血三七正丁醇部位化學成分的研究

趙 凡 ，戴 灣，李翎熙，李 漓，蔡 佳，肖玉琴，許光明*，周小江*

（1.湖南中醫(yī)藥大學，湖南 長沙 410208；2.岳陽市中醫(yī)院，湖南 岳陽 414000）

血三七，別名紅三七，為蓼科蓼屬植物中華抱莖蓼Polygonum amplexicauleD.Don var.SinenseForbes et Hemsl 的干燥根莖。分布于貴州各地苗鄉(xiāng)，湖北、湖南、廣西、云南、四川等省，是鄂西地區(qū)土家族常用的民族藥［1］。血三七具有清熱解毒、活血化瘀止痛的功效，用于胃痛、跌打損傷、骨折、勞傷腰痛、風濕疼痛等癥狀，其主要作用是散瘀止血、消腫止痛。因此，本實驗選用資源豐富、活血化瘀效果良好的血三七為研究對象，研究表明其水煎液能防治血栓，具有抗動脈粥樣硬化［2］、抗血栓［3］、抗炎［4］、抗真菌［5］、抗氧化［6］等藥理作用。為了探究其物質(zhì)基礎，本實驗對血三七進行化學成分研究，從其正丁醇部位分離得到11 個化合物，其中化合物6～11 均為首次從該植物中分離得到。

1 材料

WFH-203B 型三用紫外光譜儀（上海精科實業(yè)有限公司）；BrukerAM-600 核磁共振儀（德國Bruker 公司）；Agilent 質(zhì)譜儀、Agilent 1200 series高效液相色譜儀（美國Agilent 公司）；KQ-500B 型超聲波清洗儀（鞏義市予華儀器有限責任公司）；RE-52AA 型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠）；BSZ-100 型自動部分收集器（上海青浦滬西儀器廠）；柱層析硅膠（100～200 目、200～300 目）、硅膠GF254和硅膠H（青島海洋化工廠）。石油醚、乙酸乙酯、甲醇、環(huán)己烷（分析純，成都市科龍化工試劑廠）；三氯甲烷、丙酮（分析純，國藥集團化學試劑有限公司）。

血三七藥材采自安徽亳州，經(jīng)湖南中醫(yī)藥大學藥學院周小江教授鑒定為蓼科蓼屬植物中華抱莖蓼Polygonum amplexicauleD.Don var.sinenseForbes et Hemsl 的干燥根莖。

2 提取與分離

50 kg 血三七干燥藥材粉碎后，用70%乙醇回流提取2 次（第1 次提取2 h，8 倍量溶劑；第2次提取1.5 h，6 倍量溶劑），棄藥渣。合并提取液，經(jīng)濃縮至無醇味，得到浸膏濕重9 kg，將浸膏加水分散，用石油醚萃取10 次，乙酸乙酯萃取12次，正丁醇萃取12 次后，減壓回收溶劑，得到石油醚部位（200 g）、乙酸乙酯部位（2.4 kg）、正丁醇部位（4 kg）。

取正丁醇部位4 kg，使用大孔吸附樹脂，分別用水，30%、50%、70%、100% 乙醇洗脫，合并70%、100%乙醇洗脫部位為分段1（760 g），50%洗脫部位為分段2（1 400 g），30%乙醇洗脫部位為分段3（1 500 g）。

分段1 經(jīng)正相硅膠，石油醚-乙酸乙酯20∶1～1∶20 洗脫，再用甲醇-乙酸乙酯1∶50～1∶1 洗脫，最后使用甲醇洗脫，得到10 個部分，分別為部分A～J。

部分D 經(jīng)正相硅膠，石油醚-乙酸乙酯20∶1～1∶10 洗脫，使用薄層色譜檢測并指導合并，最后大合并得到6 個組分（a～f），將組分b、c 分別經(jīng)正相硅膠、制備薄層、Sephadex LH-20 層析等進行分離純化，得化合物1（8 mg）、6（3.5 mg）；將組分e、f 分別經(jīng)正向硅膠、制備薄層、Sephadex LH-20 層析和半制備HPLC 等進行分離純化，得到化合物2（3.6 mg）、3（3.9 mg）、4（4.5 mg）。

