新疆馬鈴薯鐮刀菌根腐病發(fā)生危害調(diào)查及病原菌鑒定

楊 波，郭成瑾，王喜剛，沈瑞清,

(1.寧夏大學(xué) 農(nóng)學(xué)院，銀川 750021；2.寧夏農(nóng)林科學(xué)院植物保護(hù)研究所，銀川 750002)

馬鈴薯是繼水稻、小麥和玉米之后的第四大糧食作物[1]，糧蔬飼兼用，具有很高的營養(yǎng)、藥用和經(jīng)濟(jì)價(jià)值[2-3]。新疆是中國馬鈴薯產(chǎn)區(qū)之一，因馬鈴薯性喜冷涼、耐旱、耐貧瘠、高產(chǎn)、適應(yīng)性強(qiáng)等特點(diǎn)，近年來，新疆馬鈴薯的種植面積大幅增加[4]。據(jù)報(bào)道，馬鈴薯各種病害的發(fā)生及危害也逐年加重，其中真菌性病害發(fā)生最重[5-7]，鐮刀菌引起的根腐病作為真菌性病害中的一種，在馬鈴薯的生長期及儲(chǔ)藏期均有發(fā)生，不僅制約馬鈴薯的產(chǎn)量，而且影響馬鈴薯儲(chǔ)藏期的品質(zhì)，是限制新疆馬鈴薯產(chǎn)業(yè)發(fā)展的重要因素。

鐮刀菌(Fusariumssp.)是世界范圍內(nèi)分布的一類真菌，寄主范圍廣，侵染能力強(qiáng)，可侵染植物的根、莖、穗和果實(shí)，引起植物的根腐、莖腐等多種病害[8-9]。本研究中馬鈴薯鐮刀菌根腐病是由鐮刀菌引起的馬鈴薯根、莖及薯塊發(fā)病的病害總稱，其中由鐮刀菌引起的馬鈴薯儲(chǔ)藏期病害稱為干腐病，鐮刀菌干腐病是馬鈴薯儲(chǔ)藏期危害最嚴(yán)重的病害之一[10]，可使儲(chǔ)藏期的馬鈴薯平均減產(chǎn)6%～25%[11]，產(chǎn)量損失最高可達(dá)60%[12]。鐮刀菌侵染馬鈴薯塊莖，通常表現(xiàn)為薯塊顏色發(fā)暗、褐變、內(nèi)部常呈空心[13]，從具有典型發(fā)病癥狀的塊莖上分離最多的鐮刀菌為茄病鐮刀菌(F.solani)、尖孢鐮刀菌(F.oxysporum)、燕麥鐮刀菌(F.avenaceum)、黃色鐮刀菌(F.culmorum)、接骨木鐮刀菌(F.sambucinum)、半裸鐮刀菌 (F.semitectum)[14-15]。不同地區(qū)引起馬鈴薯鐮刀菌干腐病的種類有一定差異，據(jù)報(bào)道，在北美和部分歐洲國家，接骨木鐮刀菌和藍(lán)色鐮刀菌(F.coeruleum)被認(rèn)為是引起馬鈴薯干腐病最主要的病原菌[16-17]；而由茄病鐮刀菌引起的馬鈴薯干腐病在伊朗和南非發(fā)生嚴(yán)重[18]；在中國河北和內(nèi)蒙古共分離到4種致病鐮刀菌，其中銳頂鐮刀菌(F.acuminatum)是優(yōu)勢分離菌[19-20]；李金花等[21]在對(duì)甘肅馬鈴薯鐮刀菌干腐病的優(yōu)勢病原菌研究中發(fā)現(xiàn)，接骨木鐮刀菌和茄病鐮刀菌是優(yōu)勢分離種；引起黑龍江省馬鈴薯干腐病的鐮刀菌有6種，閔凡祥等[22]在對(duì)鑒定出的鐮刀菌進(jìn)行致病性測試中發(fā)現(xiàn)，接骨木鐮刀菌、燕麥鐮刀菌和擬絲孢鐮刀菌(F.trichothecioides)的致病力最強(qiáng)，擬枝孢鐮刀菌(F.sporotrichioides)最弱。

