脾氣虛證與神經(jīng)內(nèi)分泌相關(guān)的生化指標(biāo)的關(guān)聯(lián)性研究概述

南夢(mèng)蝶 程諾 賀倩 劉遠(yuǎn)歐 劉玥蕓

脾氣虛證是由于脾氣虛弱，脾失健運(yùn)而出現(xiàn)的以食少、腹脹、大便溏薄、神疲、肢體倦怠、舌淡脈弱等為常見(jiàn)癥的證候[1]。脾氣虛證常見(jiàn)于泄瀉、胃脘痛、水腫、痰飲、痿證、小兒疳積，以及西醫(yī)的慢性胃腸炎、慢性腎炎、慢性支氣管炎、支氣管哮喘等疾病，在不同疾病中有不同表現(xiàn)。近年來(lái)，大量研究表明脾氣虛證會(huì)引起多系統(tǒng)多指標(biāo)的改變，包括腦腸肽、神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫網(wǎng)絡(luò)指標(biāo)、能量代謝指標(biāo)，以及酶學(xué)改變、腸道菌群紊亂等[2-4]。本文在通過(guò)中國(guó)知網(wǎng)(CNKI)檢索對(duì)脾氣虛證神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)指標(biāo)方面進(jìn)行研究的實(shí)驗(yàn)類(lèi)文獻(xiàn)，比較與分析研究現(xiàn)況，并展望今后研究趨勢(shì)。

1 腦腸肽在脾氣虛證狀態(tài)下有明顯變化

胃腸激素是胃腸道(包括胰腺)中的內(nèi)分泌細(xì)胞分泌的特殊化學(xué)物質(zhì)，作為神經(jīng)內(nèi)分泌免疫網(wǎng)絡(luò)中的一部分，與其他成分如細(xì)胞因子、化學(xué)遞質(zhì)等共同發(fā)揮作用，影響著胃腸道的運(yùn)動(dòng)，維持著機(jī)體正常的生理功能。胃腸激素中，既存在于胃腸道又存在于腦中，被稱(chēng)為腦腸肽，胃泌素(gastrin，GAS)、胃動(dòng)素(motilin，MOT/MTL)、膽囊收縮素(cholecystokinin,CCK)、P物質(zhì)(substance P,SP)、生長(zhǎng)抑素(somatostatin,SS)、神經(jīng)降壓素等均屬腦腸肽，腦腸肽在腦中由神經(jīng)細(xì)胞合成，沿神經(jīng)纖維傳遞到神經(jīng)末梢釋放，調(diào)節(jié)神經(jīng)支配的細(xì)胞活動(dòng)。對(duì)胃腸運(yùn)動(dòng)起促進(jìn)作用的有GAS、MOT/MTL等，抑制胃腸運(yùn)動(dòng)的有生長(zhǎng)抑素、血管活性腸肽、CCK。研究發(fā)現(xiàn)，脾失健運(yùn)與腦腸肽分泌水平紊亂密切相關(guān)。探討脾氣虛證與腦腸肽的關(guān)系，對(duì)深入認(rèn)識(shí)脾氣虛證本質(zhì)，尋找脾虛失健運(yùn)的特異性、客觀性的定量性指標(biāo)具有重要的理論和實(shí)際意義。

現(xiàn)有脾氣虛證研究涉及的腦腸肽有GAS、MOT/MTL、β-EP、SS、血漿降鈣素基因相關(guān)肽(caleitonin gene related peptide,CGRP)、神經(jīng)肽Y(neuropeptide Y,NPY)、SP和生長(zhǎng)素等。

1.1 GAS、MOT/MTL、生長(zhǎng)素在脾氣虛證狀態(tài)下減少

魏彥明等[5]測(cè)得脾氣虛模型家兔血清GAS顯著降低。溫慶祥等[6]、劉鉞等[7]對(duì)脾氣虛型功能性消化不良患者采用手法、隔藥灸治療后血清GAS明顯高于治療前，反向說(shuō)明了脾氣虛狀態(tài)下GAS降低。多數(shù)動(dòng)物模型研究[8-12]與此有類(lèi)似結(jié)果。而研究結(jié)果與之相反的有：王小榮[13]、呂凌[14]得到脾氣虛大鼠模型GAS反而顯著升高。王洪海[15]研究結(jié)果表明GAS變化隨時(shí)間波動(dòng)：脾氣虛證大鼠GAS第三周下降、第四周上升。呂琳等[16-17]、李楷[18]研究結(jié)果表明GAS變化因樣本不同而不同：脾氣虛證大鼠模型GAS在血清中含量降低，在下丘腦、胃、小腸中含量升高。

