木賊鐮刀菌最適營養(yǎng)條件篩選

裴雙康 劉彥妮 弓玉紅 田晶

摘 要：以菌落生長速率、菌落直徑及產孢量為指標，從5種常用培養(yǎng)基中篩選最適合木賊鐮刀菌生長的培養(yǎng)基，再通過正交試驗對所選培養(yǎng)基進行優(yōu)化。結果表明，木賊鐮刀菌在SDAY培養(yǎng)基上生長最快，速率達6.736mm·d-1;直徑最大，為56.33mm;產孢量最大，達到3.66×107cfu·mL-1。正交試驗優(yōu)化后，最適合木賊鐮刀菌生長的培養(yǎng)基成分為蛋白胨10g、葡萄糖48g、酵母粉1.5g、瓊脂15g、蒸餾水1L。

關鍵詞：木賊鐮刀菌;培養(yǎng)基;菌落直徑;產孢量;正交實驗

中圖分類號 Q 939.5文獻標識碼 A文章編號 1007-7731（2020）（02-03）0024-03

Fusarium equiseti most Suitable Nutrition Condition Screening

Pei Shuangkang et al.

（Lvliang College of Life Sciences Department， Lvliang 033000， China）

Abstract： With the Fusarium equiseti as the research object， the growth rate， the diameter of the colony and the production of spores were the index， the medium best suited for its growth was selected from several commonly used mediums， and the selected medium was optimized by orthogonal test. The results showed that the F.equiseti grew fastest on SDAY， with a rate of 6.736 mm d-1， the largest diameter， 56.33 mm， and the largest spore production， reaching 3.66 x 107 cfu mL-1. After optimization through orthogonal testing， the most suitable medium components for the growth of? F.equiseti are protein sucrose 10 g， glucose 48 g， yeast powder 1.5 g， agar 15 g， distilled water 1 L.

Key words： Fusarium equiseti; Medium; Colony diameter; Spore production; Orthogonal experiment.

木賊鐮刀菌（Fusarium equiseti）是一種重要的蟲生真菌，分布方泛。木賊鐮刀菌能產生植物刺激素，如赤霉素等，這些刺激素可使農作物在一定程度上增產[1]，而且部分可產生纖維酶、果膠酶、脂肪酶等具有極大應用價值的酶類。

1986年有研究初步表明：木賊鐮刀菌在人工培養(yǎng)基上生長良好，對菜青蟲有較高的致病力，具有田間使用價值[1]。2013年有研究表明：黃海海域海蜇的共生微生物包括木賊鐮刀菌，并通過實驗確定了其4個次生代謝產物，包括Alternariol，Djalonensone，腺嘌呤核苷和過氧麥角甾醇，其中過氧麥角甾醇具有廣泛抗痛、抑菌等生物活性[2]。本研究以木賊鐮刀菌為研究對象，以菌落生長速率、菌落直徑及產孢量為指標，從5種常用培養(yǎng)基中篩選最適合其生長的培養(yǎng)基，通過正交試驗優(yōu)化后，得出最適合木賊鐮刀菌生長的培養(yǎng)基成分，為此菌的擴大培養(yǎng)提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 菌種供試 菌株：木賊鐮刀菌，試管斜面保存于4℃的冰箱中。使用時，取出活化，接種于PDA培養(yǎng)基，置于28℃生化培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，待制作孢子懸浮液。

1.1.2 培養(yǎng)基 5種培養(yǎng)基成分見表1。

1.1.3 儀器與設備 BSA224S電子天平，賽多利斯科學儀器（北京）有限公司;HZJK-1 KDM型控溫電熱套，山東鄄城華魯儀器公司;YX-24LDJ手提式壓力蒸汽滅菌器（簡），江陰濱江醫(yī)療設備有限公司;HH0-C1112B超凈工作臺，上海智城分析儀器制造有限公司;SPX-250生化培養(yǎng)箱，上海躍進醫(yī)療器械有限公司;SMART生物顯微鏡，重慶奧特光學儀器有限公司。

1.2 方法

1.2.1 擴大培養(yǎng) 將保存于4℃冰箱試管斜面上的木賊鐮刀菌取出活化，并接種于PDA培養(yǎng)基中，置于28℃生化培養(yǎng)箱培養(yǎng)。5d后，待其長滿整個培養(yǎng)皿2/3，即可用于制作孢子懸浮液。

1.2.2 接種及菌落直徑測定 按照表1中的5種培養(yǎng)基配方進行培養(yǎng)基配制，每種培養(yǎng)基在滅菌后分別倒至5個培養(yǎng)皿內，以做重復。取出已長滿培養(yǎng)皿2/3的木賊鐮刀菌，用無菌水將其制作成孢子懸浮液，用滅菌的濾紙片（直徑約5mm）蘸取孢子懸浮液，置于培養(yǎng)皿中心，倒置于28℃生化培養(yǎng)箱中培養(yǎng)[3-5]。接種后，從第2d開始，每天同一時間雙向測量菌落直徑，取平均值并記錄，最終計算其生長速率，期間觀察各培養(yǎng)皿的菌落形態(tài)特征。

1.2.3 產孢量測定 用滅過菌的打孔器在各培養(yǎng)基的菌落上打5個孔，再將5個菌餅置于5mL無菌水中，攪拌均勻，用2層滅菌的紗布過濾，濾液即為孢子懸浮液。利用血球計數板進行計數，根據公式計算其產孢量[6]。

1.2.4 正交實驗 在確定了最適合木賊鐮刀菌生長的培養(yǎng)基之后，針對其配方，選擇蛋白胨，麥芽糖，酵母粉作為3個試驗因素，每個因素設置3個水平，進行正交試驗，記錄菌落直徑與產孢量。