小大黃化學(xué)成分的研究

王洪玲 王 陸 鐘國躍 梁文娟

（1.江西中醫(yī)藥大學(xué)中藥資源與民族藥研究中心， 江西 南昌330004； 2.云南農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科技學(xué)院，云南 昆明650201）

藏藥小大黃Rheum pumilumMaxim.為蓼科大黃屬植物，為《藏藥標(biāo)準(zhǔn)》 曲瑪孜的基源品種之一，用于治療便秘、腹水、黃水病、腹痛等［1］。本課題組前期發(fā)現(xiàn)小大黃70%乙醇提取物具有降尿酸功效［2］，其化學(xué)成分主要包括蒽醌類、二苯乙醇類、黃酮類、萘苷類等［3-4］。為了進(jìn)一步尋找其抗痛風(fēng)活性成分，本實(shí)驗(yàn)從小大黃中分離得到12個化合物，且所有化合物均為首次從該植物中分離得到的。

1 材料

柱色譜硅膠（200～300目，煙臺江友有限公司）；反相C18硅膠材料（日本Fuji 公司）；Bruker DRX-500、AV-600型超導(dǎo)核磁共振波譜儀（德國布魯克公司）；API Qstar Pulsar 液相四極桿飛行時間質(zhì)譜（美國AB 公司）。二氯甲烷、丙酮、甲醇（西隴化學(xué)有限公司）；純凈水為實(shí)驗(yàn)室自制的二次蒸餾水；顯色劑為H2SO4（10%） 乙醇溶液。

小大黃藥材于2013 年10 月采自西藏昌都，經(jīng)江西中醫(yī)藥大學(xué)鐘國躍研究員鑒定為小大黃Rheum pumilumMaxim.［4］。

2 提取與分離

小大黃3.20 kg 用70%乙醇提取濃縮，經(jīng)石油醚、乙酸乙酯萃取，得石油醚、乙酸乙酯和水部位［4］。乙酸乙酯部位（Fr.2，92.0 g） 過硅膠柱層析，以二氯甲烷-甲醇梯度洗脫，得7個部位Fr.2-1～Fr.2-7。Fr.2-2 經(jīng)反復(fù)硅膠柱層析和Sephadex LH-20（甲醇） 洗脫，得化合物1（15 mg）、2（9 mg）、3（6 mg）、4（7 mg）。水部位（Fr.3，310 g） 過D101 大孔樹脂，乙醇-水梯度洗脫，得5個部位Fr.3-1～Fr.3-5。Fr.3-3 過反復(fù)硅膠柱層析，再經(jīng)Sephadex LH-20 和安捷倫半制備液相，得化合物5（9 mg）、6（8 mg）、7（6 mg）、8（12 mg）、9（7 mg）。Fr.3-4 過瑞士步琪中亞制備，甲醇-水不同梯度洗脫，再經(jīng)硅膠柱層析和Sephadex LH-20得化合物10（9 mg）、11（13 mg）、12（7 mg）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：淡黃色粉末。ESI-MSm／z：259.3［M ＋H］＋。1H-NMR（500 MHz，CD3OD）δ：7.01（1H，d，J＝1.9 Hz，H-2′），6.90（1H，d，J＝16.4 Hz，H-8），6.86（1H，d，J＝16.4 Hz，H-7），6.78（2H，overlapped，H-5′，H-6′），6.49（2H，overlapped，H-2，H-6），6.23（1H，d，J＝2.2 Hz，H-4），3.74（3H，s，-OCH3）；13C-NMR（125 MHz，CD3OD）δ：141.3（C-1），106.1（C-2，6），159.6（C-3，5），102.9（C-4），127.8（C-7），129.6（C-8），132.1（C-1′），120.3（C-2′），148.9（C-3′），147.4（C-4′），113.6（C-5′），120.3（C-6′）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［5］基本一致，故鑒定為丹葉大黃素。

化合物2：棕色油狀物。ESI-MSm／z：195.1［M ＋H］＋。1H-NMR（600 MHz，CD3OD）δ：6.76（1H，d，J＝2.0 Hz，H-6），6.67（1H，d，J＝8.3 Hz，H-9），6.60（1H，dd，J＝8.3，2.0 Hz，H-10），3.80（3H，s，7-OCH3），2.09（3H，s，H-1）；13C-NMR（150 MHz，CD3OD）δ：30.0（C-1），211.5（C-2），30.5（C-3），46.3（C-4），133.9（C-5），113.0（C-6），148.9（C-7），145.8（C-8），116.1（C-9），121.7（C-10），56.3（-OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［6］基本一致，故鑒定為姜酮。