部分實(shí)驗(yàn)研究年代已較久[5-8,11-15]，所應(yīng)用的檢測(cè)手段如放射免疫分析(radioimmunoassay，RIA)及其精準(zhǔn)度也與近來(lái)研究[16-18]所用酶聯(lián)免疫吸附法(enzyme-linked immuno sorbent assay，ELISA)、免疫組化法等存在一定差異，且GAS在體內(nèi)各組織中有不同活性形式，檢測(cè)時(shí)注意到不同亞類(lèi)需要用到各自的抗體才能得到對(duì)于在脾氣虛證狀態(tài)下GAS含量變化趨勢(shì)更具價(jià)值的結(jié)論。

多數(shù)研究表明，MOT在脾氣虛證患者血清中出現(xiàn)下降趨勢(shì)[6,7,19]，部分動(dòng)物脾氣虛證模型研究[8-9,11-12,20]結(jié)果與此相似。劉凱[21]研究還發(fā)現(xiàn)脾氣虛證模型大鼠離體胃竇平滑肌對(duì)MTL引起的收縮反應(yīng)敏感下降，下丘腦中MTL含量也有下降。王洪海[15]研究結(jié)果表明MTL變化隨時(shí)間波動(dòng)：脾氣虛證大鼠MTL第三周下降、第四周上升。然而，也有研究表明MOT在脾氣虛狀態(tài)下出現(xiàn)上升趨勢(shì)。陳銳[10]、趙鋒[22]采用利血平注射液腹腔注射14天建立脾虛家兔模型，RIA法檢測(cè)血清MOT，造模后與對(duì)照組相比，MOT明顯上升，穴位埋線(xiàn)、捏脊治療或四君子湯治療后恢復(fù)到原來(lái)水平。

與GAS類(lèi)似，MOT在調(diào)節(jié)胃腸道功能方面有正面的調(diào)節(jié)作用，較多研究[6-12,15]兼具兩者變化含量的檢測(cè)，故在研究檢測(cè)手段上均存在不一致性的局限性。值得一提的是，個(gè)別研究[21]不僅報(bào)告了脾氣虛狀態(tài)下MOT的含量變化，還對(duì)于脾氣虛狀態(tài)下靶器官對(duì)其敏感程度的降低也進(jìn)行了分析。

脾氣虛證狀態(tài)下，中樞神經(jīng)系統(tǒng)通過(guò)腦腸神經(jīng)影響腦腸肽的分泌合成[23-27]，一些研究表明脾氣虛證動(dòng)物模型的下丘腦和胃腸道組織中生長(zhǎng)素含量下降[25-27]，其受體表達(dá)也有下調(diào)[26]。而楊可新[28]的研究提示脾氣虛證大鼠模型的血漿生長(zhǎng)素含量反而明顯升高。

同上，個(gè)別研究[28]在造模方式上的明顯不同可能對(duì)生長(zhǎng)素含量帶來(lái)不同影響，雖然同屬脾氣虛證動(dòng)物模型，但也不除外疾病模型(慢性腎衰模型)因素對(duì)證型研究結(jié)果的干擾。

1.2 SS、CCK在脾氣虛證狀態(tài)下增加

張航向[19]RIA法檢測(cè)脾氣虛證患者血漿及胃竇SS含量明顯高于胃熱證、肝火上炎證患者。陳天娥等[29]用免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)到脾虛證胃潰瘍模型的胃黏膜中SS陽(yáng)性細(xì)胞分泌活性增強(qiáng)。多數(shù)動(dòng)物模型研究[8,11-12,30]均表明脾氣虛狀態(tài)下，血或腸道組織中SS含量上升。呂琳等[16]研究表明SS的變化具有組織差異性，脾氣虛模型組垂體、血、胃、腸組織中的SS含量明顯高于對(duì)照組，而下丘腦低于對(duì)照組。陳旻丹[27]研究亦發(fā)現(xiàn)結(jié)腸平滑肌SS表達(dá)降低，而下丘腦神經(jīng)細(xì)胞中SS表達(dá)無(wú)明顯差異。然而，楊可新[28]研究結(jié)果提示脾氣虛狀態(tài)下SS含量可能出現(xiàn)下降。

大部分文獻(xiàn)的方法學(xué)優(yōu)勢(shì)及局限性同前。張航向[19]將脾氣虛證與其他證型患者對(duì)比而非與健康對(duì)照對(duì)比，難以明確SS的增加是否為脾氣虛證狀態(tài)下會(huì)出現(xiàn)的特異性改變。