本試驗(yàn)對(duì)新疆馬鈴薯鐮刀菌根腐病進(jìn)行調(diào)查和取樣，將病樣進(jìn)行病原菌的分離純化，通過形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)對(duì)其進(jìn)行種類鑒定，并對(duì)鑒定出的鐮刀菌進(jìn)行致病性測定，確定引起新疆地區(qū)馬鈴薯鐮刀菌根腐病的主要致病菌，為防治馬鈴薯根腐病提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

培養(yǎng)基：馬鈴薯葡萄糖瓊脂(Potato dextrose agar，PDA)培養(yǎng)基:馬鈴薯200 g、葡萄糖20 g、瓊脂12 g、蒸餾水1 000 mL；Joff修改的Bilai’s培養(yǎng)基：磷酸二氫鉀1 g、硝酸鉀1 g、氯化鉀 0.5 g、七水硫酸鎂0.5 g、淀粉0.2 g、葡萄糖0.2 g、瓊脂12 g、蒸餾水1 000 mL；麥麩培養(yǎng)基：麥麩500 g、蒸餾水20 mL。

主要試劑及儀器：DNA提取試劑盒(杭州博日科技有限公司)、2×EasyTaqPCR SuperMix、Trans 2K DNA Marker、Gelstain、ddH2O(北京全式金生物技術(shù)有限公司)、50×TAE電泳緩沖液(北京索萊寶科技有限公司)等。SPX-250生化培養(yǎng)箱(上海躍進(jìn)醫(yī)療器械有限公司)、T100TMThermalCycler PCR儀(時(shí)代聯(lián)想生物科技有限公司)、DYY-6C型電泳儀(北京六一生物科技有限公司)、Azure Biosystems C200凝膠成像系統(tǒng)(北京深藍(lán)云生物科技有限公司)、高速冷凍離心機(jī)(上海安亭科學(xué)儀器廠)、LE204E/02電子天平(梅特勒-托利多儀器有限公司)、TOMY SX-500高壓滅菌器(上海麥森醫(yī)療科技有限公司)等。

1.2 馬鈴薯鐮刀菌根腐病田間發(fā)病情況調(diào)查

2016-2017年在新疆馬鈴薯種植區(qū)，采用隨機(jī)取樣的方法對(duì)鐮刀菌根腐病進(jìn)行調(diào)查，本試驗(yàn)主要研究由鐮刀菌引起的田間馬鈴薯塊莖、根莖腐類病害，因此在調(diào)查取樣中只側(cè)重于表現(xiàn)為該病害癥狀的病樣，在每個(gè)馬鈴薯種植區(qū)調(diào)查20株，通過觀察莖基部、根及塊莖上有無病斑及病斑的大小，確定鐮刀菌根腐病發(fā)生的嚴(yán)重度，并計(jì)算病害發(fā)生率，將具有典型癥狀的根莖等帶回實(shí)驗(yàn)室，保存于4 ℃冰箱中，用于病原菌的分離。

病害發(fā)生率=(發(fā)病株數(shù)/調(diào)查株數(shù))×100%。

1.3 病原菌的分離、鑒定

1.3.1 病原菌分離純化 用常規(guī)組織分離法對(duì)采集的病害樣本進(jìn)行分離[23]，利用單孢分離法對(duì)分離到的菌株進(jìn)行純化。單孢分離采用稀釋平板法，刮取少許菌絲于盛有無菌水的1.5 mL離心管中混勻制成孢子懸浮液，取一滴在顯微鏡下進(jìn)行觀察，如若一個(gè)鏡頭下只有0～1個(gè)孢子，則取一滴該濃度下的孢子懸浮液滴于PDA培養(yǎng)基上，用涂布玻璃棒將其均勻涂開，待單孢長出菌絲，挑取菌絲轉(zhuǎn)至新的PDA培養(yǎng)基上25 ℃恒溫培養(yǎng)。

