UPLC測(cè)定健脾益肺口服液中白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ和白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ的含量

王丹丹

摘要：目的 ?使用UPLC測(cè)定健脾益肺口服液中白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ的含量。方法 ?采用Waters H-class 超高效液相色譜儀測(cè)定白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ的含量，色譜柱：Waters BEH C18（50 mm×2.1 mm，1.7 μm），柱溫：30℃，進(jìn)樣量：2 μl，檢測(cè)波長(zhǎng)：220 nm，流動(dòng)相：乙腈（A）-水（B），梯度洗脫，流速：0.2 ml/min。結(jié)果 ?白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ線性方程為y=0.0528x+0.0241（r=0.9998），線性范圍2～160 μg/ml;白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ的線性方程為y=0.0786x（r=0.9998），線性范圍3～140 μg/ml;白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ及白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ的精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性、加樣回收率均符合要求。結(jié)論 ?初步建立了健脾益肺口服液中白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ含量測(cè)定的高效、迅速的檢測(cè)方法，為下一步質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的提高奠定基礎(chǔ)。

關(guān)鍵詞：UPLC;白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ;白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ

中圖分類號(hào)：R284.1 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2019.21.053

文章編號(hào)：1006-1959（2019）21-0159-03

Abstract：Objective ?To determine the content of atractylenolide I and atractylenolide III in Jianpi Yifei Oral Liquid by UPLC. Methods ?The contents of atractylenolide I and atractylenolide III were determined by Waters H-class ultra performance liquid chromatography. Column： Waters BEH C18 （50 mm × 2.1 mm， 1.7 μm）， column temperature： 30°C， injection Amount： 2 μl， detection wavelength： 220 nm， mobile phase： acetonitrile （A）-water （B）， gradient elution， flow rate： 0.2 ml/min. Results ?The linear equation of atractylenolide I was y=0.0528x+0.0241 （r=0.9998）， the linear range was 2～160 μg/ml; the linear equation of atractyl lactone III was y=0.0786x （r=0.9998）， linear range 3 ～140 μg/ml; the precision， repeatability， stability and recovery rate of atractylenolide I and atractylenolide III meet the requirements. Conclusion ?The high-efficiency and rapid detection method for the determination of atractylenolide I and atractylenolide III in Jianpi Yifei Oral Liquid was established， which laid a foundation for the improvement of quality standards.

Key words：UPLC;Atractylenolide I;Atractylenolide III

健脾益肺口服液為我院的自制院內(nèi)制劑，主要功效為益氣，固表，止汗，健脾益肺。臨床上用于表虛不固，咳喘，自汗惡風(fēng)，脾虛便溏，或體虛易感風(fēng)邪者;癥見小兒哮喘、體質(zhì)虛弱易感者，脾肺氣虛證表現(xiàn)為慢性阻塞性肺病。組方主要藥物包括有黃芪、黨參、白術(shù)、山藥、防風(fēng)、扁豆、雞內(nèi)金等。白術(shù)在方中是主要組成藥物之一，是為臣藥，來源于菊科植物白術(shù)的干燥根莖[1]，是浙江的道地藥材，使用歷史悠久，全國(guó)均有栽培。目前在用的炮制品主要有土炒白術(shù)和麩炒白術(shù)，具有健脾益氣、燥濕利水的作用，健脾益肺口服液中選用麩炒白術(shù)，取白術(shù)經(jīng)麥麩炮制之后更能增強(qiáng)白術(shù)的健脾作用，同時(shí)對(duì)君藥能起到協(xié)同增效的作用，并增強(qiáng)黃芪、黨參補(bǔ)脾肺之氣的作用?，F(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)，白術(shù)中多含揮發(fā)油，其主要化學(xué)成分為白術(shù)內(nèi)酯類成分、多糖、苷類等[2]，但其性質(zhì)在常溫下并不穩(wěn)定，因此選擇測(cè)定性質(zhì)相對(duì)穩(wěn)定且含量較高白術(shù)內(nèi)酯類成分作為白術(shù)的指標(biāo)性檢測(cè)成分[3]。本文主要使用UPLC測(cè)定健脾益肺口服液中白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ的含量，現(xiàn)報(bào)道如下。

1資料與方法

1.1儀器 ?Waters H-class超高效液相色譜儀;水蒸氣蒸餾裝置（自制）;高速萬能粉碎機(jī)（常州毅康藥化設(shè)備有限公司）;超純水系統(tǒng)（edi，北京豐裕華環(huán)環(huán)?？萍加邢薰荆?。

1.2藥品 ?白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ（青島捷士康生物科技有限公司，批號(hào)：185266，純度>98%），白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ（青島捷士康生物科技有限公司，批號(hào)：173652，純度>98%）;乙腈、甲醇（TEDIA色譜純）;健脾益肺口服液（本院自制，批號(hào)：20180712;20181103;20190320），本品為棕褐色澄明的液體，味微苦、澀。相對(duì)密度、pH值、裝量差異均符合《中華人民共和國(guó)藥典》2015年版的規(guī)定。

1.3色譜條件 ?色譜柱：Waters BEH C18（50 mm×2.1 mm，1.7 μm），柱溫：30℃，進(jìn)樣量：2 μl;檢測(cè)波長(zhǎng)：220 nm，流動(dòng)相：（A）-水（B），梯度洗脫：0～2.5 min，40%B～20%B;2.5～4min，20%B～15%B;4～8 min，15%B～10%B;8～14 min，0%B，流速：0.2 ml/min，見圖1。

