香砂和中丸的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)改進(jìn)研究=

王曉偉 王艷偉 王海波 宋漢敏 劉瑞新 石巖

中圖分類號(hào)R917

文獻(xiàn)標(biāo)志碼A

文章編號(hào)1001-0408（2020）02-0153-07

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2020.02.06

摘要 目的：提高香砂和中丸的藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法：在香砂和中丸原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)上，修訂性狀觀察和顯微鑒定項(xiàng)目;建立組方藥材姜厚樸、廣藿香、蒼術(shù)（土炒）的薄層色譜法（TLC）鑒定方法;建立橙皮苷、厚樸酚、和厚樸酚的高效液相色譜法（HPLC）含量測(cè)定方法。結(jié)果：香砂和中丸的外觀性狀描述修改為“黃棕色或棕褐色的水丸”。對(duì)顯微鑒別項(xiàng)目的表述進(jìn)行了少量調(diào)整。姜厚樸、廣藿香、蒼術(shù)（土炒）的TLC圖譜均與相應(yīng)的對(duì)照品或?qū)φ账幉脑谙嗤恢蒙巷@現(xiàn)相同顏色的斑點(diǎn)，且陰性樣品無干擾。HPLC法采用色譜柱為Phenomenex LunaC10柱，柱溫為30℃，流動(dòng)相分別為甲醇一水（40：60，V/V橙皮苷）、乙腈-1%冰醋酸（52：48.V/V，厚樸酚、和厚樸酚），流速為1.0 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)分別為284 nm（橙皮苷）、294 nm（厚樸酚、和厚樸酚）。橙皮苷、厚樸酚、和厚樸酚進(jìn)樣量分別在0.201 8-2.018、0.035 7-0.357 4、0.028 2-0.282 4 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（r均為0.999 9）;檢測(cè)限分別為2.0、0.72、0.45 ng，定量限分別為7.0、2.45、1.61 ng;精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性、耐用性試驗(yàn)的RSD均小于3%;平均回收率分別為99.92%、100.49%、102.08%.RSD均小于3%。結(jié)論：本研究在香砂和中丸原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)基礎(chǔ)上修訂了性狀觀察、顯微鑒別項(xiàng)目的表述，增加了姜厚樸、蒼術(shù)（土炒）、廣藿香的TLC鑒別方法，并采用HPLC法測(cè)定了橙皮苷、厚樸酚、和厚樸酚的含量，能夠有效地提高該制劑的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。

關(guān)鍵詞 香砂和中丸;鑒別;含量測(cè)定;薄層色譜法;高效液相色譜法;質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

香砂和中丸是由陳皮、姜厚樸、蒼術(shù)（土炒）、麩炒枳殼、醋青皮、焦山楂、砂仁、炙甘草、廣藿香、清半夏、白術(shù)（土炒）、茯苓、六神曲（炒）等13味藥材組方而成的中成藥制劑，于2002年被國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局發(fā)布的《第三批非處方藥目錄》所收錄，其具有健脾燥濕、和中消食等功能，主要用于脾胃不和、不思飲食、胸滿腹脹、惡心嘔吐、噫氣吞酸等癥的治療[1]。該品種目前有5個(gè)國(guó)藥準(zhǔn)字文號(hào)，分別來自5家生產(chǎn)企業(yè)，規(guī)格均為每500丸重30g。

