捻轉(zhuǎn)血矛線蟲GST耐藥基因的克隆、表達(dá)及生物信息學(xué)分析

趙學(xué)亮 孫 柯 蘇 倩 呼和巴特爾 王文龍

(內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué) 獸醫(yī)學(xué)院/農(nóng)業(yè)農(nóng)村部動物疾病臨床診療技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，呼和浩特 010018)

捻轉(zhuǎn)血矛線蟲(Haemonchuscontortus)是毛圓科血矛屬的一種消化道線蟲，主要寄生在綿羊、山羊、牛等反芻動物的皺胃，偶見于小腸[1]。該病分布廣泛，給畜牧業(yè)，尤其是熱帶、亞熱帶及降雨量較多的地區(qū)養(yǎng)殖業(yè)帶來嚴(yán)重威脅[2]。國內(nèi)外對捻轉(zhuǎn)血矛線蟲病主要采用丙硫咪唑等化學(xué)藥物防治，然而隨著該類驅(qū)蟲藥物的使用，捻轉(zhuǎn)血矛線蟲的耐藥現(xiàn)象逐漸凸顯。van Wyk等[3]于1986年首次報(bào)道捻轉(zhuǎn)血矛線蟲對丙硫咪唑等驅(qū)蟲藥物的耐藥性。隨后的幾十年內(nèi)，捻轉(zhuǎn)血矛線蟲耐藥性已在世界范圍內(nèi)廣泛得到報(bào)道[4]。因此，在捻轉(zhuǎn)血矛線蟲耐藥檢測方法和耐藥機(jī)制研究顯得尤為重要。

丙硫咪唑能與捻轉(zhuǎn)血矛線蟲β-微管蛋白亞基結(jié)合，阻斷β-微管組裝，使蟲體發(fā)育代謝障礙，從而導(dǎo)致蟲體死亡。據(jù)報(bào)道捻轉(zhuǎn)血矛線蟲對丙硫咪唑產(chǎn)生耐藥性的主要原因是由于β-微管蛋白同種型Ⅰ基因的突變(F167Y，E198A和F200Y)，導(dǎo)致該蛋白結(jié)構(gòu)改變，使藥物不能與其靶位點(diǎn)結(jié)合而失去作用[5]。但由于寄生蟲等真核生物復(fù)雜的耐藥機(jī)制，耐藥性的產(chǎn)生可能存在多種原因[6]，耐藥機(jī)制尚待進(jìn)一步研究。

谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶(Glutathione S-transferase，GST)于20世紀(jì)60年代在大鼠肝臟中首次被發(fā)現(xiàn)，是生物體內(nèi)最重要的解毒酶系之一。GST能催化親電性有害物質(zhì)與還原型谷胱甘肽結(jié)合發(fā)揮解毒功能，對生物體代謝內(nèi)源性和外源性化合物起著重要作用[7]。而GST在寄生蟲耐藥性、細(xì)菌耐藥性都發(fā)揮著主導(dǎo)作用[8-9]。因此本試驗(yàn)基于轉(zhuǎn)錄組測序分析的基礎(chǔ)上，擬篩選出與耐藥相關(guān)的GST基因[10]。通過對捻轉(zhuǎn)血矛線蟲GST蛋白結(jié)構(gòu)序列、抗原表位進(jìn)行預(yù)測分析，探究原核表達(dá)系統(tǒng)最佳誘導(dǎo)表達(dá)條件，以期獲得穩(wěn)定的純化GST重組蛋白，為探究捻轉(zhuǎn)血矛線蟲耐藥機(jī)制和免疫防控提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 蟲株及質(zhì)粒

捻轉(zhuǎn)血矛線蟲丙硫咪唑敏感株(HC)和耐藥株(HC-BZ)均在液氮中保存，用于RNA的提取?？寺≥d體pMD19-T simple vector，購自大連寶生物工程有限公司；表達(dá)載體pET30a(+)在本實(shí)驗(yàn)室保存。

1.2 試劑及儀器

Trizol試劑、反轉(zhuǎn)錄試劑盒、限制性內(nèi)切酶EcoR Ⅰ、XhoⅠ等均購自TaKaRa公司；質(zhì)粒抽提試劑盒、膠回收試劑盒購自AXYGEN公司；Ni+蛋白純化試劑盒購自上海生工；氯仿、異丙醇均為國產(chǎn)分析純。核酸濃度測定儀(Thermo NanoDrop 2000，美國)、凝膠影像儀(賽智創(chuàng)業(yè)科技有限公司，北京)。