多數(shù)研究表明脾氣虛狀態(tài)下，組織中CCK含量上升。脾氣虛組患者血漿和胃竇CCK明顯高于胃熱組[19]，脾虛證模型大鼠下丘腦及結(jié)腸粘膜中CCK-8含量高于正常組[30]。與此類(lèi)似，多數(shù)動(dòng)物模型研究[23,26,31]表明在下丘腦、胃腸道、血清中CCK含量升高。而陳旻丹[27]研究表明CCK表達(dá)可能下降。但劉芳等[32]研究表明CCK隨時(shí)間推移而先上升后下降。

關(guān)于CCK的研究結(jié)論相對(duì)較新，來(lái)源包括臨床研究和實(shí)驗(yàn)研究，故可以推測(cè)脾氣虛證狀態(tài)下，CCK在一定時(shí)間內(nèi)各組織中均表現(xiàn)下降趨勢(shì)。

1.3 β-EP、VIP、SP在脾氣虛證狀態(tài)下變化不一

研究結(jié)果表明，β-EP變化因樣本不同而不同：呂琳等[16-17]用耗氣破氣中藥灌胃加饑飽失常法建立脾氣虛證大鼠模型，模型組β-EP在下丘腦、垂體、血漿中含量降低，在胃、小腸中含量升高。多數(shù)動(dòng)物模型研究[8,18,23]與此有類(lèi)似結(jié)果。而在魏彥明等[24]對(duì)脾氣虛雄性大鼠模型的研究中，血漿β-EP極顯著升高，四君子湯治療后恢復(fù)。

應(yīng)指出的是，部分文獻(xiàn)[16-17]均來(lái)源于同一研究團(tuán)隊(duì)時(shí)，研究結(jié)果一致性并不能完全代表可重復(fù)性。個(gè)別研究[24]有明顯不同的研究結(jié)果，但不除外其應(yīng)用的造模方式(利血平注射法)與其余研究均有較大差異(耗氣中藥灌胃法、饑飽失常法等)可能造成干擾。

陳天娥等[29]用免疫組織化學(xué)染色得到，脾氣虛證胃潰瘍動(dòng)物模型的下丘腦、大腦皮層和海馬等部位VIP陽(yáng)性神經(jīng)元分泌活性增強(qiáng)。陳倩[33]對(duì)脾氣虛患者的得出的回顧性結(jié)論表明脾氣虛狀態(tài)下血VIP升高。部分脾氣虛證動(dòng)物模型研究表明[11-12,23,26]，下丘腦、胃腸道、血清中VIP含量升高。與此相反，劉凱[21]研究表明，脾氣虛模型大鼠離體胃竇平滑肌對(duì)VIP的舒張作用反應(yīng)敏感性下降，且平滑肌中VIP含量明顯降低。部分研究[27,31]得到與此類(lèi)似的結(jié)論。

通過(guò)總結(jié)以上研究，難以得出與其他抑制性腦腸肽類(lèi)似的結(jié)論，即VIP在脾氣虛狀態(tài)下呈增高趨勢(shì)。通常認(rèn)為，回顧性研究所提供結(jié)論的可信度一般。其余實(shí)驗(yàn)類(lèi)文獻(xiàn)的造模方法類(lèi)似，檢測(cè)手段明確，取材組織類(lèi)似，而結(jié)論不一，可見(jiàn)VIP在脾氣虛證狀態(tài)下會(huì)出現(xiàn)一定變化，但其表達(dá)及作用效應(yīng)是否會(huì)與其他調(diào)節(jié)因子發(fā)生相互作用尚待進(jìn)一步明確。

不同研究表明，脾氣虛證狀態(tài)下SP含量可有不同的變化。陳倩[33]對(duì)脾氣虛型腸易激綜合征患者采用隔藥灸法，治療后血清SP均明顯下降。陳天娥等[29]研究提示亦其含量增加(脾氣虛證胃潰瘍模型中SP陽(yáng)性細(xì)胞分泌活性增強(qiáng))。而陳旻丹[27]研究提示其在不同組織內(nèi)的變化趨勢(shì)不同，功能性腹瀉脾氣虛證大鼠模型結(jié)腸平滑肌細(xì)胞SP表達(dá)顯著減少，下丘腦神經(jīng)細(xì)胞SP表達(dá)顯著增加。而其他研究如馮曉帆等[34](下丘腦和海馬)、李楷[18](海馬及小腸組織)均檢測(cè)到SP顯著減少。