香砂和中丸的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)最早于1977年被《河南省藥品標(biāo)準(zhǔn)》收載，但其項(xiàng)下僅有性狀及丸劑檢查等項(xiàng)目[2];到20世紀(jì)80～90年代，其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)被收錄于《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑（第二冊(cè)）》，與《河南省藥品標(biāo)準(zhǔn)》相比，該版標(biāo)準(zhǔn)的檢驗(yàn)項(xiàng)目中僅增加了顯微鑒別項(xiàng)[1，3]，顯然，該標(biāo)準(zhǔn)已不適用于現(xiàn)代中藥質(zhì)量評(píng)價(jià)與控制的需求。藥品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)是對(duì)藥品進(jìn)行質(zhì)量評(píng)價(jià)與控制的基礎(chǔ)，為使香砂和中丸的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與現(xiàn)代藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)接軌，并提高該品種質(zhì)量評(píng)價(jià)的水平，筆者對(duì)香砂和中丸的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行了系統(tǒng)性研究，包括采用顯微鑒定和薄層色譜法（TIC）對(duì)主要組方藥材進(jìn)行鑒定，并建立了高效液相色譜法（HPIC）測(cè)定組方藥材陳皮、麩炒枳殼、醋青皮中的活性成分橙皮苷和姜厚樸中的活性成分厚樸酚、和厚樸酚的含量，以期為相關(guān)研究人員提供參考，更好地推動(dòng)中藥質(zhì)量監(jiān)管工作。

1 材料

1.1 儀器

Waters 2695型高效液相色譜儀，包括Waters 2998型光電二極管陣列（PDA）檢測(cè)器（美國(guó)Waters公司）;Digistore 2型薄層色譜數(shù)碼成像系統(tǒng)（瑞士CAMAG公司）;XPE 205型電子天平（美國(guó)Mettler-Toledo公司）;GZX-DH-400-BSⅡ型電熱恒溫干燥箱、XMTD-204型數(shù)顯式電熱恒溫水浴鍋（上海市躍進(jìn)醫(yī)療器械有限公司）;IKA C-MAG HP 7型加熱器（德國(guó)IKA公司）;KQ-300型超聲波儀（昆山市超聲儀器有限公司）。

1.2 試劑與藥品

橙皮苷對(duì)照品（批號(hào)：110721-200512，純度：>98%）、厚樸酚對(duì)照品（批號(hào)：110729-200411，純度：>98%）、和厚樸酚對(duì)照品（批號(hào)：110730-201112，純度：>98%）、百秋李醇對(duì)照品（批號(hào)：110772-200404，純度：>98%）、蒼術(shù)素對(duì)照品（批號(hào)：111924-201006，純度：>98%）、廣藿香對(duì)照藥材（批號(hào)：121135-200904）、蒼術(shù)對(duì)照藥材（批號(hào)：120932-199202）均購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院;硅膠G和硅膠GF 254預(yù)制薄層色譜板分別購(gòu)自青島海洋化工廠和煙臺(tái)市化學(xué)工業(yè)研究所;甲醇、乙腈（德國(guó)Merck公司，色譜純）;其余試劑為分析純，水為超純水。

香砂和中丸樣品共9批，分別來自2家生產(chǎn)企業(yè)（企業(yè)代碼為X、Y），樣品信息詳見表1。

2 方法與結(jié)果

2.1 外觀性狀

原標(biāo)準(zhǔn)對(duì)香砂和中丸的描述為“土黃色的水丸”[1]，但筆者對(duì)樣品實(shí)際觀察后認(rèn)為其顏色比土黃色更深，因此將香砂和中丸的外觀性狀描述修改為“黃棕色或棕褐色的水丸”。

2.2 TLC鑒別

2.2.1 姜厚樸的TLC鑒別取本品10 g，研細(xì)，加石油醚（30～60℃）50 mL，水浴加熱回流30 min，濾過;濾液用l%氫氧化鈉溶液萃取2次，每次15 mL，合并氫氧化鈉溶液層，加稀鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH值至2～3;用乙酸乙酯萃取2次，每次20 mL，合并乙酸乙酯液層，水浴揮去溶劑濃縮至1 mL，即得供試品溶液。取相應(yīng)量的缺姜厚樸陰性樣品（由Y廠家提供，以下同），按供試品溶液制備方法處理，即得陰性對(duì)照溶液。分別取厚樸酚對(duì)照品、和厚樸酚對(duì)照品各適量，加乙酸乙酯制成每1 mL含1mg的溶液，即得對(duì)照品溶液。吸取上述供試品溶液、陰性對(duì)照溶液各8 μL，厚樸酚對(duì)照品、和厚樸酚對(duì)照品溶液各2 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠GF 254預(yù)制薄層板上，以環(huán)己烷一丙酮（10：3，V/V）為展開劑展開，取出，晾干，置于紫外光燈（波長(zhǎng)254 nm）下檢視。結(jié)果顯示，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，樣品色譜均顯相同顏色的斑點(diǎn)，且陰性樣品無干擾，詳見圖1。