部分E 在正相硅膠柱上用二氯甲烷-乙酸乙酯100∶1～1∶6 洗脫，得到7 個組分，分別為組分1～7。其中組分5 經(jīng)減壓正相硅膠、Sephadex LH-20、HPLC 純化后，得化合物8（3.9 mg）。

部分G 經(jīng)正相硅膠，石油醚-乙酸乙酯12∶1～1∶12 洗脫后，用乙酸乙酯洗脫，得到7 個組分，分別為組分1～7。組分6 經(jīng)減壓正相硅膠，石油醚-乙酸乙酯-甲醇7∶3∶0.3～7∶3∶1.1 洗脫后，得到8 個餾分，分別為餾分Ⅰ～Ⅷ。餾分Ⅵ經(jīng)反相硅膠，甲醇15%～55% 洗脫，得到11 個次餾分，分別為a～k；其中次餾分a 經(jīng)Sephadex LH-20、HPLC 純化，得化合物7（3.1 mg）；次餾分b 經(jīng)Sephadex LH-20、HPLC 純化，得化合物 9（21 mg）、10（65 mg）、11（70 mg）；次餾分k 經(jīng)反復Sephadex LH-20，得化合物5（198 mg）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：橙黃色粉末，分子式C15H10O5。ESI-MSm/z：269.048 3［M-H］-。1H-NMR（600 MHz，DMSO-d6）δ：7.40（1H，s，H-5），7.08（1H，s，H-4），7.05（1H，s，H-7），6.54（1H，s，H-2），2.36（3H，s，H-5），12.01（1H，m，1-OH），11.93（1H，m，8-OH），11.36（1H，s，3-OH）；13C-NMR（150 MHz，DMSO-d6）δ：190.1（C-9），181.7（C-10），166.0（C-3），165.0（C-1），162.0（C-8），148.7（C-6），135.5（C-14），133.2（C-12），124.5（C-7），120.9（C-5），113.7（C-11），109.4（C-13），109.2（C-4），108.3（C-2），22.0（C-15）。以上數(shù)據(jù)與文獻［7］基本一致，故鑒定為大黃素。

化合物2：黃色粉末，分子式C15H10O7。ESIMSm/z：301.044 4［M-H］-。1H-NMR（600 MHz，Methanol-d4）δ：7.73（1H，d，J＝8.5 Hz，H-2′），7.63（1H，d，J＝8.5，2.2 Hz，H-6′），6.88（1H，d，J＝8.5 Hz，H-5′），6.39（1H，d，J＝2.1 Hz，H-8），6.18（1H，d，J＝2.1 Hz，H-6）；13C-NMR（150 MHz，Methanol-d4）δ：175.9（C-4），164.2（C-7），161.1（C-9），156.8（C-5），147.4（C-4′），146.6（C-2），144.8（C-3′），135.8（C-3），122.7（C-1′），120.3（C-6′），114.8（C-5′），114.6（C-2′），103.1（C-10），93.8（C-8），93.0（C-6）。以上數(shù)據(jù)與文獻［8］基本一致，故鑒定為槲皮素。

化合物3：白色粉末，分子式C10H10O4。ESIMSm/z：193.057 3［M-H］-。1H-NMR（600 MHz，Methanol-d4）δ：7.60（1H，d，J＝15.9 Hz，H-7），7.18（1H，d，J＝1.9 Hz，H-2），7.07（1H，d，J＝8.2，1.9 Hz，H-6），6.81（1H，d，J＝8.2 Hz，H-5），6.31（1H，d，J＝15.9 Hz，H-8），3.90（3H，s，H-10）；13C-NMR（150 MHz，Methanol-d4）δ：169.6（C-9），149.1（C-3），148.0（C-4），145.5（C-7），126.4（C-1），122.6（C-2），115.1（C-6），114.5（C-8），110.3（C-5），55.0（C-10）。以上數(shù)據(jù)與文獻［9］基本一致，故鑒定為阿魏酸。