大部分文獻(xiàn)的方法學(xué)優(yōu)勢(shì)及局限性同前。脾氣虛證狀態(tài)下SP含量在各組織中的變化以及與其他調(diào)節(jié)因素的相互作用尚待進(jìn)一步明確。

1.4 CGRP、NPY、5-羥色胺(5-hydroxytryptamine, 5-HT)、促胰液素(secretin, Sec)、亮氨酸-腦啡肽(leucine-encephalin, L-EK)在脾氣虛證狀態(tài)下的變化有待研究

魏彥明等[24]用RIA法檢測(cè)到脾氣虛大鼠的CGRP升高、NPY降低。龍奕文[25]的研究也發(fā)現(xiàn)脾氣虛證模型大鼠的血NPY的含量下降。陳旻丹[27]檢測(cè)功能性腹瀉脾虛證大鼠結(jié)腸平滑肌和下丘腦神經(jīng)細(xì)胞中CGRP含量及表達(dá)mRNA的含量，分析得到CGRP的表達(dá)在結(jié)腸平滑肌細(xì)胞中降低，在下丘腦神經(jīng)細(xì)胞中升高。陳倩[33]在脾氣虛型腸易激綜合征患者采用隔藥灸法治療后，檢測(cè)到血清5-HT明顯下降。李楷[18]用ELISA法檢測(cè)到脾氣虛大鼠模型海馬及小腸Sec含量顯著降低。李剛[35]用RIA法檢測(cè)脾氣虛證大鼠模型L-EK含量，血清L-EK顯著降低，額葉皮質(zhì)、下丘腦、垂體L-EK水平顯著升高。

總結(jié)以上對(duì)脾氣虛證狀態(tài)下腦腸肽的研究可以發(fā)現(xiàn)，不同研究中腦腸肽受到脾氣虛證影響而發(fā)生的變化并不一致，甚至相互矛盾，難以?xún)H通過(guò)文獻(xiàn)學(xué)習(xí)而確定脾氣虛證特異性的腦腸肽改變。究其原因可能：一是脾氣虛證狀態(tài)下，為糾正胃腸道功能狀態(tài)，各種腦腸肽均有波動(dòng)，組織性質(zhì)(神經(jīng)系統(tǒng)組織、胃腸組織、血液樣本)不同、時(shí)相(脾氣虛證出現(xiàn)時(shí)間、生物鐘)不同、腦腸肽之間協(xié)同拮抗關(guān)系復(fù)雜，但卻少有研究相互比較各種胃腸道對(duì)腸胃功能調(diào)節(jié)的作用差異；二是從檢測(cè)手段方面考慮，僅一類(lèi)腦腸肽下就有多種分子形式，不同分子形式如果僅用一種抗體來(lái)檢測(cè)，不論用RIA、免疫組化還是ELISA等檢測(cè)方法，其結(jié)果不夠嚴(yán)密。

2 神經(jīng)調(diào)節(jié)相關(guān)指標(biāo)在脾氣虛證狀態(tài)下有不同程度改變

神經(jīng)調(diào)節(jié)是在神經(jīng)系統(tǒng)的直接參與下所實(shí)現(xiàn)的生理功能調(diào)節(jié)過(guò)程，是人體最重要的調(diào)節(jié)方式。脾氣虛證以食少、腹脹、大便溏薄、神疲、肢體倦怠為主要特點(diǎn)，尤其以胃腸道表現(xiàn)為突出，胃腸道由中樞神經(jīng)系統(tǒng)、腸神經(jīng)系統(tǒng)和自主神經(jīng)系統(tǒng)共同支配，神經(jīng)系統(tǒng)調(diào)節(jié)紊亂，因而在一系列指標(biāo)上出現(xiàn)相應(yīng)改變，如神經(jīng)細(xì)胞成分、神經(jīng)遞質(zhì)等。