2.2.2 廣藿香的TLC鑒別 取本品10 g，研細(xì)，置于500 mL圓底燒瓶中，加入沸石數(shù)粒，加水200 mL，連接揮發(fā)油測(cè)定器;自測(cè)定器上端加水至刻度，再加入乙酸乙酯1 mL，連接回流冷凝管，電熱套加熱提取3h，分離乙酸乙酯層，即得供試品溶液。取相應(yīng)量的缺廣藿香陰性樣品，按供試品溶液制備法處理，即得陰性對(duì)照溶液。取廣藿香對(duì)照藥材1 g，按供試品溶液制備法處理，即得對(duì)照藥材溶液。取百秋里醇對(duì)照品適量，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，即得對(duì)照品溶液。吸取上述供試品溶液、陰性對(duì)照溶液各2 μL，對(duì)照藥材溶液、對(duì)照品溶液各1 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G預(yù)制薄層板上，以石油醚（30～60℃）.乙酸乙酯一冰醋酸（95：5：0.2，V/V）為展開劑展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，熱風(fēng)吹至斑點(diǎn)顯色清晰，置于日光下檢視。結(jié)果顯示，在與對(duì)照品和對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，樣品色譜均顯相同顏色的斑點(diǎn)，且陰性樣品無干擾，詳見圖2。

2.2.3 蒼術(shù)（土炒）的TLC鑒別取“2.2.2”項(xiàng)下供試品溶液作為供試品溶液。取相應(yīng)量的缺蒼術(shù)（土炒）陰性樣品，按“2.2.2”項(xiàng)下供試品溶液制備方法處理，即得陰性對(duì)照溶液。取蒼術(shù)對(duì)照藥材1 g，按“2.2.2”項(xiàng)下供試品溶液制備法處理，即得對(duì)照藥材溶液。取蒼術(shù)素對(duì)照品適量，加甲醇制成每1 mL含0.1 mg的溶液，即得對(duì)照品溶液。吸取上述溶液各6～8 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G預(yù)制薄層板上，以石油醚（60～90℃）一丙酮（9：2，V/V）為展開劑展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸試液，于105℃下加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置于日光下檢視。結(jié)果顯示，在與對(duì)照品和對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，樣品色譜顯相同顏色的斑點(diǎn)，且陰性樣品無干擾，詳見圖3。

2.3 橙皮苷含量測(cè)定

2.3.1 溶液制備取橙皮苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每1 mL含60 μg的溶液，即得對(duì)照品溶液。取本品適量，研細(xì)，取約0.1 g置于錐形瓶中，精密稱定，精密加入甲醇50 mL，稱定質(zhì)量，水浴加熱回流1h，放冷，再次稱定質(zhì)量，加甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。按處方比例稱取相應(yīng)量的缺陳皮、醋青皮、麩炒枳殼的陰性樣品，按供試品溶液制備方法處理，即得陰性對(duì)照溶液。

2.3.2 色譜條件色譜柱：Phenomenex Luna C18柱（250mmx4.6 mm，5 μm）;柱溫：30℃;流動(dòng)相：甲醇一水（40：60，V/V）;流速：1.O mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng)：284 nm。

