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    外周血γδT細(xì)胞在評估Peg-IFN α-2a治療慢性乙型肝炎效果中的應(yīng)用價值

    2019-12-04 08:32:00支星顏學(xué)兵
    肝臟 2019年11期
    關(guān)鍵詞:病毒學(xué)拷貝干擾素

    支星 顏學(xué)兵

    近年來,聚乙二醇干擾素(Peg-IFN)α-2a在慢性乙型肝炎(CHB)治療中被應(yīng)用,與常規(guī)α-干擾素相比,Peg-IFN α-2a的耐藥率更低,療效更可靠[1-2]。γδT細(xì)胞是比較特殊的一類T淋巴細(xì)胞,其組成部分包括γ鏈與δ鏈,既往有研究發(fā)現(xiàn),γδT細(xì)胞在外周血中的異常表達(dá)參與了肝炎進展過程,如對慢性丙型肝炎患者而言,其外周血γδT細(xì)胞持續(xù)異常與肝臟炎癥程度密切相關(guān)[3]。本研究分析外周血γδT細(xì)胞在評估Peg-IFNα-2a治療CHB效果中的應(yīng)用價值,旨在進一步了解Peg-IFN α-2a的臨床療效及外周血γδT細(xì)胞對CHB療效的影響。

    資料與方法

    一、一般資料

    回顧性分析我院2016年4月—2018年4月收治的106例CHB患者的臨床資料,其中男59例,女47例,年齡32~74歲,平均(52.53±12.16)歲;病程1~5年,平均(3.41±1.37)年;肝纖維化程度:S1期15例、S2期41例、S3期38例、S4期12例;炎癥程度:G1級14例、G2級45例、G3級35例、G4級12例。

    二、納入與排除標(biāo)準(zhǔn)

    (一)納入標(biāo)準(zhǔn) (1)參考相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)確診為CHB[4],診斷明確;(2)入院前6個月內(nèi)無抗病毒治療史;(3)病例資料完整;(4)入院后接受Peg-IFNα-2a治療;(5)遵循醫(yī)囑定期入院復(fù)查。

    (二)排除標(biāo)準(zhǔn) (1)合并血液性疾??;(2)糖尿病患者;(3)既往有精神病史、神經(jīng)病史;(4)妊娠、哺乳期婦女;(5)腎、心、腦等器官損害;(6)其他類型的肝病,如甲型肝炎、丙型肝炎等。

    三、方法

    (一)治療方法 所有患者均給予Peg-IFNα-2a(派羅欣,羅氏制藥,國藥準(zhǔn)字J20120075)治療,每次180 μg派羅欣皮下注射,每周1次,治療12個月。在治療期間,患者每隔3個月入院復(fù)查一次,必要情況下進行降酶藥物干預(yù),期間不采用其他藥物治療。

    (二)檢測方法

    1.乙型肝炎病毒DNA(HBV DNA)檢測:選取3 mL空腹靜脈血,經(jīng)高壓滅菌后置于EP管內(nèi),利用實時熒光定量PCR法測定血清HBV DNA水平,試劑盒源于生工生物,嚴(yán)格根據(jù)試劑盒完成操作。反應(yīng)條件:37 ℃ 120 s,94 ℃ 120 s,(93 ℃ 15 s,60 ℃ 40 s,循環(huán)40次)。

    2.外周血γδT細(xì)胞檢測:主要儀器為酶標(biāo)儀(生工生物)、培養(yǎng)箱(上海森信)、流式細(xì)胞儀(貝克曼),主要試劑為小牛血清(江蘇寶萊)、酶聯(lián)免疫試劑盒(生工生物)、rhIL-2(江蘇寶萊)、RPMI1640(江蘇寶萊)。采集4 mL空腹靜脈血抗凝,將單個核細(xì)胞分離出來,經(jīng)磷酸鹽緩沖液進行洗滌,對白細(xì)胞予以收集,使其濃度為1 106個/mL,接入24孔板進行培養(yǎng),分別加入IPP、rhIL-2,其中rhIL-2每隔2 d補加一次。按照細(xì)胞具體的增殖狀態(tài)分孔培養(yǎng)。經(jīng)Hanks液體進行3次沖洗,使細(xì)胞濃度調(diào)整為5 106個/mL,取細(xì)胞懸液100 μL加入流式管,取0.5 μg抗人TCR-γδ-FITC加入,充分混合,在4 ℃條件下反應(yīng)30 min,離心、洗滌,經(jīng)流式細(xì)胞儀測定。

    四、觀察指標(biāo)

