平敏煎對(duì)慢性蕁麻疹模型大鼠的影響*

★ 喻國(guó)華 施德全 李智萍

（1.江西中醫(yī)藥高等?？茖W(xué)校皮膚科 江西 撫州 344000；2.撫州市婦幼保健院 江西 撫州 344000）

蕁麻疹是由多種因素引起的皮膚、粘膜小血管擴(kuò)張及滲透性增強(qiáng)而出現(xiàn)的一種局限性水腫隆起，以風(fēng)團(tuán)和瘙癢為主要臨床表現(xiàn)。慢性蕁麻疹（CU）目前認(rèn)為其發(fā)病主要與Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)有關(guān)，血清IgE 作為介導(dǎo)Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)的主要抗體，在變態(tài)反應(yīng)疾病中起關(guān)鍵作用［1］。IL-4 是 Ig E 的特異性誘導(dǎo)劑，能促使 B 細(xì)胞產(chǎn)生IgM 并轉(zhuǎn)變?yōu)镮gE，在IgE 正反饋效應(yīng)中起到重要的作用［2］。5-HT 是組織液外滲，風(fēng)團(tuán)形成的主要機(jī)制［3］，在臨床上至少有3/4 的CU 患者找不到過(guò)敏源，致使CU 非常頑固。西醫(yī)以抗組胺藥物治療為主，輔以免疫調(diào)節(jié)、脫敏等治療，抗組胺藥雖有效，但停藥后復(fù)發(fā)率高，長(zhǎng)期用藥耐藥性增加的等問(wèn)題一直沒得到解決。因此積極開展中藥治療CU 的實(shí)驗(yàn)研究，尋找中藥抗變態(tài)反應(yīng)的有效藥物，并探索其可能的作用機(jī)制非常有必要。本課題采用現(xiàn)代免疫學(xué)技術(shù)，觀察平敏煎對(duì)CU 小鼠相關(guān)因子的影響。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物wistar 大鼠60 只，體重200～220g，雄雌各半，飼養(yǎng)室溫度22℃±2 ℃，相對(duì)濕度70%±5%。均購(gòu)自南昌大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，許可證號(hào)SCXK（贛）2018-0018，實(shí)驗(yàn)期間分籠喂養(yǎng)，每籠飼養(yǎng)大鼠5 只。

1.2 實(shí)驗(yàn)藥物平敏煎的組成為：生地黃、何首烏、防風(fēng)、荊芥、白鮮皮、刺蒺藜、五味子、烏梅、丹皮、地骨皮各10g，煅龍骨、生黃芪20g，苦參、黃柏各9g，當(dāng)歸6g，全蝎3g，蜈蚣2 條。生藥均由江西中醫(yī)藥高等?？茖W(xué)校附屬醫(yī)院中藥房提供。氯雷他定片，10mg/片，上海先靈葆雅制藥有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字：H20180410。將藥片研磨成粉末加入生理鹽水配成10mg/mL 溶液待用。

1.3 主要試劑及儀器設(shè)備P 物質(zhì)（SP）試劑盒，上海江萊生物科技有限，批號(hào)：20170824；5-羥色胺（5-HT），上海博谷生物科技有限公司，批號(hào)：80362801；人白介素4（IL-4）試劑盒（上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司，批號(hào)：20171036；干擾素-γ（上海滬峰生物科技有限公司，批號(hào)：20173028）。卵白蛋白，上?？道噬锟萍加邢薰荆?hào)：F20170521；AI（OH）懸液，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑公司， 批號(hào)：F20170417；ELX80O 型酶標(biāo)儀，美國(guó)BIOTEK 公司；XYJ—2 型臺(tái)式高速離心機(jī)，江蘇醫(yī)療儀器設(shè)備廠；切片機(jī)，德國(guó)克林藍(lán)公司；熒光分光光度計(jì)，上海精密儀器儀表有限公司。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 平敏煎制備按照生藥劑量比例根據(jù)文獻(xiàn)折算給藥量，并擴(kuò)大5 倍。稱取上述藥品，加入10倍清水中浸泡30min 后，然后將藥材及浸泡液轉(zhuǎn)至煎藥鍋中加水至水面超過(guò)藥面一指，武火煮沸后改用文火煎熬，煎熬過(guò)程中用玻璃棒時(shí)時(shí)攪拌，文火煎熬40min 后將藥液倒出至另一容器中，藥鍋中再次加水如前煎熬30min 后將藥液倒出。將兩次所得藥液用8 層紗布過(guò)濾、混勻后于火上濃縮為每1mL 藥液含1g 生藥的提取物，裝入潔凈玻璃瓶中，封口膜封口，置于4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

