潰瘍性結腸炎患者外周血Tim-4mRNA表達水平的變化及意義

華琳 陳元旺 唐靜

摘要：目的 ?探究潰瘍性結腸炎患者外周血Tim-4 mRNA的表達變化及臨床意義。方法 ?選取2015年2月～2019年4月我院收治的潰瘍性結腸炎患者38例作為觀察組，另選取同期來我院體檢的健康者30名作為對照組，采用熒光定量PCR測定外周血Tim-4 mRNA表達水平，比較兩組Tim-4 mRNA、C反應蛋白（CRP）、紅細胞沉降率（ESR）表達水平及觀察組Tim-4 mRNA與CRP和ESR的相關性。結果 ?觀察組Tim-4 mRNA、CRP、ESR表達均高于對照組[（0.79±0.37）vs（0.33±0.20）]、[（6.08±3.21）mg/L vs（0.99±0.87）mg/L]、[（19.12±12.13）mm/h vs（5.58±4.10）mm/h]，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。觀察組外周血單個核細胞Tim-4 mRNA表達水平與CRP呈正相關（r=0.376，P<0.05），而與ESR無相關性（r=0.077，P>0.05）。結論 ?潰瘍性結腸炎患者Tim-4 mRNA異常上調(diào)，并與CRP密切相關，可能參與潰瘍性結腸炎的致病過程。

關鍵詞：潰瘍性結腸炎;Tim-4;C反應蛋白;紅細胞沉降率

中圖分類號：R574.62 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?文獻標識碼：A ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2019.21.054

文章編號：1006-1959（2019）21-0161-03

Abstract：Objective ?To investigate the expression and clinical significance of Tim-4 mRNA expression in peripheral blood of patients with ulcerative colitis.Methods ?A total of 38 patients with ulcerative colitis admitted to our hospital from February 2015 to April 2019 were enrolled as the observation group. 30 healthy subjects from our hospital for the same period were selected as the control group. The expression of Tim-4 mRNA in peripheral blood was determined by real-time PCR. The expressions of Tim-4 mRNA， C-reactive protein （CRP） and erythrocyte sedimentation rate （ESR） in the two groups and the correlation between Tim-4 mRNA and CRP and ESR in the observation group were compared.Results ?The expressions of Tim-4 mRNA， CRP and ESR in the observation group were higher than those in the control group [（0.79±0.37） vs （0.33±0.20）]， [（6.08±3.21） mg/L vs （0.99±0.87） mg/L]， [（19.12±12.13） mm/h vs （5.58±4.10） mm/h]， the difference was statistically significant （P<0.05）. The expression of Tim-4 mRNA in peripheral blood mononuclear cells of the observation group was positively correlated with CRP （r=0.376， P<0.05）， but not correlated with ESR （r=0.077， P>0.05）. Conclusion ?The abnormal expression of Tim-4 mRNA in patients with ulcerative colitis is closely related to CRP and may be involved in the pathogenesis of ulcerative colitis.

Key words：Ulcerative colitis;Tim-4;C-reactive protein;Erythrocyte sedimentation rate

潰瘍性結腸炎（ulcerativecolitis）是一類以腸道炎癥為主要表現(xiàn)的慢性復發(fā)性腸道自身免疫性疾病[1]。全球范圍內(nèi)潰瘍性結腸炎發(fā)病率高達5.5/10000～24.3/10000，中國潰瘍性結腸炎發(fā)病率也高達11.6/10000，并有逐年增加趨勢[2]。但目前潰瘍性結腸炎病因?qū)W及發(fā)病機制尚未完全闡明，且治療棘手、病程冗長，嚴重影響患者生活質(zhì)量。有研究認為[3]，潰瘍性結腸炎發(fā)生可能與遺傳、免疫功能紊亂、感染、環(huán)境等多種因素有關。作為自身免疫性疾病，免疫功能異常在疾病機制中扮演重要的角色，其中CD4+T輔助細胞（Th）是介導免疫反應的主要效應細胞，既往研究普遍認為潰瘍性結腸炎患者主要以Th2細胞反應為主[4]。Tim-4是T細胞免疫球蛋白域黏蛋白域家族成員之一，近期發(fā)現(xiàn)其可以作為免疫負調(diào)控因子調(diào)控免疫平衡，包括Th2細胞反應。據(jù)此推測Tim-4可能參與潰瘍性結腸炎發(fā)病過程。然而目前關于潰瘍性結腸炎和Tim-4的研究報道較少。本文主要探究潰瘍性結腸炎患者外周血Tim-4 mRNA的表達變化及臨床意義，現(xiàn)報道如下。

