PPZ與5-FU對(duì)胃癌細(xì)胞生長(zhǎng)、自我更新能力的影響及相互作用

馮水土 馮麗華 任芳

摘要：目的 ?探討泮托拉唑（PPZ）、5-氟尿嘧啶（5-FU）在調(diào)控胃癌細(xì)胞及胃癌干細(xì)胞生長(zhǎng)、自我更新能力中的影響及其相互作用。方法 ?將SGC-7901和HGC-27細(xì)胞分為3組實(shí)驗(yàn)：5-Fu處理組、PPZ處理組和5-Fu+PPZ組。通過細(xì)胞成球?qū)嶒?yàn)檢測(cè)PPZ加藥前后胃癌細(xì)胞系（SGC7901、HGC-27）中胃癌細(xì)胞及胃癌干細(xì)胞自我更新能力的變化，觀察PPZ對(duì)胃癌細(xì)胞系成球能力干擾情況;MTT法檢測(cè)PPZ、5-FU對(duì)胃癌細(xì)胞及胃癌干細(xì)胞增殖能力的影響，觀察PPZ對(duì)5-FU藥物敏感性的調(diào)節(jié)作用。結(jié)果 ?PPZ加入后胃癌細(xì)胞系（SGC7901、HGC-27）和胃癌干細(xì)胞系（SGC7901-SP、 HGC-27-SP）自我更新率比PPZ加入前的自我更新率下降（P<0.01）;PPZ、5-FU對(duì)胃癌細(xì)胞（SGC7901、HGC-27）增殖均有抑制作用，而5-Fu+PPZ聯(lián)合組抑制最為明顯，抑制增殖的作用在24 h開始出現(xiàn)，96 h最低，均低于0 h。PPZ對(duì)胃癌干細(xì)胞（SGC7901-SP、HGC-27-SP）增殖均有抑制作用，在48 h逐漸明顯;加入PPZ后，胃癌干細(xì)胞（SGC7901-SP、HGC-27-SP）兩個(gè)細(xì)胞系酶標(biāo)儀檢測(cè)到的吸光值在48 h、72 h、96 h時(shí)均下降。72 h和96 h時(shí)，加與不加PPZ的吸光值比較，統(tǒng)計(jì)學(xué)意義顯著（P<0.01）。不同濃度（0～50 μg/ml）5-FU對(duì)胃癌干細(xì)胞（SGC7901-SP、HGC-27-SP）增殖抑制的差異不顯著;而加入PPZ 100 μg/ml后，隨著5-FU濃度的增加增殖抑制作用逐漸增強(qiáng)，在40～50 μg/ml濃度的5-FU對(duì)胃癌干細(xì)胞（SGC7901-SP、HGC-27-SP）增殖抑制更加明顯;加入PPZ 后，40 μg/ml及50 μg/ml濃度的5-FU作用下胃癌干細(xì)胞（SGC7901-SP、HGC-27-SP）酶標(biāo)儀檢測(cè)到的吸光值均降低。結(jié)論 ?PPZ能有效抑制胃癌細(xì)胞及胃癌干細(xì)胞的自我更新能力，抑制其增殖，并可提高其對(duì)5-FU的化療敏感性。PPZ有望成為逆轉(zhuǎn)胃癌耐藥的一類聯(lián)合治療藥物應(yīng)用于臨床。

關(guān)鍵詞：胃癌;PPIs;5-FU;腫瘤成球能力;自我更新

中圖分類號(hào)：R735.2 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2019.21.020