1.3 Total RNA提取及cDNA合成

將組織樣品在液氮中取出，放入預(yù)冷的研缽中研磨，然后加入Trizol，提取捻轉(zhuǎn)血矛線蟲總RNA。將獲得的總RNA進(jìn)行濃度、純度檢測后，利用反轉(zhuǎn)錄試劑盒合成cDNA。

1.4 GST基因擴(kuò)增

1.5 GST基因克隆及測序

用膠回收試劑盒回收PCR產(chǎn)物，將目的片段3’末端添加“A尾”，然后與克隆載體pMD19-T過夜連接，轉(zhuǎn)化至Trans1-T1感受態(tài)細(xì)胞中，過夜培養(yǎng)。將陽性菌株送華大基因公司進(jìn)行測序，測序結(jié)果正確的質(zhì)粒命名為pMD19T-GST。

1.6 GST基因原核表達(dá)載體構(gòu)建

將pMD19T-GST和表達(dá)載體pET30a(+)分別用限制酶EcoR Ⅰ和XhoⅠ進(jìn)行雙酶切，回收目的基因和載體片段，T4連接酶過夜連接，轉(zhuǎn)化至E.coliDH5α感受態(tài)細(xì)胞，過夜培養(yǎng)后進(jìn)行PCR和雙酶切鑒定，陽性菌株送華大基因公司進(jìn)行雙向測序，測序結(jié)果正確的質(zhì)粒命名為pET30a(+)-GST。

1.7 GST蛋白表達(dá)條件優(yōu)化

將測序正確的重組表達(dá)菌BL21(pETGST)接種于10 mL含Kan抗性的LB液體培養(yǎng)基中，37 ℃過夜培養(yǎng)，對重組表達(dá)菌BL21(pETGST)進(jìn)行溫度、時(shí)間和IPTG誘導(dǎo)濃度表達(dá)條件優(yōu)化。溫度優(yōu)化，將溫度分為20、25、30和37 ℃不同梯度，在搖床中180 r/min培養(yǎng)6 h。時(shí)間優(yōu)化，分別在0、1、2、3、4、6、7、8和9 h時(shí)間點(diǎn)各取2 mL菌液，37 ℃，180 r/min 培養(yǎng)。IPTG濃度優(yōu)化，濃度梯度分別為0.05、0.1、0.2、0.6、1.0、2.0和4.0 mmol/L，37 ℃，180 r/min培養(yǎng)6 h。離心收菌，按照不同的OD值加入相應(yīng)量的PBS，然后加入蛋白上樣緩沖液，煮沸10 min裂解變性，用12% SDS-PAGE凝膠電泳檢測。

1.8 重組蛋白表達(dá)形式鑒定

按照最佳誘導(dǎo)條件分別誘導(dǎo)100 mL重組表達(dá)菌液，低溫超速離心收集菌液沉淀，然后超聲破碎，12 000 r/min低溫離心15 min，分別收集上清和沉淀，煮沸10 min裂解變性，用12% SDS-PAGE凝膠電泳進(jìn)行表達(dá)形式檢測。