2.3.3 系統(tǒng)適用性及專屬性試驗(yàn)取“2.3.1”項(xiàng)下對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性對(duì)照溶液各適量，按“2.3.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果顯示，各色譜峰分離良好，理論板數(shù)按橙皮苷峰計(jì)不低于2 000，陰性對(duì)照溶液在橙皮苷對(duì)照品色譜峰相應(yīng)的位置上無干擾色譜峰，表明本方法系統(tǒng)適用性及專屬性均良好。色譜圖見圖4。2.3.4線性關(guān)系考察取橙皮苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每1 mL含橙皮苷201.8 μg的對(duì)照品母液;分別精密吸取該母液1、2、3、4、5、6、7.5、10 mL置于10 mL量瓶中，以甲醇稀釋定容，即得系列線性對(duì)照品溶液。分別取上述線性對(duì)照品溶液各適量，按“2.3.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定。以橙皮苷峰面積（X）為橫坐標(biāo)、進(jìn)樣量（y，μg）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得橙皮苷回歸方程為Y= 1.93×106X- 9.72 X10⁴（r= 0.999 9）。結(jié)果表明，橙皮苷進(jìn)樣量在0.201 8～2.018 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。2.3.5精密度試驗(yàn)精密吸取同一份供試品溶液（編號(hào)：X1）適量，按“2.3.2”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次。結(jié)果，橙皮苷峰面積RSD為0.1%（n=6），表明儀器精密度良好。

2.3.6 重復(fù)性試驗(yàn)取同一批樣品（編號(hào)：Y3）共6份，每份0.1g，按“2.3.1”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.3.2”項(xiàng)下色譜條件分別進(jìn)樣測(cè)定，以外標(biāo)法計(jì)算橙皮苷含量。結(jié)果，橙皮苷平均含量為30.2 mg/g，RSD為1.2%（n=6），表明方法重復(fù)性良好。

2.3.7 加樣回收試驗(yàn)取已知橙皮苷含量的樣品（編號(hào)：Y3）共6份，每份約0.05 g，分別置于錐形瓶中，精密稱定，分別精密加入每1 mL含橙皮苷177.02 μg的對(duì)照品溶液（按“2.3.1”項(xiàng)下方法重新配制）10 mL、甲醇40mL，按“2.3.1”項(xiàng)下供試品溶液制備法處理，然后按照“2.3.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定并計(jì)算加樣回收率，結(jié)果見表2。

2.3.8 檢測(cè)限與定量限考察取“2.3.1”項(xiàng)下對(duì)照品溶液適量，以甲醇逐級(jí)稀釋，按“2.3.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，分別以信噪比3：1、10：1計(jì)算檢測(cè)限和定量限。結(jié)果，橙皮苷的檢測(cè)限和定量限分別為2.0、7.O ng。2.3.9穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一供試品溶液（編號(hào)：Y3）適量，分別在室溫下放置0、2、4、6、10、12 h時(shí)，按“2.3.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果，橙皮苷峰面積RSD為2.3%（n=6），表明供試品溶液在室溫下放置12 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.3.10 色譜柱耐用性試驗(yàn)取同一供試品溶液（編號(hào)：XI）適量，參照“2.3.2”項(xiàng)下色譜條件，分別使用3種不同品牌的色譜柱，即Phenomenex Luna（ 250 mmx4.6 mm，5μm）、YMC-Pack ODS-A（ 250 mmx4.6 mm，5μm）、Kro-masil C18（250 mmx4.6 mm，5μm）進(jìn)樣測(cè)定并計(jì)算橙皮苷含量。結(jié)果，橙皮苷含量的RSD為0.5%（n=3），表明本方法中色譜柱耐用性良好。

2.3.11 樣品含量測(cè)定取各批次樣品各0.1 g，精密稱定，按“2.3.1”項(xiàng)下供試品溶液制備法處理，再按“2.3.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定并計(jì)算橙皮苷含量，平行操作2次，取平均值，結(jié)果見表3。

