葉面噴施外源ABA對(duì)胡椒抗寒生理生化及ABA信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)相關(guān)基因的影響

伍寶朵　崔鑫　胡麗松　范?！≈齑好贰罱ǚ濉『鲁\(yùn)

摘要：【目的】篩選出能提高胡椒抗寒性的脫落酸（ABA）適宜濃度，明確低溫脅迫條件下外施適宜濃度ABA對(duì)胡椒葉片ABA信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)相關(guān)基因SnRK2和PYL表達(dá)的影響，為生產(chǎn)上提高胡椒抗寒技術(shù)及揭示ABA信號(hào)在胡椒抗寒中的作用機(jī)理提供依據(jù)?！痉椒ā恳詿嵋?號(hào)胡椒為試驗(yàn)材料，通過(guò)葉面噴施0（CK）、25（T1）、50（T2）、75（T3）、100（T4）mg/L ABA及4 ℃低溫脅迫處理，測(cè)定各處理胡椒葉片葉綠素?zé)晒鈪?shù)、抗氧化酶活性（POD、CAT和SOD）、H2O2和MDA含量。在篩選出適宜ABA噴施濃度的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步運(yùn)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR分析ABA信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)相關(guān)基因的表達(dá)情況。【結(jié)果】低溫脅迫后，不同濃度ABA處理的胡椒POD、CAT和SOD活性與CK相比均顯著上升（P<0.05，下同），其中T2處理的POD活性升高最顯著，T3處理的CAT和SOD活性升高最顯著;隨著ABA處理濃度的升高，H2O2和MDA含量呈先下降后上升的變化趨勢(shì)，以T3處理含量最低，即一定濃度外源ABA處理對(duì)胡椒抗寒生理發(fā)揮積極作用。低溫脅迫0 d時(shí)，不同ABA濃度處理的胡椒Fv/Fm和Fv/Fo無(wú)顯著變化;低溫脅迫4d時(shí)，其Fv/Fm和Fv/Fo均顯著降低，但T3處理緩解Fv/Fm和Fv/Fo下降效果顯著，即ABA預(yù)處理能夠在一定程度上緩解低溫對(duì)胡椒光系統(tǒng)潛在活性的抑制。低溫脅迫0 d時(shí)，不同ABA濃度處理胡椒的qP和Yield無(wú)顯著變化，但qN隨著ABA處理濃度的升高明顯下降，即正常生長(zhǎng)條件下，外施不同濃度ABA對(duì)胡椒葉片的qP和Yield無(wú)影響，但會(huì)減弱胡椒的光保護(hù)能力;低溫脅迫4 d時(shí)，不同ABA濃度處理的胡椒葉片qP、qN和Yield均有不同程度的下降，隨著ABA處理濃度的升高，qN呈現(xiàn)下降、上升再下降的變化趨勢(shì)，qP呈先下降后上升的變化趨勢(shì)，T3處理成為轉(zhuǎn)折點(diǎn)，即在低溫脅迫下外源ABA能夠提高胡椒的光保護(hù)能力，其中T3處理效果相對(duì)較好。低溫脅迫條件下，ABA預(yù)處理可誘導(dǎo)ABA信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)相關(guān)基因SnRK2和PYL提前并高表達(dá)?！窘Y(jié)論】外源ABA通過(guò)提高胡椒抗氧化酶活性、降低H2O2和MDA含量及緩解低溫對(duì)其光系統(tǒng)活性的傷害，從而提高胡椒抵抗低溫脅迫的能力。外源ABA還能誘導(dǎo)胡椒ABA信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)相關(guān)基因表達(dá)，啟動(dòng)和引發(fā)植株固有抗凍性基因的表達(dá)，進(jìn)而提高其耐凍性。

關(guān)鍵詞： 胡椒;抗寒性;低溫脅迫;ABA;生理生化;ABA信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)相關(guān)基因

中圖分類號(hào)： S311 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A 文章編號(hào)：2095-1191（2020）11-2764-09

Effects of exogenous foliar spraying ABA on genes related to cold resistance physiology， biochemistry and ABA signal transduction of black pepper

WU Bao-duo1， 2， 3， CUI Xin4， HU Li-song1， 2， 3， FAN Rui1， 2， 3， ZHU Chun-mei4，

YANG Jian-feng1， 2， 3， HAO Chao-yun1， 2， 3*

（1Spice and Beverage Research Institute， Chinese Academy of Tropical Agricultural Sciences， Wanning， Hainan ?571533， China; 2Ministry of Agriculture and Rural Affairs Key Laboratory of Genetic Resources Utilization of Spice and Beverage Crops， Wanning， Hainan 571533， China; 3Hainan Provincial Key Laboratory of Genetic Improvement and Quality Regulation for Tropical Spice and Beverage Crops， Wanning， Hainan 571533， China; 4Tropical Crops College， Yunnan Agricultural University， Puer， Yunnan 665000， China）

Abstract：【Objective】The optimal abscisic acid（ABA） concentration to improve the cold resistance for black pepper was screened，and the expression changes of SnRK2 and PYL genes of ABA signal transduction related genes in black pepper leaves under low temperature stress were clarified， which could provide basis for further research on the cold resistance mechanism of black pepper and function of ABA signal in cold resistance of black pepper. 【Method】Piper nigrum cv. Reyin1 leaves were sprayed with 0（CK）， 25（T1）， 50（T2）， 75（T3）， 100（T4） mg/L ABA. After 4 ℃ low temperature stress， detected the chlorophyll fluorescence parameters， antioxidant enzyme activities（POD， CAT and SOD）， H2O2 and MDA content. Base on the suitable ABA concentration， the expression of ABA transduction related genes was further analyzed by real-time fluorescence quantitative PCR. 【Result】The POD， CAT， SOD activities of black pepper were significantly increased under low temperature stress compared with CK（P<0.05， the same below）. Furthermore， the POD activity increased the most in T2 treatment， and the CAT and SOD activities in T3 treatment increased the most. With the increase of ABA treatment concentration， the contents of H2O2 and MDA first decreased and then increased. And the value was the lowest in T3 treatment. The results declared that certain concentration of exogenous ABA treatment played a positive role in black pepper resistant to cold stress. Fv/Fm and Fv/Fo values treated by different ABA concentrations did not change significantly under low temperature stress of 0 d， while the values decreased significantly under low temperature stress of 4 d. However， T3 treatment had a significant effect in alleviating the decline of Fv/Fm and Fv/Fo values. The results indicated that ABA pretreated black pepper could alleviate the inhibition on the light system potential activity. Under low temperature stress of 0 d， the qP and yield values treated with different ABA concentrations did not change significantly， but the qN value decreased significantly with the increase of ABA concentration. It showed that different ABA concentrations had no effect on the qP and Yield values of black pepper under normal growth conditions， but the light protection ability was weakened. Under low temperature stress of 4 d， the qP， qN and Yield value were also decreased. With the increase of concentration of ABA treatment， qN value presented a trend of decreased， increased and then decreased， and qP value showed a trend of decreased and then increased. The turning point was T3 treatment. These results showed that exoge-nous ABA under low temperature could improve the light protection ability of black pepper， and T3 treatment performed the best. Under low temperature stress， ABA pretreatment could induce the early and high expression of SnRK2 and PYL genes. 【Conclusion】Exogenous ABA enhances pepper resistance to low-temperature stress moths by increasing pepper antioxidant enzyme activity， reducing H2O2 and MDA contents， and alleviating the damage of low temperature to its light system activity. The exogenous ABA can also induce the expression of pepper ABA signal transduction related genes， ini-tiate and trigger the expression of plant inherent antifreeze genes， and then improve its freezing resistance.