1.9 重組表達(dá)菌pET30a-GST的純化

按照1.8方法收集上清和沉淀，并利用8 M尿素充分溶解沉淀，然后離心收集上清，用0.45 μm孔徑的濾器過濾，然后按照上海生工Ni+說明書純化蛋白。

1.10 GST基因生物信息分析

利用蛋白質(zhì)在線分析工具Prot-Param(https:∥web.expasy.org/protparam/)分析GST蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)(氨基酸組成，分子質(zhì)量，不穩(wěn)定系數(shù)、等電點(diǎn)等)；利用ProtScale(https:∥web.expasy.org/protscale/)分析GST蛋白的親水性和疏水性[11]；利用SignalP 4.0 Server(http:∥www.cbs.dtu.dk/services/SignalP-4.0/)預(yù)測GST蛋白的信號肽[12]；利用TMHMM Server(http:∥www.cbs.dtu.dk/services/TMHMM/)預(yù)測GST蛋白的跨膜區(qū)[13]；利用NetPhos3.1 Server(http:∥www.cbs.dtu.dk/services/NetPhos/)預(yù)測GST蛋白的磷酸化位點(diǎn)[14]；利用在線軟件SOPMA(https:∥npsa-prabi.ibcp.fr/cgi-bin/npsa_automat.pl?page=npsa_sopma.html)預(yù)測GST蛋白的二級結(jié)構(gòu)[15]；利用在線軟件SWISS-MODEL(https:∥swissmodel.expasy.org/)預(yù)測GST蛋白的三級結(jié)構(gòu)[16]；利用Conserved domains(https:∥www.ncbi.nlm.nih.gov/Structure/cdd/wrpsb.cgi)對GST蛋白進(jìn)行保守結(jié)構(gòu)域預(yù)測分析[17]；利用DNAStar分析GST蛋白B細(xì)胞抗原表位等。

2 結(jié)果與分析

2.1 GST基因擴(kuò)增、克隆及測序

PCR擴(kuò)增捻轉(zhuǎn)血矛線蟲GST基因，經(jīng)1%的瓊脂糖凝膠電泳檢測，結(jié)果顯示在618 bp處擴(kuò)增出條帶，片段長度與預(yù)期片段大小一致(圖1)。

M，DNA 標(biāo)準(zhǔn)DL2000；1～3，GST基因的擴(kuò)增產(chǎn)物。
M， DL2000 DNA Marker； 1-3， products ofGSTgene.
圖1 捻轉(zhuǎn)血矛線蟲GST基因PCR擴(kuò)增結(jié)果
Fig.1 PCR amplification results ofGSTgene ofHaemonchuscontortus

2.2 重組表達(dá)載體的構(gòu)建與鑒定

將測序正確的菌液提取質(zhì)粒，限制性內(nèi)切酶XhoⅠ和EcoR Ⅰ進(jìn)行雙酶切，結(jié)果顯示，分別出現(xiàn)在大小為618 bp和5 422 bp的條帶，表明目的片段插入到表達(dá)載體pET30a中，成功構(gòu)建重組質(zhì)粒(圖2)。

M，DNA標(biāo)準(zhǔn)DL5000；1～2，pET30-GST的雙酶切產(chǎn)物。
M， DL5000 DNA Marker； 1-2， double restriction enzyme digestion products of pET30-GST.
圖2 重組質(zhì)粒pET30-GST的雙酶切鑒定
Fig.2 Identification result of recombinant plasmid pET30a (+)-GST byXhoⅠ andEcoR Ⅰ digestion

2.3 重組蛋白表達(dá)條件優(yōu)化

對重組表達(dá)菌BL21(pETGST)進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)溫度、時(shí)間和IPTG濃度優(yōu)化，結(jié)果顯示，4個(gè)不同溫度下誘導(dǎo)后的重組表達(dá)菌均在29 ku誘導(dǎo)出條帶，在37 ℃時(shí)的蛋白表達(dá)量最高(圖3)。9個(gè)不同時(shí)間下誘導(dǎo)后的重組表達(dá)菌均在29 ku誘導(dǎo)出條帶，表達(dá)量隨著誘導(dǎo)時(shí)間的增加而增加，在6 h時(shí)表達(dá)量達(dá)到最高(圖4)。7 個(gè)不同IPTG濃度優(yōu)化梯度下誘導(dǎo)后的重組表達(dá)菌均在29 ku誘導(dǎo)出條帶，但表達(dá)量和OD600 nm值均沒有顯著差異，表明IPTG濃度對重組表達(dá)菌影響較小，所以選擇IPTG終濃度0.05 mmol/L為IPTG的最佳誘導(dǎo)濃度(圖5)。至此，成功對重組蛋白表達(dá)條件進(jìn)行優(yōu)化，最佳誘導(dǎo)條件為37 ℃、6 h、IPTG濃度0.05 mmol/L。