2.4 厚樸酚、和厚樸酚含量測(cè)定

2.4.1 溶液制備取厚樸酚對(duì)照品、和厚樸酚對(duì)照品各適量，加甲醇制成每1 mL分別含厚樸酚60 μg、和厚樸酚40 μg的溶液，即得2種成分的混合對(duì)照品溶液。取本品適量，研細(xì)，取約2 g置于索氏提取器中，精密稱定，加甲醇適量，水浴加熱回流提取3h，提取液以水浴揮去溶劑濃縮后，轉(zhuǎn)移至25 mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。按處方比例稱取相應(yīng)量的缺姜厚樸陰性樣品，按供試品溶液制備方法處理，即得陰性對(duì)照溶液。

2.4.2 色譜條件色譜柱：Phenomenex Luna C18柱（250mmx4.6 mm，5 μm）;柱溫：30℃;流動(dòng)相：乙腈-l%冰醋酸（52：48，V/V）;流速：1.O mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng)：294 nm。

2.4.3 系統(tǒng)適用性及專屬性試驗(yàn)取“2.4.1”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性對(duì)照溶液各適量，按“2.4.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果顯示，各色譜峰分離良好，理論板數(shù)按厚樸酚或和厚樸酚計(jì)均不低于2 000，陰性對(duì)照溶液在混合對(duì)照品色譜峰相應(yīng)的位置上無干擾色譜峰，表明本方法系統(tǒng)適用性及專屬性均良好。色譜圖見圖5。

2.4.4 線性關(guān)系考察取厚樸酚、和厚樸酚對(duì)照品各適量，加甲醇制成每1 mL含厚樸酚35.74 μg、和厚樸酚28.24 μg的混合對(duì)照品母液;精密吸取上述混合對(duì)照品母液1、2、3、4、5、6、7、8、10 mL置于10 mL量瓶中，以甲醇稀釋定容，即得系列線性對(duì)照品溶液。分別吸取上述系列對(duì)照品溶液各適量，按“2.4.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定。分別以厚樸酚、和厚樸酚峰面積（X）為橫坐標(biāo)、兩者對(duì)應(yīng)的進(jìn)樣量（Y，μg）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得厚樸酚回歸方程為Y= 1.22 X10⁴X- 9.9lx104（ r= 0.999 9），和厚樸酚回歸方程為Y= 1.68×10⁴X- 1.04×104 （r= 0.999 9）。結(jié)果表明，厚樸酚、和厚樸酚進(jìn)樣量分別在0.035 7～0.357 4 μg、0.028 2～0.282 4μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。2.4.5精密度試驗(yàn)精密吸取同一供試品溶液（編號(hào)：Y4） 10 μL，按“2.4.2”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次。結(jié)果，厚樸酚、和厚樸酚峰面積RSD分別為1.4%、1.0%（n=6），表明儀器精密度良好。

2.4.6 重復(fù)性試驗(yàn)取同一批樣品（編號(hào)：Y4）共6份，每份2 g，按照“2.4.1”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，并按照“2.4.2”項(xiàng)下色譜條件分別進(jìn)樣測(cè)定，以外標(biāo)法計(jì)算厚樸酚、和厚樸酚的含量。結(jié)果，厚樸酚、和厚樸酚的平均含量分別為0.46、0.33 mg/g，RSD分別為2.0%、2.0%（n=6），表明方法重復(fù)性良好。

2.4.7 加樣回收率試驗(yàn)取已知厚樸酚、和厚樸酚含量的樣品（編號(hào)：Y4）共6份，每份約1 g，置于索氏提取器中，精密稱定，分別精密加入每ImL含厚樸酚17.868 μg、和厚樸酚14.120 μg的混合對(duì)照品溶液（按“2.4.1”項(xiàng)下方法重新配制）25 mL，按“2.4.1”項(xiàng)下供試品溶液制備法處理，再按“2.4.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定并計(jì)算加樣回收率，結(jié)果見表4、表5。