文章編號(hào)：1006-1959（2019）21-0061-05

Abstract：Objective ?To investigate the effects of pantoprazole （PPZ） and 5-fluorouracil （5-FU） on the growth and self-renewal of gastric cancer cells and gastric cancer stem cells. Methods SGC-7901 and HGC-27 cells were divided into three groups of experiments： 5-Fu treatment group， PPZ treatment group and 5-Fu combined with PPZ treatment group. The changes of self-renewal ability of gastric cancer cells and gastric cancer stem cells in gastric cancer cell lines （SGC7901， HGC-27） before and after PPZ dosing were detected by cell globule assay. The interference of PPZ on the ability of gastric cancer cell line to form a ball was observed. MTT assay for PPZ， 5-FU effect on the proliferation of gastric cancer cells and gastric cancer stem cells， and to observe the regulation of PPZ on its 5-FU drug sensitivity.Results ?The self-renewal rate of gastric cancer cell lines （SGC7901， HGC-27） and gastric cancer stem cell lines （SGC7901-SP， HGC-27-SP） after PPZ addition was lower than that before PPZ（P<0.01）. PPZ and 5-FU inhibited the proliferation of gastric cancer cells （SGC7901， HGC-27）， while the 5-Fu+PPZ combination showed the most obvious inhibition. The inhibition of proliferation began to appear at 24 h， the lowest at 96 h，Both are below 0 h. PPZ inhibited the proliferation of gastric cancer stem cells （SGC7901-SP， HGC-27-SP）， and became obvious at 48 h. After adding PPZ， two cell lines of gastric cancer stem cells （SGC7901-SP， HGC-27-SP） were labeled. The absorbance values detected by the instrument decreased at 48 h， 72 h， and 96 h. At 72 h and 96 h， the absorbance values of the plus and without PPZ were statistically significant （P<0.01）. Different concentrations （0～50 μg/ml） of 5-FU had no significant difference in the inhibition of proliferation of gastric cancer stem cells （SGC7901-SP， HGC-27-SP）， but increased with the concentration of 5-FU after adding PPZ 100μg/ml. The inhibition of proliferation was gradually enhanced， and the proliferation of gastric cancer stem cells （SGC7901-SP， HGC-27-SP） was more obvious in 5-FU （40～50 μg/ml） concentration; 40 μg/ml and 50 μg were added after adding PPZ. At the concentration of 5-FU， the absorbance values of gastric cancer stem cells （SGC7901-SP， HGC-27-SP） were decreased.Conclusion ?PPZ can effectively inhibit the self-renewal ability of gastric cancer cells and gastric cancer stem cells， inhibit their proliferation， and improve their chemosensitivity to 5-FU. PPZ is expected to be a combination of a combination of therapeutic drugs for reversing gastric cancer.

Key words：Gastric cancer;PPIs;5-FU;Tumor globular ability;Self-renewal

胃癌（gastric cancer）是常見的惡性消化系統(tǒng)腫瘤，雖然在全世界范圍內(nèi)發(fā)病率有所下降，但仍是癌癥死亡的第3大原因[1]。晚期胃癌治療手段及效果有限，在我國(guó)年死亡率占惡性腫瘤第2位[2]，5年生存率20%～30%[3，4]。僅有包括5-FU、多柔比星、順鉑等數(shù)種化療藥物對(duì)胃癌有一定療效，由于藥物抗性的發(fā)生，治療有效率僅為15%～50%[5，6]。如何降低化療耐藥一直是臨床醫(yī)生關(guān)注的問題。研究已證明胃癌細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（epithelial mesenchymal transformation，EMT）形成的胃癌干細(xì)胞（gastric cancer stem cells，GCSCs） 是其化療抵抗及形成腹腔轉(zhuǎn)移的重要驅(qū)動(dòng)者[7-10]。研究表明[11-15]，活體當(dāng)中的胃癌細(xì)胞往往處在一個(gè)酸性的缺氧微環(huán)境中，這有利于癌細(xì)胞的增殖、侵襲、抵抗化療藥物等。胃癌細(xì)胞內(nèi)質(zhì)子外排是腫瘤細(xì)胞提升自身在酸性環(huán)境下生存力的有力手段[16，17]。通過抑制細(xì)胞內(nèi)質(zhì)子外排可能是逆轉(zhuǎn)胃癌化療耐藥的方法之一。因而，本研究通過使用質(zhì)子泵抑制劑（proton pump inhibitors，PPIs）泮托拉唑（pantoprazole，PPZ）來干擾胃癌細(xì)胞株及其胃癌干細(xì)胞（GCSCs）株的成球能力和增殖能力，探討PPIs對(duì)胃癌細(xì)胞株及其胃癌干細(xì)胞株自我更新能力的影響。

