雞蛋卵轉(zhuǎn)鐵蛋白螯合鐵及其對(duì)大鼠貧血模型的影響

付 星 李述剛 黃 茜 袁小軍 胡明燁 馬美湖*

（1 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科技學(xué)院 國(guó)家蛋品加工技術(shù)研發(fā)分中心 武漢430070

2 湖北工業(yè)大學(xué)生物工程與食品學(xué)院 武漢430068）

鐵缺乏可以引起缺鐵性貧血，導(dǎo)致皮膚蒼白、易疲勞、注意力分散、氣促、心跳過速等癥狀。營(yíng)養(yǎng)性缺鐵貧血是當(dāng)今世界上最常見的營(yíng)養(yǎng)缺乏病之一，也是全球所矚目的公共衛(wèi)生問題之一，而患此病的人群主要是嬰幼兒、發(fā)育期青少年和婦女[1-2]。缺鐵性貧血對(duì)嬰幼兒智力及行為發(fā)育的影響很大，研究表明患缺鐵性貧血的兒童與正常兒童相比，排除出生、營(yíng)養(yǎng)、父母智商和家庭環(huán)境等因素的影響，其智力行為發(fā)展指數(shù)也顯著的低，且與貧血的程度、時(shí)間有著直接的關(guān)系[3]。口服鐵劑是治療缺鐵性貧血的首選藥物，而傳統(tǒng)補(bǔ)鐵劑中的多數(shù)均存在對(duì)胃、腸道有較大刺激性，且具有不同程度的鐵腥味以及其它副作用，限制了它的使用[4-5]。隨著新型補(bǔ)鐵劑的開發(fā)，人們發(fā)現(xiàn)有機(jī)鐵具有適口性好，副作用小，吸收率高，容易被人體吸收等特點(diǎn)，是一種優(yōu)良的補(bǔ)鐵劑[6]。例如：多糖螯合鐵通過胃酸的作用釋放鐵離子后，以分子形式完整地被腸道吸收，多糖鐵配合物受溫度、pH等的影響小，研究結(jié)果顯示多糖鐵是一類很有前途的新型高效的口服補(bǔ)鐵劑[7]。此外，還有血紅素鐵，主要存在于哺乳動(dòng)物機(jī)體的攜氧蛋白上，作為一種生物態(tài)鐵可以促進(jìn)骨髓造血，并對(duì)缺鐵性貧血有良好的治療效果，是至今人們發(fā)現(xiàn)的無毒副作用，補(bǔ)鐵效果最好的治療藥物之一[8]。

卵轉(zhuǎn)鐵蛋白（Ovotransferrin）亦稱卵伴白蛋白，是一種糖蛋白，屬于轉(zhuǎn)鐵蛋白家族的成員，具有抗菌、抗病毒、免疫調(diào)節(jié)、抗癌和抗氧化等作用。蛋清中含有大量的卵轉(zhuǎn)鐵蛋白，而乳鐵蛋白在乳中的含量甚微，且工業(yè)化難度較大。研究發(fā)現(xiàn)，卵轉(zhuǎn)鐵蛋白與乳鐵蛋白具有非常近似的生物活性，此外在蛋白的分離純化、理化性質(zhì)與結(jié)構(gòu)表征及體外抗菌、抑制游離基形成等方面的研究亦具有相似的地方[9]。臨床實(shí)驗(yàn)證明，嬰兒服用后并無異源蛋白常有的過敏等不良反應(yīng)[10]。卵轉(zhuǎn)鐵蛋白是一種良好的食品因子和生物醫(yī)藥產(chǎn)品，可作為功能性添加劑添加到一些食品配方中，不會(huì)產(chǎn)生敏感的刺激性氣味。卵轉(zhuǎn)鐵蛋白的每個(gè)分子中有2個(gè)配位中心可與鐵、銅或鋅等金屬離子結(jié)合。它可用作開發(fā)新型生物補(bǔ)鐵制劑，起營(yíng)養(yǎng)保健的功效[11]。2003年，黃登宇等[12]以轉(zhuǎn)鐵蛋白為基礎(chǔ)，研究高鐵制劑對(duì)缺鐵小鼠模型的影響，結(jié)果顯示有一定的補(bǔ)血作用，同時(shí)可提高小鼠SOD活力。2010年，杜華英等[13]研究了卵轉(zhuǎn)鐵蛋白鐵制劑用于恢復(fù)缺鐵性貧血小鼠，顯著效果。研究表明卵轉(zhuǎn)鐵蛋白不僅補(bǔ)鐵效果好，而且不會(huì)引起毒副作用，已成為本領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)[13]。卵轉(zhuǎn)鐵蛋白結(jié)合的鐵元素通過腸黏膜細(xì)胞可以直接吸收，生物利用率較高，不會(huì)對(duì)胃、腸道產(chǎn)生任何的刺激作用，是一類具有發(fā)展?jié)摿Φ难a(bǔ)鐵劑。