化合物3：白色粉末。ESI-MSm／z：167.0［M＋H］＋。1H-NMR（600 MHz，CD3OD）δ：6.86（1H，brs，H-4），6.73（1H，brs H-6），5.19（2H，s，H-4）；13C-NMR（150 MHz，CD3OD）δ：170.6（C ＝O），167.2（C-3），69.3（C-3），104.4（C-4），160.4（C-5），101.7（C-6），152.6（C-7），105.0（C-8）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［7］基本一致，故鑒定為5，7-二羥基-異苯唑呋喃。

化合物4：白色粉末。ESI-MSm／z：249.1［M＋H］＋。1H-NMR（600 MHz，CD3OD）δ：6.70（1H，t，J＝7.8 Hz，H-7），6.27（1H，d，J＝7.8 Hz，H-8），6.00（1H，d，J＝7.8 Hz，H-6），4.11（1H，s，H-1），2.56（3H，s，H-CH3），2.261（3H，s，HCH3）；13C-NMR（125 MHz，CD3OD）δ：66.9（C-1），64.8（C-2），68.5（C-3），196.1（C-4），164.0（C-5），115.5（C-6），136.7（C-7），117.6（C-8），112.2（C-9），142.9（C-10），200.5（-CO），28.8（-CH3），15.2（-CH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［8］基本一致，故鑒定為3-acetyl-2-methyl-1，5-dihydroxy-2，3-epoxynaphthoquinol。

化合物5：白色粉末。ESI-MSm／z：191.2［M＋Na］＋。1H-NMR（CD3OD，600 MHz）δ：7.59（2H，overlapped，H-5，6），6.86（1H，d，J＝1.9 Hz，H-2），3.89（3H，s，-OCH3）；13C-NMR（CD3OD，150 MHz）δ：123.4（C-1），116.1（C-2），149.1（C-3），152.9（C-4），114.0（C-5），125.8（C-6），170.4（C-7）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［9］基本一致，故鑒定為3-甲氧基-4-羥基苯甲酸。

化合物6：白色粉末。ESI-MSm／z：183.0［M-H］-。1H-NMR（600 MHz，CD3OD）δ：7.01（2H，brs，H-2，6），3.85（3H，s，4-OCH3）；13CNMR（150 MHz，CD3OD）δ：127.9（C-1），109.9（C-2，6），151.1（C-3，5），140.4（C-4），60.3（-OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［10］基本一致，故鑒定為3，5-二羥基-4-甲氧基苯甲酸。

化合物7：白色粉末。ESI-MSm／z：123.0［M＋H］＋。1H-NMR（500 MHz，CD3OD）δ：9.72（1H，s，-CHO），7.75（2H，d，J＝8.8 Hz，H-2，6），6.90（1H，d，J＝8.8 Hz，H-3，5）；13C-NMR（125 MHz，CD3OD）δ：130.2（C-1），133.5（C-2，6），116.9（C-3，5），165.2（C-4），193.1（-CHO）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［11］基本一致，故鑒定為對羥基苯甲醛。

化合物8：白色粉末。ESI-MSm／z：419.2［MH］-。1H-NMR（600 MHz，CD3OD）δ：6.57（1H，s，H-8），6.38（2H，s，H-2′，6′），4.30（1H，d，J＝5.6 Hz，H-4），3.85（3H，s，7-OCH3），3.73（6H，s，3′，5′-OCH3），3.35（3H，s，5-OCH3）；13C-NMR（150 MHz，CD3OD）δ：33.7（C-1），41.0（C-2），66.9（C-2a），49.7（C-3），64.2（C-3a），42.4（C-4），147.8（C-5），139.0（C-6），148.8（C-7），107.9（C-8），130.3（C-9），126.4（C-10），139.4（C-1′），106.9（C-2′，6′），149.1（C-3′，5′），134.6（C-4′），60.3（5-OCH3），56.7（7-OCH3），56.9（3′，5′-OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［12］基本一致，故鑒定為lyoniresinol。