Key words： black pepper; cold resistance; low temperature stress; ABA; physiology and biochemistry; ABA signal transduction related genes

Foundation item： Hainan Natural Science Foundation（320QN346）; ?Basic Scientific Research Project of Chinese Academy of Tropical Agricultural Sciences（1630142017010）

0 引言

【研究意義】胡椒（Piper nigrum L.）原產(chǎn)印度，是世界上最重要的香辛料作物之一，具有較高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。在我國(guó)，胡椒主要分布在海南、云南、廣東、廣西和福建等省（區(qū)）。據(jù)統(tǒng)計(jì)，2018年海南胡椒種植面積約2.63萬(wàn)ha，年產(chǎn)量超過(guò)4萬(wàn)t，占全國(guó)90%以上。隨著食品加工業(yè)及醫(yī)藥工業(yè)的發(fā)展，胡椒的食用和藥用價(jià)值不斷被深化拓展，市場(chǎng)需求量也日益增長(zhǎng)。我國(guó)胡椒長(zhǎng)期依靠進(jìn)口滿足內(nèi)需，供需矛盾突出，產(chǎn)業(yè)發(fā)展空間大。近年來(lái)，云南省大力發(fā)展胡椒產(chǎn)業(yè)，胡椒種植面積發(fā)展迅速（王燦等，2015;張春林等，2018）。我國(guó)主栽胡椒品種熱引1號(hào)胡椒屬于低溫敏感品種，遭受寒害會(huì)出現(xiàn)掉葉、斷枝現(xiàn)象，而熱區(qū)頻發(fā)的寒流等極端氣候給胡椒生產(chǎn)造成嚴(yán)重影響（蕭自位等，2017;伍寶朵等，2018b）。但胡椒是經(jīng)濟(jì)效益較高的熱帶經(jīng)濟(jì)作物，將種植面積擴(kuò)大到高緯度和高海拔地區(qū)可促進(jìn)農(nóng)民脫貧致富。因此，加強(qiáng)胡椒抗寒研究對(duì)其高產(chǎn)穩(wěn)產(chǎn)及產(chǎn)業(yè)規(guī)模擴(kuò)大具有重要意義?！厩叭搜芯窟M(jìn)展】脫落酸（Abscisic acid，ABA）是植物在逆境環(huán)境中生成的重要信號(hào)物質(zhì)之一，被廣泛稱為脅迫激素或逆境激素，是誘導(dǎo)植物體內(nèi)抗逆基因表達(dá)的第一信使，在調(diào)節(jié)植物體內(nèi)物質(zhì)平衡和誘導(dǎo)脅迫抗性方面發(fā)揮重要作用，在感受低溫脅迫信號(hào)及提高植物抗寒性中也起著重要作用（李艷軍，2005），即篩選適宜胡椒的ABA噴施濃度可為生產(chǎn)上提高胡椒抗寒性提供參考。田丹青等（2010）通過(guò)以50 mg/L ABA預(yù)處理低溫脅迫的蝴蝶蘭發(fā)現(xiàn)，外施ABA可提高蝴蝶蘭葉片抗氧化酶活性，減少膜脂過(guò)氧化產(chǎn)物積累，降低細(xì)胞膜透性，從而減輕低溫傷害。尹松松等（2016）篩選出適宜番茄抗冷性增強(qiáng)的ABA濃度為200 μL/mL，并指出ABA預(yù)處理可增加脅迫葉片內(nèi)脯氨酸、可溶性糖和可溶性蛋白含量，促進(jìn)冷脅迫相關(guān)基因（SLCMYB1和LENLP4）的表達(dá)。此外，葉綠素?zé)晒鈪?shù)被抑制程度與逆境脅迫間呈正相關(guān)，可作為植物的抗逆指標(biāo)（馮建燦等，2002）。ABA受體PYR/PYL/RCAR蛋白、負(fù)調(diào)控因子2C類蛋白磷酸酶（PP2C）和正調(diào)控因子SnRK2s被認(rèn)為是ABA信號(hào)途徑的重要組件，其共同構(gòu)成一個(gè)雙向負(fù)調(diào)控系統(tǒng)來(lái)調(diào)控ABA信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)及其下游反應(yīng)。ABA信號(hào)誘發(fā)PYR/PYL/RCAR蛋白與PP2C相互作用，導(dǎo)致PP2C被抑制并激活SnRK2s，進(jìn)而引發(fā)下游響應(yīng)基因（ABF/AREB/ABI5和SLAC1等）被磷酸化或激活（Umezawa et al.，2010）。過(guò)量表達(dá)OsPYL3和OsPYL9可改善水稻的干旱和寒冷脅迫耐受性（Tian et al.，2015），而PYL-PP2C-SnRK2介導(dǎo)的ABA信號(hào)正向調(diào)控香蕉果實(shí)的成熟及耐寒、耐鹽和滲透脅迫（Hu et al.，2017）。低溫脅迫下，ABA可誘導(dǎo)、啟動(dòng)和引發(fā)植物固有抗凍性基因的表達(dá)，提高植物耐凍性。Rubio等（2018）研究發(fā)現(xiàn)低溫和外施ABA均可誘導(dǎo)葡萄休眠芽CBF/DREB1轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)增強(qiáng)，而ABA和低溫聯(lián)合處理致使CBF/DREB1轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)量大于單獨(dú)處理之和，并顯著增強(qiáng)休眠芽抗寒性。綜上所述，外施ABA能改善植物的脅迫生理，并誘導(dǎo)抗凍性基因表達(dá)，提高植物抗寒性?！颈狙芯壳腥朦c(diǎn)】目前，我國(guó)胡椒產(chǎn)區(qū)主要采用越冬前增施有機(jī)肥、在椒頭培土覆蓋，寒害發(fā)生前設(shè)防霜棚、防風(fēng)障、放熏煙堆等措施進(jìn)行防寒，以及寒害過(guò)后采取病害防治、施肥、補(bǔ)種等措施恢復(fù)生產(chǎn)，但這些措施實(shí)施效果有限，災(zāi)后補(bǔ)救難以減少椒農(nóng)損失。采用噴施ABA提高植物抗寒性已有相關(guān)報(bào)道，但外施ABA對(duì)胡椒抗寒性的影響及適宜噴施濃度等仍需深入探究?！緮M解決的關(guān)鍵問(wèn)題】研究不同濃度ABA對(duì)低溫脅迫下胡椒葉片表型變化和抗寒生理變化的影響，明確ABA處理下胡椒抗寒能力變化，篩選出適宜外施ABA濃度并分析外施ABA對(duì)ABA信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)相關(guān)基因表達(dá)的影響，以期為生產(chǎn)上提高胡椒抗寒性技術(shù)及揭示ABA信號(hào)在胡椒抗寒中的作用機(jī)理提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1. 1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)在中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院香料飲料研究所進(jìn)行，試驗(yàn)胡椒品種為熱引1號(hào)扦插苗，來(lái)源于農(nóng)業(yè)農(nóng)村部萬(wàn)寧胡椒種質(zhì)資源圃。熱引1號(hào)扦插苗按照農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)NY/T 360—1999《胡椒 插條苗》執(zhí)行。