2.1 自主神經(jīng)系統(tǒng)功能在脾氣虛證狀態(tài)下出現(xiàn)明顯紊亂

探究脾氣虛證在自主神經(jīng)系統(tǒng)方面影響的研究常以乙酰膽堿(acetylcholine,Ach)或膽堿酶(acetylcholinesterase,AchE)、環(huán)磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate,cAMP)和環(huán)磷酸鳥(niǎo)苷(cyclic guanosine monophosphate,cGMP)等為研究?jī)?nèi)容。魏彥明等[5]用間苯三酚顯色法測(cè)得脾氣虛證家兔血清AchE升高。祝淑貞[36]檢測(cè)脾氣虛證患者的血清AchE活性低于正常水平。脾氣虛證動(dòng)物模型血漿cAMP含量升高、血漿cGMP無(wú)明顯變化、cAMP/cGMP比值升高[37-38]。張廣霞[8]測(cè)得脾氣虛模型組血清Ach降低、cAMP降低、cGMP升高、AchE升高，ELISA法測(cè)得骨骼肌乙酰膽堿受體M2受體降低。神經(jīng)遞質(zhì)(如Ach)可以通過(guò)激活G蛋白、激活腺苷酸環(huán)化酶(adenylate cyclase, AC)、催化ATP轉(zhuǎn)化成cAMP，cAMP進(jìn)一步激活蛋白激酶(proteinkinase A, PKA)，引起級(jí)聯(lián)反應(yīng)或陽(yáng)離子通道的開(kāi)放。

脾氣虛狀態(tài)引起Ach降低、cAMP/cGMP比值升高，這表明脾氣虛模型植物性神經(jīng)功能的異常，即交感神經(jīng)功能低下和副交感神經(jīng)功能偏亢，故產(chǎn)生涎多、腹痛、便溏等表現(xiàn)。但是cAMP/cGMP比值升高在脾氣虛證動(dòng)物模型研究中并不統(tǒng)一。自主神經(jīng)功能紊亂可影響胃腸平滑肌[5]、骨骼肌功能、體溫調(diào)節(jié)[8]，可使機(jī)體表現(xiàn)出腸鳴腹瀉、乏力倦怠等脾氣虛證常有表現(xiàn)，目前還未見(jiàn)對(duì)于脾氣虛證狀態(tài)如何影響自主神經(jīng)功能紊亂進(jìn)而引起Ach、cAMP、cGMP水平變化的深入研究。

2.2 中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能在脾氣虛證狀態(tài)下出現(xiàn)不同程度紊亂

脾氣虛證對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)的邊緣系統(tǒng)如海馬、側(cè)腦室以及下丘腦有一定影響，現(xiàn)僅有關(guān)于蛋白激酶C(proteinkinase,PKC)、去甲腎上腺素(norepinephrine,NE)、5-羥基吲哚乙酸(5-hydroxyindole acetic acid,5-HIAA)、高香草酸(homovanillic acid,HVA)、3,4-二羥基苯乙酸(3,4-dihydroxy-phenyl aceticacid,3,4-DOPAC)、多巴胺(dopamine, DA)和堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(basic fibroblast growth factor, bFGF)cAMP效應(yīng)元件結(jié)合蛋白(cAMP response element binding protein, CREB)等的研究。王淑娟[39]采用改良Takai法檢測(cè)到脾氣虛大鼠模型海馬組織的膜PKC活性升高、胞漿PKC活性明顯降低，衰老大鼠更明顯。王洪海[15]發(fā)現(xiàn)脾氣虛證模型組大鼠海馬的各項(xiàng)單胺類(lèi)神經(jīng)遞質(zhì)如5-HT、NE、5-HIAA和HVA建模3周時(shí)明顯降低，3,4-DOPAC逐漸下降，而DA水平明顯升高，且與大鼠嗜睡、倦怠、少動(dòng)的行為表現(xiàn)相關(guān)。卓緣圓[40]觀察到脾氣虛證大鼠側(cè)腦室下區(qū)、海馬齒狀回區(qū)被溴脫氧尿苷標(biāo)記的神經(jīng)干細(xì)胞受損，檢測(cè)到兩個(gè)腦區(qū)bFGF的表達(dá)增加。李楷[18]測(cè)得脾氣虛大鼠的海馬及小腸組織cAMP/PKA-CREB信號(hào)通路中cAMP、PKA的CREB的相對(duì)表達(dá)量降低。脾氣虛大鼠下丘腦葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)體1、葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)體3表達(dá)水平下降，與下丘腦、胃、空腸中的β-EP、CCK、VIP表達(dá)水平異常有相關(guān)性[23]。

多數(shù)文章來(lái)源于新近研究，且利用免疫組化標(biāo)記的切片觀察或組織勻漿研究相關(guān)指標(biāo)改變，檢測(cè)方法明確，造模手段成熟。但每項(xiàng)指標(biāo)的同類(lèi)研究較少，個(gè)別研究[15,18,23]同時(shí)對(duì)脾氣虛證狀態(tài)下腦腸肽的變化進(jìn)行研究，并認(rèn)為各信號(hào)通路的改變與腦腸肽變化存在相關(guān)性，但其變量過(guò)多，故結(jié)論的參考價(jià)值有待商榷。

