短管兔耳草化學成分的研究（Ⅱ）

張晨輝李 敏謝雄雄張 遲任玲玲朱繼孝曾金祥*朱玉野鐘國躍

（1.江西中醫(yī)藥大學中藥資源與民族藥研究中心，江西 南昌 330004； 2.浙江省食品藥品檢驗研究院，浙江 杭州 310052）

藏藥是我國傳統(tǒng)醫(yī)藥的重要組成部分，尤其對某些特殊疑難病癥（如風濕病、心血管病、胃病等）顯示出其他藥物無可替代的作用［1］。短管兔耳草系玄參科兔耳草屬植物Lagotis brevitubaMaxim.的干燥全草，主要分布于青海、西藏、甘肅等地，其應用歷史悠久，是著名藏藥洪連的基原植物［2］，藏醫(yī)學在臨床上用于治療腎炎、高血壓、動脈粥樣硬化癥、全身發(fā)燒、肺病、濕熱瀉痢、陰道流黃黑色液物、綜合性毒性中毒、心熱等［3］，具有極高的藥用價值，被《四部醫(yī)典》列為藏草藥之首。現(xiàn)代藥理研究表明短管兔耳草具有降尿酸、抗腫瘤、抗炎、保肝等多種生物活性［4-8］。本實驗對短管兔耳草的化學成分進行研究，從中分離得到11個化合物，其中，化合物2～4、6～7、10 為首次從該植物中分離得到，化合物1、5、8～9、11 首次從兔耳草屬植物中分離得到，可為其開發(fā)利用提供物質基礎。

1 材料

薄層色譜硅膠及柱色譜硅膠（青島海洋化工廠）；ZF-I 型三用紫外分析儀（上海顧村電光儀器廠）；LC-20AT 型高效液相色譜儀（日本Shimadzu公司）；SZ-93A 型雙重純水蒸餾器（上海亞榮生化儀器廠）；SHB-Ⅲ型循環(huán)水式真空泵（鄭州長城科工貿有限公司）；旋轉蒸發(fā)儀（瑞士步琪公司）；BT25S 型電子分析天平（北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司）；AX-600 型核磁共振波譜儀（以TMS為內標，瑞士布魯克公司）；YMC-Pack ODS 半制備柱（250 mm×10 mm，5 μm，日本YMC 公司）；YMC C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm，日本YMC公司）。試劑均為分析純（廣東汕頭市西隴化工股份有限公司）。

短管兔耳草購于成都荷花池藥材市場，經江西中醫(yī)藥大學鐘國躍教授鑒定為玄參科兔耳草屬植物短管兔耳草Lagotis brevitubaMaxim.的干燥全草。

2 提取與分離

取10 kg 干燥全草，粉碎，滲漉，提取液減壓濃縮得浸膏，加水混懸至無明顯顆粒，石油醚萃取，水層減壓濃縮得浸膏（385 g），硅膠拌樣，經硅膠柱（200～300 目，二氯甲烷-甲醇＝100∶0～0∶100），得8 個流份（Ⅰ～Ⅷ）。流份Ⅴ經硅膠柱（200～300 目，二氯甲烷-甲醇＝10∶1～1∶5），得10 個流份Ⅴ-1～Ⅴ-10。Ⅴ-6 經ODS 柱（水-甲醇＝80∶20～0∶100），得4 個流份Ⅴ-6-1～Ⅴ-6-4，Ⅴ-6-3經過Sephadex LH-20 柱（二氯甲烷-甲醇＝1∶1），得3 個流份Ⅴ-6-3-1～Ⅴ-6-3-3，Ⅴ-6-3-2經半制備HPLC（甲醇-水＝40∶60），得化合物8（13.6 mg）。Ⅴ-8 經ODS 柱（水-甲醇＝80∶20～0∶100），得4 個流份Ⅴ-8-1～Ⅴ-8-4，Ⅴ-8-3 經過Sephadex LH-20 柱（二氯甲烷-甲醇＝1∶1），得4個流份Ⅴ-8-3-1～Ⅴ-8-3-4，Ⅴ-8-3-2 經 半制備HPLC（甲 醇-水＝45∶55），得化合物 11（57.9 mg）；Ⅴ-8-3-3 經半制備HPLC（甲醇-水＝45∶55），得化合物1（21.8 mg）；Ⅴ-8-3-4 經ODS柱（水-甲醇＝70∶30～0∶100），得4 個流份Ⅴ-8-3-4-1～Ⅴ-8-3-4-4，Ⅴ-8-3-4-2 經半制備HPLC（甲醇-水＝45∶55），得化合物2（11.2 mg）；Ⅴ-8-3-4-4 經半制備HPLC（甲醇-水＝45∶55），得化合物6（7.5 mg）。Ⅴ-10 經硅膠柱（200～300 目，二氯甲烷-甲醇＝20∶1～1∶5），得4 個流份Ⅴ-10-1～Ⅴ-10-4，Ⅴ-10-4 經Sephadex LH-20 柱（二氯甲烷-甲醇＝1∶1），得5 個流份Ⅴ-10-4-1～Ⅴ-10-4-5，Ⅴ-10-4-2 經半制備HPLC（乙腈-水＝20∶80），得化合物10（22.7 mg），經2 次制備（甲醇-水＝40∶60），得化合物9（6 mg）；Ⅴ-10-4-3 經半制備HPLC（甲 醇-水＝45∶55），得化合物 4（941.8 mg）、5（66 mg）；Ⅴ-10-4-4 經半制備HPLC（乙 腈-水＝20∶80），得化合物 3（108.2 mg）；Ⅴ-10-4-5 經半制備HPLC（甲醇-水＝32∶68），得化合物7（27.5 mg）。

