22q11.2微重復(fù)攜帶者的產(chǎn)前診斷策略*

黃寧，劉艷秋，鄒永毅，王欣榮，吳翠婷

（江西省婦幼保健院 產(chǎn)前診斷中心，江西 南昌 330006）

22q11.2 微重復(fù)綜合征是新近被學(xué)者們所熟知的一類(lèi)綜合征，遺傳方式為常染色體顯性遺傳，其表型可呈現(xiàn)正常至不同程度的臨床癥狀，異常臨床表現(xiàn)為精神發(fā)育遲滯、學(xué)習(xí)障礙、精神運(yùn)動(dòng)發(fā)育遲緩、生長(zhǎng)遲緩、肌張力減退等[1]。本文回顧性分析江西省婦幼保健院1 例22q11.2 微重復(fù)攜帶者的產(chǎn)前診斷，以期探討其遺傳咨詢(xún)策略及生育指導(dǎo)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

患者，女性，30 歲，孕18+周，G3P1A1，第1 胎足月順產(chǎn)一女孩，體?。坏? 胎無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前檢測(cè)提示為22 號(hào)染色體異常，于本院行羊水穿刺產(chǎn)前診斷，全基因組測(cè)序提示46,XN,dup（22q11.2）×3，引產(chǎn)；現(xiàn)再次懷孕要求行產(chǎn)前診斷。夫婦否認(rèn)近親結(jié)婚、孕期不良因素暴露史及家族遺傳病史。經(jīng)充分告知，孕婦簽署產(chǎn)前診斷知情同意書(shū)，于本院實(shí)施羊膜腔穿刺術(shù)，進(jìn)行羊水染色體核型分析和染色體微陣列分析。

1.2 方法

抽取夫婦外周血及孕婦羊水，行細(xì)胞培養(yǎng)，收獲制片，G 顯帶染色體分析。同時(shí)提取夫婦外周血及羊水DNA 基因組DNA，采用Affymetrix Cytoscan 750K基因芯片試劑盒，隨機(jī)引物法，利用cy3 和cy5 染料分別標(biāo)記待檢樣本和對(duì)照樣本DNA，經(jīng)雜交、洗脫處理后，掃描分析。

2 結(jié)果

2.1 染色體核型分析結(jié)果

夫婦外周血染色體及羊水染色體核型分析均未見(jiàn)明顯異常。見(jiàn)圖1。

2.2 染色體微陣列分析

羊水染色體微陣列分析提示22q11.2（18 648 855-21 464 764）×3，存在2.81 Mb 微重復(fù)；母方提示22q11.2（18 631 364-21 460 641）×3，存在2.82 Mb微重復(fù)；父方未見(jiàn)異常。見(jiàn)圖2。

圖1 染色體核型

2.3 隨訪

該病例術(shù)后及產(chǎn)后均進(jìn)行電話隨訪，現(xiàn)已足月順產(chǎn)一男孩，出生時(shí)身高52 cm，體重3.9 kg，經(jīng)體格及超聲波檢查各項(xiàng)發(fā)育指標(biāo)未見(jiàn)明顯異常。

圖2 染色體微陣列分析

3 討論

該疾病最初在2003年由ENSENAUER 等[2]報(bào)道，染色體22q11.2 區(qū)域基因富集，含有多個(gè)低拷貝重復(fù)序列（low copy repeats, LCR），被命名為L(zhǎng)CR22s，分別為L(zhǎng)CR1-LCR8。LCR 在減數(shù)分裂期間可以導(dǎo)致相鄰DNA 片段發(fā)生不對(duì)稱(chēng)的同源重組，結(jié)果導(dǎo)致染色體的微缺失、微重復(fù)、插入、轉(zhuǎn)位等。現(xiàn)已被證實(shí)22q11.2 區(qū)域的這些LCR22s 介導(dǎo)基因重排，從而導(dǎo)致一些基因組異常，例如DiGeorge/Velocardiofacial syndrome（DGS/VCFS）、貓眼綜合征、der（22）綜合征及22q11.2 微重復(fù)綜合征[3]。理論上LCR 介導(dǎo)的基因重排發(fā)生重復(fù)的和缺失的比例是對(duì)等的，但實(shí)際上很少發(fā)生微重復(fù)，本文對(duì)1 例再次妊娠22q11.2 微重復(fù)綜合征的孕婦進(jìn)行產(chǎn)前診斷并進(jìn)行了親本溯源遺傳分析。