1. 2 試驗(yàn)方法

1. 2. 1 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 于2018年5月選取健康和無(wú)機(jī)械損傷的胡椒插條在溫室沙床上培育，生根后選擇生長(zhǎng)一致的植株移栽至直徑18 cm、高25 cm的育苗袋中，每袋2株，土壤為園土和枯枝落葉粉碎物以3∶1混勻配比而成。移栽成活3個(gè)月后移入人工培養(yǎng)室進(jìn)行試驗(yàn)處理。于同年11月在人工培養(yǎng)室中30 ℃/24 ℃（12 h/12 h）培養(yǎng)1周，生長(zhǎng)穩(wěn)定后開(kāi)始進(jìn)行ABA處理。設(shè)5個(gè)梯度濃度處理，分別為0（CK）、25（T1）、50（T2）、75（T3）、100 mg/L（T4）ABA溶液，每處理4株，3次重復(fù)。接50 mL/株的劑量將ABA溶液噴施在相應(yīng)處理植株葉片正反兩面，直至滴水，多余溶液澆于盆內(nèi)，每隔1 d噴施1次，共6 d。低溫脅迫處理4 d，低溫脅迫培養(yǎng)參數(shù)設(shè)置：溫度15 ℃/5 ℃，光照強(qiáng)度200 μmol/（m2·s），時(shí)間為12 h/12 h，相對(duì)濕度保持在70%左右。處理完成后，測(cè)量葉綠素?zé)晒鈪?shù)并取樣用于測(cè)定葉片生理生化指標(biāo)?；虮磉_(dá)試驗(yàn)采用篩選出的75 mg/L ABA溶液處理胡椒，以純水為對(duì)照，材料培養(yǎng)和ABA處理方法同上。ABA處理完成后，以5 ℃低溫脅迫72 h，光照強(qiáng)度為200 μmol/（m2·s），時(shí)間為12 h/12 h，相對(duì)濕度保持在70%左右。并于低溫脅迫0、4、8、24、48和72 h時(shí)分別取樣抽取RNA，用于驗(yàn)證ABA信號(hào)傳導(dǎo)途徑中相關(guān)基因在低溫脅迫ABA處理胡椒中的表達(dá)情況。

1. 2. 2 測(cè)定項(xiàng)目及方法 測(cè)定低溫脅迫后各處理胡椒葉片的過(guò)氧化物酶（POD）活性、過(guò)氧化氫酶（CAT）活性、超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）含量及過(guò)氧化氫（H2O2）含量等生理生化指標(biāo)，每處理3次重復(fù)，各指標(biāo)采用南京建成生物技術(shù)有限公司試劑盒進(jìn)行測(cè)定。采用Li-6400便攜式光合測(cè)定儀于低溫脅迫前和常溫恢復(fù)2 h測(cè)定各處理胡椒葉綠素?zé)晒鈪?shù)，光照強(qiáng)度為900 μmol/（m2·s），CO2濃度為400 μmol/mol，流速為500 μmol/s，每處理3次重復(fù)。在葉片光化學(xué)反應(yīng)達(dá)穩(wěn)態(tài)時(shí)，測(cè)得PSII光化學(xué)猝滅系數(shù)（qP）、非光化學(xué)猝滅系數(shù)（qN）和實(shí)際光能轉(zhuǎn)化效率（Yield）。用錫箔紙包被近枝頭端第一完全穩(wěn)定葉進(jìn)行暗處理過(guò)夜，測(cè)定初始熒光（Fo）和最大熒光（Fm）。參照Rohá?ek（2002）的研究方法計(jì)算最大可變熒光Fv=Fm-Fo，并由此得到最大光化學(xué)量子產(chǎn)量（Fv/Fm）和最大光能轉(zhuǎn)化潛力（Fv/Fo）

用于基因表達(dá)分析的樣品在預(yù)冷研缽中用液氮研磨至粉末狀，按試劑盒說(shuō)明書(shū)提取RNA。采用TaKaRa試劑盒反轉(zhuǎn)錄合成cDNA。根據(jù)GenBank已公布的模式植物SnRK2和PYL基因序列，在胡椒EST數(shù)據(jù)庫(kù)（SRX708503）中進(jìn)行BLASTn搜索，獲得與SnRK2和PYL基因序列同源的2個(gè)序列，即CL4161.Contig1_All和CL4292.Contig1_All。設(shè)計(jì)ORF特異性引物qABAs-F：5'-TTAGATGGAAGCAT GGCAC-3'、qABAs-R：5'-GAATGTAGCACGGAAG ACTG-3'和qABAp-F：5'-GTGAATGTGAAAACGG GTCT-3'、qABAp-R：5'-AGAAAAGGGAGGCAATA AAT-3'，分別用于檢測(cè)胡椒中SnRK2和PYL基因表達(dá)量。