1材料與方法

1.1主要實(shí)驗(yàn)儀器及耗材 ?CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱購自Thermo Scientific，生物安全柜購自Heal Force，倒置顯微鏡購自Motic，低速離心機(jī)購自長(zhǎng)沙鑫奧，100 mm細(xì)胞培養(yǎng)板、96孔超低吸附細(xì)胞培養(yǎng)板和6孔超低吸附細(xì)胞培養(yǎng)板購于Corning，流式細(xì)胞儀購自Beckman CouLter公司，酶標(biāo)儀購自Thermo。

1.2主要實(shí)驗(yàn)試劑 ?1640培養(yǎng)基和DMEM/F12培養(yǎng)基購自Hyclone，胎牛血清、B27、EGF和FGF購自GIBCO，青鏈霉素購自MP，胰酶消化液購自Auragene，Insulin和BSA購自索萊寶，Hoechst3342、PI、維拉帕米購自Sigma，MTT 購自上海生工。

1.3干細(xì)胞成球培養(yǎng)基（SFM）的配制 ?母液配置濃度為：EGF 100 ng/ml、FGF 100 ng/ml、BSA 20%、Insulin 1 mg/ml，將DMEM-F12倒入干凈的50 ml血清瓶中，分別加入1 ml 50xB27、50xL-Gln、EGF 10 μl、FGF ?10 μl、20%濃度的BSA 1 ml、insulin 20μl、Pen/strep 0.5 ml，配制干細(xì)胞培養(yǎng)基（濃度為：DMEM/F12 1×、B27 1×、EGF 20 ng/ml、FGF 20 ng/ml、BSA 0.4 %、Insulin 4 μg/ml、L-Gln 1×、Pen/strep 100 U/ml）。

1.4流式側(cè)群分選獲取胃癌干細(xì)胞 ?在37℃、5% CO2飽和濕度條件下用完全培養(yǎng)液（1640含10%小牛血清、100 U/ml青霉素及100 U/ml鏈霉素）培養(yǎng)胃癌細(xì)胞（SGC7901、HGC-27），每周換液2～3次，細(xì)胞生長(zhǎng)至80%后使用0.25%胰蛋白酶消化并傳代、計(jì)數(shù)，用培養(yǎng)基（DMEM/F 12）重懸至1×106 /ml的濃度，分成3組2管，分別用37℃ DMEM/F12洗滌，制成細(xì)胞懸液;其中兩組均加入熒光染料Hoechst33342，使終濃度為5 μg/ml。另一組作為對(duì)照，加維拉帕米 （終濃度50 μmol/L）;室溫37℃，避光條件下水浴 ?90 min后在冰上冷卻10 min來終止染色并進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù);離心后用冰預(yù)冷的DMEM/F12洗滌細(xì)胞重懸浮，濃度調(diào)整至超過1×105/ml;加入PI使終濃度為2 μg/ml后上機(jī)。用細(xì)胞流式細(xì)胞儀（400濾網(wǎng)過濾）檢測(cè)，分選出干細(xì)胞（SP）及非干細(xì)胞（NSP）。DMEM/F12收集分選后細(xì)胞，流式細(xì)胞儀再分析細(xì)胞純度。確定SP 與NSP細(xì)胞純度達(dá)80%以上。

1.5細(xì)胞成球?qū)嶒?yàn) ?分別收集胃癌細(xì)胞和胃癌干細(xì)胞單細(xì)胞懸液，接種到超低吸附培養(yǎng)板中，每孔用 ?2 ml干細(xì)胞條件培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，將6孔的細(xì)胞數(shù)調(diào)整成一定的梯度（1000個(gè)、5000個(gè)、10000個(gè)、10000個(gè)、20000個(gè)、20000個(gè)）。每天拍照觀察腫瘤細(xì)胞球生長(zhǎng)情況，隔天再加入1 ml培養(yǎng)基，確定最佳培養(yǎng)密度。在細(xì)胞培養(yǎng)板中以4×105 個(gè)/ml的細(xì)胞密度接種，加入2 ml配好的干細(xì)胞培養(yǎng)基，在細(xì)胞培養(yǎng)箱（37℃、5% CO2）中培養(yǎng)48 h后再收集細(xì)胞，用0.05% 的胰酶消化5～10 min后再加1 ml干細(xì)胞培養(yǎng)基終止消化，均勻吹打后吸取10 μl的懸液對(duì)細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)，以相同的密度重新接種到另一的超低吸附6孔培養(yǎng)板中。