化合物4：白色粉末，分子式C8H10O2。1HNMR（600 MHz，Methanol-d4）δ：7.03（2H，d，J＝8.5 Hz，H-2，6），6.70（2H，d，J＝8.5 Hz，H-3，5），3.69（2H，t，J＝7.2 Hz，H-8），2.72（2H，t，J＝ 7.2 Hz，H-7）；13C-NMR（150 MHz，Methanol-d4）δ：155.4（C-4），129.6（C-1），129.5（C-2，6），114.7（C-3，5），63.2（C-8），38.01（C-7）。以上數(shù)據(jù)與文獻［10］基本一致，故鑒定為對羥基苯乙醇。

化合物5：白色粉末，分子式C35H60O6。ESIMSm/z：575.433 3［M-H］-。1H-NMR（600 MHz，DMSO-d6）δ：5.32（1H，d，J＝5.0 Hz，H-6），4.89（1H，d，J＝4.7 Hz，OH-3′），4.86（1H，t，J＝4.2 Hz，OH-2′，OH-4′），4.42（1H，t，J＝5.8 Hz，OH-6′），4.21（1H，d，J＝7.8 Hz，H-1′），3.64（1H，m，H-6′），3.46（1H，m，H-3），3.39（1H，dd，J＝11.7，5.9 Hz，H-6′），3.11（1H，dd，J＝8.8，4.6 Hz，H-3′），3.06（1H，dd，J＝7.9，5.9 Hz，H-5′），3.01（1H，td，J＝9.1，5.1 Hz，H-4′），2.89（1H，td，J＝8.5，4.8 Hz，H-2′），2.36（1H，m，H-4），2.12（1H，m，H-4），1.96（1H，m，H-7），1.36（1H，m，H-7），1.93（1H，m，H-12），1.15（1H，m，H-12），1.91（1H，m，H-2），1.48（1H，m，H-2），1.81（2H，m，H-16），1.77（1H，m，H-1），1.01（1H，m，H-1），1.62（1H，m，H-25），1.54（1H，m，H-15），1.02（1H，m，H-15），1.48（1H，m，H-11），1.41（1H，m，H-11），1.37（1H，d，J＝4.6 Hz，H-8），1.33（1H，m，H-20），1.28（1H，m，H-28），1.22（1H，m，H-28），1.25（1H，m，H-22），1.15（2H，m，H-23），1.02（1H，m，H-22），1.07（1H，dd，J＝17.7，7.9 Hz，H-17），0.98（1H，m，H-14），0.95（3H，s，H-19），0.92（1H，m，H-24），0.90（3H，d，J＝6.5 Hz，H-21），0.86（1H，m，H-9），0.82（3H，t，J＝7.1 Hz，H-29），0.82（3H，t，J＝7.1 Hz，H-27），0.79（3H，d，J＝6.8 Hz，H-26），0.65（3H，s，H-18）；13C-NMR（150 MHz，DMSOd6）δ：141.7（C-5），122.5（C-6），102.0（C-1′），78.2（C-3），78.0（C-3′），74.7（C-5′），73.5（C-2′），71.4（C-4′），62.4（C-6′），57.6（C-14），55.8（C-17），51.2（C-9），46.4（C-24），43.1（C-13），40.5（C-12），39.6（C-4），38.1（C-1），37.5（C-10），36.8（C-20），34.6（C-22），32.7（C-8），32.6（C-7），30.5（C-2），30.0（C-25），29.1（C-16），26.7（C-23），25.1（C-15），23.9（C-28），21.9（C-11），21.0（C-27），20.4（C-19），20.2（C-26），19.9（C-21），13.1（C-29），13.0（C-18）。以上數(shù)據(jù)與文獻［11］基本一致，故鑒定為胡蘿卜苷。