    根據(jù)患者治療12個月后的臨床療效分為病毒學(xué)應(yīng)答組、病毒學(xué)無應(yīng)答組,比較病毒學(xué)應(yīng)答組、病毒學(xué)無應(yīng)答組的外周血γδT細(xì)胞、HBV DNA水平。病毒學(xué)應(yīng)答[4]:采取熒光PCR法檢測HBV DNA,<300拷貝/mL則為病毒學(xué)應(yīng)答,其他為無應(yīng)答。

    五、統(tǒng)計學(xué)方法

    結(jié) 果

    一、106例患者的治療效果分析

    在106例CHB患者中,病毒學(xué)應(yīng)答85例(80.19%),病毒學(xué)無應(yīng)答21例(19.81%)。

    二、兩組外周血γδT細(xì)胞、HBV DNA水平比較

    治療前,病毒學(xué)應(yīng)答組、病毒學(xué)無應(yīng)答組的外周血γδT細(xì)胞分別為(5.62±0.98)%、(5.60±0.95)%,治療后分別為(2.39±0.62)%、(5.58±0.91)%。治療前,病毒學(xué)應(yīng)答組、病毒學(xué)無應(yīng)答組的HBV DNA分別為(6.43±1.02)lg拷貝/mL、(6.45±1.04)lg拷貝/mL,治療后分別為(3.32±0.73)lg拷貝/mL、(6.41±0.99)lg拷貝/mL。兩組治療前外周血γδT細(xì)胞、HBV DNA比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),病毒學(xué)應(yīng)答組治療后外周血γδT細(xì)胞、HBV DNA低于治療前及病毒學(xué)無應(yīng)答組(P<0.05)。

    三、外周血γδT細(xì)胞對CHB療效的評估價值分析

    外周血γδT細(xì)胞評估CHB療效的曲線下面積為0.653(標(biāo)準(zhǔn)誤=0.061,P=0.012,95%CI=0.534~0.772),最佳截斷值為4.11%,敏感度為60.06%,特異度為58.90%。ROC曲線見表1。

    圖1 外周血γδT細(xì)胞評估CHB療效的ROC曲線

    討 論

    約1%~5%CHB患者發(fā)展成原發(fā)性肝癌[5]。為了改善患者預(yù)后,本研究針對CHB患者采用Peg-IFNα-2a治療,結(jié)果提示在106例患者中,總病毒學(xué)應(yīng)答率為80.19%,與相關(guān)研究結(jié)論基本吻合[6]。Peg-IFNα-2a將普通干擾素、聚乙二醇相結(jié)合,可促使干擾素藥物特性出現(xiàn)變化,延長半衰期,提高血藥濃度的穩(wěn)定性,能更持久地抑制HBV DNA,每周給藥1次即可,且治療安全性高。研究表明Peg-IFN α-2a的病毒抑制效果優(yōu)于普通干擾素,且不會增加不良反應(yīng)[7]。這進一步證實該藥在CHB中適用。

    本研究提示,病毒學(xué)應(yīng)答組治療后的外周血γδT細(xì)胞、HBV DNA水平較治療前明顯降低,且低于病毒學(xué)無應(yīng)答組,提示二者在血液中的表達(dá)水平與患者的臨床療效密切相關(guān)。有研究者以慢性丙型肝炎患者為研究對象,發(fā)現(xiàn)γδT細(xì)胞在這類患者外周血中呈高表達(dá),抗病毒干預(yù)時間越長,患者的外周血γδT細(xì)胞水平越低[8]。本研究通過繪制ROC曲線,證實外周血γδT細(xì)胞對CHB患者的抗病毒療效也具有評估價值,創(chuàng)新之處在于明確了曲線下面積、最佳截斷值以及相應(yīng)的敏感度、特異度,提示以外周血γδT細(xì)胞>4.110%時,患者經(jīng)Peg-IFN α-2a治療病毒學(xué)無應(yīng)答的風(fēng)險越高。

    本研究發(fā)現(xiàn)CHB患者的外周血γδT細(xì)胞與HBV DNA呈正相關(guān),表明隨著外周血γδT細(xì)胞水平越高,患者HBV DNA也相應(yīng)增加,提示病情越重。在經(jīng)Peg-IFN α-2a治療后,患者的外周血γδT細(xì)胞水平下調(diào),HBV DNA也相應(yīng)下調(diào),提示病情緩解。基于此,臨床醫(yī)師可將外周血γδT細(xì)胞、HBV DNA共同作為評估CHB患者病情的重要指標(biāo),便于進一步評估臨床療效,改善預(yù)后。

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