本文以卵轉(zhuǎn)鐵蛋白結(jié)合三氯化鐵為鐵源，研究對(duì)缺鐵性貧血大鼠的抗貧血功效，為新型卵轉(zhuǎn)鐵蛋白補(bǔ)鐵劑產(chǎn)品的開發(fā)提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與設(shè)備

雞蛋，購(gòu)自九峰山養(yǎng)雞場(chǎng)。大鼠，由華中農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)院提供。動(dòng)物飼料，南通特洛菲飼料科技有限公司。

IF-5401熒光分光光度計(jì)，日本日立公司；DU700紫外-可見分光光度計(jì)，美國(guó)貝克曼庫(kù)爾特有限公司；CR-400色度儀，日本柯尼卡美能達(dá)；Nexus 470紅外光譜儀，美國(guó)梅特勤公司；NMI20-015V-I核磁共振成像分析儀，上海紐邁電子科技有限公司；JSM-6390LV掃描電鏡，日本NTC；APA2000激光顆粒度分布儀，英國(guó)馬爾文儀器有限公司；RE-2000E旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，上海耀特儀器設(shè)備有限公司；Beta1-8 LD plus冷凍干燥機(jī)，德國(guó)Christ公司。

1.2 方法

1.2.1 卵轉(zhuǎn)鐵蛋白鐵結(jié)合能力的測(cè)定 根據(jù)本實(shí)驗(yàn)室袁小軍[14]的方法獲得純化卵轉(zhuǎn)鐵蛋白，將其溶于pH 8.0 20mmol/L的Tris-HCI緩沖液中配制成2%（質(zhì)量分?jǐn)?shù)）的卵轉(zhuǎn)鐵蛋白溶液。分別考察不同F(xiàn)eCl3·6H2O濃度（0.05，0.10，0.15，0.20，0.25，0.30，0.35，0.40mmol/L），不同pH緩沖體系（pH 5.0，6.0，7.0，8.0，9.0 Tris-H3BO4），不同碳酸氫鈉濃度（0，40，80，160mmol/L，）和不同溫度（25，35，45，55，65，75℃）處理?xiàng)l件下，于465 nm處測(cè)定吸光值A(chǔ)。按照杜華英[15]的方法測(cè)定鐵結(jié)合能力。鐵飽和度根據(jù)鐵離子含量推算，100%鐵飽和度的卵轉(zhuǎn)鐵蛋白中鐵含量1.45μg，并利用原子吸收分光光度法測(cè)定樣品中鐵的含量[16]。

1.2.2 不同干燥條件卵轉(zhuǎn)鐵蛋白補(bǔ)鐵劑的制備在優(yōu)化條件下結(jié)合鐵的卵轉(zhuǎn)鐵蛋白溶液，經(jīng)離心、透析后，于-20℃冰箱里冷卻預(yù)凍，次日冷凍干燥。其工作條件為溫度-50℃，真空度0.1Pa，36 h，結(jié)束后獲得冷凍干燥卵轉(zhuǎn)鐵蛋白粉。噴霧干燥組樣品的工作條件為進(jìn)風(fēng)口溫度170℃，反應(yīng)結(jié)束后獲得噴霧干燥卵轉(zhuǎn)鐵蛋白粉。

1.2.3 卵轉(zhuǎn)鐵蛋白補(bǔ)鐵劑的性質(zhì)測(cè)定 分別采用快速水分測(cè)定儀、水分活度儀、UltraScan Pro高精度分光測(cè)色儀、APA2000激光顆粒度分布儀、核磁共振儀、紅外光譜、JSM-6390LV掃描電鏡測(cè)定卵轉(zhuǎn)鐵蛋白產(chǎn)品的含水量、水分活度、溶解性、色度、粒徑分布、水分分布、功能化學(xué)鍵、微觀結(jié)構(gòu)等參數(shù)。