1.3.2 病原菌形態(tài)特征觀察 將單孢菌株純化后轉(zhuǎn)接于PDA培養(yǎng)基和Bilai’s培養(yǎng)基上，觀察菌落顏色、形狀及菌絲的疏密情況，測定菌落生長4 d時(shí)的菌落直徑。產(chǎn)孢后，在顯微鏡下觀察分生孢子的大小、形狀、數(shù)量，及產(chǎn)孢細(xì)胞的形狀，厚垣孢子的有無及形狀。根據(jù)病原菌的形態(tài)特征，依據(jù)Booth分類系統(tǒng)[24]，同時(shí)參考《山西鐮刀菌》[25]等相關(guān)資料進(jìn)行形態(tài)學(xué)鑒定。

1.3.3 基因組DNA提取 病原菌DNA采用Biospin真菌基因組DNA提取試劑盒提取。首先將培養(yǎng)好的鐮刀菌菌絲于研缽中液氮冷凍后研磨，根據(jù)試劑盒提供的方法步驟進(jìn)行操作。取 5 μL DNA溶液在15 g/L瓊脂糖凝膠上電泳，DNA于-20 ℃保存，備用。

1.3.4 病原菌基因序列擴(kuò)增及測序 采用鐮刀菌屬特異性引物EF-1H/EF-2T對(duì)分離到的鐮刀菌進(jìn)行分子鑒定。EF-1H：5′-ATGGGTAAGGAAGACAAGAC-3′，EF-2T：5′-GGAAGTACCAGTGATCATGTT-3′[26]。

對(duì)所提DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，每個(gè)反應(yīng)體系總體積為25 μL，其中模板DNA 1 μL (56 ng/μL)，上下游引物各1 μL(1 μmol/L)，2×EasyTaqPCR Super Mix 12.5 μL，ddH2O 9.5 μL。

PCR擴(kuò)增程序：95 ℃預(yù)變性5 min；95 ℃變性30 s，58 ℃退火45 s，72 ℃延伸1 min，35個(gè)循環(huán)；72 ℃延伸5 min。將PCR產(chǎn)物送往上海生工生物工程有限公司進(jìn)行測序。

1.3.5 序列數(shù)據(jù)處理及系統(tǒng)發(fā)育樹構(gòu)建 對(duì)測序結(jié)果在NCBI網(wǎng)站進(jìn)行BLAST比對(duì)，根據(jù)比對(duì)結(jié)果從GenBank數(shù)據(jù)庫獲得最相似的序列，進(jìn)行同源性比較，利用MEGA 5.20分析軟件采用NJ法構(gòu)建基于EF-1α基因序列的系統(tǒng)發(fā)育樹，分析所分離菌株與其他菌株間的親緣關(guān)系，確定分類地位。

1.4 病原菌致病性測定

根據(jù)柯赫氏法則對(duì)病原菌致病性進(jìn)行驗(yàn)證[23]。分別取編號(hào)為X9-1-1、X29-1-1、X16-2-2、X16-1-3和X8-2-1的菌株進(jìn)行致病性測定，將5株鐮刀菌接入PDA平板培養(yǎng)基上培養(yǎng)7～10 d后，用直徑10 mm的打孔器取菌餅10片，接于裝有麥麩培養(yǎng)基的三角瓶中，25 ℃下培養(yǎng)9～15 d，待菌絲長滿培養(yǎng)基后，以1∶100(質(zhì)量比)比例與滅菌土混勻分別制成菌土[27]。播種馬鈴薯(品種‘青薯9號(hào)’)于裝有菌土的花盆中，以裝有無菌土的花盆為對(duì)照，每種處理3次重復(fù)，每個(gè)重復(fù)播種3株，置于溫室中培養(yǎng)。待植株發(fā)病后觀察發(fā)病情況并統(tǒng)計(jì)發(fā)病率，同時(shí)，采用組織分離法對(duì)病原菌進(jìn)行再分離，將分離物的菌落形態(tài)、孢子形態(tài)等與接種菌株進(jìn)行比較。

1.5 數(shù)據(jù)處理與分析

用Excel 2003軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)整理及作圖，用MEGA 5.20分析軟件對(duì)基因序列進(jìn)行系統(tǒng)發(fā)育樹的構(gòu)建。