M1，protein maker (10～180 ku)；M2，protein maker (14.3～97.2 ku)；1，BL21 (DE3)對照；2，誘導(dǎo)后pET30；3，誘導(dǎo)前pET30；4～7，BL21 (pETGST) 20，25，30和37 ℃誘導(dǎo)表達(dá)。
M1, protein maker (10-180 ku); M2, protein maker (14.3-97.2 ku); 1, BL21(DE3); 2, pET30 after induction; 3, pET30 before induction; 4-7, BL21 (pETGST) induced expression at 20, 25, 30 and 37 ℃, respectively.
圖3 重組基因BL21(pETGST)誘導(dǎo)溫度優(yōu)化結(jié)果
Fig.3 Expression of recombinant gene BL21 (pETGST) under different temperatures by SDS-PAGE

M1，protein maker (10-180 ku)；M2，protein maker (14.3～97.2 ku)；1，BL21(DE3)對照；2，誘導(dǎo)后pET30；3，誘導(dǎo)前pET30；4～13，BL21 (pETGST)在 0，1，2，3，4，5，6，7，8和9 h時(shí)的誘導(dǎo)表達(dá) M1, protein maker (10-180 ku); M2, protein maker (14.3-97.2 ku); 1, BL21(DE3); 2, pET30 after induction; 3, pET30 before induction; 4-13. BL21 (pETGST) induced at 0, 1, 2, 3, 4 5, 6, 7, 8 and 9 h, respectively.
圖4 重組基因BL21(pETGST)誘導(dǎo)時(shí)間優(yōu)化結(jié)果
Fig.4 Expression of recombinant gene BL21 (pETGST) under different temperatures by SDS-PAGE

M1，protein maker (10～180 ku)；M2，protein maker (14.3～97.2 ku)；1，BL21(DE3)對照；2，誘導(dǎo)后pET30；3，誘導(dǎo)前pET30；4，誘導(dǎo)前BL21(pETGST)；5～11，BL21 (pETGST)在 0.05，0.1，0.2，0.6，1.0，2.0和4.0 mmol/L時(shí)的誘導(dǎo)表達(dá)。
M1, protein maker (10-180 ku); M2, protein maker (14.3-97.2 ku); 1, BL21(DE3)；2, pET30 after induction；3, pET30 before induction；4, BL21 (pETGST) before induction; 5-11, The expression production of IPTG concentration with 0.05, 0.1, 0.2; 0.6; 1.0, 2.0, 4.0 mmol/L, respectively.
圖5 重組基因BL21(pETGST) IPTG誘導(dǎo)濃度優(yōu)化結(jié)果
Fig.5 Expression of recombinant gene BL21 (pETGST) under different IPTG concentrations

2.4 重組蛋白表達(dá)形式鑒定

利用最佳優(yōu)化條件(37 ℃、6 h、0.05 mmol/L)對重組表達(dá)菌進(jìn)行大量誘導(dǎo)表達(dá)，然后經(jīng)12%的SDS-PAGE凝膠電泳進(jìn)行表達(dá)形式鑒定。結(jié)果顯示，重組蛋白rGST以包涵體的形式存在(圖6)。

M1，protein maker(10～180 ku)；1，rGST上清；2，rGST沉淀。
M1, protein maker (10-180 ku); 1,rGST supernatant; 2, rGST precipitation.
圖6 重組蛋白表達(dá)形式鑒定
Fig.6 Detection of expression products of recombinant protein

2.5 重組蛋白純化

利用8 mol/L尿素溶解包涵體沉淀，離心后收集上清，然后用0.45 μm濾器過濾后與Ni+柱過夜結(jié)合，根據(jù)蛋白純化說明書獲得較純的蛋白。經(jīng)SDS-PAGE結(jié)果顯示，目的蛋白條帶大小約為29 ku，與預(yù)期大小一致(圖7)。

M1，protein maker (10～180 ku)；M2，protein maker (14.3～97.2 ku)；1～2，rGST純化。
M1, protein maker (10-180 ku); M2, protein maker (14.3-97.2 ku); 1-2, rGST purification.
圖7 重組蛋白純化結(jié)果
Fig.7 Result of recombinant protein purification