1.2.4 動(dòng)物分組 SPF級(jí)雌性初斷乳SD大鼠80只，21 d初斷乳。分組：將大鼠平均分為6組，A組為正常組，B組為冷凍干燥卵轉(zhuǎn)鐵蛋白補(bǔ)鐵劑組，C組為噴霧干燥卵轉(zhuǎn)鐵蛋白補(bǔ)鐵劑組，D組為陽性對(duì)照組（硫酸亞鐵組），E組為恢復(fù)組，F(xiàn)組為陰性對(duì)照組，在處理0，10，20，30 d時(shí)分別取材檢測(cè)。

1.2.5 動(dòng)物飼料及缺鐵模型建立 普通飼料同樣采用美國(guó)營(yíng)養(yǎng)學(xué)會(huì)推薦的AIN-93G純化飼料，低鐵飼料將配方中的鐵源去除。除正常組（A）外，其余每組（B、C、D、E、F）均喂養(yǎng)缺鐵飼料和去離子水，當(dāng)大鼠Hb含量低于90 g/L時(shí)即造模成功。

1.2.6 飼養(yǎng)與給藥 所有大鼠均采用不銹鋼籠飼養(yǎng)，動(dòng)物房溫度維持在（25±1）℃，相對(duì)濕度維持在50%，光暗周期為12 h。根據(jù)正常大鼠每日攝入鐵量2.4mg/100 g bw，硫酸亞鐵0.3 g/片，每片含鐵60mg，B組和C組每天以40mg/100 g bw灌胃（按含鐵量折算卵轉(zhuǎn)鐵蛋白質(zhì)量），D組每天以硫酸亞鐵12mg/100 g bw灌胃。A組和E組喂養(yǎng)正常飼料和正常飲水，其余各組（B、C、D、F）繼續(xù)喂養(yǎng)缺鐵飼料和去離子水。在藥物處理0，10，20，30 d分別取材檢測(cè)。

1.2.7 全血指標(biāo)的測(cè)定 將采集的全血置于0.5 mL EDTAK2抗凝管中，反復(fù)顛倒5～10次。采血過程中血液保存于4℃冰箱，待全部動(dòng)物采血完畢后于當(dāng)天送至武漢廣州軍區(qū)總醫(yī)院檢驗(yàn)科。RBC、Hb、HCT、MCV、RDW、MCH均 使 用Sysmex xs-1000i全自動(dòng)血液分析儀測(cè)定。

1.2.8 血清指標(biāo)的測(cè)定 將采集的血液注入2 mL EP管中（不添加抗凝劑），于37℃恒溫培養(yǎng)箱1 h，使其充分凝固，然后置于4℃冰箱中過夜，3 000 r/min離心20min，用1mL吸管小心吸取上清液，送武漢廣州軍區(qū)總醫(yī)院檢驗(yàn)科測(cè)定血清鐵蛋白（SF）、血清鐵含量（SI）、血清總鐵結(jié)合力（TIBC）及血清轉(zhuǎn)鐵蛋白（TRF）。

1.2.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 全部試驗(yàn)數(shù)據(jù)使用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 卵轉(zhuǎn)鐵蛋白鐵結(jié)合能力的優(yōu)化

