一例仔豬水腫病的實驗室診斷

亢文華，訾占超，汪葆玥，馬英

（中國動物疫病預(yù)防控制中心，北京朝陽 100125）

（一）發(fā)病情況 河北省某豬場飼養(yǎng)母豬150頭，2013年4月初，斷奶仔豬陸續(xù)出現(xiàn)急性死亡，多在斷奶后40～60日齡發(fā)病，發(fā)病率為10%，病死率達到90%以上。

（二）臨床癥狀 主要癥狀有精神沉郁，食欲下降，口流白沫，輕度腹瀉，后期便秘，體溫無明顯變化。發(fā)病仔豬均有神經(jīng)癥狀，表現(xiàn)肌肉震顫，不時抽搐，四肢泳動，共濟失調(diào)，盲目前進或做轉(zhuǎn)圈運動。面部、眼瞼及頸部有水腫，死前后軀麻痹。結(jié)膜高度充血，90%的仔豬在表現(xiàn)癥狀后不久死亡，病程為半天至1 d。剖檢3頭病死豬可見眼瞼及結(jié)膜水腫，頜下淋巴結(jié)與腸系膜淋巴結(jié)高度水腫。胃大彎高度水腫，胃壁腫脹，賁門部、胃底部黏膜明顯腫脹，呈半透明狀，在黏膜下層和肌層之間聚積膠凍樣黃色液體。小腸黏膜彌漫性出血，腸腔內(nèi)充滿茶色帶氣泡的液體。心包積液，腎腫大，腎盂水腫、充血。無菌條件下采集典型發(fā)病仔豬的肝臟進行細菌分離培養(yǎng)及實驗室鑒定，現(xiàn)將結(jié)果報告如下。

（三）實驗室檢查

1.實驗室鏡檢。無菌取肝、脾、腸系膜淋巴結(jié)觸片，均見有革蘭氏陰性、兩端鈍圓、分散或成對排列的短小桿菌。

2.細菌培養(yǎng)。無菌取瀕死豬的肝臟接種于普通肉湯試管、普通瓊脂平板培養(yǎng)基中，37℃培養(yǎng)24 h，普通肉湯均勻渾濁，試管底部出現(xiàn)黏膩的沉淀，輕搖后呈辮狀升起。普通瓊脂平板生成圓形、表面光滑濕潤、邊緣整齊、灰白色半透明的中等大小的菌落。分別挑取肉湯培養(yǎng)物和單菌落做涂片，革蘭氏染色鏡檢，均可見到大量革蘭氏陰性小桿菌。將鏡檢過的單個菌落分別接種到麥康凱和鮮血瓊脂平皿培養(yǎng)基上分別出現(xiàn)粉紅色菌落和β溶血。

3.生化試驗。該菌株能發(fā)酵葡萄糖、乳糖、麥芽糖、蔗糖、鼠李糖、阿拉伯糖、山梨糖、甘露醇、木糖、纖維二糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，不發(fā)酵蕈糖，靛基質(zhì)試驗陽性，M-R陽性、V-P陰性，不能利用檸檬酸鹽，不產(chǎn)生硫化氫，接觸酶試驗陽性。

4.藥敏試驗。藥敏試驗高度敏感的藥物：頭孢噻肟、頭孢氨芐。耐藥的藥物：阿莫西林、阿米卡星、環(huán)丙沙星、諾氟沙星、左氧氟沙星、氨芐西林、多西環(huán)素、新霉素、卡那霉素、羧芐青霉素。

5.致病性試驗。將純化后的細菌接種于普通肉湯，37℃培養(yǎng)24 h，腹腔注射小白鼠4只，每只0.2 ml；對照組2只小白鼠腹腔注射滅菌普通肉湯0.2 ml/只。接種后12 h，試驗組小白鼠有呆滯、呼吸困難、尾部發(fā)紺、活動減少、被毛側(cè)立、采食減少等癥狀，而對照組小白鼠表現(xiàn)正常。24 h 后，試驗組小白鼠先有2只死亡，余下2只在36 h內(nèi)均死亡，而對照組小白鼠生長狀況良好。剖檢病死小白鼠，見其肝臟、肺臟腫大，腹腔積液。取其肝臟涂片鏡檢，可見形態(tài)典型的革蘭氏陰性、兩端鈍圓、分散或成對排列的短小桿菌。再進一步將該病料進行病原菌的分離培養(yǎng)、生化試驗，其結(jié)果同上述分離菌的結(jié)果一樣。說明此次分離所得菌具有致病性。