2 結(jié)果與分析

2.1 馬鈴薯鐮刀菌根腐病田間發(fā)病情況

2.1.1 田間癥狀 調(diào)查發(fā)現(xiàn)，新疆地區(qū)馬鈴薯鐮刀菌根腐病的危害期主要為出苗期和結(jié)薯期。該病害主要危害馬鈴薯的根莖部位，在馬鈴薯儲(chǔ)藏期也會(huì)危害薯塊，稱為馬鈴薯干腐病，均是由鐮刀菌屬真菌引起的病害。危害癥狀主要表現(xiàn)為根部腐爛，根基部常?？O縮，維管束褐變，莖基部出現(xiàn)黑褐色不規(guī)則斑塊，濕度大時(shí)往往會(huì)產(chǎn)生白色的霉層。地上部分主要表現(xiàn)為植株瘦弱矮小，葉片開始枯黃萎蔫。

2.1.2 田間發(fā)生情況 對(duì)新疆15個(gè)馬鈴薯種植區(qū)進(jìn)行病害調(diào)查發(fā)現(xiàn)，不同地區(qū)病害發(fā)生嚴(yán)重度和發(fā)生率不同。從病害發(fā)生嚴(yán)重度上看，十二師西山農(nóng)場和尼勒克的鐮刀菌根腐病發(fā)生最嚴(yán)重，而烏魯木齊縣板房溝鄉(xiāng)等4個(gè)地區(qū)發(fā)生最輕。從病害發(fā)生率上看，伊寧縣病害發(fā)生率高達(dá)80%，是所有調(diào)查地區(qū)中病害發(fā)生最高的，其次發(fā)生率較高的是烏魯木齊縣永豐鄉(xiāng)和尼勒克，發(fā)生率為40%，病害發(fā)生率最低的是烏魯木齊縣板房溝鄉(xiāng)和呼圖壁縣呼圖壁鎮(zhèn)兩個(gè)地區(qū)，發(fā)生率為5%(表1)。

2.2 病原菌分離及形態(tài)學(xué)鑒定

2016-2017年，在新疆15個(gè)馬鈴薯產(chǎn)區(qū)采集具有典型鐮刀菌根腐病癥狀的病株/薯198份，組織分離獲得鐮刀菌菌株，采用單孢法純化分離到的菌株，共獲得純培養(yǎng)菌株322株。

通過對(duì)供試菌株在PDA及Bilai’s培養(yǎng)基上培養(yǎng)性狀的觀察及分生孢子的顯微觀察，對(duì)菌株進(jìn)行初步的形態(tài)學(xué)鑒定，將其鑒定為5種鐮刀菌。形態(tài)學(xué)鑒定雖然可以將大部分菌株區(qū)分開來，但有些菌株變異較大，僅僅依靠形態(tài)學(xué)鑒定很難將其鑒定到種的水平，因此還要依靠分子生物學(xué)鑒定。鐮刀菌的形態(tài)學(xué)特征如下。

2.2.1 尖孢鐮刀菌 培養(yǎng)4 d的菌落直徑3.10 cm，菌絲白色，棉絮狀、多。小型分生孢子卵形，棍棒形或橢圓形，0～1分隔；大型分生孢子較直，中間略彎曲，頂胞尖，基胞足跟明顯，2～5分隔。單瓶梗產(chǎn)孢，產(chǎn)孢梗短，厚垣孢子橢圓形或球形，單個(gè)間生。

2.2.2 木賊鐮刀菌 培養(yǎng)4 d的菌落直徑5.00 cm，菌絲白色、黃褐色，棉絮狀，茂盛。小型分生孢子長橢圓形、腎形及棍棒形，0～1分隔，多數(shù)無隔；大型分生孢子鐮刀形，腹背稍彎曲，頂細(xì)胞漸尖，基胞足跟明顯。3～7分隔，多數(shù)5分隔。單瓶梗產(chǎn)孢，產(chǎn)孢梗較短，厚垣孢子球形，單個(gè)，間生或頂生。