轉(zhuǎn)鐵蛋白是一種能轉(zhuǎn)運(yùn)Fe3+的鐵結(jié)合蛋白，是一種非血紅素結(jié)合鐵的β-球蛋白，一個(gè)分子能可逆地結(jié)合2個(gè)Fe3+，同時(shí)結(jié)合2個(gè)CO32-或HCO3-，陰離子的結(jié)合與Fe3+的結(jié)合是協(xié)同的。理論上，1個(gè)卵轉(zhuǎn)鐵蛋白分子可以結(jié)合2個(gè)Fe3+。本試驗(yàn)研究了環(huán)境因素對(duì)卵轉(zhuǎn)鐵蛋白鐵結(jié)合能力的影響，包括Fe3+濃度、pH值、熱處理、NaHCO3的濃度。如圖1所示，未加Fe3+時(shí)，A465為0.07，說明提取的天然卵轉(zhuǎn)鐵蛋白含有少量的鐵。隨著Fe3+濃度的增加，卵轉(zhuǎn)鐵蛋白的A465nm值增大，說明卵轉(zhuǎn)鐵蛋白逐漸被鐵飽和。當(dāng)Fe3+濃度增加到0.4 mmol/L后，A465nm增長(zhǎng)趨緩。在中性和偏堿性環(huán)境中，卵轉(zhuǎn)鐵蛋白的鐵結(jié)合能力較高。在轉(zhuǎn)鐵蛋白結(jié)構(gòu)中，HCO3-和一些堿性氨基酸殘基（如Arg121、Lys210）連接，起到一種增效陰離子的作用，使蛋白質(zhì)組分與Fe3+的結(jié)合更加緊密[17]。NaHCO3濃度為120mmol/L時(shí)，HCO3-的協(xié)同增效作用較為有效，表明轉(zhuǎn)鐵蛋白的空穴部位已被HCO3-飽和，不再體現(xiàn)增效作用。溫度對(duì)卵轉(zhuǎn)鐵蛋白的鐵結(jié)合能力影響較大，60℃條件下處理仍能保持卵轉(zhuǎn)鐵蛋白的鐵結(jié)合能力。此外，高的凈電荷引起分子間強(qiáng)烈靜電斥力，導(dǎo)致蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)充分展開，促使卵轉(zhuǎn)鐵蛋白環(huán)狀結(jié)構(gòu)打開，暴露出鐵結(jié)合樣點(diǎn)，利于卵轉(zhuǎn)鐵蛋白結(jié)合帶正電荷的Fe3+[18]。試驗(yàn)結(jié)果顯示：pH 8.0時(shí)，卵轉(zhuǎn)鐵蛋白結(jié)合能力較高，與理論相吻合。綜上，優(yōu)化條件下，卵轉(zhuǎn)鐵蛋白的鐵結(jié)合能力為91.5%。經(jīng)原子吸收分光光度法測(cè)定螯合鐵卵轉(zhuǎn)鐵蛋白樣品的鐵含量達(dá)到1.28μg/g，卵轉(zhuǎn)鐵蛋白的鐵飽和度為89.2%，接近理論值。

圖1 卵轉(zhuǎn)鐵蛋白鐵結(jié)合能力的優(yōu)化圖Fig.1 Optimization of the iron-binding capacity of ovotransferrin

2.2 不同干燥條件下螯合鐵卵轉(zhuǎn)鐵蛋白的理化性質(zhì)

缺鐵卵轉(zhuǎn)鐵蛋白干燥后為白色絮狀固體，經(jīng)螯合后含鐵卵轉(zhuǎn)鐵蛋白為粉紅色絮狀固體，溶解性進(jìn)一步提升。

用傅里葉紅外光譜分析兩種常規(guī)的處理工藝對(duì)螯合鐵卵轉(zhuǎn)鐵蛋白的影響，結(jié)果（圖2）顯示兩種干燥方式獲得的卵轉(zhuǎn)鐵蛋白粉峰型完全重合，表明干燥方式對(duì)卵轉(zhuǎn)鐵蛋白鐵結(jié)構(gòu)無影響。

表1中色度分析結(jié)果顯示，冷凍干燥與噴霧干燥獲得的卵轉(zhuǎn)鐵蛋白之間存在極顯著差異，其色度L值分別為77.0和90.6。冷凍干燥處理后的卵轉(zhuǎn)鐵蛋白顏色呈橘粉色，而噴霧干燥的為淡粉色。

圖2 不同干燥條件卵轉(zhuǎn)鐵蛋白的傅里葉紅外圖譜Fig.2 The FT-IR spectra of ovotransferrin by different kinds of drying methods

表1 不同干燥條件卵轉(zhuǎn)鐵蛋白的色度Table1 Chromaticity color of ovotransferrin by different kinds of drying methods

