腐植酸對蛋雞產(chǎn)蛋后期產(chǎn)蛋性能、抗氧化及促產(chǎn)蛋激素分泌的影響

魯鑫濤，邱家凌，祝家明，周 琴，劉 兵，余東游

（浙江大學(xué)動物科學(xué)學(xué)院，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部華東動物營養(yǎng)與飼料重點實驗室，浙江杭州 310058）

隨著我國對動物飼用抗生素使用的不斷嚴(yán)格控制，尋找一種替代抗生素使用的飼料添加劑已變得越來越重要。腐植酸能作為一種促生長劑能促進(jìn)動物充分利用營養(yǎng)物質(zhì)，并通過增強(qiáng)機(jī)體免疫力，對抗病原體，來改善動物的健康狀況與生產(chǎn)性能[1-2]。腐植酸主要來源于土壤或腐殖質(zhì)，是動植物殘骸在土壤中經(jīng)微生物及物理化學(xué)分解轉(zhuǎn)化形成的一種具有芳香族雜環(huán)化合物與聚羧酸側(cè)鏈的復(fù)雜有機(jī)混合物[3]。腐植酸分子結(jié)構(gòu)中含有許多酚羥基、羧基和醌基等活性基團(tuán)，其作為電子或氫的提供體，可激活多酚氧化酶、過氧化物酶和抗壞血酸氧化酶等活性酶，提高機(jī)體抗氧化水平、免疫功能和抗病力。此外，腐植酸及腐植酸鹽資源豐富、富含多酚類物質(zhì)，生物學(xué)活性高，對豬、雞及反芻動物安全且無毒副作用[4-7]。

根據(jù)來源不同，腐植酸可分為天然和人工合成腐植酸，其有效成分和含量有一定的區(qū)別[8-9]。在產(chǎn)蛋后期，蛋雞的生產(chǎn)性能及健康狀況會逐步下降。已有研究表明，腐植酸可改善蛋雞的健康狀態(tài)，提高生產(chǎn)性能，但其在蛋雞上的應(yīng)用效果存在較大差異[10-15]，而目前關(guān)于天然和合成腐植酸對產(chǎn)蛋后期蛋雞的影響研究尚鮮有報道。本試驗以產(chǎn)蛋后期蛋雞為研究對象，在飼糧中分別添加不同來源的腐植酸，探究天然和合成腐植酸對產(chǎn)蛋后期蛋雞生產(chǎn)性能、蛋品質(zhì)、抗氧化指標(biāo)和促性腺激素水平的影響，旨在為腐植酸在蛋雞生產(chǎn)中的應(yīng)用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料 天然提取腐植酸（HAA），有效成分（風(fēng)干基礎(chǔ)）包括有機(jī)物質(zhì)62.88%、鈣0.93%、鐵 1.59%；人工合成腐植酸（HAB），含有機(jī)物質(zhì)60.51%、鈣1.17%、鐵1.21%。

1.2 試驗設(shè)計 試驗采用單因子試驗設(shè)計，選用52 周齡健康、體重（1.31±0.12）kg、產(chǎn)蛋率（81.39±0.23）%的海蘭白蛋雞405 羽，隨機(jī)分成3 個組，每組設(shè)9 個重復(fù)，每個重復(fù)15 羽。對照組（CON 組）飼喂基礎(chǔ)飼糧，試驗組分別在對照組基礎(chǔ)上添加1 000 mg/kg 的HAA和HAB。預(yù)試期2 周，在此期間對雞群進(jìn)行調(diào)整，使各組蛋雞的飼料消耗量、產(chǎn)蛋率、蛋重差異不顯著，正試期8 周。蛋雞試驗的基礎(chǔ)飼糧參照NRC（1994）和《海蘭白蛋雞飼養(yǎng)手冊》配制成粉料，基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)成分見表1。

1.3 飼養(yǎng)管理 蛋雞飼養(yǎng)于農(nóng)業(yè)農(nóng)村部華東動物營養(yǎng)與飼料重點實驗室研究試驗基地半開放式雞舍，采用上中下3層階梯式籠養(yǎng)，每層5 個雞籠（45 cm×30 cm×30 cm），每籠養(yǎng)3 羽。按蛋雞場常規(guī)方法進(jìn)行飼養(yǎng)，采用不銹鋼料槽與乳頭飲水器，每天定時喂料和清糞，使蛋雞自由采食、飲水，雞舍采用人工光照16:8（L/D），光照強(qiáng)度為20 Lx。每周對雞舍進(jìn)行消毒1 次。

1.4 樣品采集與制備 在試驗第8 周末，以重復(fù)為單位，每個重復(fù)隨機(jī)選取1 羽蛋雞，用促凝管在翅靜脈采血5 mL，以3 000 r/min 離心10 min 制備血清，上清液分裝于1.5 mL的Eppendorf 管中，保存在-80℃的冰箱中待用。

