冰醋酸在胸腔液基細(xì)胞學(xué)制片中的應(yīng)用研究

汪貽苑 王 琦 李 增 李傳應(yīng)

近年來(lái)，肺癌已經(jīng)成為發(fā)展中國(guó)家和發(fā)達(dá)國(guó)家惡性腫瘤相關(guān)死亡的主要原因之一，是一個(gè)重大的公共衛(wèi)生問(wèn)題[1]。胸腔液基涂片作為肺癌篩查的常用方法，其制片質(zhì)量與HE染色結(jié)果密切相關(guān)，進(jìn)而影響檢測(cè)結(jié)果的判斷。若標(biāo)本含有大量血液、淋巴液、脫落細(xì)胞或細(xì)菌，這些細(xì)胞或雜質(zhì)貼附在制片區(qū)，影響病理細(xì)胞的判讀[2]。因此，高質(zhì)量的細(xì)胞學(xué)制片對(duì)臨床病理診斷顯得尤為重要。本實(shí)驗(yàn)將圍繞這一問(wèn)題，探討冰醋酸作為輔助裂解液在胸腔液基細(xì)胞學(xué)制片中的應(yīng)用價(jià)值，以期優(yōu)化液基細(xì)胞學(xué)制片方法和質(zhì)量。

1 材料與方法

1.1 試劑與儀器 冰醋酸（AR 國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）、無(wú)水乙醇（AR 無(wú)錫市展望化工試劑有限公司）、HE染液（珠海貝索生物技術(shù)有限公司）、生理鹽水（石家莊四藥有限公司）、液基薄層細(xì)胞制片機(jī)（南京健邦錦源醫(yī)療儀器有限公司，JY-8000B）。

1.2 方法

1.2.1 試劑配制 取50 mL冰醋酸與50 mL生理鹽水混勻配成體積分?jǐn)?shù)為50%冰醋酸；另取兩支潔凈無(wú)菌試管分別加入50 mL生理鹽水，采用倍比稀釋的方法依次配成25%冰醋酸和12.5%冰醋酸溶液，備用。

1.2.2 涂片制備 ①所有標(biāo)本來(lái)源為本醫(yī)院2019年-2020年疑似肺癌患者行將胸腔液基細(xì)胞學(xué)檢查的標(biāo)本，選取其中90例，分為正常組、血性液組和渾濁液組，各組30例。②取正常組、血性液組和渾濁液組標(biāo)本離心處理，棄上清液，取沉渣于細(xì)胞保存液，混勻后分別置于制片機(jī)上制片，作為對(duì)照組。③如上相同的方法處理血性液組和渾濁液組標(biāo)本，分別取沉渣于細(xì)胞保存液，混勻后分別加入50%冰醋酸、25%冰醋酸、12.5%冰醋酸，混勻后置于自動(dòng)制片機(jī)上制片。④所有標(biāo)本制片后行HE染色，光學(xué)顯微鏡觀察染色情況。

2 結(jié) 果

2.1 肉眼觀察結(jié)果 ①液基細(xì)胞學(xué)檢查正常胸腔液呈黃色或淺黃色、澄清透明狀液體，或有少量細(xì)胞均勻分布；渾濁液組胸腔液為深黃色，懸浮有大量細(xì)小顆粒狀物；血性液組胸腔液呈紅棕色、灰褐色或暗紅色，內(nèi)含大量血細(xì)胞，不透明。②將各組標(biāo)本制成直徑約13 mm的圓形細(xì)胞薄層片，后行HE染色，結(jié)果顯示，正常組呈一薄層細(xì)胞均勻分布，表面平整，邊緣整齊，染色均勻；血性液組和渾濁液組未經(jīng)冰醋酸處理的涂片厚薄不一，染色不均勻，表面不平整；經(jīng)冰醋酸處理組涂片外觀似正常組涂片，且隨著冰醋酸濃度變化，著色深淺不同。

2.2 鏡下觀察結(jié)果 ①正常組涂片背景干凈，少量細(xì)胞，無(wú)明顯雜質(zhì)，分布均勻，著色對(duì)比清晰（圖1-P）。②渾濁液組和血性液組，未經(jīng)冰醋酸處理的涂片染色不均勻，有較多細(xì)胞碎片或細(xì)胞堆積，可見(jiàn)大片的紅染區(qū)，著色對(duì)比不明顯（圖1-A，圖1-E）；經(jīng)50%冰醋酸處理的涂片背景雜亂，細(xì)胞破壞較多，血性液組可見(jiàn)較多紅染區(qū)，著色對(duì)比不清晰（圖1-B，圖1-F）；經(jīng)25%冰醋酸處理的涂片與正常組涂片相似，背景較為干凈，細(xì)胞分布均勻，紅染區(qū)大幅減少，著色對(duì)比清晰（圖1-C，圖1-G）；經(jīng)12.5%冰醋酸處理的涂片染色不均勻，有較多細(xì)胞碎片和細(xì)胞堆積，著色對(duì)比不清晰（圖1-D，圖1-H）。