1.6腫瘤（干）細(xì)胞自我更新實(shí)驗(yàn) ?分別收集胃癌細(xì)胞和各組成球細(xì)胞，用0.05 %的胰酶消化液消化后在成球培養(yǎng)基中制成單細(xì)胞懸液（濃度至1×103 個(gè)/ml）備用;取6塊96孔超低吸附板（胃癌細(xì)胞與胃癌干細(xì)胞各3板），每個(gè)細(xì)胞共180 孔（96 孔板邊緣孔加200 μl PBS），取1 μl加入到96 孔超低吸附板（每孔含200 μl干細(xì)胞培養(yǎng)基）;顯微鏡下觀察，將多于1個(gè)或不含細(xì)胞的孔標(biāo)記排除;每天顯微鏡下觀察，大約6～10 d，記錄形成腫瘤個(gè)數(shù)和大小。結(jié)果計(jì)算：自我更新率=（克隆數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)）×100%。

1.7 MTT檢測(cè)PPZ和5-FU對(duì)胃癌（干）細(xì)胞生長(zhǎng)的影響

1.7.1 MTT檢測(cè)PPZ和5-FU對(duì)胃癌細(xì)胞生長(zhǎng)的影響 ?為確定PPZ是否具有協(xié)同5-Fu抑制細(xì)胞增殖作用，將SGC-7901和HGC-27細(xì)胞分為3組實(shí)驗(yàn)：5-Fu處理組、PPZ處理組和5-Fu+PPZ組。在5塊96孔板上每孔各加入100 μl制備好的的胃癌細(xì)胞（SGC7901、HGC-27）懸液，鋪板使待測(cè)細(xì)胞數(shù)量達(dá)5×103 個(gè)/孔，每組設(shè)置5個(gè)復(fù)孔;在37℃條件下5% CO2培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)24 h后取出進(jìn)行檢測(cè)。在3塊96孔板加藥，PPZ處理組加入100 μg/ml PPZ、5-Fu處理組加入20 μg/ml 5-FU、5-Fu+PPZ組同時(shí)加入同劑量?jī)煞N藥物。檢測(cè)時(shí)每孔加MTT溶液10 μl，繼續(xù)培養(yǎng)4 h;用酶標(biāo)儀檢測(cè)各孔波長(zhǎng)570 nm的吸光值，每隔24 h取出一塊96孔板行檢測(cè)。

1.7.2 MTT檢測(cè)PPZ和5-FU對(duì)胃癌干細(xì)胞生長(zhǎng)的影響 ?胃癌細(xì)胞（SGC7901、HGC-27）經(jīng)四代成球分選后得到的干細(xì)胞株（SGC7901-SP、HGC-27-SP）在成球培養(yǎng)條件下，加入100 μg/ml PPZ，通過MTT檢測(cè)其對(duì)胃癌干細(xì)胞生長(zhǎng)的影響：在5塊96孔板上每孔各加入100 μl制備好的的胃癌干細(xì)胞（SGC7901-SP、HGC-27-SP）懸液，鋪板使待測(cè)細(xì)胞數(shù)量達(dá)5×103 個(gè)/孔，每組設(shè)置5個(gè)復(fù)孔;在37℃條件下5% CO2培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)24 h后取出進(jìn)行檢測(cè)。在4塊96孔板加藥，共設(shè)置兩個(gè)分組：一組加入100 μg/ml PPZ;另一組不添加藥物。檢測(cè)時(shí)每孔加入MTT溶液10 μl，繼續(xù)培養(yǎng)4 h;用酶標(biāo)儀檢測(cè)各孔的波長(zhǎng)570 nm的吸光值。之后每隔24 h取出一塊96孔板進(jìn)行檢測(cè)。