3 結構鑒定

化合 物1：白色粉末。ESI-MSm／z：529.5［M＋H］＋。1H-NMR（600 MHz，CD3OD）δ：7.74（d，J＝15.9 Hz，1H，H-7″），7.63（m，2H，H-2″，6″），7.42（m，3H，H-3″，5″），6.54（d，J＝15.9 Hz，1H，H-8″），6.23（m，1H，H-3），5.63（m，1H，H-1），5.10（m，1H，H-4），4.63（d，J＝7.9 Hz，1H，H-1′），4.57（d，J＝11.8 Hz，1H，H-10），4.34（d，J＝11.8 Hz，1H，H-10），4.07（d，J＝8.1 Hz，1H，H-7），3.93（dd，J＝8.1，6.1 Hz，1H，H-6），2.72（m，1H，H-5），2.64（dd，J＝10.9，3.6 Hz，1H，H-9）；13C-NMR（150 MHz，CD3OD）δ：92.9（C-1），140.8（C-3），105.8（C-4），38.0（C-5），83.5（C-6），73.4（C-7），79.4（C-8），49.9（C-9），66.3（C-10），99.8（C-1′），74.7（C-2′），77.9（C-3′），71.4（C-4′），77.9（C-5′），62.7（C-6′），135.7（C-1″），129.3（C-2″），130.0（C-3″），131.6（C-4″），130.0（C-5″），129.3（C-6″），118.7（C-7″），146.6（C-8″），168.2（C-9″）。以上數(shù)據(jù)與文獻［9］一致，故鑒定為baldaccioside。

化合 物2。白色粉末。ESI-MSm／z：493.0［M＋H］＋。1H-NMR（600 MHz，CD3OD）δ：7.74（d，J＝15.9 Hz，1H，H-7″），7.64（m，H-2″，6″），7.43（m，H-3″，4″，5″），6.59（d，J＝15.9 Hz，1H，H-8″），6.38（d，J＝5.6 Hz，1H，H-3），5.10（m，1H，H-1），5.09（m，1H，H-4），5.05（d，J＝12.6 Hz，1H，H-10），4.77（d，J＝7.7 Hz，1H，H-1′），4.29（d，J＝12.6 Hz，1H，H-10），3.92（m，1H，H-6），3.37（brs，1H，H-7），2.69（m，1H，H-9），2.32（m，1H，H-5）；13C-NMR（150 MHz，CD3OD）δ：95.6（C-1），141.8（C-3），103.7（C-4），39.0（C-5），79.5（C-6），62.8（C-7），63.5（C-8），43.6（C-9），64.5（C-10），100.3（C-1′），74.8（C-2′），77.9（C-3′），71.5（C-4′），78.5（C-5′），63（C-6′），135.8（C-1″），130.0（C-2″，6″），129.4（C-3″，5″），131.6（C-4″），118.6（C-7″），146.7（C-8″），168.4（C-9″）。以上數(shù)據(jù) 與文獻［10］一致，故鑒定為globularin。