1.5 測定指標(biāo)與方法

1.5.1 生產(chǎn)性能指標(biāo) 以重復(fù)為單位，每天記錄產(chǎn)蛋數(shù)量、不合格蛋數(shù)（包括軟殼蛋、破殼蛋、沙殼蛋等）及總蛋重量，每周通過減量法計算雞群的飼料消耗量，然后統(tǒng)計產(chǎn)蛋率、平均蛋重、平均日采食量、不合格蛋率和料蛋比等。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)成分（飼喂基礎(chǔ)）

1.5.2 蛋品質(zhì)指標(biāo) 試驗第8 周末，從每個重復(fù)中隨機(jī)選取2 枚雞蛋，每組18 枚雞蛋，使用實驗室DET-6 000 全自動蛋品質(zhì)測定儀（日本Nabel 公司）測定蛋殼厚度、蛋殼強(qiáng)度、蛋白高度、蛋黃顏色和哈氏單位等蛋品質(zhì)指標(biāo)。

1.5.3 血清生化與抗氧化指標(biāo) 采用SpectraMax M5 多功能酶標(biāo)儀（美國Molecular Devices 公司）測定血清中的生化指標(biāo)與抗氧化指標(biāo)，生化指標(biāo)包括堿性磷酸酶、肌酸激酶、乳酸脫氫酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性及總蛋白、白蛋白、尿酸、總膽固醇、甘油三酯和葡萄糖含量；抗氧化指標(biāo)包括谷胱甘肽過氧化物酶、總超氧化物歧化酶、過氧化氫酶活性及丙二醛含量；相應(yīng)的試劑盒購買于南京建成生物工程研究所，嚴(yán)格按照其說明書進(jìn)行指標(biāo)測定操作。

1.5.4 血清促性腺激素水平變化 血清促黃體素（LH）與促卵泡素（FSH）采用酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）法進(jìn)行測定，對應(yīng)的試劑盒購買于南京建成生物工程研究所，嚴(yán)格按照其說明書進(jìn)行指標(biāo)測定操作。

1.6 統(tǒng)計分析 數(shù)據(jù)經(jīng)WPS Excel 初步整理后，采用SPSS 20.0 統(tǒng)計軟件進(jìn)行單因素方差分析（One-Way ANOVA），用Duncan′s 法比較組間差異顯著性，并用平均值± 標(biāo)準(zhǔn)差表示。P＜0.05 表示差異顯著，P＜0.01表示差異極顯著，0.05＜P＜0.1 表示有提高或降低的趨勢。

2 結(jié)果

2.1 不同來源腐植酸對蛋雞生產(chǎn)性能的影響 由表2 可知，與CON 組及HAB 組相比，飼糧中添加HAA 可提高產(chǎn)蛋率（P＜0.01）；HAB 組與CON 組差異不顯著；與CON 組相比，飼糧中添加HAA 與HAB 均可提高平均蛋重（P＜0.05），降低不合格蛋率（P＜0.05）與料蛋比（P＜0.01），且HAA 組的料蛋比低于HAB 組（P＜0.01）。各組間日均采食量無顯著差異。表2 飼糧中添加不同來源腐植酸對蛋雞產(chǎn)蛋后期生產(chǎn)性能的影響

表2 飼糧中添加不同來源腐植酸對蛋雞產(chǎn)蛋后期生產(chǎn)性能的影響

2.2 不同來源腐植酸對蛋雞蛋品質(zhì)的影響 由表3 可知，與CON 組相比，HAA 組與HAB 組中蛋白高度與哈氏單位均有提高（P＞0.05）。飼糧中添加腐植酸對雞蛋的蛋殼強(qiáng)度、蛋黃顏色與蛋殼厚度等均無明顯影響。

表3 飼糧中添加不同來源腐植酸對蛋雞產(chǎn)蛋后期蛋品質(zhì)的影響

2.3 不同來源腐植酸對蛋雞血清生化指標(biāo)的影響 由表4 可知，與CON 組相比，飼糧中添加HAA 或HAB 均可降低血清中的甘油三酯含量（P＜0.01），且HAA 可降低血清中白蛋白含量（P＜0.05），HAB 可提高血清中乳酸脫氫酶活性（P＜0.05）。

2.4 不同來源腐植酸對蛋雞血清抗氧化指標(biāo)的影響 由表5 可知，與CON 組相比，飼糧中添加HAB 可提高血清中谷胱甘肽過氧化物酶活性（P＜0.05），各組間總超氧化物歧化酶、過氧化氫酶和丙二醛均無明顯影響。