胃癌細(xì)胞（SGC7901、HGC-27）經(jīng)四代成球分選后得到的干細(xì)胞株（SGC7901-SP、HGC-27-SP）在成球培養(yǎng)條件下，加入100 μg/ml PPZ，通過MTT檢測(cè)各組胃癌干細(xì)胞對(duì)5-FU的藥物敏感性：在2塊96孔板上每孔各加100 μl制備好的的胃癌干細(xì)胞（SGC7901-SP、HGC-27-SP）懸液，鋪板使待測(cè)細(xì)胞數(shù)量達(dá)5×103 個(gè)/孔，每組設(shè)5個(gè)復(fù)孔;在37℃條件下5% CO2培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)24 h后取出96孔板加藥，其中一塊加100 μg/ml PPZ，另一塊不加PPZ。兩塊板均加不同濃度梯度（0～50 μg/ml）的5-FU，24 h后取出行檢測(cè)，檢測(cè)時(shí)每孔加MTT溶液10 μl，繼續(xù)細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)4 h;用酶標(biāo)儀檢測(cè)各孔波長(zhǎng) ? ? 570 nm的吸光值。

1.8統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 ?采用SPSS 17.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料以（x±s）表示，兩組數(shù)據(jù)采用兩樣本獨(dú)立t 檢驗(yàn)，P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.01表示統(tǒng)計(jì)學(xué)意義顯著。

2結(jié)果

2.1 PPZ抑制胃癌（干）細(xì)胞成球能力 ?在細(xì)胞培養(yǎng)皿中PPZ加入前后兩種胃癌細(xì)胞系（SGC7901、HGC-27）的成球數(shù)和自我更新率均下降，統(tǒng)計(jì)學(xué)意義顯著（P<0.01），見表1。在胃癌干細(xì)胞（SGC7901-SP、HGC-27-SP）的實(shí)驗(yàn)中，加入PPZ后腫瘤球形成數(shù)及自我更新率均下降，統(tǒng)計(jì)學(xué)意義顯著（P<0.01），見表2。

2.2 MTT檢測(cè)PPZ和5-FU對(duì)胃癌細(xì)胞生長(zhǎng)的影響 ?PPZ、5-FU對(duì)胃癌細(xì)胞（SGC7901、HGC-27）增殖均有抑制作用，而5-Fu+PPZ聯(lián)合組抑制最為明顯;PPZ組胃癌細(xì)胞（SGC7901、HGC-27）兩個(gè)細(xì)胞系酶標(biāo)儀檢測(cè)到的吸光值在48 h時(shí)開始出現(xiàn)下降，直到96 h時(shí)仍低于0 h;5-FU組在24 h時(shí)開始出現(xiàn)下降直到96 h時(shí)，最低為96 h，均低于0 h;5-Fu+PPZ聯(lián)合組抑制增殖的作用亦是24 h開始出現(xiàn)，96 h最低，均低于0 h，見表3、表4。

2.3 MTT檢測(cè)PPZ對(duì)胃癌干細(xì)胞生長(zhǎng)的影響 ?PPZ對(duì)胃癌干細(xì)胞（SGC7901-SP、HGC-27-SP）增殖均有抑制作用，在48 h逐漸明顯;加入PPZ后，胃癌干細(xì)胞（SGC7901-SP、HGC-27-SP）兩個(gè)細(xì)胞系酶標(biāo)儀檢測(cè)到的吸光值在48 h、72 h、96 h時(shí)均下降。72 h 和96 h時(shí)，加與不加PPZ的吸光值不同，統(tǒng)計(jì)學(xué)意義顯著（P<0.01），見表5、表6。

2.4 MTT檢測(cè)胃癌干細(xì)胞對(duì)5-FU的藥物敏感性 ?不同濃度（0～50 μg/ml）5-FU對(duì)胃癌干細(xì)胞（SGC7901-SP、HGC-27-SP）增殖抑制情況比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）;而加入PPZ 100μg/ml后，隨著5-FU濃度的增加增殖抑制作用逐漸增強(qiáng)，在40～50 μg/ml濃度的5-FU對(duì)胃癌干細(xì)胞（SGC7901-SP、HGC-27-SP）增殖抑制更加明顯;加入PPZ 后，在40 μg/ml及50 μg/ml濃度的5-FU作用下胃癌干細(xì)胞（SGC7901-SP、HGC-27-SP）酶標(biāo)儀檢測(cè)到的吸光值均降低，見表7、表8。