化合 物3：白色粉末。ESI-MSm／z：553.0［M＋H］＋。1H-NMR（CD3OD，600 MHz）δ：7.69（d，J＝2.0 Hz，1H，H-2″），7.23（dd，J＝8.5，2.1 Hz，1H，H-6″），6.95（d，J＝7.9 Hz，1H，H-5″），6.93（d，J＝12.9 Hz，1H，H-7″），6.35（dd，J＝6.0，1.8 Hz，1H，H-3），5.88（d，J＝12.9 Hz，1H，H-8″），5.08（m，1H，H-4），5.05（m，1H，H-1），4.97（d，J＝12.7 Hz，1H，H-10），4.74（d，J＝7.9 Hz，1H，H-1′），4.21（d，J＝12.7 Hz，1H，H-10），3.95（m，1H，H-6），3.65（brs，1H，H-7），3.88（s，6H，-OCH3），2.66（m，1H，H-5）；13C-NMR（CD3OD，150 MHz）δ：95.6（C-1），141.8（C-3），103.7（C-4），39.0（C-5），79.5（C-6），62.7（C-7），63.4（C-8），43.6（C-9），64.0（C-10），100.2（C-1′），74.8（C-2′），78.5（C-3′），71.6（C-4′），77.8（C-5′），63.0（C-6′），129.2（C-1″），112.0（C-2″），149.7（C-3″），151.7（C-4″），114.9（C-5″），126.2（C-6″），145.3（C-7″），117.4（C-8″），167.9（C-9″），56.3（-OCH3），56.5（-OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻［11］一致，故鑒定為10-O-［3，4-二甲氧基-（Z）-肉桂?；?梓醇。

化合 物4：白色粉末。ESI-MSm／z：553.0［M＋H］＋。1H-NMR（600 MHz，CD3OD）δ：7.65（d，J＝15.9 Hz，1H，H-7″），7.22（d，J＝2.0 Hz，1H，H-2″），7.17（dd，J＝8.3，2.0 Hz，1H，H-6″），6.96（d，J＝8.3 Hz，1H，H-5″），6.44（d，J＝15.9 Hz，1H，H-8″），6.36（dd，J＝6.0，1.8 Hz，1H，H-3），5.08（m，1H，H-4），5.07（d，J＝5.6 Hz，1H，H-1），5.00（d，J＝12.6 Hz，1H，H-10），4.76（d，J＝7.8 Hz，1H，H-1′），4.28（d，J＝12.6 Hz，1H，H-10），3.95（dd，J＝7.9，1.2 Hz，1H，H-6），3.68（dd，J＝12.0，6.0 Hz，1H，H-7），3.88（s，3H，-OCH3），3.87（s，3H，-OCH3），2.66（dd，J＝9.7，7.6 Hz，1H，H-5）；13C-NMR（150 MHz，CD3OD）δ：95.6（C-1），141.8（C-3），103.7（C-4），39.0（C-5），79.4（C-6），62.8（C-7），63.6（C-8），43.6（C-9），64.3（C-10），100.2（C-1′），74.8（C-2′），78.4（C-3′），71.4（C-4′），77.8（C-5′），63.0（C-6′），128.7（C-1″），111.5（C-2″），150.6（C-3″），152.8（C-4″），112.5（C-5″），124.1（C-6″），146.8（C-7″），116.1（C-8″），168.8（C-9″），56.4（-OCH3），56.5（-OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻［11］一致，故鑒定為10-O-［3，4-二甲氧基-（E）-肉桂?；?梓醇。

化合 物5：白色粉末。ESI-MSm／z：495.0［M＋H］＋。1H-NMR（600 MHz，CD3OD）δ：7.72（d，J＝16.0 Hz，1H，H-7″），7.63（m，2H，H-2″，6″），7.41（m，3H，H-3″，4″，5″），6.56（d，J＝16.0 Hz，1H，H-8″），4.97（d，J＝12.6 Hz，1H，H-10），4.81（d，J＝9.2 Hz，1H，H-1），4.67（d，J＝7.9 Hz，1H，H-1′），4.22（d，J＝12.6 Hz，1H，H-10），4.19（d，J＝9.2 Hz，1H，H-3），3.91（dd，J＝12.0，1.7 Hz，1H，H-6），3.67（dd，J＝11.9，5.9 Hz，1H，H-7），2.41（dd，J＝9.1，7.4 Hz，1H，H-9），2.07（m，1H，H-5），1.80（m，1H，H-4），1.63（m，1H，H-4）；13C-NMR（150 MHz，CD3OD）δ：98.0（C-1），62.8（C-3），23.9（C-4），38.3（C-5），73.1（C-6），62.3（C-7），63.3（C-8），43.5（C-9），64.5（C-10），99.8（C-1′），74.8（C-2′），78.4（C-3′），71.4（C-4′），77.9（C-5′），63.0（C-6′），135.7（C-1″），130.0（C-2″），129.3（C-3″），131.6（C-4″），129.3（C-5″），130.0（C-6″），146.7（C-7″），118.6（C-8″），168.5（C-9″）。以上數(shù)據(jù)與文獻［12］一致，故鑒定為globularidin。