1.4混合對(duì)照品溶液制備 ?精密稱定對(duì)照品適量，制成1 m分別含白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ 0.113 mg、0.162 mg的混合溶液，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，搖勻放入冰箱中冷藏備用。

1.5供試品溶液制備 ?取不同3個(gè)批次健脾益肺口服液生產(chǎn)中采用超臨界萃取中得到揮發(fā)油25 mg，分別加入25 ml容量瓶中，各加甲醇定容為1 mg/ml的溶液，避光保存，按批號(hào)編號(hào)放入冰箱中冷藏備用。

2結(jié)果

2.1線性關(guān)系考察 ?按4項(xiàng)下有關(guān)方法制備，并按色譜條件分析，并記錄有關(guān)色譜峰面積，進(jìn)行線性回歸。白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ線性方程為y=0.0528x+0.0241（r=0.9998），線性范圍2～160 μg/ml;白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ的線性方程為y=0.0786x（r=0.9998），線性范圍3～140 μg/ml，表明兩者在線性范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.2精密度考察 ?選取同一批次供試品（批號(hào)：20181103），按5項(xiàng)下有關(guān)方法制備溶液，并按色譜分析條件連續(xù)進(jìn)樣6次，同時(shí)記錄下色譜圖，并以2號(hào)色譜峰作為參照峰，計(jì)算各主要色譜峰相對(duì)峰面積和相對(duì)保留時(shí)間的RSD值均<2.3%，則表明該試驗(yàn)方法精密度較好，符合相關(guān)實(shí)驗(yàn)要求。

2.3重復(fù)性考察 ?選取同一批次供試品（批號(hào)：20181103），按5項(xiàng)下有關(guān)方法同時(shí)制備了6份供試品溶液備用，并按色譜分析的條件按順序進(jìn)樣檢測(cè)，同時(shí)記錄下色譜圖，并以2號(hào)色譜峰為參照峰，計(jì)算各主要色譜峰相對(duì)峰面積和相對(duì)保留時(shí)間的RSD值均<2.1%，則表明該方法重現(xiàn)性較好，符合相關(guān)實(shí)驗(yàn)要求。

2.4穩(wěn)定性考察 ?選取同一批次供試品（批號(hào)：20181103），按5項(xiàng)下方法制備出供試品溶液，并按色譜分析條件分別于0、2、4、8、12、18、24 h進(jìn)樣檢測(cè)，同時(shí)記錄下色譜圖，以2號(hào)色譜峰為參照峰，計(jì)算各主要色譜峰相對(duì)峰面積和相對(duì)保留時(shí)間的RSD均<2.1%，則表明該批次供試品溶液中各種成分在24 h內(nèi)穩(wěn)定，符合相關(guān)實(shí)驗(yàn)要求。

2.5加樣回收率考察 ?選取同一批次供試品（批號(hào)：20181103），置于25 ml錐形瓶中，加入白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ的對(duì)照品各適量，按5項(xiàng)下方法制備樣品，并注入色譜儀，按項(xiàng)下色譜分析條件按順序檢測(cè)，計(jì)算加樣回收率，計(jì)算結(jié)果顯示平均加樣回收率均在101.23%～101.54%，RSD<4%，表明此方法可行，能用于健脾益肺口服液中白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ的含量測(cè)定，見表1。

2.6含量測(cè)定結(jié)果 ?取3個(gè)批次的健脾益肺口服液，按方法和色譜測(cè)定含量，結(jié)果見表2。

3討論

自古以來，中藥在我國(guó)種植歷史悠久，資源豐富，物種多樣，并且使用了上千年，在實(shí)踐中發(fā)現(xiàn)其毒副作用小，還可以增強(qiáng)和調(diào)節(jié)人體的免疫功能。特別是中國(guó)傳統(tǒng)的中醫(yī)藥理論的指導(dǎo)下的中藥，一直作為篩選開發(fā)新藥的重要來源，扮演著特別重要的角色。白術(shù)作為中藥處方中常用藥物，具有減慢小腸細(xì)胞的蠕動(dòng)、抗衰老、抗病毒、抗炎鎮(zhèn)痛、利尿、調(diào)節(jié)免疫功能、明顯抑制腫瘤細(xì)胞增殖、對(duì)老化小鼠的認(rèn)識(shí)能力有明顯提高等多種藥理作用[4-7]，臨床上應(yīng)用廣泛。

本文通過對(duì)健脾益肺口服液中白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ含量測(cè)定方法的建立，可以作為方中白術(shù)藥材的質(zhì)控指標(biāo)，同時(shí)采用UPLC的方法，采用乙腈-水梯度洗脫的方法，檢測(cè)波長(zhǎng)220 nm，白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ線性方程為y=0.0528x+0.0241（r=0.9998），線性范圍2～160 μg/ml;白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ的線性方程為y=0.0786x（r=0.9998），線性范圍3～140 μg/ml，在線性范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，同時(shí)精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性、加樣回收率均符合要求，說明該色譜條件穩(wěn)定可靠、檢測(cè)時(shí)間迅速而且效率高，為揮發(fā)油類的檢測(cè)提供了新的思路和方法，為下一步醫(yī)院制劑的工藝提高提供一定的參考，同時(shí)也保證了臨床用藥安全有效。

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收稿日期：2019-7-27;修回日期：2019-8-5

編輯/錢洪飛