2.4.8 檢測(cè)限與定量限考察取“2.4.1”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液適量，以甲醇逐級(jí)稀釋，按“2.4.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，分別以信噪比3：1、10：1計(jì)算檢測(cè)限和定量限。結(jié)果，厚樸酚、和厚樸酚的檢測(cè)限分別為0.72、0.45ng，定量限分別為2.45、1.61 ng。

2.4.9 穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一供試品溶液（編號(hào)：Y3）適量，分別在室溫下放置O、2、4、6、10、12 h時(shí)，按“2.4.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果，厚樸酚、和厚樸酚峰面積RSD分別為1.7%、1.1%（n=6），表明供試品溶液在室溫下放置12h穩(wěn)定性良好。

2.4.10 色譜柱耐用性試驗(yàn)取同一供試品溶液（編號(hào)：Y3）適量，參照“2.4.2”項(xiàng)下色譜條件，分別使用3種不同品牌的色譜柱，即Phenomenex Luna（ 250 mmx4.6 mm，5μm）、YMC-Pack ODS-A（ 250 mmx 4.6 mm，5μm）、Kro-masil C18（250 mmx4.6 mm，5μm）進(jìn)樣測(cè)定并計(jì)算厚樸含量。結(jié)果，厚樸酚、和厚樸酚含量的RSD分別為1.5%、1.3%（n=3），表明本方法中色譜柱耐用性良好。

2.4.11 樣品含量測(cè)定取各批次樣品各2 9，精密稱定，按“2.4.1”項(xiàng)下供試品溶液制備法處理，再按“2.4.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定并計(jì)算厚樸酚、和厚樸酚的含量，平行操作2份，取平均值，結(jié)果見表6。

3 討論

有關(guān)中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究與建立是一個(gè)系統(tǒng)性工程，需要體現(xiàn)藥品本身的安全、穩(wěn)定和有效的必備特性，此外還應(yīng)該體現(xiàn)中藥本身的特色一，。作為用于評(píng)價(jià)和控制中藥質(zhì)量的標(biāo)準(zhǔn)而言，其本身也須具有全面性、特征性、科學(xué)性和通用性。本研究在香砂和中丸原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)上，開展了較為全面的系統(tǒng)性研究工作，項(xiàng)目包括顯微鑒別，姜厚樸、陳皮、蒼術(shù)（土炒）、白術(shù)（土炒）、廣藿香等的TLC法鑒別，以及橙皮苷、厚樸酚、和厚樸酚的HPLC法含量測(cè)定。

3.1 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中顯微特征鑒別項(xiàng)的改進(jìn)

原標(biāo)準(zhǔn)中顯微特征鑒別較為完善，因此在本研究中僅對(duì)其中部分組分的顯微特征進(jìn)行了術(shù)語(yǔ)上的修改。本品原標(biāo)準(zhǔn)中顯微鑒別項(xiàng)為：石細(xì)胞分枝狀，壁厚，層紋明顯;內(nèi)種皮石細(xì)胞黃棕色或棕紅色，表面觀類多角形，壁厚，胞腔含硅質(zhì)塊;果皮表皮細(xì)胞呈類圓形或類多角形，壁稍厚，胞腔內(nèi)含黃棕色或紅棕色物;中果皮薄壁組織無色，細(xì)胞形狀不規(guī)則，壁不均勻增厚，厚約至7 μm，角隅處較厚，細(xì)胞中可見黃色類圓形或不規(guī)則形橙皮苷結(jié)晶;非腺毛1～8細(xì)胞，壁有疣狀突起;草酸鈣針晶成束，長(zhǎng)32～144 μm，存在于黏液細(xì)胞中或散在。筆者通過查詢2010年版和2015年版《中國(guó)藥典》砂仁的顯微鑒別特征描述，將“內(nèi)種皮石細(xì)胞”改為“內(nèi)種皮厚壁細(xì)胞”。另經(jīng)筆者調(diào)研，由于現(xiàn)有粉碎技術(shù)的提升，樣品粉末中很難發(fā)現(xiàn)較為完整的陳皮中果皮薄壁組織細(xì)胞，也不易發(fā)現(xiàn)成片存在于中果皮薄壁細(xì)胞中的草酸鈣方晶;且陳皮、醋青皮、麩炒枳殼及山楂薄壁組織細(xì)胞中均有草酸鈣方晶存在，無專屬性，且在成品中檢出率較低。兩種顯微特征專屬性均不強(qiáng)，故建議取消上述顯微特征表述。