化合 物6：白色粉末。ESI-MSm／z：523.0［M＋H］＋。1H-NMR（600 MHz，CD3OD）δ：7.67（d，J＝15.9 Hz，1H，H-7″），7.57（d，J＝8.4 Hz，2H，H-2″，6″），6.96（d，J＝85 Hz，2H，H-3″，5″），6.42（d，J＝16.0 Hz，1H，H-8″），6.36（d，J＝6.0 Hz，1H，H-3），5.00（m，2H，H-1，4），4.99（d，J＝12.6 Hz，1H，H-10），4.75（d，J＝7.9 Hz，1H，H-1′），4.27（d，J＝12.6 Hz，1H，H-10），3.97（d，J＝8.2 Hz，1H，H-6′），3.92（dd，J＝12.0，2.2 Hz，1H，H-6′），3.51（d，J＝6.5 Hz，1H，H-7），2.66（m，1H，H-9），2.30（m，1H，H-5）；13C-NMR（150 MHz，CD3OD）δ：95.6（C-1），141.8（C-3），103.8（C-4），39.0（C-5），79.4（C-6），62.9（C-7），64.3（C-8），43.6（C-9），63.6（C-10），100.3（C-1′），74.8（C-2′），78.4（C-3′），71.4（C-4′），77.8（C-5′），63.6（C-6′），128.3（C-1″），131.1（C-2″），115.4（C-3″），163.2（C-4″），115.4（C-5″），131.1（C-6″），146.5（C-7″），115.8（C-8″），168.9（C-9″），55.9（-OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻［13］一致，故鑒定為10-O-對甲氧基-（Z）-肉桂酰基-梓醇。

化合物7：黃色粉末。ESI-MSm／z：422.0［M＋H］＋。1H-NMR（600 MHz，CD3OD）δ：7.67（d，J＝16.0 Hz，1H，H-7），7.18（d，J＝2.0 Hz，1H，H-2），7.14（dd，J＝8.3，2.1 Hz，1H，H-6），6.94（d，J＝8.3 Hz，1H，H-5），6.45（d，J＝15.9 Hz，1H，H-8），5.12（dd，J＝9.9，3.3 Hz，1H，H-4′），3.83（s，3H，-OCH3），3.82（s，3H，-OCH3），1.26（m，3H，H-6′）；13C-NMR（150 MHz，CD3OD）δ：128.9（C-1），111.4（C-2），150.7（C-3），152.8（C-4），112.6（C-5），124.0（C-6），146.4（C-7），116.8（C-8），168.7（C-9），95.8（C-1′），71.6（C-2′），71.0（C-3′），75.5（C-4′），69.4（C-5′），18.2（C-6′），56.4（-OCH3），56.5（-OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻［14］一致，故鑒定為兔耳草苷B。