2.3 腸神經(jīng)系統(tǒng)功能在脾氣虛證狀態(tài)下明顯受損

劉凱[21]、丁伯龍[41]使用免疫組化法檢測(cè)到脾氣虛證模型大鼠胃腸各部位的神經(jīng)型一氧化氮合酶增加，提示一氧化氮(nitric oxide, NO)的抑制作用增強(qiáng)。消化道的Cajal間質(zhì)細(xì)胞(interstitial cells of Cajal，ICC)是腸道慢波的起搏細(xì)胞，與腸神經(jīng)系統(tǒng)末梢和平滑肌細(xì)胞構(gòu)成胃腸運(yùn)動(dòng)的基本功能單位。丁伯龍[41]觀察到脾氣虛大鼠模型幽門(mén)、降結(jié)腸組織中神經(jīng)纖維數(shù)量明顯降低，腸神經(jīng)-ICC之間信號(hào)通路損傷，Ach、SP、VIP、NO、蛋白基因產(chǎn)物9.5和神經(jīng)纖維數(shù)量明顯降低，提示腸肽分泌及腸神經(jīng)功能均降低。趙璠[42]通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)脾氣虛大鼠小腸組織M2受體表達(dá)增多、控制平滑肌收縮的M3受體表達(dá)下降，抑制M2受體介導(dǎo)的陽(yáng)離子內(nèi)流，使小腸平滑肌收縮幅度變小，從而引起小腸運(yùn)動(dòng)減慢。宋囡等[43]測(cè)得脾氣虛證大鼠胃組織cAMP-PKA-CREB途徑整體均有下調(diào)。而中藥健胃合劑[44]能通過(guò)增加乙酰膽堿轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白、乙酰膽堿受體M1加快胃腸運(yùn)動(dòng)。

3 下丘腦-腺垂體系統(tǒng)在脾氣虛證狀態(tài)下出現(xiàn)功能紊亂

下丘腦-腺垂體系統(tǒng)通過(guò)神經(jīng)-體液性聯(lián)系，即下丘腦促垂體區(qū)的肽能神經(jīng)元通過(guò)所分泌的肽類(lèi)神經(jīng)激素(釋放激素和釋放抑制激素)，經(jīng)垂體門(mén)脈系統(tǒng)轉(zhuǎn)運(yùn)到腺垂體，調(diào)節(jié)相應(yīng)的腺垂體激素的分泌，進(jìn)而影響靶器官(性腺、腎上腺、甲狀腺)的功能。

脾氣虛狀態(tài)下，下丘腦-垂體-性腺軸功能紊亂，現(xiàn)有研究對(duì)血清孕激素(progesterone，P)、雌二醇(estradiol，E2)、睪酮(testosterone，T)含量變化的研究結(jié)果不一致。黃雪琪[45]脾不統(tǒng)血證雌性大鼠模型E2下降，P升高。李志強(qiáng)等[46]的脾氣虛雄性大鼠血清E2上升、T下降。王立峰[37](脾氣虛雄性大鼠)、馬媛媛[38]檢測(cè)到血清E2、T均升高。王昕等[47]檢測(cè)到脾氣虛雄性大鼠血清E2、T下降。由此可以認(rèn)為脾氣虛證會(huì)導(dǎo)致丘腦-垂體-性腺軸功能紊亂，但是考慮到性激素的周期性變化，無(wú)法確定性激素調(diào)節(jié)紊亂與脾氣虛證單一因素有關(guān)。

現(xiàn)有的脾氣虛證動(dòng)物模型研究[15,37,48]的結(jié)果表明，促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素、促腎上腺皮質(zhì)激素和皮質(zhì)醇濃度均有不同程度降低，下丘腦-垂體-腎上腺軸功能減弱。

下丘腦-垂體-甲狀腺軸相關(guān)方面研究較早就集中出現(xiàn)。大量重復(fù)類(lèi)型的實(shí)驗(yàn)研究促甲狀腺素釋放激素(thyrotropin releasing hormone, TRH)、促甲狀腺激素(thyroid stimulating hormone, TSH)、三碘甲腺原氨酸、四碘甲腺原氨酸等指標(biāo)的結(jié)果提示，脾虛狀態(tài)下甲狀腺功能降低[8,15,37-38,46, 49-50]。而甲狀腺功能低下又會(huì)進(jìn)一步導(dǎo)致胸腺[51]、淋巴細(xì)胞等免疫器官和細(xì)胞的變化。脾氣虛證動(dòng)物模型研究[35]提示L-EK可在中樞神經(jīng)系統(tǒng)胺類(lèi)遞質(zhì)介導(dǎo)下，減少TRH、TSH釋放。