化合物6：白色粉末，分子式C14H12O3。ESIMSm/z：229.079 4［M+H］+。1H-NMR（600 MHz，Methanol-d4）δ：7.35（2H，d，J＝8.6 Hz，H-2′，6′），6.96（1H，d，J＝16.2 Hz，H-a），6.80（1H，d，J＝16.2 Hz，H-b），6.77（2H，d，J＝8.6 Hz，H-3′，5′），6.45（2H，d，J＝2.2 Hz，H-2，6），6.16（1H，t，J＝2.2 Hz，H-4）；13C-NMR（150 MHz，Methanol-d4）δ：158.3（C-3，C-5），157（C-4′），139.9（C-1），129.0（C-1′），128.0（C-a），127.4（C-2′，6′），125.6（C-b），115.1（C-3′，5′），104.4（C-2，C-6），101.2（C-4）。以上數(shù)據(jù)與文獻［12］基本一致，故鑒定為白藜蘆醇。

化合物7：無色透明晶體，分子式C13H18O6。ESI-MSm/z：269.102 1［M-H］-。1H-NMR（600 MHz，Methanol-d4），顯示分子中存在1 個苯環(huán)的結(jié)構(gòu)δ：7.43（3H，d，J＝8.8 Hz，H-3，H-5，H-7），7.34（1H，t，J＝7.4 Hz，H-6），7.28（1H，t，J＝7.3 Hz，H-4），4.94（1H，d，J＝11.8 Hz，H-1a），4.68（1H，d，J＝11.8 Hz，H-1b），4.36（1H，d，J＝7.8 Hz，H-1′），3.91（1H，dd，J＝11.9，2.2 Hz，H-6′a），3.70（1H，dd，J＝11.9，5.7 Hz，H-6′ b），3.35（1H，m，H-3′），3.32（1H，d，J＝1.7 Hz，H-5′），3.31（1H，d，J＝1.7 Hz，H-4′），3.27（1H，m，H-2′）；13C-NMR（150 MHz，Methanol-d4）δ：137.7（C-2），127.9（C-3，C-7），127.8（C-4，C-6），127.3（C-5），101.9（C-1′），76.7（C-5′），76.6（C-3′），73.7（C-2′），70.3（C-4′），70.3（C-1），61.4（C-6′）。以上數(shù)據(jù)與文獻［13］基本一致，故鑒定為苯甲醇-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物8：淡黃色粉末，分子式C8H10O。1HNMR（600 MHz，Methanol-d4），顯示分子中存在1個對位取代苯環(huán)的結(jié)構(gòu)δ：7.12（2H，d，J＝8.8 Hz，H-3，5），6.86（2H，d，J＝8.8，H-2，6），3.38（3H，s，-OCH3），1.61（3H，s，H-7）；13CNMR（150 MHz，Methanol-d4）δ：156.8（C-1），143.3（C-4），127.4（C-3，C-5），113.6（C-2，C-6），58.0（-OCH3），30.1（C-7）。以上數(shù)據(jù)與文獻［14］基本一致，故鑒定為對甲氧基甲苯。

化合物9：白色粉末，分子式C16H30O8。ESIMSm/z：367.152 3［M+OH］-。1H-NMR（600 MHz，Methanol-d4）δ：5.09（2H，d，J＝9.9 Hz，H-1′），4.42（1H，m，H-2），4.35（2H，d，J＝7.8 Hz，H-6′），4.31（1H，dd，J＝7.8，3.8 Hz，H-3′），4.24（1H，t，J＝8.1 Hz，H-4′），3.89（1H，m，H-2′），3.81（1H，m，H-5′），2.55（1H，m，H-3），2.34（1H，m，H-3），2.44（1H，dtd，J＝13.1，H-4），2.09（2H，m，H-6），1.97（2H，m，H-5），1.29（3H，s，H-7），1.19（3H，s，H-9），1.11（3H，s，H-10）；13C-NMR（150 MHz，Methanol-d4）δ：101.5（C-1′），78.2（C-3′），77.9（C-1），76.2（C-5′），75.2（C-2′），75.0（C-2），73.5（C-4′），71.8（C-8），62.9（C-6′），35.2（C-4），32.3（C-6），29.1（C-3），28.9（C-9），26.8（C-10），24.8（C-7），22.8（C-5）。以上數(shù)據(jù)與文獻［15］基本一致，故鑒定為（1R，2R，4S）-p-menthane-1，2，8-triol 1-O-β-D-glucopyranoside。