2.2.3 芬芳鐮刀菌 培養(yǎng)4 d的菌落直徑4.40 cm，菌絲白色，羊毛狀或氈狀。小型分生孢子卵圓形，0～1分隔；大型分生孢子較直，頂細(xì)胞鈍，基胞足跟不明顯，2～5分隔。單瓶梗產(chǎn)孢，產(chǎn)孢梗較長，厚垣孢子未見。

2.2.4 茄病鐮刀菌 培養(yǎng)4 d的菌落直徑2.50 cm，菌絲少，白色，絨狀。小型分生孢子多，以橢圓形、腎形及卵形為主，0～1隔，多數(shù)1隔；大型分生孢子馬特形，兩端鈍，略彎曲，2～5分隔，多數(shù)3隔。單瓶梗產(chǎn)孢，產(chǎn)孢梗長，厚垣孢子球形，單生或串生于菌絲中間。

2.2.5 銳頂鐮刀菌 培養(yǎng)4 d的菌落直徑4.45 cm，菌絲淡黃色，羊毛狀，茂盛。小型分生孢子橢圓形、紡錘形及腎形，0～1分隔；大型分生孢子頂細(xì)胞延長，基胞足跟明顯，2～5分隔，多數(shù)3分隔。單瓶梗產(chǎn)孢，厚垣孢子球形，單個(gè)頂生或 間生。

2.3 分子生物學(xué)鑒定

通過EF-1H/EF-2T引物對(duì)分離到的菌株進(jìn)行序列測定，獲得長度為711～748 bp的序列片段。將獲得的DNA序列與GenBank中已登錄鐮刀菌的序列進(jìn)行同源性比較，并用MEGA 5.20分析軟件采用NJ法構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(圖1)。結(jié)果表明，編號(hào)為X8-2-1和X9-1-1的菌株與GenBank中登錄號(hào)為KX094920.1的銳頂鐮刀菌聚在一個(gè)分枝上，說明其親緣關(guān)系最近，且同源性達(dá)98%，菌株X8-2-1和X9-1-1的形態(tài)學(xué)鑒定均為銳頂鐮刀菌，與分子學(xué)鑒定結(jié)果一致。菌株X8-1-1和X16-2-2與登錄號(hào)為HQ702585.1的芬芳鐮刀菌聚在一起，同源性高達(dá)99%，與形態(tài)學(xué)鑒定結(jié)果一致，確定X8-1-1和X16-2-2菌株為芬芳鐮刀菌。編號(hào)為X19-1-1的菌株與登錄號(hào)為KJ647280.1和KU361443.1的尖孢鐮刀菌序列的同源性為99%，且與形態(tài)學(xué)鑒定結(jié)果相一致，說明這兩株菌株為尖孢鐮刀菌。分離編號(hào)為X16-1-3的菌株與GenBank中登錄號(hào)為KX901848.1的茄病鐮刀菌的同源性為99%，與菌株X16-1-3的形態(tài)學(xué)鑒定結(jié)果一致，確定其為茄病鐮刀菌。編號(hào)為X29-1-1的菌株與登錄號(hào)為KP400714.1的木賊鐮刀菌的同源性為99%，聚在一個(gè)分枝上，且與形態(tài)學(xué)鑒定結(jié)果一致，確定該菌株為木賊鐮刀菌。通過對(duì)新疆分離到的鐮刀菌菌株進(jìn)行EF-1α基因序列分析，以及形態(tài)學(xué)鑒定，確定引起新疆馬鈴薯鐮刀菌根腐病的病原菌依次為尖孢鐮刀菌、茄病鐮刀菌、銳頂鐮刀菌、芬芳鐮刀菌和木賊鐮刀菌。

表1 新疆各地區(qū)馬鈴薯鐮刀菌根腐病調(diào)查結(jié)果Table 1 Investigation of potato Fusarium root rot disease in Xinjiang

注：“+”表示發(fā)病的輕重程度，“+”發(fā)病輕、“++”發(fā)病中、“+++”發(fā)病重。

Note:“+” indicates the severity of the disease, “+” is light, “++” is medium, and “+++” is heavy.