化合物8：白色粉末。ESI-MSm／z：310.0［M＋H］＋。1H-NMR（600 MHz，CD3OD）δ：7.71（d，J＝16.0 Hz，1H，H-7），7.60（m，2H，H-2，6），7.40（m，3H，H-3，4，5），6.55（d，J＝16.0 Hz，1H，H-8），5.12（d，J＝3.7 Hz，0.5H，H-α），4.54（d，J＝7.8 Hz，0.5H，H-β）；13C-NMR（150 MHz，CD3OD）δ：135.7（C-1），129.2（C-2，6），130.1（C-3，5），131.6（C-4），146.5（C-7），118.7（C-8），168.6（C-9），β-D98.3（C-1′），74.8（C-2′），77.9（C-3′），72.0（C-4′），75.4（C-5′），65.1（C-6′），α-D94.0（C-1′），76.2（C-2′），73.8（C-3′），70.7（C-4′），71.8（C-5′），65.0（C-6′）。以上數(shù)據(jù)與文獻［15］一致，故鑒定為6-O-（E）-肉桂?；?α／β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物9：白色粉末。ESI-MSm／z：520.0［M＋H］＋。1H-NMR（600 MHz，CD3OD）δ：7.15（d，J＝8.4 Hz，1H，H-5），7.03（d，J＝2.0 Hz，1H，H-2），6.95（d，J＝1.9 Hz，1H，H-2′），6.92（dd，J＝8.3，2.0 Hz，1H，H-6），6.81（dd，J＝8.2，2.0 Hz，1H，H-6′），6.77（d，J＝8.1 Hz，1H，H-5′），4.76（d，J＝4.1 Hz，1H，H-7），4.71（d，J＝4.5 Hz，1H，H-7′），4.25（m，2H，H-9，9′），3.87（s，3H，-OCH3），3.86（s，3H，-OCH3），3.17（m，2H，H-8，8′）；13C-NMR（150 MHz，CD3OD）δ：137.4（C-1），133.7（C-1′），111.6（C-2），110.9（C-2′），150.9（C-3），149.1（C-3′），147.5（C-4），147.3（C-4′），118.0（C-5），116.0（C-5′），119.8（C-6），120.1（C-6′），87.5（C-7），87.1（C-7′），55.5（C-8），55.3（C-8′），72.7（C-9），72.6（C-9′），102.8（C-1″），74.9（C-2″），78.2（C-3″），71.3（C-4″），77.8（C-5″），62.5（C-6″），56.4（-OCH3），56.73（-OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻［16］一致，故鑒定為松脂酚-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物10：白 色粉末。ESI-MSm／z：692.0［M＋H］＋。1H-NMR（600 MHz，CD3OD）δ：6.73（s，2H，H-2′，6′），6.67（s，2H，H-2，6），4.78（d，J＝4.2 Hz，1H，H-7），4.73（d，J＝4.4 Hz，1H，H-7′），4.26～4.34（m，2H，H-9，9′），3.91～3.95（m，2H，H-9，9′），3.87（s，6H，-OCH3），3.86（s，6H，-OCH3），3.11～3.18（m，2H，H-8，8′）；13C-NMR（150 MHz，CD3OD）δ：133.0（C-1），104.8（C-2，6），149.3（C-3，5），136.2（C-4），87.2（C-7），55.7（C-8），72.8（C-9），56.8（3，5-OCH3），139.5（C-1′），104.5（C-2′，6′），154.4（C-3′，5’），135.5（C-4′），87.6（C-7′），55.5（C-8′），72.9（C-9′），57.0（3′，5′-OCH3），105.3（C-1″），75.7（C-2″），78.3（C-3″），71.3（C-4″），77.8（C-5″），62.5（C-6″）。以上數(shù)據(jù)與文獻［17］一致，故鑒定為syringaresinol-4′-O-β-D-monoglucoside。

化合物11：白 色粉末。ESI-MSm／z：370.0［M＋H］＋。1H-NMR（600 MHz，CD3OD）δ：7.59（d，J＝15.9 Hz，1H，H-7），7.37（brs，2H，H-2，5），7.25（d，J＝8.4 Hz，1H，H-6），6.59（d，J＝15.9 Hz，1H，H-8），β-D4.97（d，J＝4.3 Hz，1H，H-1′），α-D4.41（d，J＝11.7 Hz，1H，H-1′），3.81（s，3H，-OCH3），3.79（s，3H，-OCH3）；13C-NMR（150 MHz，CD3OD）δ：126.8（C-1），110.3（C-2），151.0（C-3），149.0（C-4），111.5（C-5），123.1（C-6），144.9（C-7），115.4（C-8），166.6（C-9），55.6（-OCH3），55.6（-OCH3），α-D92.3（C-1′），72.9（C-2′），72.2（C-3′），70.6（C-4′），69.3（C-5′），64.0（C-6′），β-D97.0（C-1′），76.4（C-2′），74.7（C-3′），73.6（C-4′），70.2（C-5′），64.0（C-6′）。以上數(shù)據(jù)與文獻［18］一致，故鑒定為6-O-（3，4-二甲氧基-（Z）-肉桂酰基）-α／β-D-吡喃葡萄糖苷。

4 結論

本研究從短管兔耳草中分離得到了11 個化合物，其中化合物2～4、6～7、10 為首次從該植物中分離得到，化合物1、5、8～9、11 為首次從兔耳草屬植物中分離得到，主要為環(huán)烯醚萜類、苯丙素類及其聚合物。結合現(xiàn)代藥理研究［4-8］，課題組推測苯丙素類及環(huán)烯醚萜類化合物可能為短管兔耳草降尿酸、抗腫瘤及保肝活性的物質基礎。目前，關于環(huán)烯醚萜與苯丙素聚合后形成聚合物的藥理研究較少，其與短管兔耳草生物活性之間有何聯(lián)系也不明確，今后將對兩者的關聯(lián)性進行研究，以期更好地闡釋短管兔耳草的活性物質基礎。