實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)以胡椒管家基因Polyubiquitin 1為內(nèi)參，qABAs和qABAp為目標(biāo)基因引物。采用熒光定量PCR儀（Life Technologies Quant Studio 6 Flex）進(jìn)行PCR擴(kuò)增，反應(yīng)體系10.0 μL，其中cDNA模板1.5 μL，2×Taq PCR Master Mix 5.0 μL，10 μmol/L上、下游引物各0.4 μL，ddH2O補(bǔ)足至10.0 μL。每處理cDNA模板設(shè)3次重復(fù)，擴(kuò)增程序?yàn)榻?jīng)典的2步法：95 ℃預(yù)變性2 min;95 ℃ 15 s，58 ℃ 15 s，72 ℃ 40 s，進(jìn)行40個(gè)循環(huán)。采用2-△△Ct法計(jì)算不同處理樣品中目的基因的相對(duì)表達(dá)量。

1. 3 統(tǒng)計(jì)分析

使用Excel 2010整理試驗(yàn)數(shù)據(jù);運(yùn)用SPSS 16.0進(jìn)行方差分析，并以Excel 2010制圖。

2 結(jié)果與分析

2. 1 外源ABA處理對(duì)低溫脅迫下胡椒葉片的影響

觀察胡椒植株葉片表型（圖1）可發(fā)現(xiàn)，低溫脅迫下經(jīng)ABA處理可提高熱引1號(hào)胡椒抗寒性。其中，CK和T4處理植株受害較重，部分葉片脫落，部分穩(wěn)定葉明顯發(fā)黑，T1和T2處理植株部分葉片發(fā)黃，穩(wěn)定葉邊緣及葉尖發(fā)黑，植株受害較輕，T3處理植株寒害表型不明顯。說(shuō)明噴施一定濃度外源ABA可緩解胡椒寒害表型，且以75 mg/L ABA處理胡椒的寒害表型最輕。

2. 2 外源ABA處理對(duì)低溫脅迫下胡椒葉片H2O2含量的影響

低溫脅迫能造成細(xì)胞內(nèi)活性氧積累，而活性氧積累是引起質(zhì)膜損傷的重要因素。如圖2所示，低溫脅迫下，隨ABA濃度的增加胡椒葉片H2O2含量呈現(xiàn)先減少后增加的趨勢(shì)。其中，T3處理H2O2含量較CK顯著下降20.67%（P<0.05，下同）;T1、T2和T4處理的H2O2含量與CK相比有下降變化趨勢(shì)，分別下降10.98%、10.54%和8.11%，但無(wú)顯著差異（P>0.05，下同）;T1、T2和T4各處理間的H2O2含量也無(wú)顯著差異;T3處理H2O2含量低于T1、T2和T4處理，但無(wú)顯著差異，分別下降12.21%、11.33%和15.84%。以上結(jié)果說(shuō)明低溫脅迫下，噴施低于100 mg/L的外源ABA可不同程度降低胡椒葉片中H2O2含量，保護(hù)質(zhì)膜免受傷害，其中以75 mg/L ABA處理降低H2O2含量效果最顯著。

2. 3 外源ABA處理對(duì)低溫脅迫下胡椒葉片抗氧化酶活性的影響

POD、CAT和SOD是植物體內(nèi)清除自由基的3種重要保護(hù)酶，其活性增強(qiáng)可作為植物抗寒性鑒定的標(biāo)準(zhǔn)（He et al.，2016）。由圖3可知，低溫脅迫后，適宜濃度ABA處理可提高胡椒葉片中POD、CAT和SOD活性。從圖3-A可看出，與CK相比，POD活性在T1處理無(wú)顯著變化，T2、T3和T4處理均顯著升高，分別升高162.78%、120.45%和17.40%，說(shuō)明低溫脅迫下噴施25 mg/L ABA對(duì)胡椒葉片POD活性無(wú)顯著影響，當(dāng)ABA處理濃度超過(guò)50 mg/L后POD顯著升高，但隨處理濃度升高對(duì)提高POD活性效果減弱。從圖3-A還可看出，與CK相比，CAT活性在T1、T2和T4處理無(wú)顯著性變化，T3處理顯著升高40.06%，即低溫脅迫下，噴施25、50和100 mg/L ABA對(duì)胡椒葉片CAT活性無(wú)顯著影響，而75 mg/L ABA處理能顯著提高胡椒葉片CAT活性。從圖3-B可看出，與CK相比，各處理的胡椒葉片SOD活性均顯著升高，分別升高28.61%、15.85%、42.64%和33.67%，其中，SOD活性在T3處理中最高，在T1與T4處理間無(wú)顯著差異，T3處理與其他處理均存在顯著差異，說(shuō)明低溫脅迫下噴施低于100 mg/L的ABA能提高胡椒葉片SOD活性，以75 mg/L ABA處理效果最佳。綜上所述，低溫脅迫條件下，外源ABA處理可提高胡椒葉片中抗氧化酶活性，且不同抗氧化酶的活性提高效果不同，其中以提高POD活性效果最好，而提高CAT活性效果最差;保護(hù)酶POD、CAT和SOD活性的提高，增強(qiáng)了清除自由基和活性氧的能力，降低了膜脂過(guò)氧化作用，其中噴施75 mg/L ABA的效果最佳。

2. 4 外源ABA處理對(duì)低溫脅迫下胡椒葉片MDA含量的影響

逆境條件下植物膜脂常發(fā)生過(guò)氧化作用，MDA積累量是衡量植物遭受逆境傷害程度的指標(biāo)（Car-valho et al.，2013;Grimaud et al.，2013）。低溫脅迫后植物體內(nèi)MDA積累越多，表明植物膜結(jié)構(gòu)和功能的受凍害程度越嚴(yán)重，抗寒能力越弱。由圖4可知，與CK相比，T1、T2、T3和T4處理的MDA含量均顯著下降，分別下降27.33%、29.21%、37.95%和23.86%，且隨ABA處理濃度的增加MDA含量呈先下降后上升的變化趨勢(shì)，其中T3處理的MDA含量最低，但其與T1、T2和T4處理未達(dá)顯著差異。表明低溫脅迫下噴施低于100 mg/L的ABA能顯著降低胡椒葉片細(xì)胞膜受損傷程度，不同濃度處理間無(wú)顯著差異，但以外源噴施75 mg/L ABA的效果最佳。