6.PCR。根據(jù)GenBank中發(fā)表的stx2e基因序列在分析比較的基礎(chǔ)上根據(jù)保守區(qū)域設(shè)計一對引物用于PCR對產(chǎn)志賀毒素大腸桿菌的鑒定。

采用常規(guī)PCR反應(yīng)系統(tǒng)，擴增出與預(yù)期相同的620 bp片段，表明該分離株為產(chǎn)志賀毒素的大腸桿菌（圖 1）。

(四)防治

1.加強飼養(yǎng)管理，搞好環(huán)境衛(wèi)生。加強消毒,用0.5%百毒殺和0.2%過氧乙酸上下午交替噴霧消毒。

2.由于仔豬出現(xiàn)水腫病時，大部分已吸收了內(nèi)毒素，所以用抗生素治療收效甚微?；钾i出現(xiàn)水腫和神經(jīng)癥狀時，用5%的葡萄糖水250～500 ml、安鈉咖0.5～2 g、20%甘露醇50 ～100 ml，混合后靜脈注射，1 次/d，連續(xù)注射3 d，以緩解腦部水腫和顱內(nèi)壓升高。

圖1 PCR鑒定結(jié)果

3.減少或消除應(yīng)激因素，改善斷奶仔豬的飼養(yǎng)管理。一是斷奶前的仔豬要提早補料，訓練采食，少喂多餐，飼料喂量逐漸增加。斷奶后不宜突然更換飼料，要限制高蛋白、高碳水化合物飼料的喂量，增加日糧中纖維素的含量；二是在氣候多變的春秋季節(jié)，要保持豬舍內(nèi)的溫度恒定，尤其要注意寒流、暴風雨的侵襲，做到防寒保暖；三是斷奶后每天口服 MgSO4，同時在飼料或飲水中加入敏感的抗菌藥，可大大減少水腫病的發(fā)生。

采取以上綜合措施后，該病得到了有效控制。半月后回訪時，該豬場再未發(fā)現(xiàn)仔豬水腫病臨床病例。

（五）討論

1.本病的診斷需要與偽狂犬病、腦膜腦炎型鏈球菌病等疾病相區(qū)別。豬偽狂犬病臨診表現(xiàn)因日齡不同而有很大差異，初生仔豬即可發(fā)病，表現(xiàn)與水腫病相似的神經(jīng)癥狀，但體溫升高41℃～41.5℃，20日齡以上到斷奶前后的仔豬癥狀輕微，表現(xiàn)體溫41℃以上，呼吸短促，食欲減退或廢絕，耳尖發(fā)紫，發(fā)病率、死亡率都低于15日齡以內(nèi)豬。腦膜腦炎型鏈球菌病在出現(xiàn)神經(jīng)癥狀的同時，個別豬會出現(xiàn)多發(fā)型關(guān)節(jié)炎、關(guān)節(jié)腫大。

2.產(chǎn)志賀毒素大腸桿菌的毒力因子主要有2種，即菌毛和毒素。致仔豬水腫病產(chǎn)志賀毒素大腸桿菌的菌毛主要是黏附性菌毛（F18），但也有大腸桿菌K88以及沒有菌毛的菌株，而引起血管變性從而出現(xiàn)水腫的毒素卻只有致水腫病2型類志賀毒素（Stx2e）一種；因此，菌毛的有無及其類型不能作為鑒定產(chǎn)志賀毒素大腸桿菌的指標，而必須依賴于Stx2e的檢測。傳統(tǒng)鑒定Stx2e方法是用細胞毒性試驗及免疫學試驗，但其鑒定程序相對繁瑣，且難以與志賀樣毒素1型（Stx1）、志賀樣毒素2型（Stx2）區(qū)分；因此，本試驗采用鑒定產(chǎn)Stx2e型產(chǎn)志賀毒素大腸桿菌的PCR方法該方法具有特異和快速特點，能夠很好地檢測出仔豬水腫病。

（略）