1資料與方法

1.1一般資料 ?選取2015年2月～2019年4月九江市第一人民醫(yī)院收治的潰瘍性結腸炎患者38例作為觀察組，另選取同期來我院體檢的健康者30名作為對照組。觀察組中男22例，女16例，年齡29～67歲，平均年齡（49.87±13.56）歲。對照組中男18例，女12例，年齡28～69歲，平均年齡（48.91±10.82）歲。兩組性別、年齡等一般資料比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），具有可比性。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會審批通過，所有研究對象知情同意并簽署知情同意書。

1.2納入及排除標準

1.2.1納入標準 ?①符合“炎癥性腸病診斷與治療的共識意見（2012年·廣州）”制訂的潰瘍性結腸炎診斷標準[5];②所有患者在納入研究前均未經(jīng)任何治療，為初診病例;③所有患者在納入前6個月均未服用任何免疫抑制劑藥物。

1.2.2排除標準 ?①合并結直腸腫瘤患者;②其他臟器腫瘤、自身免疫性疾病以及感染性疾病的患者。

1.3方法 ?抽取清晨空腹靜脈血5 ml，置于EDTA抗凝管中，淋巴細胞分離液分離外周血單個核細胞，TRIZOL法提取外周血單個核細胞總RNA（Invitrogen公司試劑盒）。Real-time qPCR檢測外周血單個核細胞Tim-4 mRNA表達水平。引物序列為：Tim-4：5'-ACAGGACAGATGGATGGAATACCC-3'，5'-AGCCTTGT GTGTTTCTGCG -3';β-actin：5'-TGACGTGGACATCCGCAAAG-3'，5'-TGGAAGGTGGACAGCGAGG-3'。另外抽取2 ml靜脈血于干燥管中，以4000 r/10 min離心分離血清后，采用西門子BN-II及配套試劑以免疫濁度法檢測兩組人群的C反應蛋白（C-reactive protein，CRP）。再抽取2 ml靜脈血于枸櫞酸鈉抗凝管中，采用魏氏法測定紅細胞沉降率（erythrocyte sedimentation rate，ESR）。檢測前保證儀器室內(nèi)質(zhì)量控制合格。

1.4觀察指標 ?比較兩組Tim-4 mRNA、CRP、ESR表達及觀察組Tim-4 mRNA與CRP和ESR的相關性。

1.5統(tǒng)計學方法 ?采用SPSS20.0統(tǒng)計學軟件進行數(shù)據(jù)分析。計量資料以（x±s）表示，采用t檢驗;計數(shù)資料以[n（%）]表示，采用？字2檢驗;采用Pearson法分析Tim-4 mRNA與CRP和ESR的相關性。以P<0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。

2結果

2.1兩組Tim-4 mRNA、CRP、ESR表達比較 ?觀察組Tim-4 mRNA、CRP、ESR表達均高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），見表1。

2.2觀察組Tim-4 mRNA與CRP和ESR的相關性分析 ?觀察組Tim-4 mRNA表達水平與CRP呈正相關（r=0.376，P<0.05），而與ESR無相關性（r=0.077，P>0.05），見圖1。