2.5 不同來源腐植酸對蛋雞血清促性腺激素水平的影響由表6 可知，與CON 組相比，飼糧中添加不同來源的腐植酸均可提高血清中LH 水平（P＜0.01），F(xiàn)SH 水平有升高的趨勢（0.05＜P＜0.10）；且HAA 組LH 水平高于HAB（P＜0.01）。

3 討 論

3.1 不同來源腐植酸對蛋雞生產(chǎn)性能及蛋品質(zhì)的影響 生產(chǎn)性能與蛋品質(zhì)是影響蛋雞生產(chǎn)養(yǎng)殖的主要經(jīng)濟(jì)指標(biāo)。飼糧中添加腐植酸可以提高蛋雞的生產(chǎn)性能。Eren等[12]和Kucukersan 等[16]報道，在飲水或飼糧中添加腐植酸可顯著提高蛋雞的產(chǎn)蛋率和飼料轉(zhuǎn)化率，但對蛋殼厚度、蛋殼強(qiáng)度、蛋黃蛋白指數(shù)及哈氏單位無顯著影響。上山勝行等[15]試驗發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加1%或3%的腐植酸有抑制高齡蛋雞產(chǎn)蛋率下降的作用。本試驗中，飼糧中添加HAA 和HAB 均能降低產(chǎn)蛋后期蛋雞的不合格蛋率和料蛋比；2 種腐植酸均不同程度地提高了促性腺激素水平，進(jìn)而提高蛋雞后期的產(chǎn)蛋率，其中HAA 效果更佳。這表明不同來源腐植酸可能因分子結(jié)構(gòu)中的酚羥基、羧基和醌基等活性基團(tuán)種類和數(shù)量不同，從而導(dǎo)致在蛋雞上的應(yīng)用效果存在差異。本試驗中2 種腐植酸對蛋品質(zhì)均無顯著影響，但也有報道與該結(jié)果存在差異。如ArPá 等[11]報道，在飼糧中添加0.5%的腐植酸能提高雞蛋的哈氏單位及蛋白高度；Rosa 等[17]試驗也表明，在蛋雞的換毛期添加0.1%或0.2%的腐植酸能有效提高蛋雞的蛋殼厚度及蛋白含量。這可能是由于不同品種導(dǎo)致腐植酸對蛋品質(zhì)的效果出現(xiàn)差異。Lala 等[10]研究發(fā)現(xiàn)，在蛋雞飲水中添加腐植酸可以提高ISA Brown 和Fulani ecotype 2 種蛋雞的產(chǎn)蛋率和總采食量，但Fulani ecotype 在營養(yǎng)物質(zhì)利用率上比ISA Brown 更優(yōu)。因此，蛋雞試驗采用的腐植酸來源、蛋雞品種和所處產(chǎn)蛋階段等因素均可能對蛋雞實際生產(chǎn)性能產(chǎn)生一定的影響。

表4 飼糧中添加不同來源腐植酸對蛋雞產(chǎn)蛋后期血清生化指標(biāo)的影響

表5 飼糧中添加不同來源腐植酸對蛋雞產(chǎn)蛋后期血清抗氧化指標(biāo)的影響

表6 飼糧中添加不同來源腐植酸對蛋雞產(chǎn)蛋后期血清促性腺激素的影響

3.2 不同來源腐植酸對蛋雞血清生化指標(biāo)的影響 血清生化指標(biāo)是評價機(jī)體新陳代謝情況及健康狀況的重要指標(biāo)，可以反映動物體內(nèi)糖類、蛋白與脂肪代謝的狀況。禽類血清中的總膽固醇與甘油三酯含量的變化能反映機(jī)體脂類的沉積與代謝[18]。Ozturk 等[19]研究表明，在羅斯308 肉雞飼糧中添加1 000 mg/kg 或1 500 mg/kg 腐植酸顯著降低了血清總膽固醇含量。Hayirli 等[20]研究發(fā)現(xiàn)，在產(chǎn)蛋高峰期的蛋雞飼糧中添加3 000 mg/kg 腐植酸鹽可顯著降低血清甘油三酯含量。本研究在產(chǎn)蛋后期添加2 種腐植酸均降低了甘油三酯含量，表明天然和合成的腐植酸均可通過甘油三酯的調(diào)控從而對蛋雞脂類代謝產(chǎn)生影響。血清中總蛋白與白蛋白含量可反映機(jī)體營養(yǎng)狀態(tài)及蛋白質(zhì)吸收和代謝水平[21]。Bubel 等[22]研究表明，腐植酸制劑能有效降低產(chǎn)蛋后期蛋雞的總蛋白。而本研究中添加HAA 降低了產(chǎn)蛋后期蛋雞血清中白蛋白含量，這表明HAA 參與到了產(chǎn)蛋后期蛋雞的蛋白質(zhì)代謝中。此外，本試驗結(jié)果表明添加HAB 對血清乳酸脫氫酶活性也有所提高。血清中乳酸脫氫酶與蛋雞自身氧代謝旺盛程度相關(guān)[23]，其為糖代謝中催化丙酮酸最終生成乳酸的酶[24]。本試驗表明HAB 可能對產(chǎn)蛋后期蛋雞機(jī)體糖代謝水平產(chǎn)生了影響，這表明不同來源腐植酸由于其結(jié)構(gòu)成分不一致可能對蛋雞生化指標(biāo)的調(diào)節(jié)也不一致。