2.2 造模除正常組外，每組小鼠腹腔內(nèi)注射卵白蛋白1mL 與AI（OH）懸液1mL 的混合液進(jìn)行初次免疫，第10d 重復(fù)1 次。從初次免疫后第6d開始給藥，共14d。

2.3 動(dòng)物分組與給藥方法取大鼠 60 只，隨機(jī)分為正常組、模型組、氯雷他定組、平敏煎高、中、低劑量組，每組 10 只。正常組和模型組每日灌服生理鹽水4mL/只；低劑量組、中劑量組、高劑組分別灌服平敏煎2.5g/kg、5g/kg、10g/kg；氯雷他定組灌服氯雷他定溶液10mg/kg。

2.4 取材與檢測(cè)

2.4.1 平敏煎對(duì)大鼠血清IgE、IL-4、SP、IFN-γ、5-HT 水平的影響上述大鼠未處死前頸動(dòng)脈取血，離心2000r/min，取血清，采用雙抗夾心 ELISA 法測(cè)定血清中IgE 含量。采用放射免疫分析法測(cè)定SP、IFN-γ、IL-4 含量，采用熒光分光光度法測(cè)定5-HT含量，均嚴(yán)格按照說(shuō)明書步驟操作。

2.4.2 平敏煎對(duì)大鼠腹腔肥大細(xì)胞脫顆粒的影響 取血后，處死大鼠，立即腹腔內(nèi)注射肥大細(xì)胞沖洗液，剖開腹腔，吸出全部液體，1500r/min 離心5min，棄上清制成肥大細(xì)胞懸液。進(jìn)行細(xì)胞涂片，鏡檢。隨機(jī)計(jì)數(shù)100 個(gè)細(xì)胞，計(jì)數(shù)脫顆粒細(xì)胞數(shù)，計(jì)算脫顆粒百分?jǐn)?shù)和抑制率。

2.4.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS18.0 軟件分析，計(jì)量資料用描述，用兩樣本t檢驗(yàn)對(duì)各組數(shù)據(jù)進(jìn)行比較，當(dāng)P＜0.05 時(shí)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 平敏煎對(duì)大鼠血清IgE、IL-4、SP、IFN-γ、5-HT水平的影響與正常組比較，模型組大鼠血清IgE、SP、IL- 4 水平極顯著升高，IFN-γ、5-HT 水平極顯著降低（P＜0.01），表明病理狀態(tài)下，機(jī)體免疫細(xì)胞分泌產(chǎn)生IgE、IL-4 異常旺盛， IFN-γ、5-HT分泌不足；與模型組比較，各治療組均能降低IgE、SP、IL-4 水平，提高IFN-γ、5-HT 水平（P＜0.05或P＜0.01），具體見表1。

表1 平敏煎對(duì)大鼠血清 IgE、IL- 4、SP、IFN-γ、5-HT水平的影響（，n=10）

表1 平敏煎對(duì)大鼠血清 IgE、IL- 4、SP、IFN-γ、5-HT水平的影響（，n=10）

注：與正常組相比，*P＜0.01；與模型組相比，#P＜0.05，△P＜0.01。

組別 IgE/ng·mL-1 IL- 4/μg·L-1 IFN-γ/μg·L-1 SP/ng·mL-1 5-HT/μg·L正常 5.68±0.65 18.64±2.73 46.01±1.72 58.01±9.86 124.23±2.89模型 9.96±0.67* 27.47±3.42* 35.65±4.58* 109.74±8.13★ 58.78±5.34*氯雷他定 5.72±1.12 20.25±2.28 44.63±4.26 62.19±7.26 119.69±7.68平敏煎高劑量組 5.73±0.79△ 20.15±3.26△ 43.52±3.28△ 61.01±11.32△ 120.57±13.36△平敏煎中劑量組 5.98±0.77# 23.13±2.34# 39.34±2.47# 89.53±3.48# 76.63±12.45#平敏煎低劑量組 6.24±0.83# 25.52±3.15# 37.43±3.74# 92.35±9.48# 68.54±11.26#

3.2 平敏煎對(duì)大鼠腹腔肥大細(xì)胞脫顆粒的影響與正常組比較，模型組脫顆粒率極顯著升高（P＜0.01），表明病理狀態(tài)下，肥大細(xì)胞大量脫顆粒，釋放多種炎癥介質(zhì)。與模型組比較，均可減少肥大細(xì)胞脫顆粒，差異有顯著性（P＜0.05 或P＜0.01），具體見表2。