3.2 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中TLC法鑒別項(xiàng)的改進(jìn)

為了評(píng)價(jià)TLC鑒別方法的適用程度，本研究對(duì)各項(xiàng)TLC鑒別法均進(jìn)行了耐用性試驗(yàn)，針對(duì)影響TLC法的主要影響因素，即溫度、濕度以及不同廠家薄層板三個(gè)方面分別進(jìn)行了考察：溫度考察范圍為7～30℃，濕度考察范圍為25%～75%，薄層色譜預(yù)制板選用了市場(chǎng)相對(duì)主流的2家生產(chǎn)企業(yè)（青島海洋化工廠、煙臺(tái)市化學(xué)工業(yè)研究所）生產(chǎn)的產(chǎn)品。結(jié)果顯示，本品各項(xiàng)TLC鑒別方法在上述溫度、濕度以及不同品牌薄層色譜預(yù)制板等試驗(yàn)條件改變的情況下均能得到效果一致的鑒別結(jié)果，各陰性樣品也均未出現(xiàn)干擾色譜斑點(diǎn)。

本課題組前期對(duì)樣品中的姜厚樸進(jìn)行TLC法鑒別時(shí)曾采用石油醚（30～60℃）加熱回流提取后濃縮的樣品處理方法，但是所得供試品色譜干擾斑點(diǎn)過多、色譜分離效果較差，而采用本文方法后則能較好地去除干擾斑點(diǎn)，有效地提升了色譜分離效果。

筆者在對(duì)廣藿香進(jìn)行TLC鑒別研究時(shí)，曾考察乙醚冷浸法提取和乙醚回流法提取的效果，結(jié)果2種提取方法所得供試品溶液的干擾斑點(diǎn)過多，不易鑒別。而采用本文中的揮發(fā)油提取法進(jìn)行樣品處理后，能達(dá)到較好的TLC分離鑒別效果。

此外，由于本品處方中的陳皮、麩炒枳殼、醋青皮這3種藥材的化學(xué)成分十分接近，均含有橙皮苷、柚皮苷和新橙皮苷等成分[5]，筆者在研究中雖曾嘗試改變供試品溶液制備方法和色譜展開條件，但都無法實(shí)現(xiàn)這3種藥材的專屬性鑒別，故未納入本研究，這3種藥材的TLC鑒別法有待進(jìn)一步研究完善。而在白術(shù)（土炒）的TLC鑒別研究中，筆者通過優(yōu)化供試品溶液制備方法和色譜展開條件后，可使供試品色譜分離良好、斑點(diǎn)清晰，但陰性對(duì)照始終有干擾，故亦未納入新標(biāo)準(zhǔn)。

3.3 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中含量測(cè)定項(xiàng)的改進(jìn)

在研究本品中橙皮苷的含量測(cè)定方法時(shí)，分別考察了不同提取溶劑（甲醇、50%甲醇、乙醇）、不同提取方法（超聲提取法、加熱回流提取法、索氏提取法）、不同提取時(shí)間（0.5、1、1.5 h）以及不同溶劑與藥材的液料比（500：1、200：1、100：1、50：1、25：1，mL/g）的效果;在研究厚樸酚、和厚樸酚的含量測(cè)定方法時(shí)，同樣分別考察了不同提取溶劑（甲醇、50%甲醇、乙醇）、不同提取方法（超聲提取法、加熱回流提取法、索氏提取法）、不同提取時(shí)間（3、4、5、6 h）的效果。最終，根據(jù)提取效率與提取完全程度確定了本文采用的樣品提取方法進(jìn)行含量測(cè)定。