2. 5 外源ABA處理對(duì)低溫脅迫下胡椒葉片F(xiàn)v/Fm和Fv/Fo的影響

從圖5可看出，低溫脅迫0 d時(shí)，不同濃度ABA處理的胡椒Fv/Fm和Fv/Fo無(wú)顯著差異，說(shuō)明正常生長(zhǎng)條件下，噴施不同濃度ABA對(duì)胡椒葉片的Fv/Fm和Fv/Fo沒(méi)有影響。低溫脅迫4 d時(shí)，不同濃度ABA處理的胡椒Fv/Fm和Fv/Fo均有不同程度的下降趨勢(shì)。從圖5-A可知，與低溫脅迫0 d相比，CK、T1、T2、T3和T4處理的Fv/Fm分別下降21.59%、24.63%、20.13%、13.72%和22.17%，說(shuō)明低溫脅迫導(dǎo)致胡椒葉片F(xiàn)v/Fm下降;隨著ABA處理濃度的升高，各處理的Fv/Fm呈現(xiàn)先上升后下降的變化趨勢(shì)，其中T3處理的Fv/Fm最高，比CK升高10.14%，且與其余處理均存在顯著差異。說(shuō)明75 mg/L ABA處理能在一定程度上緩解低溫對(duì)胡椒的光抑制，提高PSII中心利用光能的效率，從而緩解光能對(duì)細(xì)胞的損傷，增強(qiáng)抗寒能力。從圖5-B可知，與低溫脅迫0 d相比，低溫脅迫4 d后CK、T1、T2、T3和T4處理的Fv/Fo分別下降54.58%、59.00%、53.26%、41.31%和56.72%，說(shuō)明低溫脅迫導(dǎo)致胡椒葉片F(xiàn)v/Fo下降;隨著ABA處理濃度的升高，各處理Fv/Fo呈現(xiàn)下降—上升—下降的變化趨勢(shì)，其中T3處理顯著高于CK和T1處理，T1、T2和T4處理與CK無(wú)顯著差異。說(shuō)明50～100 mg/L ABA處理能在一定程度上緩解低溫對(duì)胡椒光系統(tǒng)潛在活性的抑制，其中以75 mg/L ABA處理的效果最佳。

2. 6 外源ABA處理對(duì)低溫脅迫下胡椒葉片qP、qN和Yield的影響

由圖6可知，低溫脅迫0 d時(shí)，不同濃度ABA處理胡椒的qP和Yield無(wú)顯著差異，說(shuō)明正常生長(zhǎng)條件下，噴施不同濃度ABA對(duì)胡椒葉片的qP和Yield影響不明顯;qN隨ABA處理濃度的升高，出現(xiàn)明顯下降趨勢(shì)，說(shuō)明外源ABA處理會(huì)減弱胡椒的光保護(hù)能力。低溫脅迫4 d時(shí)，不同濃度ABA處理的胡椒葉片qP、qN和Yield均有不同程度的下降趨勢(shì)。隨著ABA處理濃度的升高，低溫脅迫下，qN呈現(xiàn)下降、上升再下降的趨勢(shì)，qP呈現(xiàn)先下降后上升的趨勢(shì)，75 mg/L ABA處理成為轉(zhuǎn)折點(diǎn);與CK相比，T3處理胡椒葉片qN提高23.55%，qP下降36.47%，說(shuō)明在低溫脅迫下，噴施外源ABA能提高植物的光保護(hù)能力，其中75 mg/L ABA處理的效果相對(duì)較好。低溫脅迫4 d時(shí)，Yield隨ABA處理濃度的升高呈先上升后下降的趨勢(shì)，在75 mg/L ABA處理時(shí)Yield最高。在低溫脅迫下，相同ABA濃度處理的胡椒Yield均明顯下降，CK、T1、T2、T3和T4處理分別下降45.37%、37.36%、22.07%、2.78%和10.24%。說(shuō)明噴施外源ABA能在一定程度上緩解低溫脅迫對(duì)胡椒的影響，其中75 mg/L ABA處理的效果較明顯。

2. 7 低溫脅迫下外源ABA處理對(duì)胡椒抗寒性相關(guān)基因表達(dá)的影響

低溫脅迫下胡椒ABA信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)相關(guān)基因SnRK2和PYL的表達(dá)如圖7所示。噴施水處理中，SnRK2和PYL基因在低溫脅迫后的相對(duì)表達(dá)量出現(xiàn)上調(diào)，且分別在脅迫48和72 h時(shí)達(dá)最高值，說(shuō)明SnRK2和PYL基因受低溫脅迫誘導(dǎo)表達(dá)。低溫脅迫0 h時(shí)，與噴施水處理相比，噴施ABA處理的SnRK2和PYL基因相對(duì)表達(dá)量也出現(xiàn)明顯上調(diào)，分別上調(diào)2.93和1.37倍，說(shuō)明這些基因也受ABA誘導(dǎo)表達(dá)。在噴施ABA處理中，SnRK2和PYL基因在低溫脅迫后多個(gè)時(shí)期出現(xiàn)顯著上調(diào)，且在脅迫48 h時(shí)達(dá)最高值;在同一脅迫時(shí)期噴施ABA處理2個(gè)基因的相對(duì)表達(dá)量大多數(shù)明顯高于噴施水處理，且高表達(dá)時(shí)期的出現(xiàn)早于噴施水處理。說(shuō)明在低溫脅迫條件下，噴施ABA可誘導(dǎo)SnRK2和PYL基因提前并高表達(dá)，促進(jìn)低溫脅迫下胡椒ABA信號(hào)的轉(zhuǎn)導(dǎo)。

3 討論

3. 1 葉面噴施外源ABA對(duì)低溫脅迫下胡椒生理特性的影響

前期研究發(fā)現(xiàn)，低溫脅迫后，胡椒葉片的POD、CAT和SOD等3種抗氧化酶活性呈顯著升高，證明低溫脅迫后胡椒為減緩寒害傷害產(chǎn)生了積極的防御反應(yīng)。同時(shí)，不同低溫脅迫下胡椒表現(xiàn)不同的寒害表型，說(shuō)明胡椒雖然表現(xiàn)積極防御低溫的能力，但能力有限（伍寶朵等，2018a）。ABA作為一種脅迫激素在植物干旱、低溫及鹽漬等逆境脅迫中起重要作用，外施ABA可代替低溫鍛煉，提高植物抗寒性（Guy，1990）。劉艷菊等（2016）研究表明，在10 ℃脅迫下噴施50～200 μmol/L ABA處理可提高油棕幼苗抗寒能力，油棕幼苗的質(zhì)膜透性和SOD活性下降，滲透物質(zhì)含量和POD活性提高，MDA和H2O2含量被抑制，其中以200 μmol/L ABA抗寒性效果最好。尹松松等（2016）研究表明200 μg/L ABA處理番茄幼苗提高抗寒性效果最佳。陳燕等（2019）通過(guò)測(cè)定噴施外源ABA對(duì)番木瓜幼苗葉片SOD活性、POD活性和MDA含量的影響，發(fā)現(xiàn)以5 mg/L ABA處理對(duì)提高抗寒性番木瓜幼苗效果最佳。因此，不同植物對(duì)施用ABA濃度敏感性各不相同，噴施外源ABA對(duì)胡椒抗寒性作用尚未清楚。