4 水鹽代謝相關(guān)激素及受體在脾氣虛證狀態(tài)下表達(dá)改變

脾主運(yùn)化水濕，對(duì)其現(xiàn)代生物基礎(chǔ)的研究則著眼于抗利尿激素(antidiuretic hormone，ADH)和醛固酮(aldosterone，ALD)及其作用靶點(diǎn)，如水通道蛋白(aquaporin, AQP)等。張廣霞[8]RIA法檢測(cè)到脾氣虛大鼠模型血清ADH、ALD升高，ELISA法測(cè)定小腸及降結(jié)腸的AQP3降低、腎臟的AQP2含量升高。崔永霞[20]用免疫組化法測(cè)定回腸中AQP4，脾氣虛證大鼠模型回腸AQP4表達(dá)明顯減少，十二指腸中胃蛋白酶明顯減少。AQP4在結(jié)腸表達(dá)最豐富，小鼠剔除相關(guān)基因后，結(jié)腸水通透性下降，糞便含水量增加[52]。水鹽代謝和水轉(zhuǎn)運(yùn)方面的調(diào)節(jié)異常，在水液調(diào)節(jié)方面為脾主運(yùn)化水液的中醫(yī)理論提供指標(biāo)依據(jù)。腸段AQP3低表達(dá)可引起結(jié)腸粘膜對(duì)水重吸收減少導(dǎo)致腹瀉便溏，符合脾虛不運(yùn)，水濕內(nèi)停的中醫(yī)證候病機(jī)。

5 其他指標(biāo)在脾氣虛證狀態(tài)下的改變有待研究

段永強(qiáng)[11]檢測(cè)脾氣虛證大鼠血清胰島素、空腹血糖水平明顯下降。姜曉琳[53]用ELISA法測(cè)得脾氣虛大鼠模型血清及心肌中腦鈉肽和cAMP含量均明顯升高，用PCR檢測(cè)到心肌細(xì)胞bFGF和PKA的表達(dá)水平明顯升高。有關(guān)胰島和心肌細(xì)胞在脾氣虛證狀態(tài)下的分泌功能的臨床研究較為孤立，尚不足以確定有價(jià)值的結(jié)論。各項(xiàng)研究對(duì)于指標(biāo)變化與脾氣虛證表觀癥狀和體征的關(guān)聯(lián)性的分析水平仍停留在推測(cè)其作用機(jī)制(如抓握力減退與骨骼肌Ach受體數(shù)量[8]，單胺類(lèi)遞質(zhì)和倦怠少動(dòng)[15]，NO含量，Ach及受體與便溏[21]等)，缺乏統(tǒng)計(jì)學(xué)上確鑿的證據(jù)。