表2顯示：冷凍干燥與噴霧干燥獲得的卵轉(zhuǎn)鐵蛋白含水量分別為4.45%和5.77%，而水分活度分別為0.48和0.49，無明顯差異。水分分布（數(shù)據(jù)未列出）表明噴霧干燥獲得的卵轉(zhuǎn)鐵蛋白中水的分布狀態(tài)有3種：一部分結(jié)合水占比42%，大部分親和水占比52%。親和水分為兩種：親和較強(qiáng)的占比28%，親和較弱的占比24%，還含有少量的自由水占比6%。而冷凍干燥獲得的卵轉(zhuǎn)鐵蛋白中水的分布狀態(tài)有兩種：少部分結(jié)合水占比9%，絕大部分分布在親和水部分，占比91%。粒徑分析結(jié)果D[3，2]和D[4，3]均存在極顯著性差異。冷凍干燥獲得的卵轉(zhuǎn)鐵蛋白的D[3，2]為17.7μm，D[4，3]為93.8μm，而噴霧干燥獲得的卵轉(zhuǎn)鐵蛋白的D[3，2]為4.6μm，D[4，3]為22.3μm，冷凍干燥獲得的卵轉(zhuǎn)鐵蛋白的平均粒徑顯著高于噴霧干燥的。然而，粉體粒徑越小粉體間越容易吸附，流動(dòng)性越差。流動(dòng)性過小粉體容易產(chǎn)生粘附，對(duì)加工成片劑十分不便。冷凍干燥獲得的卵轉(zhuǎn)鐵蛋白流動(dòng)性明顯強(qiáng)于噴霧干燥，表明冷凍干燥的卵轉(zhuǎn)鐵蛋白具有更好的成片性，有利于加工成片劑。冷凍干燥的卵轉(zhuǎn)鐵蛋白完全溶解時(shí)間為77 s，噴霧干燥的卵轉(zhuǎn)鐵蛋白的完全溶解時(shí)間為91 s，冷凍干燥獲得的卵轉(zhuǎn)鐵蛋白相對(duì)噴霧干燥更易溶于水，有更快的溶解速率。

表2 卵轉(zhuǎn)鐵蛋白的理化性質(zhì)Table2 Physicochemical properties of ovotransferrin products

2.3 螯合鐵卵轉(zhuǎn)鐵蛋白的微觀結(jié)構(gòu)

利用掃描電鏡分別觀察冷凍干燥卵轉(zhuǎn)鐵蛋白與噴霧干燥卵轉(zhuǎn)鐵蛋白的微觀結(jié)構(gòu)，發(fā)現(xiàn)200倍數(shù)下可以觀察到噴霧干燥的卵轉(zhuǎn)鐵蛋白較細(xì)小，小部分粉體聚集。而冷凍干燥的卵轉(zhuǎn)鐵蛋白呈大小不一的片狀結(jié)構(gòu)，顆粒相對(duì)噴霧干燥較大，此結(jié)果與粒徑分布儀數(shù)據(jù)一致。冷凍干燥獲得的卵轉(zhuǎn)鐵蛋白呈較大的片狀，這可能是由于冷凍干燥的卵轉(zhuǎn)鐵蛋白收集過程是通過碾壓獲得，所以粉體大小不一。

圖3 螯合鐵卵轉(zhuǎn)鐵蛋白的掃描電鏡圖Fig.3 SEM image of ovotransferrin products

2.4 螯合鐵卵轉(zhuǎn)鐵蛋白對(duì)大鼠體重及臟器指數(shù)的影響

補(bǔ)鐵后大鼠平均體重和各臟器指數(shù)如表3所示。補(bǔ)鐵結(jié)束后，所有試驗(yàn)組的大鼠體重均明顯高于F組（P＜0.01），說明缺鐵對(duì)大鼠體重的增長(zhǎng)有延緩作用。30 d時(shí)，增重率最高的為B組（41.8%），其次是正常組（40.3%）。大鼠服用螯合鐵卵轉(zhuǎn)鐵蛋白補(bǔ)鐵30 d后，體重增長(zhǎng)率趨向正常水平，相對(duì)陽性對(duì)照，硫酸亞鐵補(bǔ)鐵組未出現(xiàn)不良反應(yīng)。肝臟、脾臟是機(jī)體最主要的鐵儲(chǔ)存器官，在機(jī)體內(nèi)鐵主要以鐵蛋白和含鐵血黃素形式存在于肝臟和脾臟中。由表3可以發(fā)現(xiàn)補(bǔ)鐵后，冷凍干燥卵轉(zhuǎn)鐵蛋白和噴霧干燥卵轉(zhuǎn)鐵蛋白的肝臟指數(shù)與缺鐵組有顯著性差異（P＜0.01），說明這兩種鐵源可能更有利于大鼠肝臟組織的生長(zhǎng)、發(fā)育和更新。對(duì)于脾臟指數(shù)，兩組間沒有顯著性差異（P＞0.05）。

表3 螯合鐵卵轉(zhuǎn)鐵蛋白對(duì)缺鐵性貧血大鼠體重及臟器指數(shù)的影響Table3 Effect of ovotransferrin products on body weight and organ indexes of iron-deficiency anemia rats