本研究結(jié)果表明，低溫脅迫后，外施不同濃度ABA可顯著降低胡椒葉片的MDA含量，其中噴施75 mg/L ABA的葉片MDA含量下降顯著，說(shuō)明外施ABA可減少低溫對(duì)胡椒葉片膜結(jié)構(gòu)的傷害，與方仁等（2014）對(duì)香蕉幼苗、劉艷菊等（2016）對(duì)油棕幼苗的研究結(jié)果一致。在植物受到逆境脅迫時(shí)，POD、CAT和SOD酶活性會(huì)增強(qiáng)，植物的抗逆能力提高。SOD可催化超氧陰離子自由基發(fā)生歧化反應(yīng)生成H2O2和O2，是一類重要的清除自由基抗氧化酶;H2O2能在CAT和POD的作用下生成無(wú)毒的H2O和O2。本研究發(fā)現(xiàn)，低溫脅迫后外施ABA能顯著提高各處理胡椒葉片SOD活性，其中噴施75 mg/L ABA的效果最佳，說(shuō)明外施ABA能促使胡椒葉片中超氧陰離子自由基向H2O2的轉(zhuǎn)化，減少脂質(zhì)過(guò)氧化;25、50和100 mg/L ABA處理對(duì)胡椒葉片CAT活性無(wú)顯著影響，而外施75 mg/L ABA處理顯著提高胡椒葉片的CAT活性，同時(shí)噴施25 mg/L ABA對(duì)胡椒葉片POD活性無(wú)顯著影響，當(dāng)ABA處理濃度超過(guò)50 mg/L能顯著提高POD活性。綜合分析CAT和POD的變化趨勢(shì)發(fā)現(xiàn)，與CK相比，外施75 mg/L ABA胡椒葉片中CAT和POD能催化更多的H2O2生成無(wú)毒的H2O和O2。

3. 2 葉面噴施外源ABA對(duì)低溫脅迫下胡椒光合特性的影響

葉綠素?zé)晒馐且环N快速、靈敏無(wú)損傷評(píng)價(jià)植物光合器官損傷情況的探測(cè)手段，常用于逆境對(duì)光合作用影響的研究，是植物抗逆性鑒定的理想指標(biāo)。Fv/Fm反映PSII反應(yīng)中心的最大光能轉(zhuǎn)化效率，其值下降越多，表明PSII光化學(xué)效率越低，是抗寒性鑒定主要敏感指標(biāo)（張守仁，1999）。C3植物在正常生長(zhǎng)條件下Fv/Fm維持在0.8左右，但在逆境條件下會(huì)出現(xiàn)明顯下降趨勢(shì)（朱傅赟，2007）。本研究中，在低溫脅迫前各處理Fv/Fm介于0.77～0.78，符合前人研究的正常生長(zhǎng)條件下Fv/Fm的變化范圍;在低溫脅迫后CK的Fv/Fm出現(xiàn)明顯下降（21.59%），說(shuō)明低溫造成胡椒PSII光化學(xué)效率降低，影響胡椒的光合作用。李靜等（2016）研究發(fā)現(xiàn)，噴施外源生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)可緩解低溫條件下楊樹(shù)Fv/Fm的下降趨勢(shì);本研究中外源ABA處理可在一定程度上提高胡椒葉片F(xiàn)v/Fm，與CK相比，50、75和100 mg/L ABA處理分別提高2.59%、10.14%和0.61%，說(shuō)明外施ABA可緩解低溫脅迫下胡椒PSII光化學(xué)效率的下降，其中75 mg/L ABA的效果最佳。低溫脅迫條件下，F(xiàn)v/Fm下降的同時(shí)若伴隨Fo的上升，表明是PSⅡ反應(yīng)中心的光化學(xué)傷害引起Fv/Fm下降;若伴隨Fo的下降，表明是PSⅡ反應(yīng)中心的熱耗散增加所致（李平等，2000）。本研究結(jié)果表明，在低溫脅迫下，F(xiàn)v/Fm下降，并伴隨Fo的上升，各處理上升幅度為15.86%～32.48%，反映低溫脅迫已造成胡椒PSⅡ反應(yīng)中心的光化學(xué)傷害，高濃度ABA處理（100 mg/L）會(huì)加劇PSⅡ反應(yīng)中心的光化學(xué)傷害。王可玢等（1996）、Lootens等（2004）認(rèn)為Fv/Fo是鑒定番茄和玉米品種抗寒性的可靠方法，低溫可導(dǎo)致植物Fv/Fo降低，抗寒性強(qiáng)的品種Fv/Fo下降幅度較小。本研究中，低溫脅迫后各處理Fv/Fo均明顯下降，但75 mg/L ABA處理的Fv/Fo下降幅度顯著低于CK，說(shuō)明該濃度處理可緩解低溫對(duì)胡椒的傷害。

3. 3 葉面噴施75 mg/L ABA對(duì)低溫脅迫下胡椒ABA信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)基因表達(dá)的影響

植物耐冷性是受多個(gè)基因控制的復(fù)雜性狀（潘寶貴等，2019）。在擬南芥中PYL作為直接受體參與ABA信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)（Kobayashi et al.，2004）。SnRK2是一種絲氨酸/蘇氨酸類蛋白激酶，在ABA信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中發(fā)揮重要作用（Asano et al.，2012）。Tian等（2013）研究發(fā)現(xiàn)在ABA作用和低溫脅迫條件下，TaSnRK2.3基因在普通小麥葉片中強(qiáng)烈表達(dá)，說(shuō)明TaSnRK2.3基因受ABA和低溫誘導(dǎo)表達(dá)。本研究中，SnRK2和PYL基因在低溫脅迫條件下的相對(duì)表達(dá)量顯著高于低溫脅迫前，且在同一脅迫時(shí)期噴施ABA處理的相對(duì)表達(dá)量多數(shù)明顯高于噴施水處理，同時(shí)高表達(dá)時(shí)期出現(xiàn)也較早，說(shuō)明這些基因在胡椒中可被低溫和ABA誘導(dǎo)高量表達(dá)，ABA處理可提前高效誘導(dǎo)ABA信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)相關(guān)基因表達(dá)，啟動(dòng)和引發(fā)植物固有抗凍性基因的表達(dá)，提高植物耐凍性。在低溫脅迫條件下，ABA誘導(dǎo)胡椒中相關(guān)功能基因表達(dá)發(fā)生變化的原因還需進(jìn)一步探究。

4 結(jié)論

外源ABA通過(guò)提高胡椒抗氧化酶活性、降低H2O2和MDA含量及緩解低溫對(duì)其光系統(tǒng)活性的傷害，而提高胡椒抵抗低溫脅迫的能力。外源ABA還能誘導(dǎo)胡椒ABA信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)相關(guān)基因表達(dá)，啟動(dòng)和引發(fā)植株固有抗凍性基因的表達(dá)，進(jìn)而提高其耐凍性。

參考文獻(xiàn)：

陳燕，潘祖建，甘衛(wèi)堂，歐景莉，朱楊帆，陳豪軍，寧琳，何江，李穆. 2019. 外源ABA對(duì)低溫脅迫下番木瓜幼苗抗寒性的影響[J]. 農(nóng)業(yè)研究與應(yīng)用，32（2）： 5-8. [Chen Y，Pan Z J，Gan W T，Ou J L，Zhu Y F，Chen H J，Ning L，He J，Li M. 2019. Effects of exogenous abscisic acid on chilling resistance of papaya seedling under cold stress[J]. Agricultural Research and Application，32（2）： 5-8.]