6 總結(jié)與展望

探究脾氣虛證對(duì)神經(jīng)-內(nèi)分泌系統(tǒng)影響的實(shí)驗(yàn)研究中，涉及腦腸肽的指標(biāo)占多數(shù)，其余指標(biāo)占比重較大的為中樞神經(jīng)系統(tǒng)指標(biāo)、下丘腦-垂體-腺體(性腺、甲狀腺、腎上腺)軸指標(biāo)和植物神經(jīng)功能指標(biāo)。部分實(shí)驗(yàn)將以上指標(biāo)進(jìn)行綜合研究后認(rèn)為，脾氣虛證狀態(tài)下神經(jīng)系統(tǒng)的遞質(zhì)[21]、受體及細(xì)胞通路[18,23,41]與腦腸肽或與其他激素[20,35]均有相互作用。此外，脾氣虛動(dòng)物模型各組織中酶學(xué)改變[11]、肌肉能量代謝相關(guān)信號(hào)通路[26]均與腦腸肽水平變化有關(guān)。可見(jiàn)，脾氣虛證狀態(tài)下，腦腸肽在各組織中的表達(dá)水平受到多方面因素影響而出現(xiàn)不同程度的改變，而且這種改變與其他神經(jīng)內(nèi)分泌調(diào)節(jié)的指標(biāo)的變化具有相互作用，這其中的某些改變可以解釋部分脾氣虛證常見(jiàn)的體征和癥狀表現(xiàn)。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究大部分造模方式大同小異，但部分研究模糊了脾氣虛證、脾陽(yáng)虛證甚至是脾腎兩虛證的區(qū)別，還有一些研究的造模方法的合理性有待考量，推測(cè)這些研究與大多數(shù)研究得出不同結(jié)論[10,22]的原因之一就在于造模方法的差異性。對(duì)照的設(shè)置上，大部分研究設(shè)置了空白對(duì)照組、各類(lèi)治療手段(健脾補(bǔ)氣藥物、灸法、電針、埋線(xiàn)、捏脊)組和(或)自然恢復(fù)組進(jìn)行對(duì)比相關(guān)指標(biāo)。大部分治療組均在某些指標(biāo)上相對(duì)于脾氣虛證模型組有恢復(fù)正常指標(biāo)的趨勢(shì)，可以定性推測(cè)指標(biāo)變化與脾氣虛證有一定的相關(guān)性，但由于干預(yù)措施的形式多樣，難以實(shí)現(xiàn)定量分析各指標(biāo)的特異性或敏感性。早期文獻(xiàn)未關(guān)注到脾氣虛證模型各指標(biāo)的水平變化具有時(shí)效性，后期的研究中還因此設(shè)置不同時(shí)間段檢測(cè)模型組別，部分指標(biāo)在造模后一定時(shí)間內(nèi)經(jīng)歷先異常后正常的變化趨勢(shì)，但指標(biāo)恢復(fù)正常趨勢(shì)開(kāi)始的時(shí)間并不一致，難以確定先異常后正常的機(jī)制是否與代償性或適應(yīng)性變化或其他未知因素相關(guān)。早期研究多單純對(duì)血樣或組織切片中有限個(gè)數(shù)的各物質(zhì)指標(biāo)含量變化進(jìn)行報(bào)道，現(xiàn)階段已有著眼于細(xì)胞信號(hào)通路、基因表達(dá)調(diào)節(jié)通路在脾氣虛證狀態(tài)下所發(fā)生改變而進(jìn)行的探索性研究。臨床研究數(shù)量較少，大部分臨床研究的方法學(xué)質(zhì)量較低，均為小樣本量單中心研究，從對(duì)照組設(shè)置方面，僅有個(gè)別研究與健康受試者進(jìn)行對(duì)比，或僅對(duì)脾氣虛證狀態(tài)下的指標(biāo)改變做回顧性分析，涉及的指標(biāo)集中而且亦較少，采集的數(shù)據(jù)有限，未與其他神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)指標(biāo)進(jìn)行多因素分析，臨床研究的設(shè)計(jì)方面亟待更健全的方案以揭示脾氣虛證的生物學(xué)基礎(chǔ)。此外，盡管存在少數(shù)實(shí)驗(yàn)類(lèi)研究會(huì)以不同方劑對(duì)于不同指標(biāo)及相關(guān)體征的影響為側(cè)重，但是大多數(shù)揭示針對(duì)脾氣虛證的癥狀和體征，如腹脹、便溏、神疲、乏力，還需要更多的研究探索出癥狀特異性的指標(biāo)及其變化方向。

以腦腸肽為主，神經(jīng)內(nèi)分泌調(diào)節(jié)相關(guān)的指標(biāo)在脾氣虛證狀態(tài)下存在表達(dá)水平的改變，這種改變受到多重因素的影響，而且這種影響相互交叉、相互滲透形成復(fù)雜的神經(jīng)內(nèi)分泌調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)系統(tǒng)，有待于學(xué)者們的進(jìn)一步深入嚴(yán)謹(jǐn)研究才能揭示。傳承數(shù)千年的中醫(yī)辨證論治思維體系具有多層次多途徑的特征，神經(jīng)內(nèi)分泌調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)的復(fù)雜機(jī)制與中醫(yī)的整體觀存在一致性，因此在調(diào)控神經(jīng)內(nèi)分泌的指標(biāo)表達(dá)水平的過(guò)程中發(fā)揮中醫(yī)藥優(yōu)勢(shì)、闡明中藥治療脾氣虛證的作用靶點(diǎn)和相關(guān)機(jī)制是值得關(guān)注的方向。以上內(nèi)容是基于神經(jīng)內(nèi)分泌調(diào)節(jié)相關(guān)指標(biāo)探討中醫(yī)藥治療脾氣虛證的實(shí)驗(yàn)研究和臨床研究綜述，相信隨著學(xué)者們對(duì)脾氣虛證狀態(tài)下神經(jīng)內(nèi)分泌調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)認(rèn)識(shí)的不斷深入，將會(huì)涌現(xiàn)出更多的精確至生物分子網(wǎng)絡(luò)層次的研究，為闡明脾氣虛證的生物學(xué)本質(zhì)作出有益嘗試。