2.6 GST基因編碼蛋白的生物信息學(xué)分析

利用Port-Param在線軟件分析GST蛋白的一級結(jié)構(gòu)，結(jié)果表明，GST基因序列長618 bp，編碼205個(gè)氨基酸，分子式為C1083H1657N277O294S6，理論等電點(diǎn)為9.53，包含20種氨基酸，其中含量最高的是Lys占10.2%，含量最低的是Cys占1.0%；蛋白質(zhì)不穩(wěn)定指數(shù)為34.80，屬于穩(wěn)定蛋白；脂肪系數(shù)為83.32；總平均親水指數(shù)為-0.256，是親水性蛋白。親水性預(yù)測分析表明，該蛋白在氨基酸第31位點(diǎn)存在最小值-2.51，親水性較強(qiáng)，在氨基酸第136位點(diǎn)存在最大值1.83，疏水性較強(qiáng)?？缒^(qū)和信號肽預(yù)測表明該蛋白不含有跨膜區(qū)和信號肽。磷酸化位點(diǎn)預(yù)測表明，GST蛋白共含有12個(gè)磷酸化位點(diǎn)，含有蘇氨酸位點(diǎn)最多，酪氨酸位點(diǎn)最少。二級結(jié)構(gòu)預(yù)測顯示，α螺旋含量最多，共有106個(gè)，占GST蛋白二級結(jié)構(gòu)的51.71%；β轉(zhuǎn)角含量最少，共有11個(gè)，占GST蛋白二級結(jié)構(gòu)的5.37%(圖8)。SWISS-MODEL三級結(jié)構(gòu)預(yù)測顯示，GST蛋白與1zl9.1.A同源性最高，為57.14%，GMQE值為0.81，趨近于1，建模質(zhì)量較好，表明所得結(jié)果可靠(圖9)。結(jié)構(gòu)功能域預(yù)測發(fā)現(xiàn)，GST蛋白在4～73位氨基酸有一個(gè)GST_N_Sigma結(jié)構(gòu)域，是GST同源區(qū)結(jié)合位點(diǎn)，屬于PTZ00057超家族成員?？乖砦活A(yù)測顯示，GST蛋白含有較多潛在的B細(xì)胞抗原肽表位，主要位于25～48，55～63，92～106，113～124，139～147，170～189，195～205位氨基酸殘基或其附近，提示這些區(qū)段含有潛在優(yōu)勢抗原表位。

h，α-螺旋；e，延伸鏈；t，β-轉(zhuǎn)角；c，自由卷曲 h, alpha helix； e, extended strand; t, beta turn； c, random coil
圖8 GST蛋白二級結(jié)構(gòu)預(yù)測
Fig.8 Secondary structure prediction of GST protein

圖9 GST蛋白三級結(jié)構(gòu)預(yù)測
Fig.9 Tertiary structure prediction of GST protein

3 討論與結(jié)論

中國是捻轉(zhuǎn)血矛線蟲的主要流行國家之一。目前，對該病的防治幾乎主要依靠丙硫咪唑、伊維菌素等化學(xué)驅(qū)蟲藥，但長期重復(fù)使用，導(dǎo)致耐藥株不斷出現(xiàn)。本課題組在2017—2019年對內(nèi)蒙古綿羊捻轉(zhuǎn)血矛線蟲進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查及耐藥性檢測時(shí)發(fā)現(xiàn)，捻轉(zhuǎn)血矛線蟲感染率已達(dá)到78%～89%，且耐藥現(xiàn)象十分嚴(yán)重[10]，給捻轉(zhuǎn)血矛線蟲病的防治帶來巨大困難。因此，尋找新的藥物靶點(diǎn)和探索耐藥機(jī)理對捻轉(zhuǎn)血矛線蟲的防控及避免耐藥性的產(chǎn)生具有重要意義。本研究基于轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)篩選出的耐藥基因GST，對其進(jìn)行原核表達(dá)及生物信息學(xué)分析，成功的表達(dá)了pET30a(+)-GST重組蛋白，并分析了該蛋白的結(jié)構(gòu)和功能。SDS-PAGE分析顯示，rGST在誘導(dǎo)表達(dá)后的6 h達(dá)到最大表達(dá)量，不同溫度對重組表達(dá)菌表達(dá)量的影響較大，rGST在誘導(dǎo)溫度為37 ℃時(shí)達(dá)到最大表達(dá)量，IPTG誘導(dǎo)顯示，rGST在0.05～4.0 mmol/L誘導(dǎo)下均得到了表達(dá)，且表達(dá)量無顯著差異，選擇濃度較小的0.05 mmol/L作為IPTG的最佳誘導(dǎo)濃度。另外，該蛋白以包涵體形式表達(dá)，利用Ni+柱對其進(jìn)行純化時(shí)發(fā)現(xiàn)，200、250和300 mmol/L咪唑均可將GST蛋白洗脫，且純度較高。