化合物9：白色粉末。ESI-MSm／z：269.1［M＋H］＋。1H-NMR（600 MHz，CD3OD）δ：9.86（1H，s，H-7），7.88（1H，d，J＝8.8 Hz，H-3，5），7.23（1H，d，J＝8.8 Hz，H-2，6），5.57（1H，d，J＝1.2 Hz，H-1′），1.21（1H，d，J＝6.6 Hz，H-6′）；13C-NMR（125 MHz，CD3OD）δ：163.1（C-1），117.0（C-2，6），133.2（C-3，5），132.7（C-4），193.2（C-7），99.9（C-1′），72.1（C-2′），72.4（C-3′），73.9（C-4′），71.4（C-5′），18.3（C-6′）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［13］基本一致，故鑒定為4-（α-L-rhamnopyranosyloxy） benzaldehyde。

化合物10：白色粉末。ESI-MSm／z：359.1［M-H］-。1H-NMR（600 MHz，CD3OD）δ：7.04（2H，s，H-2′，6′），5.10（1H，d，J＝3.7 Hz，H-1α），3.84（6H，s，3′，5′-OCH3）；13C-NMR（150 MHz，CD3OD）δ：98.4（C-1β），94.2（C-1α），75.8（C-2β），72.0（C-2α），78.0（C-3β），74.9（C-3α），78.0（C-3β），74.9（C-3α），71.8（C-4β），70.9（C-4α），76.3（C-5β），73.9（C-5α），66.3（C-6β），66.3（C-6α），126.6（C-1′），110.3（C-2′，6′），151.8（C-3′，5′），141.4（C-4′），167.0（C-7′）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［14］基本一致，故鑒定為 6-O-（4′-hydroxy-3′，5′-dimethoxybenzoyl） -D-glucopyranose。

化合物11：白色粉末。ESI-MSm／z：183.0［M-H］-。1H-NMR（600 MHz，CD3OD）δ：5.31（1H，d，J＝7.8 Hz，H-1″），5.29（1H，t，J＝3.6 Hz，H-12），4.57（1H，d，J＝6.6 Hz，H-1′），1.32（3H，s，H-27），1.19（3H，s，H-29），1.04（3H，s，H-25），0.95（3H，s，H-23），0.93（3H，s，H-30），0.84（3H，s，H-26），0.77（3H，s，H-24）；13C-NMR（150 MHz，CD3OD）δ：39.9（C-1），27.1（C-2），90.8（C-3），40.2（C-4），57.0（C-5），19.5（C-6），34.2（C-7），41.3（C-8），48.6（C-9），37.9（C-10），24.7（C-11），129.7（C-12），139.6（C-13），42.6（C-14），29.7（C-15），26.5（C-16），48.2（C-17），55.0（C-18），73.7（C-19），42.9（C-20），27.0（C-21），38.3（C-22），28.6（C-23），17.0（C-24），16.0（C-25），17.6（C-26），24.7（C-27），178.6（C-28），27.2（C-29），16.6（C-30），107.1（C-1′），72.6（C-2′），74.3（C-3′），69.6（C-4′），66.2（C-5′），95.8（C-1″），73.8（C-2″），78.6（C-3″），71.1（C-4″），78.3（C-5″），62.4（C-6″）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［15］基本一致，故鑒定為3-O-α-L-arabinopyranosyl-28-O-β-D-glucopyranosyl pomolic acid。

化合物12：白色粉末。ESI-MSm／z：209.1［M ＋H］＋。1H-NMR（600 MHz，CD3OD）δ：4.28（1H，t，J＝7.8 Hz，H-1），3.96（1H，m，H-6b），3.85（1H，m，H-6a），1.24（1H，t，J＝4.8 Hz，H-1）；13C-NMR（150 MHz，CD3OD）δ：104.4（C-1），75.3（C-2），78.6（C-3），71.6（C-4），78.4（C-5），63.2（C-6），66.8（C-1′），15.6（C-2′）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［16］基本一致，故鑒定為ethylβ-D-glucopyranoside。

4 討論

本研究從小大黃中分離鑒定12個化合物，包括二苯乙醇類、酚酸類、木脂素類、三萜皂苷類等，以期豐富其化學(xué)成分，為以后的研究提供參考。本課題前期發(fā)現(xiàn)藏藥小大黃70% 乙醇部位具有抗痛風(fēng)功效［2］，文獻(xiàn)報道酚酸類化合物（阿魏酸、香草醛、2，5-二羥基苯乙酮等） 和三萜皂苷（dioscorea、riparoside B、pallidifloside D 等） 具有降尿酸功效［17-21］，基于此，下一步將繼續(xù)對分離得到的化合物進(jìn)行抗痛風(fēng)篩選，從體內(nèi)、細(xì)胞、分子多種水平闡明小大黃抗痛風(fēng)藥效物質(zhì)基礎(chǔ)。