化合物10：白色粉末，分子式C21H20O11。ESI-MSm/z：449.109 1［M+H］+。1H-NMR（600 MHz，Methanol-d4），顯示分子中存在2 個苯環(huán)的結(jié)構(gòu)，其中1 個苯環(huán)為對位取代δ：7.93（2H，d，J＝7.9 Hz，H-2′，6′），7.08（1H，d，J＝2 Hz，H-7），6.83（2H，d，J＝7.9 Hz，H-3′，5′），5.03（1H，d，J＝10.4 Hz，H-10b），4.90（1H，d，J＝12.5 Hz，H-11β），4.37（1H，dd，J＝12.5，7.2 Hz，H-11α），4.10（1H，t，J＝9.9 Hz，H-4a），3.97（1H，m，H-2），3.88（3H，s，9-OCH3），3.85（1H，t，J＝9.1 Hz，H-4），3.54（1H，t，J＝9.2 Hz，H-3）；13C-NMR（150 MHz，Methanol-d4）δ：166.5（C-7′），164.3（C-6），162.7（C-8），151.1（C-10），147.9（C-9），140.9（C-4′），131.6（C-2′，C-6′），120.2（C-1′），118.0（C-6a），115.5（C-10a），114.9（C-3′，C-5′），109.8（C-7），79.9（C-4a），79.3（C-2），74.1（C-4），73.0（C-10b），70.6（C-3），63.4（C-11），59.5（9-OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻［16］基本一致，故鑒定為bergenin 11-O-p-hydroxybenzoate。

化合物11：白色粉末，分子式C22H22O13。ESI-MSm/z：495.113 4［M+H］+。1H-NMR（600 MHz，Methanol-d4），顯示分子中存在2 個苯環(huán)的結(jié)構(gòu)δ：7.05（2H，s，H-2′，6′），7.04（1H，m，H-7），4.96（1H，d，J＝10.5 Hz，H-10b），4.82（1H，dd，J＝12.2，2.2 Hz，H-11β），4.36（1H，dd，J＝12.2，6.8 Hz，H-11α），3.92（1H，ddd，J＝9.9，6.8 Hz，H-2），3.85（3H，s，4′-OCH3），3.82（3H，s，9-OCH3），3.52（1H，dd，J＝10.0，8.6 Hz，H-4），3.27（1H，p，J＝1.7 Hz，H-3）；13C-NMR（150 MHz，Methanol-d4）δ：166.3（C-7′），164.3（C-6），150.9（C-8），150.4（C-3′，C-5′），147.8（C-10），140.9（C-9），140.0（C-4′），124.7（C-1′），118.0（C-6a），115.5（C-10a），109.9（C-7），109.0（C-2′，C-6′），79.8（C-4a），79.2（C-2），74.0（C-4），73.0（C-10b），70.4（C-3），63.6（C-11），59.6（4′-OCH3），59.4（9-OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻［17］基本一致，故鑒定為11-O-（4′-O-methylgalloyl）-bergenin。

4 討論

本研究從血三七正丁醇部位中分離得到11 個化合物，化合物6～11 均為首次從該植物中分離出來，在血三七正丁醇部位分離的化合物中，化合物9～11 極性偏大，在分離上有一定難度，因此在分離過程中，為了避免損失，減少使用正相硅膠柱，多采用凝膠柱及反相色譜柱。

根據(jù)文獻報道化合物11 具有抗血小板的活性［18］；同時，該化合物可以通過抗氧化、抗炎的機制，對類風濕性關節(jié)炎有較好的治療作用［19］；對丙型肝炎絲氨酸蛋白酶具有抑制活性［20］；文獻報道化合物10 具有顯著的抗氧化作用，并且與尿素酶抑制作用有關［21］；但是化合物9 無相關生物活性的報道，有待進一步探索。