隨著后基因組時(shí)代的到來，生物信息學(xué)技術(shù)已成為生命科學(xué)領(lǐng)域研究的重要工具之一。分析蛋白質(zhì)理化性質(zhì)、預(yù)測蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)及抗原表位，對解析基因的結(jié)構(gòu)、功能及篩選藥物靶點(diǎn)候選分子具有重要的意義。本研究利用在線軟件對GST蛋白進(jìn)行預(yù)測。生物信息學(xué)分析表明，GST蛋白具有完整的ORF，編碼360個(gè)氨基酸，理論等電點(diǎn)pI為9.53，共3 317個(gè)原子，分子式為C1083H1657N277O294S6，屬于穩(wěn)定的親水性蛋白，親水性蛋白有利于蛋白的高效表達(dá)，利于抗原抗體的嵌合?？缒^(qū)和信號肽預(yù)測表明，該蛋白不含有跨膜區(qū)和信號肽，屬于膜外蛋白，推測該蛋白可能在細(xì)胞合成后直接發(fā)揮生物學(xué)作用。磷酸化位點(diǎn)預(yù)測表明，當(dāng)潛在磷酸化位點(diǎn)的閾值為0.5時(shí)，該蛋白含有12個(gè)磷酸化位點(diǎn)，其中4個(gè)絲氨酸位點(diǎn)，6個(gè)蘇氨酸位點(diǎn)，2個(gè)酪氨酸位點(diǎn)。二級結(jié)構(gòu)預(yù)測表明，α-螺旋是構(gòu)成二級結(jié)構(gòu)的主要成分。三級結(jié)構(gòu)預(yù)測表明，GMQE值為0.81，趨近于1，且具備典型結(jié)構(gòu)。近年來，隨著生物信息學(xué)的快速發(fā)展，表位疫苗已成為疫苗研究的熱點(diǎn)，因此對抗原表位的預(yù)測具有重要的意義。抗原表位預(yù)測表明，GST蛋白含有較多的B細(xì)胞抗原表位，具有較好的抗原性，與Liu等[18]旋毛蟲GST蛋白上的研究一致。

GST是生物體內(nèi)一類重要的解毒酶系，在藥物作用下該基因常發(fā)揮其解毒功能，保護(hù)機(jī)體不受外界選擇壓力的傷害。該蛋白在耐藥性中發(fā)揮著重要的作用，Sevastos等[19]研究表明，在禾谷鐮刀菌中GST基因介導(dǎo)丙硫咪唑藥物的耐藥；Sayani等[20]研究發(fā)現(xiàn)，GST基因在小菜蛾氰戊菊酯耐藥株的表達(dá)量是敏感株的9.5倍，證實(shí)了伊朗地區(qū)小菜蛾對殺蟲劑的抗性機(jī)制與GST有關(guān)；Kamita[21]等研究發(fā)現(xiàn)蚊子對菊酯類藥物的耐藥性增加，與GST基因的表達(dá)量上調(diào)有關(guān)。本研究發(fā)現(xiàn)，GST基因在捻轉(zhuǎn)血矛線蟲也具有類似生物學(xué)功能，可能在響應(yīng)丙硫咪唑選擇壓力過程中發(fā)揮著重要作用。對GST功能和結(jié)構(gòu)的深入探討不僅有助于了解蟲體對丙硫咪唑的耐藥機(jī)制，也可為捻轉(zhuǎn)血矛線蟲耐藥性早期檢測提供參考。

本研究成功構(gòu)建了捻轉(zhuǎn)血矛線蟲GST基因原核表達(dá)系統(tǒng)，并對表達(dá)條件進(jìn)行優(yōu)化，獲得了GST重組蛋白；結(jié)構(gòu)分析發(fā)現(xiàn)，蛋白質(zhì)無跨膜區(qū)和信號肽，α-螺旋是構(gòu)成二級結(jié)構(gòu)的主要成分；抗原表位預(yù)測表明，GST蛋白是一種含有7個(gè)較好抗原表位的親水性蛋白。推測GST基因有望用作捻轉(zhuǎn)血矛線蟲耐藥性診斷抗原和疫苗候選抗原。