3討論

隨著研究的深入，目前許多學(xué)者認(rèn)為胃癌也是一種干細(xì)胞疾病。腫瘤干細(xì)胞是存在于腫瘤內(nèi)部的一小部分細(xì)胞，被認(rèn)為是腫瘤起始、轉(zhuǎn)移和化療抵抗的源頭所在。越來越多的研究表明，胃癌干細(xì)胞參與胃癌的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移和治療耐藥性[18-21]。耐藥性是目前腫瘤化療的最大障礙，腫瘤干細(xì)胞對(duì)化療藥敏感性較低，通過多種機(jī)制抵抗藥物的攻擊。胃癌干細(xì)胞不能被傳統(tǒng)化療清除，作為脫落的“種子”，種植到腹腔內(nèi)導(dǎo)致腫瘤轉(zhuǎn)移進(jìn)展[22]。在臨床治療中通過一定的方式提高腫瘤干細(xì)胞的化療敏感性，可以提高臨床治療療效[21]。

腫瘤酸性微環(huán)境是化療抵抗的一個(gè)重要機(jī) ? ?制[23]，最近研究發(fā)現(xiàn)質(zhì)子泵抑制劑（PPIs）能夠提高胃癌細(xì)胞的化療敏感性[16，24]，改變腫瘤微環(huán)境的酸度[25]。泮托拉唑（PPZ）是第三代PPIs，不可逆地滅活細(xì)胞膜上的H+/K+-ATP酶，抑制胃酸分泌。研究發(fā)現(xiàn)，胃癌細(xì)胞在PPZ作用后，對(duì)5-FU化療敏感性增加，而微球體形成能力和干細(xì)胞標(biāo)記物CD44、CD24、ABCG2、EpCAM、Lgr5等的表達(dá)顯著下降，說明PPZ能抑制胃癌腫瘤干細(xì)胞，PPZ可能是一種新型的靶向治療胃癌干細(xì)胞的治療方法[26]。PPZ可明顯抑制耐ADR ?SGC-7901胃癌細(xì)胞株的侵襲及遷移，并可逆轉(zhuǎn)其上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化[6]。體外裸鼠模型顯示，與單用阿霉素相比，PPZ 聯(lián)合阿霉素治療胃癌有更高的抗癌作用，且細(xì)胞毒作用減低[27]。在臨床試驗(yàn)中，一項(xiàng)隨機(jī)前瞻性研究顯示高劑量的PPIs能改進(jìn)乳腺癌患者化療療效，且副反應(yīng)不明顯[28]。骨肉瘤特別是成軟骨細(xì)胞型患者，使用PPIs后能夠增加化療藥物的效果[29]。PPIs增加胃癌細(xì)胞化療藥物敏感性的機(jī)制可能與其逆轉(zhuǎn)跨膜pH值梯度[27]和下調(diào)耐藥基因表達(dá)[30]。

目前為止，有4種方法可以建立腫瘤干細(xì)胞模型：微球體培養(yǎng)、SP分選、流式細(xì)胞儀分選和免疫磁珠分選。在本研究中采用SP分選方法獲得胃癌干細(xì)胞。我們的研究發(fā)現(xiàn)加入PPZ后胃癌細(xì)胞系SGC7901、HGC-27的自我更新率明顯下降，胃癌干細(xì)胞系SGC7901-SP、HGC-27-SP的自我更新率也明顯下降，差異統(tǒng)計(jì)學(xué)意義顯著（P<0.01）。采用MTT試驗(yàn)法檢測(cè)到PPZ、5-Fu 對(duì)胃癌細(xì)胞增殖有抑制作用;加入PPZ其抑制作用在48 h后出現(xiàn)，到96 h仍有一定的抑制作用;加入5-Fu 24 h后抑制增殖出現(xiàn)，在48 ～96 h時(shí)它變得顯著;5-Fu+PPZ聯(lián)合處理對(duì)胃癌細(xì)胞增殖的抑制作用最為明顯。PPZ對(duì)胃癌干細(xì)胞增殖也有抑制作用，抑制作用在48 h后出現(xiàn)，到96 h仍有一定的抑制作用，且能夠增加5-FU的化療敏感性。因此質(zhì)子泵抑制劑（PPIs）可能成為逆轉(zhuǎn)胃癌腫瘤（干）細(xì)胞耐藥治療的一類聯(lián)合藥物。