該例孕婦因既往有22q11.2 微重復(fù)綜合征妊娠史而來(lái)該院行產(chǎn)前診斷，對(duì)夫婦雙方及胎兒同時(shí)進(jìn)行染色體核型分析及染色體微陣列分析，提示胎兒及母方在22q11.2 均存在2.81 Mb 重復(fù)片段。母方通過(guò)體格檢查及病史詢(xún)問(wèn)未見(jiàn)明顯異常，2 次妊娠孕中期羊水產(chǎn)前診斷為22q11.2 微重復(fù)，第1 次夫婦未行進(jìn)一步遺傳背景檢查而選擇引產(chǎn)，此次妊娠明確了胎兒微重復(fù)片段遺傳自表型正常的母親，孕婦選擇繼續(xù)妊娠。22q11.2 微重復(fù)綜合征的臨床表型可呈現(xiàn)正常，如同此例孕婦，也可出現(xiàn)嚴(yán)重程度不一的臨床癥狀，與DGS/VCFS 存在部分相同臨床表現(xiàn)，可出現(xiàn)多系統(tǒng)功能異常，包括心血管、神經(jīng)、精神、內(nèi)分泌和免疫疾病[4-5]。文獻(xiàn)查明22q11.2 微重復(fù)部分患者變異遺傳來(lái)自正常表型的父母，該疾病具有外顯不全，從而導(dǎo)致許多病例未得到臨床診斷，這就給遺傳咨詢(xún)、再發(fā)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估及產(chǎn)前診斷帶來(lái)很大挑戰(zhàn)。ROSENFELD 等[6]對(duì)大樣本人群數(shù)據(jù)進(jìn)行貝葉斯分析，結(jié)果表明22q11.2 微重復(fù)其外顯率存在外顯不全，約為21.9%。在現(xiàn)有技術(shù)條件下，完全可以對(duì)22q11.2 微重復(fù)進(jìn)行明確診斷，但確無(wú)法預(yù)測(cè)其臨床表現(xiàn)。對(duì)本研究中此例孕婦，其后代將有50%的概率遺傳22q11.2 微重復(fù)片段。本文中檢出的22q11.2 微重復(fù)片段為2.81 Mb，非常接近CHRISTOPOULOU 等[7]報(bào)道的重復(fù)區(qū)域，當(dāng)前研究表明外顯率與重復(fù)片段大小之間并無(wú)關(guān)聯(lián)[8]，對(duì)22q11.2微重復(fù)高風(fēng)險(xiǎn)人群有必要進(jìn)行產(chǎn)前診斷或胚胎植入前遺傳學(xué)診斷。

22q11.2 區(qū)域由于缺失或重復(fù)的片段較小，傳統(tǒng)G 顯帶染色體核型分析難以診斷，只能檢出一些大片段的染色體易位，額外的雙著絲粒染色體（貓眼綜合征）。該法操作簡(jiǎn)單，費(fèi)用低廉，可以同時(shí)檢測(cè)其他染色體異常，臨床上常用作篩查手段。熒光原位雜交可以通過(guò)特異性的熒光標(biāo)記DNA 探針與相對(duì)應(yīng)的染色體區(qū)域結(jié)合，檢測(cè)該區(qū)域有無(wú)重復(fù)或缺失。該方法敏感性強(qiáng)、特異性高，但正是由于DNA 探針的高度特異性導(dǎo)致1 種探針只能檢測(cè)1 個(gè)位點(diǎn)，對(duì)于該探針位點(diǎn)以外的缺失可能存在漏診[9]。多重連接探針擴(kuò)增技術(shù)利用缺失重復(fù)區(qū)的多個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記、短串聯(lián)重復(fù)序列等進(jìn)行擴(kuò)增，可以1 次反應(yīng)中擴(kuò)增多至50 個(gè)靶序列，快速，敏感，操作方便，檢測(cè)成本低，缺點(diǎn)是有假陽(yáng)性，某些點(diǎn)突變可能影響探針結(jié)合，影響結(jié)果判讀[10]。染色體微陣列技術(shù)可以對(duì)眾多基因探針的標(biāo)記、雜交等過(guò)程在1 次實(shí)驗(yàn)過(guò)程中完成，自動(dòng)化程度高，數(shù)據(jù)客觀可靠，但操作要求高。本研究中采用染色體核型分析和染色體微陣列技術(shù)同時(shí)檢測(cè)，既可以一覽此家系成員全部染色體結(jié)構(gòu)，又可以對(duì)微小拷貝數(shù)異常做出判斷，從而可以對(duì)該家系進(jìn)行個(gè)性化遺傳指導(dǎo)及胎兒產(chǎn)前診斷分析。

回顧性分析本研究中該例孕婦，妊娠1 次22q11.2 微重復(fù)胎兒后，夫婦雙方同時(shí)進(jìn)行染色體核型分析和染色體微陣列檢測(cè)意義重大，尤其在有再次生育需求時(shí)。有研究表明，70%的22q11.2 微重復(fù)遺傳自表型正常和表型輕微的親代，在明確親本來(lái)源后再進(jìn)行產(chǎn)前診斷，有利于對(duì)該家系進(jìn)行科學(xué)的遺傳咨詢(xún)及生育指導(dǎo)[11]。對(duì)所有22q11.2 微重復(fù)病例進(jìn)行家系調(diào)查分析，無(wú)論其臨床表現(xiàn)嚴(yán)重與否，都是極其重要的，這樣才能更好地理解導(dǎo)致異常表型的機(jī)制，從而提供更好的遺傳咨詢(xún)。遺憾的是，本例家系調(diào)查中夫婦拒絕對(duì)生育的第1 個(gè)表型正常女孩進(jìn)行遺傳檢查，從而無(wú)法對(duì)其進(jìn)行完整家系分析?？紤]到隨訪時(shí)此例男嬰才出生2 天，部分臨床癥狀可能遲發(fā)或難以發(fā)現(xiàn)，研究人員仍將繼續(xù)密切跟蹤隨訪。