2.5 螯合鐵卵轉(zhuǎn)鐵蛋白對(duì)大鼠血常規(guī)的影響

測(cè)試各組大鼠血常規(guī)的7個(gè)指標(biāo)，分別是紅細(xì)胞計(jì)數(shù)（RBC）、血紅蛋白濃度（Hb）、血細(xì)胞壓積（HCT）、紅細(xì)胞分布寬度（RDW）、紅細(xì)胞平均血紅蛋白量（MCH）、紅細(xì)胞平均血紅蛋白濃度（MCHC）、紅細(xì)胞平均體積（MCV）。紅細(xì)胞計(jì)數(shù)，是指單位體積血液中所含的紅細(xì)胞數(shù)目，對(duì)于提示累及紅細(xì)胞系統(tǒng)的疾病有重要意義。由表4可知，給藥前，除A組正常大鼠外，其余各組的血常規(guī)無顯著性差異。30 d后，各組RBC值均顯著高于F組（P＜0.01），且B，C組高于正常組大鼠。血紅蛋白又稱血色素，是紅細(xì)胞的主要組成部分，能與氧結(jié)合，運(yùn)輸氧和二氧化碳。血紅蛋白增高、降低的臨床意義基本和紅細(xì)胞計(jì)數(shù)的臨床意義相似，血紅蛋白能更好地反映貧血的程度。Hb、HCT、MCV實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，給藥結(jié)束后各組均顯著高于F組（P＜0.01），其中B組在30 d時(shí)的血紅蛋白質(zhì)量濃度達(dá)到163.47 g/L，C組達(dá)到171.39 g/L，增幅分別為136.1%和166.3%，略高于D組（117.5%）。血細(xì)胞壓積結(jié)果顯示B組和C組在30 d后分別恢復(fù)到43.67%和45.2%，與A組和D組差異不顯著（P＜0.05）。

表4 螯合鐵卵轉(zhuǎn)鐵蛋白對(duì)缺鐵性貧血大鼠血常規(guī)（RBC、Hb、HCT、RDW）的影響Table4 Effect of ovotransferrin products on blood indexes（RBC，Hb，HCT，RDW）of iron-deficiency anemia rats

紅細(xì)胞平均血紅蛋白含量和紅細(xì)胞平均體積下降，表現(xiàn)于小細(xì)胞低色素性貧血多為正常細(xì)胞性貧血，臨床上多見于缺鐵性貧血[19]。血紅蛋白含量正?；蚱?，提示體內(nèi)鐵質(zhì)豐富，無需補(bǔ)鐵。血紅蛋白含量偏低，表示體內(nèi)缺鐵，進(jìn)而影響血紅蛋白的合成和攜氧能力，造成貧血，阻礙身體各項(xiàng)生理活動(dòng)的正常進(jìn)行。表5顯示螯合鐵卵轉(zhuǎn)鐵蛋白對(duì)缺鐵性貧血大鼠血常規(guī)（MCH、MCHC、MCV）的影響，在給藥期內(nèi)所有實(shí)驗(yàn)組大鼠的MCH值和MCV值均明顯大于F組（P＜0.01），說明貧血大鼠對(duì)螯合鐵卵轉(zhuǎn)鐵蛋白的生物利用度較高。綜上所述，螯合鐵卵轉(zhuǎn)鐵蛋白對(duì)血常規(guī)7個(gè)指標(biāo)有顯著的促進(jìn)作用，經(jīng)過30 d的給藥處理，與正常大鼠的指標(biāo)接近。

表5 螯合鐵卵轉(zhuǎn)鐵蛋白對(duì)缺鐵性貧血大鼠血常規(guī)（MCH、MCHC、MCV）的影響Table5 Effect of ovotransferrin products on blood indexes（MCH，MCHC，MCV）of iron-deficiency anemia rats