2.4 鐮刀菌種類及分離頻率

對(duì)新疆15個(gè)馬鈴薯產(chǎn)區(qū)病害樣本采集及分離得到的322株菌株進(jìn)行形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)鑒定，結(jié)合兩種鑒定方法將其鑒定為5種鐮刀菌(圖2)，其中木賊鐮刀菌共分離到18株，分離頻率為5.59%；茄病鐮刀菌共分離到28株，分離頻率為8.70%；銳頂鐮刀菌分離到55株，分離頻率為17.08%；芬芳鐮刀菌分離到55株，分離頻率為17.08%；尖孢鐮刀菌分離到166株，分離頻率為51.55%。從鐮刀菌分離頻率上看，尖孢鐮刀菌為新疆地區(qū)優(yōu)勢分離菌種，相對(duì)于尖孢鐮刀菌來說，木賊鐮刀菌和茄病鐮刀菌的分離頻率非常低。

圖1 基于 EF-1α序列構(gòu)建的馬鈴薯鐮刀菌根腐病菌系統(tǒng)發(fā)育樹Fig.1 Phylogenetic tree of potato root rot Fusarium based on EF-1α sequence

圖2 鐮刀菌的種類及分離頻率Fig.2 Species and isolation frequency of Fusarium

2.5 病原菌致病性測定

室內(nèi)接種試驗(yàn)結(jié)果表明，對(duì)照中馬鈴薯幼苗(圖3-a)的生長指標(biāo)明顯優(yōu)于接種的馬鈴薯幼苗(圖3-d)，接種后的薯苗生長受到抑制，植株矮小，葉片開始泛黃；發(fā)病植株須根開始從根尖褐變腐爛(圖3-c)，須根少(圖3-e)，根莖處縊縮變褐(圖3-b)，莖基部出現(xiàn)黑褐色病斑，與采樣得到的病株癥狀相似，而對(duì)照中馬鈴薯幼苗均未發(fā)病，生長良好，須根多，根莖部健康(圖3-f)。依據(jù)柯赫氏法則，從接種發(fā)病馬鈴薯幼苗的病健交界處按照“材料與方法”中病原菌分離鑒定描述的方法重新分離、純化和鑒定，得到的鐮刀菌菌株與接種所用菌株形態(tài)一致，證明所接菌株為馬鈴薯鐮刀菌根腐病的病原菌。

接種不同鐮刀菌的馬鈴薯植株發(fā)病率各不相同，統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果顯示，發(fā)病率由高到低依次為：X16-1-3(F.solani)88.9%，X16-2-2(F.redolens)66.7%，X9-1-1(F.oxysporum)、X29-1-1(F.equiseti)、X8-2-1(F.acuminatum)均為 33.3%，說明在鑒定出的5種鐮刀菌中，茄病鐮刀菌和芬芳鐮刀菌的致病力較強(qiáng)，其余3個(gè)致病力 較弱。

a和f.健康植株(對(duì)照) Healthy plant (CK)；b、c、d、e.接種菌株X16-1-3引起的病害癥狀 Inoculated symptoms of disease caused by isolate X16-1-3