中藥是典型的源于自然界的產(chǎn)物，主要為動(dòng)物、植物和菌類等生物整體或部分，并以其生物代謝產(chǎn)物作為藥理藥效以及活性作用的物質(zhì)基礎(chǔ)，其本身化學(xué)成分十分復(fù)雜。對(duì)于多組分的中成藥而言，除了藥材飲片原料自身的復(fù)雜性，還存在生產(chǎn)工藝對(duì)其品質(zhì)的影響[6-8]，“一品多家”的情況十分普遍，因此能夠揭示不同生產(chǎn)企業(yè)產(chǎn)品質(zhì)量差異的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)更有利于優(yōu)劣產(chǎn)品的區(qū)分[9]。本研究對(duì)不同廠家來源的9批香砂和中丸樣品的含量測(cè)定結(jié)果顯示，2家生產(chǎn)企業(yè)的產(chǎn)品差異明顯：X企業(yè)的3批產(chǎn)品中橙皮苷含量范圍為18.0～27.7 mg/g，而Y企業(yè)的6批產(chǎn)品中橙皮苷含量范圍為30.2～49.7 mg/g;X企業(yè)3批產(chǎn)品中厚樸酚、和厚樸酚含量范圍分別為0.6～1.1、0.3～0.5 mg/g，Y企業(yè)6批產(chǎn)品中厚樸酚、和厚樸酚含量范圍分別為0.3～1.1、0.2～0.7 mg/g。兩家產(chǎn)品的厚樸酚、和厚樸酚含量范圍看似差別不大，但將各批次樣品的厚樸酚和厚樸酚含量取比值處理后可見，X企業(yè)產(chǎn)品中2種成分含量比值范圍為2.0～2.7，而Y企業(yè)產(chǎn)品為1.3～1.7（如表6所示）。從以上對(duì)多批次樣品含量測(cè)定結(jié)果的分析可知，所測(cè)成分可明顯表征香砂和中丸產(chǎn)品的來源（即生產(chǎn)企業(yè)）特征，這些特征和香砂和中丸的藥材組方原料以及生產(chǎn)工藝具有密切的關(guān)系。雖然本次研究受研究時(shí)限以及樣本數(shù)量限制，結(jié)論可能存在一定偏差，尚需進(jìn)一步收集更多樣本進(jìn)行分析和驗(yàn)證，然而通過以上初步分析結(jié)果仍可看出本研究所選取的含量測(cè)定指標(biāo)成分（橙皮苷、厚樸酚、和厚樸酚）作為本品質(zhì)量控制指標(biāo)具有一定的合理性和有效性。

綜上所述，本研究在香砂和中丸原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)基礎(chǔ)上修訂了性狀觀察、顯微鑒別項(xiàng)目的表述，增加了姜厚樸、蒼術(shù)（土炒）、廣藿香的TLC鑒別方法，并采用HPLC法測(cè)定了橙皮苷、厚樸酚、和厚樸酚的含量，能夠有效地提高本品的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。

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（收稿日期：2019-07-08修回日期：2019-12-06）

（編輯：段思怡）

△基金項(xiàng)目：國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（No.81773892）;河南省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（No.162300410187）

*主管藥師，碩士。研究方向：中藥材及飲片質(zhì)量控制。電話：0371-655660390

E-mail： wxw0357@163.com

#通信作者：研究員，博士。研究方向：中藥質(zhì)量控制。電話：010-67095995. E-mail： san0373@163.com（1）：25-28.