注：P：正常胸腔液所制涂片HE染色結(jié)果；A渾濁胸腔液未經(jīng)冰醋酸處理所制涂片HE染色結(jié)果；B：渾濁胸腔液經(jīng)50%冰醋酸處理所制涂片HE染色結(jié)果；C：渾濁胸腔液經(jīng)25%冰醋酸處理所制涂片HE染色結(jié)果；D：渾濁胸腔液經(jīng)12.5%冰醋酸處理所制涂片HE染色結(jié)果；E：血性胸腔液未經(jīng)冰醋酸處理所制涂片HE染色結(jié)果；F：血性胸腔液經(jīng)50%冰醋酸處理所制涂片HE染色結(jié)果；G：血性胸腔液經(jīng)25%冰醋酸處理所制涂片HE染色結(jié)果；H：血性胸腔液經(jīng)12.5%冰醋酸處理所制涂片HE染色結(jié)果

3 討 論

液基細(xì)胞薄層涂片檢測(cè)（TCT）是利用重力沉淀或?yàn)V膜原理，制作標(biāo)準(zhǔn)化優(yōu)良細(xì)胞學(xué)病理薄片的技術(shù)[3]。與傳統(tǒng)細(xì)胞直接涂片相比，其優(yōu)勢(shì)在于：一方面避免直接涂片造成細(xì)胞干燥，影響染色[4]。另一方面，自動(dòng)化程序制作的薄片均勻，乙醇作為固定液使得細(xì)胞核結(jié)構(gòu)清晰，細(xì)胞分布均勻易于染色和觀察[5～6]。

肺癌是引起胸腔積水的主要病因之一，因此鑒別胸腔液的性質(zhì)是排查肺部癌性病變的重要手段。然而，不同疾病引起胸腔液的顏色、透明度、蛋白和細(xì)胞的含量及分類有所不同。因此，胸腔液基細(xì)胞學(xué)檢查是肺部腫瘤篩查、診斷和治療必不可少的手段。若胸水中含有大量血液、淋巴液、脫落細(xì)胞或細(xì)菌等，在行液基細(xì)胞學(xué)檢查時(shí)就會(huì)嚴(yán)重影響觀察、制片和染色。一方面紅細(xì)胞碎片、部分大分子蛋白、細(xì)菌顆粒會(huì)貼附在制片區(qū)或炎癥細(xì)胞、上皮細(xì)胞過(guò)度重疊，甚至覆蓋病理細(xì)胞造成背景雜亂，導(dǎo)致無(wú)法觀察而影響診斷；另一方面被染液染色的血細(xì)胞或細(xì)菌顆粒等粘附于玻片上，造成染色背景復(fù)雜，著色對(duì)比不清晰，影響病理細(xì)胞的判讀[2]，因此正確處理血細(xì)胞或其他雜質(zhì)蛋白是液基細(xì)胞學(xué)制片成功的關(guān)鍵。研究表明，冰醋酸能夠改變血紅細(xì)胞膜[7～8]和細(xì)菌細(xì)胞壁的通透性，促進(jìn)大分子蛋白質(zhì)的變性。目前臨床上普遍采用高濃度的冰醋酸來(lái)處理上述標(biāo)本，方法是直接向標(biāo)本中加入一定比例的冰醋酸，裂解紅細(xì)胞后離心去除紅細(xì)胞碎片，但是大量的高濃度冰醋酸會(huì)將一部分正常細(xì)胞以及病變細(xì)胞也一同裂解，因此在去除紅細(xì)胞同時(shí)可能會(huì)因?yàn)椴∽兗?xì)胞也被裂解而造成漏檢。所以需要通過(guò)合適方法來(lái)排除過(guò)多血液或大分子蛋白等雜質(zhì)的干擾。

本實(shí)驗(yàn)中我們用不同濃度的冰醋酸處理標(biāo)本，以探究其在胸腔液基細(xì)胞學(xué)制片中的應(yīng)用價(jià)值，取得了良好的效果。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果與相關(guān)文獻(xiàn)結(jié)果一致[9]，即冰醋酸體積分?jǐn)?shù)為25%左右為最適濃度，冰醋酸的濃度過(guò)高或過(guò)低裂解效果均不明顯，這可能是由于高濃度的冰醋酸不僅能裂解紅細(xì)胞，也會(huì)影響上皮細(xì)胞等有核細(xì)胞的通透性，使部分正常的細(xì)胞也遭到裂解，從而影響制片的質(zhì)量。因此，在胸腔液基細(xì)胞學(xué)制片中用適當(dāng)濃度的冰醋酸作為裂解液，有助于提高涂片染色效果和制片的質(zhì)量，從而提高異常細(xì)胞的檢出率，具有較好的臨床應(yīng)用價(jià)值。