之后孵育時(shí)間的變化，將標(biāo)準(zhǔn)方法里溫育的時(shí)間變?yōu)?5 min，其余方法一致；顏色顯露時(shí)間的變化，將標(biāo)準(zhǔn)方法里顏色顯露時(shí)間變?yōu)?5 min，其余一致。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 加入1滴稀釋液

觀察標(biāo)本加入1滴稀釋液的效果對(duì)比見表1。

表1 為加入1滴稀釋液的效果數(shù)據(jù)

2.2 沒有使用稀釋液

未使稀釋液的觀察標(biāo)本見表2。

表2 為未使稀釋液的觀察標(biāo)本

2.3 加入血清之后溫育時(shí)間的變化

當(dāng)標(biāo)本加入血清之后溫育時(shí)間的變化觀察研究見表3。

表3 為加入血清之后溫育時(shí)間的變化

2.4 加入血清進(jìn)行孵育之后洗板

當(dāng)標(biāo)本加入血清進(jìn)行孵育之后洗板數(shù)據(jù)見表4。

表4 為加入血清進(jìn)行孵育之后洗板

2.5 加入酶之后孵育時(shí)間的變化

當(dāng)指標(biāo)加入酶之后孵育時(shí)間的變化數(shù)據(jù)見表5。

表5 為加入酶之后孵育時(shí)間的變化

2.6 顏色顯露時(shí)間的變化

觀察指標(biāo)顏色顯露時(shí)間的變化數(shù)據(jù)見表6。

表6 為顏色顯露時(shí)間的變化

3 討論

酶聯(lián)免疫試驗(yàn)的準(zhǔn)確率高達(dá)99.99%，常在篩選血清標(biāo)本的標(biāo)志物，隨著技術(shù)的成熟，對(duì)于乙型肝炎病毒表面抗原診斷的試劑盒進(jìn)行升級(jí)，使得靈敏度和特異性得到了提高[4]。酶聯(lián)免疫能夠進(jìn)一步將血清和酶標(biāo)志物一同加入，溫育的時(shí)間為30 min，在此之后兩步法中加入血清之后溫育的時(shí)間也能得到延長(zhǎng)。酶聯(lián)免疫試驗(yàn)將顏色顯露的時(shí)間從15 min也延長(zhǎng)為30 min，該顯露的時(shí)間對(duì)陽性和陰性標(biāo)本來說，影響并不大，但對(duì)弱性標(biāo)本的影響就比較大[3,4]。

綜上所述，酶聯(lián)免疫的實(shí)驗(yàn)對(duì)陽性標(biāo)本沒有什么影響，因?yàn)槠浜写罅康目乖?，抗原抗體會(huì)有特異性反應(yīng)。但是弱陽性標(biāo)本的結(jié)果會(huì)被影響，特別是處于灰區(qū)的標(biāo)本影響更為嚴(yán)重，因此在日常生活中，必須要按照試劑盒的說明書進(jìn)行，這樣才能對(duì)結(jié)果有促進(jìn)作用，減少誤差誤判。