PPIs抑制胃癌細(xì)胞增殖、逆轉(zhuǎn)化療抵抗性的機(jī)制尚不明確。有研究顯示PPZ通過STAT3信號(hào)通路抑制胃癌細(xì)胞系SGC-7901細(xì)胞的增殖，恢復(fù)其對(duì)順伯化療的敏感性[30]。Zhang B等[6]的研究發(fā)現(xiàn)PPZ可能通過靶向EMT和Akt/GSK-3β/β-catenin信號(hào)通路抑制耐阿霉素SGC-7901細(xì)胞的侵襲性。本的研究顯示PPZ能抑制胃癌（干）細(xì)胞的自我更新能力，提高5-FU化療敏感性，但其潛在的分子機(jī)制還需進(jìn)一步探討。PPZ可能成為胃癌治療領(lǐng)域的一項(xiàng)新突破，為胃癌患者治療帶來新的希望。

參考文獻(xiàn)：

[1]Ferlay J，Soerjomataram I，Dikshit R，et al.Cancer incidence and mortality worldwide：sources， methods and major patterns in GLOBOCAN 2012[J].Int J Cancer，2015，136（5）：E359-E386.

[2]Chen W，Zheng R，Baade PD，et al.Cancer statistics in China，2015[J].CA Cancer J Clin，2016，66（2）：115-132.

[3]Siegel RL，Miller KD，Jemal A.Cancer statistics，2015[J].CA Cancer J Clin，2015，65（1）：5-29.

[4]左婷婷，鄭榮壽，曾紅梅，等.中國(guó)胃癌流行病學(xué)現(xiàn)狀[J].中國(guó)腫瘤臨床，2017，44（1）：52-58.

[5]Wohrer SS，Raderer M，Hejna M.Palliative chemotherapy for advanced gastric cancer[J].Ann Oncol，2004，15（11）：1585-1595.

[6]Zhang B，Yang Y，Shi X，et al.Proton pump inhibitor pantoprazole abrogates adriamycin-resistant gastric cancer cell invasiveness via Suppression of Akt/GSK-beta/beta-catenin signaling and epithelial-mesenchymal transition[J].Cancer Lett，2015，356（2 Pt B）：704-712.

[7]遇瓏，舒雄，劉輝琦，等.高轉(zhuǎn)移胃癌細(xì)胞株的建立及其腫瘤干細(xì)胞的生物學(xué)特征[J].中國(guó)腫瘤生物治療雜志，2016;23（4）：486-491.

[8]Samadani AA，Akhavan-Niaki H.Interaction of sonic hedgehog（SHH）pathway with cancer stem cell genes in gastric cancer[J].Med Oncol，2015，32（3）：48.

[9]Yang L，Ping YF，Yu X，et al.Gastric cancer stem-like cells possess higher capability of invasion and metastasis in association with a mesenchymal transition phenotype[J].Cancer Lett， 2011， 310（1）：46-52.

[10]Mao J，F(xiàn)an S，Ma W，et al.Roles of Wnt/[beta]-catenin signaling in the gastric cancer stem cells proliferation and salinomycintreatment[J].Cell Death Dis，2014，5（1）：e1039.

[11]Fan SH，Wang YY，Wu ZY，et al.AGPAT9 suppresses cell growth，invasion and metastasis by counteracting acidic tumor microenvironment through KLF4/LASS2/V-ATPase signaling pathway in breast cancer[J].Oncotarget，2015，6（21）：18406-18417.

[12]Morais-Santos F，Granja S，Miranda-Goncalves V，et al.Targeting lactate transport suppresses in vivo breast tumour growth[J].Oncotarget，2015，6（22）：19177-19189.

[13]Song J，Ge Z，Yang X，et al.Hepatic stellate cells activated by acidic tumor microenvironment promote the metastasis of hepatocellular carcinoma via osteopontin[J].Cancer Lett，2015，356（2 Pt B）：713-720.