3.3 不同來源腐植酸對蛋雞血清抗氧化指標(biāo)的影響GSH-Px 是機(jī)體內(nèi)廣泛存在的內(nèi)源性酶抗氧化劑，作為機(jī)體抗氧化體系中重要的酶，在抗氧化過程中發(fā)揮重要作用，其能保護(hù)細(xì)胞膜不受活性氧的影響，其活性中心是硒半胱氨酸，其活力大小可以反映機(jī)體硒水平[25]。有研究表明，腐植酸與輔酶Q 在分子結(jié)構(gòu)上存在一定相似性，腐植酸可能會影響線粒體氧化還原系統(tǒng)[2]。腐植酸具有從微生物處還原得到電子的能力，且不同來源的腐植酸在被還原時主要以其中的醌基作為電子受體，可產(chǎn)生半醌自由基。ESR 光譜研究表明腐植酸得電子的能力與半醌自由基濃度呈正相關(guān)[26-28]。Akbas 等[29]試驗表明，腐植酸可以通過預(yù)防氧化應(yīng)激對腎缺血再灌注損傷進(jìn)行治療，減輕了大鼠腎缺血再灌注損傷。本試驗中，添加腐植酸在不同程度上提高了蛋雞谷胱甘肽過氧化物酶活性，且HAB 的抗氧化作用明顯優(yōu)于HAA，表明腐植酸可以提高蛋雞的抗氧化機(jī)能，但不同來源腐植酸的抗氧化作用有一定差異性，這可能與腐植酸分子結(jié)構(gòu)中醌基含量相關(guān)。

3.4 不同來源腐植酸對蛋雞血清LH 與FSH 水平的影響促性腺激素釋放激素（GnRH）能選擇性地刺激促性腺激素細(xì)胞釋放促性腺激素LH 和FSH。LH 和FSH 分別刺激卵巢性腺激素的產(chǎn)生和配子的形成[30]。Sharp 等[31]和Yuichi 等[32]報道，血漿中LH 與家禽產(chǎn)蛋率直接相關(guān)，機(jī)體LH 水平升高，產(chǎn)蛋率提高。王新謀等[33]報道，高溫條件會使產(chǎn)蛋雞血漿中LH 水平下降，從而導(dǎo)致產(chǎn)蛋性能急劇降低。張利娟[34]試驗表明，在產(chǎn)蛋后期的蛋雞飼糧中添加不同濃度的黃芪多糖及小檗堿復(fù)合的中草藥可提高血清中LH 與FSH 水平，進(jìn)而提高生產(chǎn)性能。這些研究表明血清中LH 水平與蛋雞生產(chǎn)性能存在一定正相關(guān)，血清中LH 水平提高可促進(jìn)卵細(xì)胞的生成，提高產(chǎn)蛋率。據(jù)報道，黃芪多糖及小檗堿等中藥中富含多酚類等生物活性物質(zhì)，可促進(jìn)下丘腦-垂體-性腺軸分泌促性腺激素[35]，提高血清中LH 水平。本試驗中HAA 組、HAB 組血清中LH 水平均有極顯著提高，這可能與腐植酸分子結(jié)構(gòu)中的酚羥基、羧基和醌基等活性基團(tuán)有關(guān)。而從LH 提高程度上來看，HAA 明顯優(yōu)于HAB，可能是由于HAA 含有的活性基團(tuán)總量或類別比HAB 多，2 種腐植酸基團(tuán)的差異還有待進(jìn)一步研究。

綜上所述，飼糧中添加腐植酸可通過提高機(jī)體抗氧化能力，改善體內(nèi)促性腺激素水平，促進(jìn)蛋雞健康，提高產(chǎn)蛋性能。

4 結(jié) 論

本研究結(jié)果表明，飼糧中添加腐植酸可提高機(jī)體中LH 生成，改善血清生化指標(biāo)及抗氧化指標(biāo)，能不同程度提高產(chǎn)蛋后期蛋雞的生產(chǎn)性能，且對蛋品質(zhì)無負(fù)面影響，但不同來源的腐植酸對蛋雞的作用效果存在一定差異。在本試驗條件下，玉米-豆粕型飼糧中添加天然提取的腐植酸對產(chǎn)蛋后期的蛋雞作用效果更佳。