方仁，龍興，鄧彪，張繼，唐娟，黃偉雄，唐文忠，黃宏明，堯金燕. 2014. 脫落酸對(duì)低溫脅迫后香蕉幼苗恢復(fù)生長(zhǎng)的影響[J]. 湖北農(nóng)業(yè)科學(xué)，53（20）：4878-4881. [Fang R，Long X，Deng B，Zhang J，Tang J，Huang W X，Tang W Z，Huang H M，Yao J Y. 2014. Effects of abscisic acid on the recovery growth of banana seedlings under low temperature stress[J]. Hubei Agricultural Sciences，53（20）： 4878-4881.]

馮建燦，胡秀麗，毛訓(xùn)甲. 2002. 葉綠素?zé)晒鈩?dòng)力學(xué)在研究植物逆境生理中的應(yīng)用[J]. 經(jīng)濟(jì)林研究，20（4）： 14-18. [Feng J C，Hu X L，Mao X J. 2002. Application of chlorophyll fluorescence dynamics to plant physiology in adverse circumstance[J]. Economic Forest Researches，20（4）： 14-18.]

李靜，郭成博，李正華，李春明. 2016. 外源植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)對(duì)楊樹(shù)葉綠素?zé)晒馓匦缘挠绊慬J]. 林業(yè)科技，41（1）： 24-27. [Li J，Guo C B，Li Z H，Li C M. 2016. Effects of foreign plant growth regulating substances on chlorophyll fluorescence of Populus[J]. Forestry Science & Techno-logy，41（1）： 24-27.]

李平，李曉萍，陳貽竹，劉鴻先. 2000. 低溫光抑制脅迫對(duì)不同抗冷性的秈稻抽穗期劍葉葉綠素?zé)晒獾挠绊慬J]. 中國(guó)水稻科學(xué)，14（2）： 88-92. [Li P，Li X P，Chen Y Z，Liu H X. 2000. Effect of chilling induced photoinhibition stress on chlorophyll fluorescence in flag leaves at heading stage in indica rice varieties with different cold tolerance[J]. Chinese Journal of Rice Science，14（2）： 88-92.]

李艷軍. 2005. 外源化學(xué)物質(zhì)誘導(dǎo)對(duì)番茄苗期抗冷性的影響[D]. 哈爾濱： 東北農(nóng)業(yè)大學(xué)： 7-8. [Li Y J. 2005. Effects induced by exogenous chemical on resistance of seeding of tomato to chilling injurg[D]. Harbin： Northeast Agricultural University： 7-8.]

劉艷菊，林以運(yùn)，曹紅星，李靜，雷新濤. 2016. 外源ABA對(duì)低溫脅迫油棕幼苗生理的影響[J]. 南方農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，47（7）： 1171-1175. [Liu Y J，Lin Y Y，Cao H X，Li J，Lei X T. 2016. Effects of exogenous ABA on physiology of oil palm seedlings under cold stress[J]. Journal of Southern Agriculture，47（7）： 1171-1175.]

潘寶貴，錢(qián)恒彥，戈偉，劉金兵，郭廣君，刁衛(wèi)平，王述彬. 2019. 辣椒應(yīng)答冷信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制研究進(jìn)展[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，35（3）： 743-748. [Pan B G，Qian H Y，Ge W，Liu J B，Guo G J，Diao W P，Wang S B. 2019. Research progress of cold signal transduction mechanisms in pe-pper[J]. Jiangsu Journal of Agricultural Sciences，35（3）： 743-748.]

田丹青，劉曉靜，葛亞英，潘敏剛，曹群陽(yáng). 2010. 葉面噴施ABA對(duì)蝴蝶蘭抗寒性影響的初探[J]. 浙江農(nóng)業(yè)科學(xué)，（6）： 1252-1253. [Tian D Q，Liu X J，Ge Y Y，Pan M G，Cao Q Y. 2010. Effects of foliar application of ABA on cold-resistance of Phalaenopsis amabilis[J]. Journal of Zhejiang Agricultural Sciences，（6）： 1252-1253.]

王燦，楊建峰，陳小敏，祖超，李志剛，魚(yú)歡，鄔華松. 2015. 基于因子分析的胡椒寒害氣象等級(jí)研究[J]. 熱帶作物學(xué)報(bào)，36（12）： 2171-2178. [Wang C，Yang J F，Chen X M，Zu C，Li Z G，Yu H，Wu H S. 2015. Classification of black pepper chilling injury based on factor analysis[J]. Chinese Journal of Tropical Crops，36（12）： 2171-2178.]

王可玢，趙福洪，王孝宣，李樹(shù)德. 1996. 用體內(nèi)葉綠素a熒光動(dòng)力學(xué)鑒定番茄的抗冷性[J]. 植物學(xué)報(bào)，13（2）： 29-33. [Wang K B，Zhao F H，Wang X X，Li S D. 1996. In vivo chlorophyll a fluorescence induction kinetics as a tool for chilling-tolerance detection in tomato[J]. Chinese Bulletin of Botany，13（2）： 29-33.]

伍寶朵，范睿，胡麗松，楊建峰，郝朝運(yùn). 2018a. 不同低溫脅迫條件下胡椒葉片生理生化及結(jié)構(gòu)分析[J]. 熱帶作物學(xué)報(bào)，39（1）： 61-66. [Wu B D，F(xiàn)an R，Hu L S，Yang J F，Hao C Y. 2018a. The leaf physiological，biochemical varia-tion and structural analysis of Piper nigrum cv. Reyin-1 under cold stress[J]. Chinese Journal of Tropical Crops，39（1）： 61-66.]

伍寶朵，范睿，胡麗松，楊建峰，郝朝運(yùn). 2018b. 低溫脅迫對(duì)胡椒葉片生理生化及顯微結(jié)構(gòu)的影響[J]. 熱帶作物學(xué)報(bào)，39（8）： 1519-1525. [Wu B D，F(xiàn)an R，Hu L S，Yang J F，Hao C Y. 2018b. Effect of cold stress on the leaf physiological，biochemical variation and anatomical structure in Piper L.[J]. Chinese Journal of Tropical Crops，39（8）： 1519-1525.]