[14]Federici C，Petrucci F，Caimi S，et al.Exosome release and low pH belong to a framework of resistance of human melanoma cells to cisplatin[J].PLoS One，2014，9（2）：e88193.

[15]Pilon-Thomas S，Kodumudi KN，El-Kenawi AE，et al.Neutralization of tumor acidity improves antitumor responses to immunotherapy[J].Cancer Res，2016，76（6）：1381-1390.

[16]Gu M，Zhang Y，Zhou X，et al.Rabeprazole exhibits antiproliferative effects on human gastric cancer cell lines[J].Oncol Lett，2014，8（4）：1739-1744.

[17]Chen M，Zou X，Luo H，et al.Effects and mechanisms of proton pump inhibitors as a novel chemosensitizer on human gastric adenocarcinoma（SGC7901）cells[J].Cell Biol Int，2009，33（9）： 1008-1019.

[18]Gao G，Sun Z，Wenyong L，et al.A preliminary study of side population cells in human gastric cancer cell line HGC-27[J].Ann Transplant，2015（20）：147-153.

[19]Xu ZY，Tang JN，Xie HX，et al.5-Fluorouracil chemotherapy of gastric cancer generates residual cells with properties of cancer stem cells[J].Int J Biol Sci，2015，11（3）：284-294.

[20]劉小娟，劉復(fù)娜，張艷芳，等.慢病毒轉(zhuǎn)染敲低HDAC1表達(dá)對(duì)胃癌干細(xì)胞性增殖、遷移及侵襲的影響及其機(jī)制研究[J].疑難病雜志，2018，17（7）：715-718.

[21]何學(xué)彥，張超.胃癌干細(xì)胞對(duì)5-氟尿嘧啶的敏感性[J].中國(guó)組織工程研究，2015，19（41）：6606-6610.

[22]汪貫龍，文剛.胃癌干細(xì)胞與腹腔種植轉(zhuǎn)移[J].臨床外科雜志，2016，24（8）：641-643.

[23]Taylor S，Spugnini EP，Assaraf YG，et al.Microenvironment acidity as a major determinant of tumor chemoresistance：Proton pump inhibitors（PPIs）as a novel therapeutic approach[J].Drug Resist Updat，2015（23）：69-78.

[24]Azzarito T，Venturi G，Cesolini A.Lansoprazole induces sensitivity to suboptimal doses of paclitaxel in human melanoma[J].Cancer Lett，2015，356（2 Pt B）：697-703.

[25]Bellone M，Calcinotto A，F(xiàn)ilipazzi P，et al.The acidity of the tumor microenvironment is a mechanism of immune escape that can be overcome by proton pump inhibitors[J].Oncoimmunology，2013，2（1）：e22058.

[26]Feng S，Zheng Z，F(xiàn)eng L，et al.Proton pump inhibitor pantoprazole inhibits the proliferation， self renewal and chemoresistanceof gastric cancer stem cells via the EMT/β catenin pathways[J].Oncol Rep，2016，36（6）：3207-3214.

[27]Chen M，Huang SL，Zhang XQ，et al.Reversal effects of pantoprazole on multidrug resistance in human gastric adenocarcinoma cells by down-regulating the V-ATPases/mTOR/HIF-1alpha/P-gp and MRP1 signaling pathway in vitro and in vivo[J].J Cell Biochem，2012，113（7）：2474-2487.

[28]Wang BY，Zhang J，Wang JL，et al.Intermittent high dose proton pump inhibitor enhances the antitumor effects of chemotherapy in metastatic breast cancer[J].J Exp Clin Cancer Res， 2015，34（1）：85.

[29]Ferrari S，Perut F，F(xiàn)agioli F，et al.Proton pump inhibitor chemosensitization in humn osteosarcoma：from the bench to the patients'bed[J].J Transl Med，2013，11（1）：268.

[30]Huang S，Chen M，Ding X，et al.Proton pump inhibitor selectively suppresses proliferation and restores the chemosensitivity of gastric cancer cells by inhibiting STAT3 signaling pathway[J].Int Immunopharmacol，2013，17（3）：585-592.

收稿日期：2019-7-22;修回日期：2019-8-2

編輯/肖婷婷