3討論

潰瘍性結腸炎是一種病因尚不明確的結腸和直腸慢性非特異性炎癥性疾病，病變局限于大腸黏膜及黏膜下層。病變多位于乙狀結腸和直腸，也可延伸至降結腸，甚至整個結腸。病程漫長，常反復發(fā)作，嚴重影響患者生活質(zhì)量。潰瘍性結腸炎治療仍以緩解癥狀為基礎，在眾多機制假說中，機體對腸道微生物的過度免疫反應以及機體自身免疫平衡紊亂被認為是最為重要免疫學機理。抗原呈遞細胞在潰瘍性結腸炎發(fā)病機制中起著重要作用，而巨噬細胞是一類可向T細胞提供抗原信息的專職抗原提呈細胞，并誘導T細胞增殖分化。潰瘍性結腸炎發(fā)病過程涉及以上免疫異常過程，而免疫調(diào)控分子Tim-4與這些過程存在一定聯(lián)系。

Tim-4是Tim家族成員之一，主要表達于抗原呈遞細胞、T細胞和單核/巨噬細胞表面。Miyanishi M等[6]首次證實Tim-4是凋亡細胞吞噬的磷酸化受體，進一步證實了其調(diào)節(jié)免疫細胞功能的生物學效應。另研究發(fā)現(xiàn)[7]，Tim-4可參與系統(tǒng)性紅斑狼瘡和類風濕性關節(jié)炎等自身免疫性疾病的慢性炎癥調(diào)控過程，且其表達水平與疾病進展密切相關。Fang XY等[8]研究發(fā)現(xiàn)，Tim-4可通過不同細胞信號參與機體免疫調(diào)控，被證實為全新的免疫負性調(diào)控因子。Tim-4已經(jīng)在多種自身免疫性疾病中被證實，如在強直性脊柱炎患者中單核細胞上Tim-4的表達以及血漿中Tim-4的水平均高于健康人群，且與TNF-α和疾病活動度密切相關;此外，在系統(tǒng)紅斑狼瘡患者中也發(fā)現(xiàn)Tim-4表達異常上調(diào)。以上結果提示Tim-4作為新型免疫調(diào)控分子參與自身免疫性疾病的發(fā)生發(fā)展，據(jù)此推測Tim-4可能參與同為自身免疫性疾病的潰瘍性結腸炎的病因?qū)W過程。本研究結果發(fā)現(xiàn)，觀察組Tim-4 mRNA、CRP、ESR表達均高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），表明潰瘍性結腸炎患者的炎癥活化狀態(tài)，與上述研究結果一致，而Tim-4轉(zhuǎn)錄水平的上調(diào)則提示其參與了潰瘍性結腸炎的致病過程，但具體調(diào)控機制有待于進一步研究。此外，相關性分析結果顯示，觀察組Tim-4 mRNA表達水平與CRP呈正相關（r=0.376，P<0.05），而與ESR無相關性（r=0.077，P>0.05）。提示Tim-4可能參與了潰瘍性結腸炎中過度炎癥反應過程，且有潛力成為評估疾病炎癥狀態(tài)的新指標。

綜上所述，潰瘍性結腸炎患者Tim-4 mRNA表達異常并與CRP密切相關，可能參與了潰瘍性結腸炎的致病過程。

參考文獻：

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[5]中華醫(yī)學會消化病學分會炎癥性腸病學組.炎癥性腸病診斷與治療的共識意見（2012年·廣州）[J].胃腸病學，2012，51（12）：818-831.

[6]Miyanishi M，Tada K，Koike M，et al.Identification of Tim4 as a phosphatidylserine receptor[J].Nature，2007，450（7168）：435-439.

[7]Zhang X，Liu Q，Wang J，et al.TIM-4 is differentially expressed in the distinct subsets of dendritic cells in skin and skin-draining lymph nodes and controls skin Langerhans cell homeostasis[J].Oncotarget，2016，7（25）：37498-37512.

[8]Fang XY，Xu WD，Pan HF，et al.Novel insights into Tim-4 function in autoimmune diseases[J].Autoimmunity，2015，48（4）：189-195.

收稿日期：2019-7-1;修回日期：2019-7-11

編輯/杜帆