蕭自位，張洪波，田素梅，白學(xué)慧，李錦紅，周華，郭鐵英，夏紅云，馬關(guān)潤(rùn)，趙明珠. 2017. 云南德宏地區(qū)兩種胡椒栽培模式寒害研究[J]. 熱帶農(nóng)業(yè)科技，40（2）：15-17. [Xiao Z W，Zhang H B，Tian S M，Bai X H，Li J H，Zhou H，Guo T Y，Xia H Y，Ma G R，Zhao M Z. 2017. Studies on cropping systems against chilling damage of pepper in Dehong of Yunnan Province[J]. Tropical Agricultural Science & Technology，40（2）：15-17.]

尹松松，趙婷婷，李景富，姜景彬，張賀，陳秀玲，許向陽(yáng). 2016. 外源ABA對(duì)番茄幼苗抗冷性差異的研究[J]. 東北農(nóng)業(yè)科學(xué)，41（4）： 94-99. [Yin S S，Zhao T T，Li J F，Jiang J B，Zhang H，Chen X L，Xu X Y. 2016. Studies on exo-genous ABA on chilling resistance of tomato seedling[J]. Journal of Northeast Agricultural Sciences，41（4）： 94-99.]

張春林，嚴(yán)文偉，朱權(quán). 2018. 綠春縣三猛鄉(xiāng)胡椒種植技術(shù)[J]. 云南農(nóng)業(yè)科技，（2）： 34-35. [Zhang C L，Yan W W，Zhu Q. 2018. The planting technology of black pepper in Sanmeng Town，Lüchun County[J]. Yunnan Agricultural Science and Technology，（2）： 34-35.]

張守仁. 1999. 葉綠素?zé)晒鈩?dòng)力學(xué)參數(shù)的意義及討論[J]. 植物學(xué)報(bào)，16（4）： 444-448. [Zhang S R. 1999. A discussion on chlorophyll fluorescence kinetics parameters and their significance[J]. Chinese Bulletin of Botany，16（4）： 444-448.]

朱傅赟. 2007. 高溫下水稻PSⅡ和光合關(guān)鍵酶的動(dòng)態(tài)研究[D]. 杭州： 浙江大學(xué). [Zhu F Y. 2007. Dynamic study on PSⅡ and photosynthetic key enzyme in rice under high-temperature stress[D]. Hangzhou： Zhejiang University.]

Asano T， Hayashi N， Kikuchi S， Ohsugi R. 2012. CDPK-mediated abiotic stress signaling[J]. Plant Signal and Behavior，7（7）： 817-821.

Carvalho C P，Hayashi A H，Braga M R，Nievola C C. 2013. Biochemical and anatomical responses related to the in vitro survival of the tropical bromeliad Nidularium minutum to low temperatures[J]. Plant Physiology and Biochemistry，71：144-154.

Grimaud F，Renaut J，Dumont E，Sergeant K，Lucau-Danila A，Blervacq A S，Sellier H，Bahrman N，Lejeune-Hénaut I，Delbreil B，Goulas E. 2013. Exploring chloroplastic chan-ges related to chilling and freezing tolerance during cold acclimation of pea（Pisum sativum L.）[J]. Journal Proteomic，80（1）： 145-159.

Guy C L. 1990. Cold acclimation and freezing stress tole-rance： Role of protein metabolism[J]. Annual Review of Plant Physiology and Plant Molecular Biology，41：187-223.

He S L，Zhao K T，Ma L F，Yang J J，Chang Y W，Muhammad A A. 2016. Comparison of cold resistance physiological and biochemical features of four Herba rhodiola seedlings under low temperature[J]. Saudi Journal of Biolo-gical Sciences，23（2）：198-204.

Hu W，Yan Y，Shi H T，Liu J H，Miao H X，Tie W W，Ding Z H，Ding X P，Wu C L，Liu Y，Wang J S，Xu B Y，Jin Z Q. 2017. The core regulatory network of the abscisic acid pathway in banana： Genome-wide identification and expression analyses during development，ripening，and abiotic stress[J]. BMC Plant Biology，17（1）： 145.

Kobayashi Y，Yamamoto S，Minami H，Kagaya Y，Hattori T. 2004. Differential activation of the rice sucrose nonfermenting1-related protein kinase2 family by hyperosmotic stress and abscisic acid[J]. The Plant Cell，16： 1163-1177.

Lootens P，Van Waes J，Carlier L. 2004. Effect of a short photo inhibition stress on photosynthesis，chlorophyll a fluorescence，and pigment contents of different maize cultivars. Can a rapid and objective stress indicator be found？[J]. Photosynthetica，42：187-192.

Rohá?ek K. 2002. Chlorophyll fluorescence parameters： The definitions，photosynthetic meaning and mutual relationships[J]. Photosynthetica，40： 13-29.

Rubio S G，Noriega X，Pérez F J. 2018. Abscisic acid（ABA） and low temperatures synergistically increase the expression of CBF/DREB1 transcription factors and cold-hardiness in grapevine dormant buds[J]. Annals of Botany，123（4）： 681-689.

Tian S J，Mao X G，Zhang H Y，Chen S S，Zhai C C，Yang S M，Jing R L. 2013. Cloning and characterization of Ta-SnRK2.3，a novel SnRK2 gene in common wheat[J]. Journal of Experimental Botany，64（7）： 2063-2080.

Tian X J，Wang Z Y，Li X F，Lü T X，Liu H Z，Wang L Z，Niu H B，Bu Q Y. 2015. Characterization and functional analysis of pyrabactin resistance-like abscisic acid receptor family in rice[J]. Rice， 8（1）： 1-13.

Umezawa T，Nakashima K，Miyakawa T，Kuromori T，Tanokura M，Shinozaki K，Yamaguchi-Shinozaki K. 2010. Molecular basis of the core regulatory network in ABA responses： Sensing，signaling and transport[J]. Plant and Cell Physiology，51（11）： 1821-1839.

（責(zé)任編輯 鄧慧靈）

收稿日期：2019-12-24

基金項(xiàng)目：海南省自然科學(xué)基金項(xiàng)目（320QN346）;中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院基本科研業(yè)務(wù)費(fèi)專項(xiàng)（1630142017010）

作者簡(jiǎn)介：*為通訊作者，郝朝運(yùn)（1979-），研究員，主要從事胡椒種質(zhì)資源研究工作，E-mail：haochy79@163.com。伍寶朵（1984-），主要從事胡椒抗逆研究工作，E-mail：0204114089@163.com