表2 平敏煎對(duì)大鼠腹腔肥大細(xì)胞脫顆粒的影響（，n=10）

表2 平敏煎對(duì)大鼠腹腔肥大細(xì)胞脫顆粒的影響（，n=10）

注：與正常組比較，*P＜0.01；與模型組比較，#P＜0.05，△P＜0.01。

組別 脫顆粒率/% 抑制率/%正常 19.23±5.12 -模型 60.10±11.35* -氯雷他定 28.91±9.24 53.65±10.93平敏煎高劑量組 29.47±8.31△ 52.92±11.28平敏煎中劑量組 39.51±11.43# 38.36±15.17平敏煎低劑量組 42.53±9.84# 32.18±7.94

4 討論

氣血不足，營(yíng)衛(wèi)失和是慢性蕁麻疹的病理基礎(chǔ)。氣不足則衛(wèi)外失固，風(fēng)邪乘虛而入；血不足則虛風(fēng)內(nèi)生，肌膚失養(yǎng)而出現(xiàn)風(fēng)團(tuán)、皮膚瘙癢不已等癥，且反復(fù)發(fā)作，纏綿難愈。故治法應(yīng)兼顧標(biāo)本，以補(bǔ)益氣血，調(diào)理臟腑為主，兼祛外邪，消風(fēng)止癢。方中生地、何首烏、當(dāng)歸、丹皮、地骨皮養(yǎng)血潤(rùn)燥，養(yǎng)陰?kù)铒L(fēng)；荊芥、防風(fēng)、白鮮皮、刺蒺藜祛外風(fēng)；全蝎、蜈蚣屬蟲類藥，病久者以其搜風(fēng)入絡(luò)、搜剔化疲通絡(luò)藥；生黃芪與當(dāng)歸配益氣養(yǎng)血；苦參、黃柏祛濕止癢，防濕邪纏綿；烏梅、五味子酸收藥，與祛風(fēng)藥合用，一散一收，開合有度，祛邪而不傷正。全方共奏益氣養(yǎng)血、潤(rùn)燥祛風(fēng)、化疲通絡(luò)的功效。

目前，蕁麻疹的發(fā)病機(jī)制尚不完全清楚，其中心環(huán)節(jié)是肥大細(xì)胞活化脫顆粒，釋放多種炎性介質(zhì)等引起毛細(xì)血管擴(kuò)張及通透性增加，導(dǎo)致真皮淺層急性水腫。皮膚中的P 物質(zhì)能導(dǎo)致肥大細(xì)胞脫顆粒釋放介質(zhì)，引起組胺、類胰蛋白酶等生物活性物質(zhì)的快速釋放，可促進(jìn)免疫細(xì)胞吞噬作用和細(xì)胞因子的分泌［4-5］，并增加血管通透性，促進(jìn)白細(xì)胞外滲參與促炎過(guò)程［6］。SP 可直接刺激嗜酸性粒細(xì)胞釋放過(guò)氧化物酶、乳酸脫氫酶和氧自由基、血栓烷B2 等［7］。

血清Ig E 作為介導(dǎo)Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)的主要抗體，在變態(tài)反應(yīng)疾病中起關(guān)鍵作用。IL-4、IFN-γ 分別是Th1、Th2 細(xì)胞的自分泌因子，而且與Ig E 的生成密切相關(guān)。IL-4 可選擇性導(dǎo)致嗜酸性粒細(xì)胞從循環(huán)血管溢出向炎癥部位移行、聚集，增強(qiáng)肥大細(xì)胞來(lái)源的炎癥介質(zhì)活性，也是促肥大細(xì)胞生長(zhǎng)因子。IFN-γ 是由Th1 細(xì)胞分泌可誘導(dǎo)Th 細(xì)胞向Th1 細(xì)胞分泌，抑制IL- 4 誘導(dǎo)Th 細(xì)胞向Th2 細(xì)胞分化；可拮抗IL- 4 誘導(dǎo)B 淋巴細(xì)胞增殖及產(chǎn)生IgE［8］。5-HT 在慢性蕁麻疹發(fā)病中也取到重要作用，王俠生［9］通過(guò)測(cè)定尿5-羥吲哚乙酸、5-HT 發(fā)現(xiàn)均有異常，提示蕁麻疹的發(fā)病可能與5-HT 有關(guān)。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，模型組大鼠血清SP、IL- 4、Ig E、水平極顯著升高，IFN-γ、5-HT 水平極顯著降低。通過(guò)平敏煎治療后，IFN-γ、5-HT 水平顯著升高，而其余的都顯著下降，提示平敏煎具有調(diào)節(jié)炎癥介質(zhì)釋放，抑制體內(nèi)IgE 生成，從而抑制Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)的發(fā)生。