2.6 螯合鐵卵轉(zhuǎn)鐵蛋白對(duì)大鼠血清指數(shù)的影響

測(cè)試卵轉(zhuǎn)鐵蛋白對(duì)缺鐵性貧血大鼠血清指標(biāo)的4個(gè)指標(biāo)，分別是血清鐵含量（SI）、血清鐵蛋白含量（SF）、轉(zhuǎn)鐵蛋白含量（TRF）和鐵總結(jié)合力（TIBC）。其中血清鐵是人體的必需元素，具有生理活性的鐵除以血漿的轉(zhuǎn)鐵蛋白形式存在外，主要以血紅素的形式存在，因此，缺鐵會(huì)引起貧血。血清鐵蛋白是去鐵蛋白和鐵核心Fe3+形成的復(fù)合物[20]。鐵蛋白的鐵核心Fe3+具有強(qiáng)大的結(jié)合鐵和貯備鐵的能力，以維持體內(nèi)鐵的供應(yīng)和血紅蛋白相對(duì)穩(wěn)定性[21]。SF是鐵的貯存形式，其含量變化可作為判斷是否缺鐵或鐵負(fù)荷過量的指標(biāo)[22]。由表6可知，給藥前，除A組正常大鼠外，其余各組的血清指標(biāo)無顯著性差異。30 d后，各組血清鐵含量和血清鐵蛋白含量均顯著高于F組（P＜0.01），且B，C組的血清鐵蛋白含量分別達(dá)到108.29 ng/mL和117.45 ng/mL，高于正常組大鼠。轉(zhuǎn)鐵蛋白含量的升高常見于缺鐵性貧血和鐵蛋白升高的情況，說明冷凍干燥卵轉(zhuǎn)鐵蛋白和噴霧干燥卵轉(zhuǎn)鐵蛋白及硫酸亞鐵對(duì)缺鐵性貧血大鼠有一定的治療作用。B組與A組指標(biāo)無顯著性差異（P＜0.05），表明缺鐵性貧血大鼠該指標(biāo)已恢復(fù)到正常水平。血清總鐵結(jié)合力（TIBC）是指血清中轉(zhuǎn)鐵蛋白能與鐵結(jié)合的總量，反映血漿轉(zhuǎn)鐵蛋白的水平[23]。由于缺鐵性貧血時(shí)機(jī)體缺鐵，與鐵結(jié)合的轉(zhuǎn)鐵蛋白比通常情況要少，所以未與鐵結(jié)合的轉(zhuǎn)鐵蛋白增加導(dǎo)致TIBC升高。數(shù)據(jù)顯示B組、C組和D組的TIBC值由0 d的164.38，158.41μmol/L和147.13μmol/L分別降至89.31，81.31μmol/L和78.31μmol/L，接近于正常組大鼠指標(biāo)。綜上所述，螯合鐵卵轉(zhuǎn)鐵蛋白對(duì)貧血大鼠血清的4個(gè)指標(biāo)均有顯著的促進(jìn)作用，30 d的給藥處理后與正常大鼠的指標(biāo)接近。

表6 卵轉(zhuǎn)鐵蛋白對(duì)缺鐵性貧血大鼠血清指標(biāo)的影響Table6 Effect of ovotransferrin products on serum indexes of iron-deficiency anemia rats

3 結(jié)論

缺鐵性貧血是發(fā)展中國(guó)家比較普遍的一種功能型貧血，多發(fā)生在青少年和孕婦。天然純化的卵轉(zhuǎn)鐵蛋白含鐵量較低，經(jīng)過條件優(yōu)化可提高鐵結(jié)合能力，滿足缺鐵大鼠對(duì)鐵源的需要。臨床上一直使用硫酸亞鐵作為首選藥物，副作用發(fā)生率高，穩(wěn)定性差，易被氧化。卵轉(zhuǎn)鐵蛋白補(bǔ)鐵劑的開發(fā)有望解決此類問題。本試驗(yàn)結(jié)果表明，冷凍干燥卵轉(zhuǎn)鐵蛋白與噴霧干燥卵轉(zhuǎn)鐵蛋白在色度、粒徑分布、完全溶解時(shí)間等方面存在極顯著的差異，而在水分活度和化學(xué)鍵結(jié)構(gòu)上無明顯差異。在大鼠服用螯合鐵轉(zhuǎn)鐵蛋白補(bǔ)鐵30 d后，體重增長(zhǎng)率、血常規(guī)和血清指標(biāo)趨向正常水平，相對(duì)陽性對(duì)照（硫酸亞鐵補(bǔ)鐵組）并未出現(xiàn)不良反應(yīng)。綜上所述，螯合鐵卵轉(zhuǎn)鐵蛋白具有較好的治療缺鐵性貧血的作用。本結(jié)果有望為開發(fā)一種新型的治療缺鐵性貧血的補(bǔ)鐵劑提供理論基礎(chǔ)。