圖3 病原鐮刀菌致病性測定
Fig.3 Pathogenicity identification of potato root rot

3 結(jié)論與討論

隨著馬鈴薯主糧化戰(zhàn)略的提出[28]，馬鈴薯產(chǎn)業(yè)在農(nóng)業(yè)發(fā)展中越來越重要，不僅能夠帶給農(nóng)民經(jīng)濟(jì)效益，而且在某些地區(qū)肩負(fù)著脫貧攻堅(jiān)的重要使命。作為馬鈴薯種植產(chǎn)區(qū)之一的新疆，馬鈴薯產(chǎn)業(yè)也正朝著規(guī)?；较虬l(fā)展，而馬鈴薯鐮刀菌根腐病的發(fā)生是制約馬鈴薯產(chǎn)業(yè)發(fā)展的關(guān)鍵因素。本研究通過對(duì)新疆地區(qū)馬鈴薯根腐病進(jìn)行調(diào)查，結(jié)果表明馬鈴薯根腐病在調(diào)查的15個(gè)地區(qū)均有發(fā)生，其病害發(fā)生嚴(yán)重度和發(fā)生率有所不同，在所調(diào)查的地區(qū)中病害發(fā)生率最高的是伊寧縣，發(fā)生率高達(dá)80%；從病害發(fā)生的嚴(yán)重度上看，十二師西山農(nóng)場和尼勒克的發(fā)病嚴(yán)重度最高。新疆地處中國最西邊，由于日照和熱量條件充足，非常適宜馬鈴薯的種植，隨著馬鈴薯在新疆的種植面積不斷加大，病害的發(fā)生也越來越嚴(yán)重，通過上述調(diào)查發(fā)現(xiàn)，新疆地區(qū)的伊寧縣、奇臺(tái)縣等地的病害發(fā)生率和嚴(yán)重度非常高，由于這些地方的種植戶在種植馬鈴薯時(shí)，習(xí)慣采用種植自留種薯和外調(diào)種薯，造成馬鈴薯的病毒感染，加大了土傳病害的發(fā)生率，加上天山豐沛的降水，使得馬鈴薯鐮刀菌根腐病的發(fā)生也逐年加重。

鐮刀菌是引起植物真菌類病害中最重要的病原菌，能夠引起多種植物的根腐病[29]，馬鈴薯枯萎病和干腐病也是由鐮刀菌的許多種引起的[30-31]，本文所指鐮刀菌根腐病也包括由鐮刀菌引起的馬鈴薯干腐病。據(jù)報(bào)道，中國大多數(shù)馬鈴薯種植地區(qū)都有鐮刀菌根腐病的發(fā)生。李金花等[21]和何蘇琴等[32]對(duì)甘肅不同地區(qū)引起馬鈴薯干腐病的病原菌進(jìn)行分離鑒定，發(fā)現(xiàn)不同地區(qū)引起該病害的病原菌種類存在差異，優(yōu)勢病原菌也不同。陳彥云[33]對(duì)寧夏西吉地區(qū)儲(chǔ)藏期的馬鈴薯進(jìn)行病害調(diào)查，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，引起西吉馬鈴薯干腐病的病原菌主要是茄病鐮刀菌和接骨木鐮刀菌。王麗麗等[7]對(duì)新疆烏昌地區(qū)窖藏馬鈴薯病害調(diào)查中發(fā)現(xiàn)，5種鐮刀菌可以引起馬鈴薯儲(chǔ)藏期鐮刀菌病害，分別為銳頂鐮刀菌、茄病鐮刀菌、黃色鐮刀菌、接骨木鐮刀菌和半裸鐮刀菌，而在本研究中發(fā)現(xiàn)引起新疆地區(qū)的病原菌主要為茄病鐮刀菌、銳頂鐮刀菌、芬芳鐮刀菌、木賊鐮刀菌和尖孢鐮刀菌，由于采集地點(diǎn)不同，所以在病原菌種類上存在一定差異，說明新疆地區(qū)引起馬鈴薯鐮刀菌根腐病的病原菌在地理位置分布上有明顯的地域差異。而在中國其他地方，對(duì)馬鈴薯鐮刀菌根腐病的研究主要集中在黑龍江[22]、內(nèi)蒙古[20]、河北[19]及山西[34]等地，不同地方分離到的病原菌不同，而在同一地方由于采集地區(qū)不同，病原菌的種類也有所不同。

通過對(duì)新疆馬鈴薯根腐病的調(diào)查、病原菌的分離、形態(tài)學(xué)特征觀察、分子生物學(xué)鑒定及致病性測定，確定引起該病害的病原菌為尖孢鐮刀菌、茄病鐮刀菌、銳頂鐮刀菌、芬芳鐮刀菌和木賊鐮刀菌。對(duì)由鐮刀菌引起的馬鈴薯根腐病在新疆地區(qū)報(bào)道較少，通過本試驗(yàn)確定引起新疆馬鈴薯鐮刀菌根腐病的主要病原菌，為以后防治新疆馬鈴薯根腐病提供一定依據(jù)。